CMV IgG Avidity. IgG antibodies to Cytomegalovirus. Elecsys 2010 MODULAR ANALYTICS E170 cobas e 411 cobas e 602

Transkript

1 ; 50 CMV IgG avidite tayinine eşit Türkçe Kullanım amacı İnsan serumu ve plazmasında sitomegalovirüse karşı IgG antikorlarının aviditesinin in vitro kantitatif tayini için immünolojik test. Elektrokemilüminesans immünolojik testi ECLIA (electrochemiluminescence immunoassay), Elecsys ve cobas e immünolojik test analizörlerinde kullanım içindir. Özet Herpes virüs ailesinin bir üyesi olan sitomegalovirüs tüm insan popülasyonlarında yaygın olarak bulunur ve enfeksiyonlara neden olur, ardından konakta ara sıra görülen reaktivasyonlar ve nükseden enfeksiyonlar dışında yaşam boyu latent kalır. CMV enfeksiyonları genellikle hafif ve asemptomatiktir. Ancak gebelik sırasındaki primer maternal CMV enfeksiyonu yüksek intrauterin bulaşma riski taşır, bu da fetüste gelişme ve zeka geriliği, sarılık ve MSS anormallikleri gibi ciddi hasara yol açabilir. Doğum sırasında asemptomatik olan kişiler yaşamlarının daha sonraki evrelerinde işitme kusurları veya öğrenme güçlükleri geliştirebilir. Prenatal CMV enfeksiyonu, tüm canlı doğumların yaklaşık 'inde meydana gelir. Farklı çalışmalar, maternal primer enfeksiyon erken gebelikte 20. gebelik haftasından önce ve daha erken meydana geldiğinde, fetüste veya yeni doğan bebekte semptomatik konjenital hastalık riskinin yüksek olduğunu göstermiştir. Primer olmayan enfeksiyonun neden olduğu konjenital CMV enfeksiyonu, fetüste konjenital hastalığa nadiren yol açar. 1,2,3,4,5 Akut klinik belirtilerin yokluğunda, CMV enfeksiyonunun tanısı genelde seroloji ile koyulur. Akut CMV enfeksiyonu tanısının ilk adımı genellikle spesifik CMV IgG ve IgM antikorlarının saptanmasıdır. CMV IgM antikorlarına reaktif olan numuneler akut, yakın tarihli veya yeniden aktive olmuş bir enfeksiyona işaret ediyor olabilir. Fetüsteki semptomatik konjenital enfeksiyon çoğunlukla primer maternal enfeksiyonun ardından intrauterin bulaşmadan kaynaklandığından, primer enfeksiyona karşı nükseden enfeksiyonun ayırıcı tanısı, CMV'ye özgü IgM antikorunun poliklonal stimülasyon veya devamlılığı doğru rehberlik ve gebeliğin yönetimi için hayati öneme sahiptir. CMV IgG avidite testi, gebe kadınlarda primer enfeksiyonun tanımlanmasında mevcut olan en güvenilir prosedürdür. CMV IgG avidite testi, CMV IgG antikorlarının enfeksiyona yanıt olarak fonksiyonel bağlanma afinitesini ölçer. Primer yanıt sırasında üretilen antikorlar, non primer yanıt sırasında veya enfeksiyonun ileri fazında üretilen antikorlardan daha düşük antijen aviditesine sahiptir. Düşük avidite, immünokompetan gönüllülerde semptomların başlangıcından yaklaşık hafta sonra görülür. Ancak, avidite olgunluğu oranında kişiye göre varyasyon görülür. Nadir durumlarda, düşük avidite sonuçları enfeksiyon başlangıcından 6 ay veya daha uzun bir süre sonra dahi gözlenebilir. Avidite testi gebelikte erken yapılmalıdır. Pozitif CMV IgM sonucu ile birlikte gebeliğin haftasından önce saptanan düşük aviditeli CMV IgG antikorları, yakın zamanlı primer enfeksiyonun güçlü bir kanıtıdır. Gebeliğin ilerleyen dönemlerinde (gebeliği 20. haftasından sonra) yüksek bir avidite sonucu, düşük avidite CMV IgG'nin mevcut olabileceği gebeliğin erken dönemindeki primer enfeksiyon olasılığını dışlayamaz. Gebeliğin ilk haftasında yüksek bir avidite indeksi, geçmiş enfeksiyona dair iyi bir gösterge kabul edilebilir. 6,7,8,9 Test prensibi Test prensibi, Elecsys testi ile yapılan iki paralel ölçüme dayanır. İlk ölçüm, Elecsys testi ile numunelerin referans ölçümüdür. İkinci ölçüm, numunelerin önce analizörün otomatik numuneye özgü dilüsyon fonksiyonu kullanılarak avidite dilüenti (DilCMVAv) ile DilCMVAv uygulandığı, ardından Elecsys testinin yapıldığı ölçümdür, Avidite dilüenti, düşük aviditeli CMV IgG antikorlarının bağlanmasıyla etkileşime giren bileşenler içerir. Avidite (), referans ölçüm ile DilCMVAv uygulanan ölçüm arasındaki oran belirlenerek değerlendirilir. Elecsys 2010 MODULAR ANALYTICS E170 cobas e 411 cobas e 601 cobas e 602 Elecsys testi sandviç prensibini kullanır. Testin toplam süresi, referans ölçüm ve DilCMVAv uygulanan ölçümün her ikisi için de 18 dakikadır. 1. enkübasyon: 20 µl numune (DilCMVAv ile otomatik olarak seyreltilmiş veya seyreltilmemiş referans), biotinlenmiş rekombinant CMV'ye özgü antijenler ve rutenyum kompleksi a) ile işaretlenmiş CMV'ye özgü rekombinant antijenler bir sandviç kompleksi oluşturur. DilCMVAv uygulanan ölçümde sadece yüksek aviditeli CMV antikorları sandviç kompleksini oluşturabilir; düşük aviditeli CMV antikorlarının bulunduğu kompleks ise çözünür. 2. inkübasyon: Streptavidin-kaplı mikropartiküller eklendikten sonra biyotin ile streptavidinin etkileşimi aracılığıyla kompleks katı faza bağlanmış hale gelir. Reaksiyon karışımı, mikropartiküllerin elektrodun yüzeyine manyetik olarak yakalandıkları ölçüm hücresi içine aspire edilir. Bundan sonra bağlanmamış maddeler ProCell/ProCell M ile uzaklaştırılır. Elektrot üzerine voltaj uygulanması kemilüminesans emisyonunu indükler, bu da bir fotoçoğaltıcı ile ölçülür. Sonuçlar, 2 noktalı kalibrasyon ile cihaza özel olarak oluşturulmuş bir kalibrasyon eğrisi ve reaktif barkodu aracılığıyla edinilen bir ana eğri (master) ile tayin edilir. a) Tris(2,2'-bipiridil)rutenyum(II)-kompleksi (Ru(bpy) ) Reaktifler - çalışma solüsyonları Reaktif paketi (M, R1, R2), CMV AV şeklinde etiketlenmiştir. M R1 R2 Streptavidin kaplı mikropartiküller (saydam kapaklı), 1 şişe, 6.5 ml: Streptavidin kaplı mikropartiküller 0.72 mg/ml; koruyucu madde. CMV-Ag~biotin (gri kapaklı), 1 şişe, 9 ml: Biotinlenmiş CMV'ye özgü antijen (rekombinant, E. coli) > 400 µg/l; MES tamponu 50 mmol/l, ph 6.5; koruyucu madde. CMV-Ag~Ru(bpy) (siyah kapaklı), 1 şişe, 9 ml: Rutenyum kompleksiyle işaretlenmiş CMV'ye özgü antijen (rekombinant, E. coli) > 400 µg/l; MES tamponu 50 mmol/l, ph 6.5; koruyucu madde. CMV AV Cal1 Negatif kalibratör 1 (beyaz kapaklı), her birinde aşağıdakilerden 1.0 ml bulunan 2 şişe: İnsan serumu, anti CMV IgG için reaktif değil; koruyucu madde. CMV AV Cal2 Pozitif kalibratör 2 (siyah kapaklı), her birinde aşağıdakilerden 1.0 ml bulunan 2 şişe: DilCMVAv İnsan serumu, anti CMV IgG için reaktif, yaklaşık 40 U/mL; tampon; koruyucu madde. Avidite Dilüenti (beyaz kapaklı), 1 şişe, 2.5 ml: 0.8 M Guanidin klorür, CMV'ye özgü antijen (rekombinant, E. coli); MES tamponu 50 mmol/l, ph 6.5; koruyucu madde. Önlemler ve uyarılar İn vitro diagnostik kullanım içindir. Tüm laboratuvar reaktiflerinin kullanılmasında gerekli olan normal önlemleri uygulayın. Tüm atık malzemelerin atılması yerel yönetmeliklere göre olmalıdır. Talep edildiği takdirde profesyonel kullanıcılara güvenlik veri formu verilebilir , V 6.0 Türkçe 1 / 6

2 İnsanlardan elde edilmiş tüm maddeler potansiyel olarak bulaşıcı kabul edilmelidir. İki kalibratör de (CMV AV Cal1, CMV AV Cal2) sadece ayrı ayrı test edilmiş ve içinde HBsAg'nin ve H ile HIV'e karşı oluşan antikorların bulunmadığı gösterilmiş donörlerin kanından hazırlanmıştır. Anti CMV IgG içeren serum (CMV AV Cal2) steril filtreden geçirilmiştir. Uygulanan test yöntemleri FDA onaylıdır veya Avrupa Direktifi 98/79/EC, Ek II, Liste A'ya uygun şekilde izinlidir. Ancak, hiçbir test yöntemi potansiyel enfeksiyon riskinin olmadığına dair mutlak kesinlik veremediği için, maddeler, hasta örneğiyle aynı dikkat seviyesinde kullanılmalıdır. Maruz kalma durumunda, sorumlu sağlık yetkililerinin direktifleri takip edilmelidir. 10,11 Tüm reaktifler ve numune tiplerinde (örnek, kalibratör ve kontrol) köpük oluşumunu engelleyin. Reaktif kullanımı Kit içinde verilen reaktifler kullanıma hazırdır ve sistemle uyumlu şişeler içinde verilir. Elecsys 2010 ve cobas e 411 analizörleri: Kalibratörler analizörlerde sadece C'deki kalibrasyon sırasında bırakılmalıdır. Kullanımın ardından, şişeleri olabildiğince çabucak kapatın ve dik şekilde 2 8 C'de saklayın. Olası buharlaşma etkileri nedeniyle, her şişe seti için en fazla 5 kalibrasyon prosedürü gerçekleştirilmelidir. MODULAR ANALYTICS E170, cobas e 601 ve cobas e 602 analizörleri: Analizörde kalibrasyon için tüm hacim gerekmediği sürece, kullanıma hazır kalibratörlerden kısımları geçme kapaklı boş şişelere aktarın (CalSet Vials). Verilen etiketleri bu ek şişelere yapıştırın. Kısımları ileride kullanım için 2 8 C'de saklayın. Her kısım için sadece bir kalibrasyon prosedürü gerçekleştirin. Doğru şekilde çalışma için gereken tüm bilgiler ilgili reaktif barkodlarından okutulur. Lütfen dikkat: Hem flakon etiketleri hem de ek etiketlerde (varsa) 2 farklı barkod vardır. Sarı işaretler arasındaki barkod sadece cobas 8000 sistemleri içindir. cobas 8000 sistemi kullanılıyorsa, sistemin barkodu okuyabilmesi için lütfen flakon kapağını 180 çevirerek doğru konuma getirin. Flakonu her zamanki gibi cihaz üzerine yerleştirin. Saklama ve stabilite 2 8 C'de saklayın. Dondurmayın. Elecsys reaktif kitini ve DilCMVAv'yi, kullanmadan önce otomatik karıştırma sırasında mikropartiküllerin tamamının kullanılabilmesini sağlamak için dik şekilde saklayın. Reaktif paketinin ve DilCMVAv'nin stabilitesi açılmamış olarak 2 8 C'de açıldıktan sonra 2 8 C'de analizörlerde Kalibratörlerin stabilitesi: açılmamış olarak 2 8 C'de açıldıktan sonra 2 8 C'de Elecsys 2010 ve cobas e 411'de C'de MODULAR ANALYTICS E170, cobas e 601 ve cobas e 602 analizörlerinde C'de belirtilen son kullanma tarihine kadar 12 hafta dönüşümlü olarak buzdolabında ve analizörlerde saklanırsa 3 hafta veya 8 hafta (20 25 C'de en fazla 8 saat) belirtilen son kullanma tarihine kadar 8 hafta 5 saate kadar sadece bir kez kullanın Kalibratör solüsyonunun geçme kapağa yapışmasını önlemek için, kalibratörleri dik şekilde saklayın. Örnek toplama ve hazırlama Sadece aşağıda listelenen örnekler yeterli sayıda test edilmiştir ve kabul edilebilir bulunmuştur. Standart numune alma tüpleri veya ayırma jeli içeren tüpler kullanılarak alınan serum. Li heparin, K 2 EDTA ve K 3 EDTA'lı plazma. Kriter: Pozitif numunelerin serum değerinin 'si dahilinde ortalama geri kazanımı. 2 8 C'de 4 hafta, 25 C'de 7 gün, 20 C'de 6 ay stabildir. Numuneler 5 kez dondurulabilir. Listelenen numune tipleri test sırasında piyasada bulunan numune toplama tüplerinin bir kısmı ile test edilmiştir; bir başka deyişle, tüm üreticilerin mevcut tüm tüpleri test edilmemiştir. Çeşitli üreticilerden alınan numune toplama sistemleri bazı durumlarda test sonuçlarını etkileyebilecek farklı materyaller içerebilir. Numuneleri primer tüplerde (numune toplama sistemleri) işleme tabi tutarken tüp üreticisinin talimatlarına uyun. Hatalı bulguları önlemek için, örnekler sonradan katkı maddeleriyle (biyositler, antioksidanlar ve numunenin ph'ını değiştirebilecek maddeler) değiştirilmemelidir. Havuzlanmış numuneler ve diğer yapay materyallerin farklı testler üzerinde farklı etkileri olabilir ve bu nedenle uyumsuz bulgulara yol açabilir. Testi yapmadan önce çökelti içeren numuneleri ve dondurulmuş numuneleri santrifüje tabi tutun. Liyofilize numuneler ve ısı ile inaktive edilmiş numuneler kullanılabilir. Ölçümden önce numunelerin, kalibratörlerin ve kontrollerin C'de olduğundan emin olun. Olası buharlaşma etkilerinden dolayı, analizörlerdeki numuneler, kalibratörler ve kontroller 2 saat içinde analiz edilmeli/ölçülmelidir. Kit içinde bulunan malzemeler Reaktifler için Reaktifler çalışma solüsyonları bölümüne bakın. Gerekli malzemeler (kit içinde bulunmayan) , PreciControl, PreciControl 1 ve 2'nin her birinden 3 x 1.0 ml , Diluent Universal, 2 x 16 ml numune dilüenti veya , Diluent Universal, 2 x 36 ml numune dilüenti , CalSet Vials, 2 x 56 geçme kapaklı boş şişe Genel laboratuvar cihazları Elecsys 2010, MODULAR ANALYTICS E170 veya cobas e analizörü Elecsys 2010 ve cobas e 411 analizörleri için aksesuarlar: , ProCell, 6 x 380 ml sistem tamponu , CleanCell, 6 x 380 ml ölçüm hücresi temizleme solüsyonu , Elecsys SysWash, 1 x 500 ml yıkama suyu katkısı , SysClean için Adaptör , Elecsys 2010 AssayCup, 60 x 60 reaksiyon kabı , Elecsys 2010 AssayTip, 30 x 120 pipet ucu MODULAR ANALYTICS E170, cobas e 601 ve cobas e 602 analizörleri için aksesuarlar: , ProCell M, 2 x 2 L sistem tamponu , CleanCell M, 2 x 2 L ölçüm hücresi temizleme solüsyonu , PC/CC Cups, kullanmadan önce ProCell M ve CleanCell M'nin ısıtılması için 12 kap , ProbeWash M, çalışmanın tamamlanması ve reaktif değişimi sırasında yıkama için 12 x 70 ml temizleme solüsyonu , AssayTip/AssayCup Combimagazine M, 48 kutu x 84 reaksiyon kabı veya pipet ucu, atık torbaları , WasteLiner, atık torbaları , SysClean Adaptörü M Tüm analizörler için aksesuarlar: , ISE Cleaning Solution/Elecsys SysClean, 5 x 100 ml sistem temizleme solüsyonu 2 / , V 6.0 Türkçe

3 Test Çalışması Testin optimum performansı için, bu belgede ilgili analizör için verilen talimatlara uyun. Analizöre özgü test talimatları için uygun kullanıcı kılavuzuna bakın. Mikropartiküllerin tekrar süspansiyon haline gelmesi kullanımdan önce otomatik olarak yerine getirilir. Teste özgü parametreler reaktif barkodundan okutulur. Barkodun okunamadığı istisnai durumlarda, 15 basamaklı rakam serisini girin. Soğutulmuş reaktifleri yaklaşık 20 C'ye getirin ve analizörün reaktif diskine (20 C) yerleştirin. Köpük oluşmasından kaçının. Sistem reaktiflerin sıcaklığını ve şişelerin açılıp kapanmasını otomatik olarak düzenler. Kalibratörleri numune alanına yerleştirin. Testin kalibre edilmesi için gereken tüm bilgiler, analizöre otomatik olarak okutulur. Kalibrasyon yapıldıktan sonra kalibratörleri 2 8 C'de saklayın veya atın (MODULAR ANALYTICS E170, cobas e 601 ve cobas e 602 analizörleri). Aviditenin () hesaplanması için her numune ve kontroller iki kere sipariş edilmelidir (referans ölçüm ve DilCMVAv uygulanan ölçüm). Elecsys testi için örneğin kullanımı Elecsys CMV IgG sonucu: U/mL Avidite () tayini için örnek Elecsys CMV IgG sonucu: > 500 U/mL Diluent Universal ile numuneyi manuel olarak 1:20 oranında önceden seyreltin Örneği iki kısma ayırın, minimum hacim 300 μl REFERANS ÖLÇÜM 1. kısmı analizörde n pozisyonuna yerleştirin CMV IgG avidite tayini sipariş edin analizör referans ölçümün sonucunu raporlar (U/mL) çalıştırın DilCMVAv UYGULANAN ÖLÇÜM 2. kısmı analizörde n+1 pozisyonuna yerleştirin S.Vol./Dil. Oranı" seçeneğini seçin ve 1:2 dilüsyon oranlı CMV IgG avidite tayini sipariş edin analizör DilCMVAv uygulanan ölçümün sonucunu raporlar (U/mL) aviditenin manuel hesaplanması (), ayrıntılı bilgi için bkz. "Hesaplama" bölümü Elecsys CMV IgG testinde U/mL arası konsantrasyonlarla reaktif bulunan numuneler, iki kısma ayrılır. Bir numune Elecsys CMV IgG testinde > 500 U/mL'lik bir konsantrasyonla reaktif ise, numune Diluent Universal ile 1:20 oranında manuel olarak önceden seyreltilmeli ("Dilüsyon" bölümüne bakın) ve sonra iki kısma ayrılmalıdır. Referans ölçüm: Belirli bir numunenin ilk kısmını analizörde n pozisyonuna yerleştirin ve CMV IgG avidite ölçümü sipariş edin. DilCMVAv uygulanan ölçüm: Yukarıda bahsedilen örneğin ikinci kısmını analizörde n+1 pozisyonun yerleştirin ve 1:2 oranında "numuneye özgü dilüsyon" ile CMV IgG avidite ölçümü sipariş edin. Ayrıntılı bilgi için lütfen analizör kullanıcısı el kitabına bakın. Analizör bu yolla CMV IgG avidite ölçümü öncesi 50 µl DilCMVAv'yı 50 µl numuneyle karıştıracaktır. Kullanıcı, iki ölçümün de ardışık olarak aynı reaktif lotu, aynı analizör ve aynı kalibrasyon ile yapıldığından emin olmalıdır. Not: Numunenin kısımlara ayrılması mümkün değilse, iki ölçümün programlanması ve ardışık olarak yapılması gerekir. Referans ölçüm ve DilCMVAv uygulanan ölçümün bir kısımdan paralel, otomatik ölçümü mümkün değildir. Kalibrasyon İzlenebilirlik: Bu yöntem, Roche'un dahili CMV IgG standardına göre standardize edilmiştir. CMV için uluslararası bir standart yoktur. Her Elecsys reaktif setinde, belirli bir reaktif lotunun kalibrasyonuna özgü bilgiler içeren bir barkod etiketi bulunur. Önceden tanımlanmış ana eğri CMV AV Cal1 ve CMV AV Cal2 kullanılarak analizöre adapte edilir. Kalibrasyon sıklığı: Kalibrasyon her reaktif lotunda CMV AV Cal1, CMV AV Cal2 ve taze reaktif (bir başka deyişle, reaktif kitinin analizöre kaydedilmesinin üzerinden 24 saatten uzun bir süre geçmeden) kullanılarak bir kez yapılmalıdır. Aşağıdaki durumlarda kalibrasyonun tekrar yapılması önerilir: aynı reaktif lotu kullanılırken 1 ay (28 gün) sonra 7 gün sonra (analizörde aynı reaktif kiti kullanılırken) gerektiğinde, örn. PreciControl ile elde edilen kalite kontrol bulguları tanımlanan sınırların dışında olduğunda ilgili düzenlemelere göre gerektiğinde daha sık Kalite kontrol Kalite kontrol için, PreciControl kullanın. PreciControl 1 ve 2'nin her çalışma gününün başında ve her kalibrasyon sonrası çalışılması önerilir. Her kontrol düzeyinden iki kısım hazırlayın. Numune rakı üzerinde, her kontrol düzeyinin iki kısmını da birbiri ardına yerleştirin. Performans kontrolü olarak referans ölçümde ve DilCMVAv uygulanan ölçümde iki düzey de paralel olarak çalışılmalıdır. Her laboratuvar, değerler tanımlanan sınırlar dışında olduğu takdirde alınacak düzeltici önlemleri belirlemelidir. Gerekirse, ilgili numunelerin ölçümlerini tekrar edin. Kalite kontrolü için geçerli resmi düzenlemelere ve yerel kılavuzlara uyun. Kalibrasyonun doğrulanması: Referans ölçümün hedef değerleri ve aralıkları (U/mL) Roche tarafından belirlenmiş ve değerlendirilmiştir. Bu değerler, test sırasında mevcut olan Elecsys test reaktifleri ve analizörleri kullanılarak elde edilmiştir. Kontrollerin referans ölçümleri, değer sayfasında belirtilen kontrol aralıklarında (U/mL) geri kazanılmalıdır. Kontrol değerleri, değer sayfasında verilen CMV IgG aralıkları ile (U/mL) manuel olarak karşılaştırılmalıdır. Lota özgü kesin hedef değerler ve aralıklar ekteki (veya elektronik olarak bulunan) değer sayfasında basılmıştır. Diluent Avidity'nin (DilCMVAv) fonksiyonelliğinin doğrulanması: Avidite (), referans ölçümden ve DilCMVAv ile işleme tabi tutulmuş ölçümden "Hesaplama" bölümüne göre hesaplanır. PreciControl CMV IgG Avidity 1'in manuel olarak hesaplanan avidite sonucu () için hedef aralık < 45.0, PreciControl 2 için ilgili aralık ise 55.0 'dir. Not: Kontroller barkodlu değildir ve hasta numuneleri gibi ele alınmalıdır. Cihazda kontrollerin dilüsyonu mümkün olmadığından, kontroller harici kontroller olarak tanımlanmamalıdır. Hesaplama Analizör her numunenin analit konsantrasyonunu her iki ölçüm için de (referans ölçüm ve DilCMVAv uygulanmış ölçüm) U/mL cinsinden otomatik olarak hesaplar. Avidite () manuel olarak hesaplanmalıdır: , V 6.0 Türkçe 3 / 6

4 = DilCMVAv uygulanan ölçüm sonucu sonuç referans ölçüm sonucu x 100 Yalnızca referans ölçümde reaktif olan numuneler ( 1.0 U/mL) aviditenin tayini () için kullanılabilir. DilCMVAv uygulanan ölçüm < 0.3 U/mL değerler ile sonuçlanırsa, lütfen aviditeyi () 0.3 U/mL ile hesaplayın. Sonuçların yorumlanması Elecsys testiyle elde edilen sonuçlar aşağıdaki gibi yorumlanır: Avidite Yorum < 45.0 düşük avidite gri bölge 55.0 yüksek avidite Gri bölgede bulunan bir sonuçtan hareketle klinik yorum yapılamaz. Uygun bir süre içinde (örn. 2 4 hafta) bir takip numunesinin alınması ve testin tekrar edilmesi önerilir. Elecsys sonuçları, hastanın tıbbi hikayesi, klinik semptomlar ve diğer laboratuvar testleriyle birlikte kullanılmalıdır; örn. CMV 'ye özgü IgG ve IgM sonuçları. Hastanın tıbbi hikayesi, klinik semptomlar ve diğer laboratuvar testleriyle (örn. CMV 'ye özgü IgG ve IgM sonuçları) uyumsuz bir CMV IgG avidite sonucu alınması durumunda, sonucu doğrulamak için başka testler yapılmalıdır ve bir takip numunesinin test edilmesi de önerilir. Farklı üreticilerin testleriyle belirlenen belirli bir örnekteki CMV IgG avidite sonuçları, test yöntemleri ve kullanılan reaktiflerdeki farklılıklar nedeniyle değişkenlik gösterebilir. Bu nedenle, laboratuvarın hekime bildirdiği sonuçlar şu ifadeyi içermelidir: Aşağıdaki sonuçlar Elecsys CMV IgG Avidity testiyle elde edilmiştir. Başka üreticilerin testlerinden elde edilen sonuçlarla birbirinin yerine kullanılamaz. Testin yapısından kaynaklanan değişkenlik nedeniyle 110 değerine kadar avidite sonuçları görülebilir ve bu değerler, yüksek avidite sonuçları olarak yorumlanır. > 110 düzeyinde avidite için numunenin önceden seyreltilmesi ("Dilüsyon" bölümünde anlatıldığı gibi) ve yeni bir aviditenin () hesaplanması için iki ölçümün de tekrarlanması önerilir. Sınırlamalar - etkileşim HIV hastalarında, immünosüpresif tedavi uygulanan hastalarda veya immünosüpresyona yol açan başka bozuklukları olan hastalarda sonuçlar dikkatle yorumlanmalıdır. Yenidoğanlardan, kordon kanından, nakil öncesi hastalardan veya serum ve plazma dışındaki idrar, tükürük veya amniyon sıvısı gibi vücut sıvılarından alınan örnekler test edilmemiştir. Ölçüm aralığındaki 142 pozitif numuneden oluşan bir panelde, herhangi bir yüksek doz hook etkisi gözlenmemiştir (dilüsyon sonrası artan sinyal yoktur). Ancak, başka kohortlarda yüksek doz hook etkisi meydana gelme olasılığı göz ardı edilemez. Test çalışması, ikterus (bilirubin < 1129 µmol/l veya < 66 mg/dl), hemoliz (Hb < mmol/l veya < g/dl), lipemi (Intralipid < 2000 mg/dl) ve biotinden (< 246 nmol/l veya < 60 ng/ml) etkilenmez. Kriter: Serum değerinin ± 20'si içinde pozitif numunelerin ortalama geri kazanımı. Yüksek dozda biotin (> 5 mg/gün) tedavi alan hastalarda son biotin uygulamasının ardından en az 8 saat geçmeden numune alınmamalıdır IU/mL'ye kadar konsantrasyonda romatoid faktörlerden etkileşim gözlenmemiştir. Yaygın olarak kullanılan 18 farmasötik ürün ve ayrıca gansiklovir ile valgansiklovir üzerinde in vitro testler yapılmıştır. Test ile hiçbir etkileşim bulunmamıştır. Nadir durumlarda, streptavidine veya rutenyuma karşı oluşan antikorların yüksek titreleri etkileşime neden olabilir. Bu etkiler uygun test tasarımıyla en aza indirilebilir. Tanı koyulurken sonuçlar mutlaka hastanın tıbbi hikayesi, klinik muayene ve diğer bulgularla birlikte değerlendirilmelidir. Sınırlar ve aralıklar Ölçüm aralığı Referans ölçüm: U/mL (Saptama Sınırı ve ana eğrinin maksimumu ile tanımlanmıştır). Boş Sınırı altındaki değerler < 0.15 U/mL şeklinde rapor edilir. Boş Sınırının üzerinde olup Saptama Sınırının altındaki değerlere cihaz uyarı işareti vermez. Ölçüm aralığının üzerindeki değerler > 500 U/mL şeklinde rapor edilir. Boş Sınırı (LoB) ve Saptama Sınırı (LoD) Boş Sınırı = 0.15 U/mL Saptama Sınırı = 0.25 U/mL Boş Sınırı ve Saptama Sınırı CLSI (Klinik ve Laboratuvar Standartları Enstitüsü) EP17 A gerekliliklerine göre belirlenmiştir. Boş Limiti, analit içermeyen numunelerin birkaç bağımsız seride n 60 ölçümünden 95. persentil değeridir. Boş Sınırı, altında analit içermeyen numunelerin 95 olasılıkla bulunduğu konsantrasyona karşılık gelir. Saptama Sınırı, Boş Sınırına ve düşük konsantrasyonlu numunelerin standart sapmasına göre belirlenir. Saptama Sınırı saptanabilecek en düşük analit konsantrasyonuna karşılık gelir ( 95 olasılıkla, Boş Sınırının üzerindeki değer) DilCMVAv uygulanan ölçüm: 1:2 dilüsyon nedeniyle, ölçüm aralığı U/mL'dir. Boş Sınırı altındaki değerler < 0.30 U/mL şeklinde rapor edilir. Boş Sınırının üzerinde olup Saptama Sınırının altındaki değerlere cihaz uyarı işareti vermez. Ölçüm aralığının üzerindeki değerler > 1000 U/mL şeklinde rapor edilir. Dilüsyon CMV IgG konsantrasyonları ölçüm aralığının üzerinde olan numuneler, Elecsys testi ile test edilmeden önce Diluent Universal ile seyreltilmelidir. Önerilen ön dilüsyon 1:20'dir (manuel olarak). Önceden seyreltilen numunenin konsantrasyonu 15 U/mL olmalıdır. Manuel olarak önceden seyreltilen numune iki ölçüm için de kullanıldığından (referans ölçüm ve DilCMVAv uygulanan ölçüm), bu manuel ön dilüsyon avidite () hesaplaması için dikkate alınmamalıdır. Not: CMV antikorları heterojendir. Bu özellik, doğrusal olmayan dilüsyon davranışına yol açabilir. Spesifik performans verileri Analizörlerden alınan örnek performans verileri aşağıda verilmektedir. Ayrı ayrı laboratuvarlardan elde edilen sonuçlar farklılık gösterebilir. Hassasiyet Hassasiyet, CLSI'nin (Klinik ve Laboratuvar Standartları Enstitüsü) bir protokolünde (EP5 A2) Elecsys reaktifleri, insan numuneleri ve kontroller kullanılarak belirlenmiştir: 21 gün boyunca iki kopya halinde günde 2 çalışma (n = 84); tekrarlanabilirlik n = 21. Aşağıdaki sonuçlar elde edilmiştir: Numune Elecsys 2010 ve cobas e 411 analizörleri Tekrarlanabilirlik Ara hassasiyet İnsan serumu İnsan serumu İnsan serumu PC b) PC b) PC = PreciControl MODULAR ANALYTICS E170, cobas e 601 ve cobas e 602 analizörleri Numune Tekrarlanabilirlik Ara hassasiyet İnsan serumu İnsan serumu İnsan serumu / , V 6.0 Türkçe

5 MODULAR ANALYTICS E170, cobas e 601 ve cobas e 602 analizörleri Numune Tekrarlanabilirlik Ara hassasiyet PC PC Analitik özgüllük Potansiyel olarak çapraz reaksiyon gösteren 439 numune, Elecsys CMV IgG testiyle (Elecsys referans ölçümüne eşittir) ve karşılaştırma amaçlı bir CMV IgG testiyle, aşağıdaki özellikleri taşıyan örneklerle test edilmiştir: HBV**, HAV, H*, HIV, HTLV, EBV**, HSV*, VZV**, Parvo B19***, Rubella, Treponema pallidum**, Toxoplasma gondii**'ye karşı antikorlar içeren otoantikorlar*** içeren (ANA, anti doku, RF) Elecsys referans ölçümü ve karşılaştırma testiyle bu örneklerde 96.6 (422/437) genel uyum bulunmuştur. 110 numune uyumlu negatif ve 312 numune pozitif bulunmuştur. 2 numune, Elecsys CMV IgG testi veya karşılaştırma testiyle belirsiz sonuç vermiştir. * HSV, H: Her grupta 2 uyumsuz numune bulunmuştur. ** HBV, EBV, VZV, Treponema pallidum, Toxoplasma gondii: Her grupta 1 uyumsuz numune bulunmuştur. *** Parvo B19, otoantikorları: Her grupta 3 uyumsuz numune bulunmuştur. Duyarlılık Duyarlılık (düşük avidite sonuçlarının primer enfeksiyonlarla uyumu): CMV IgG avidite testinin duyarlılığı, düşük aviditeli CMV IgG antikorları içerdiği saptanan CMV primer enfeksiyonları bulunan numune yüzdesi (referans laboratuvarlar tarafından tanımlanmıştır) olarak tanımlanır. Referans laboratuvarlar tarafından alınan ve primer CMV enfeksiyonlar bulunduğu şeklinde tanımlanan (diagnostik testler ve varsa, klinik endikasyonlara dayanarak) toplamda 183 tek ve ardışık numune incelenmiştir. 31 numunenin sonucu gri bölgede yer almış ve bu numuneler hesaplamaya dahil edilmemiştir. Numune tipi Duyarlılık Diagnostik 96.1 (74/77) Gebe kadınlar 93.4 (99/106) Toplam 94.5 (173/183) Alt 95 güven Üst 95 güven Bağıl duyarlılık (düşük avidite sonuçlarının iki ticari CMV IgG avidite testiyle uyumu): Bir önceki verilen kan ile güncel verilen kana arasında CMV IgG serokonversiyonu olan rasgele seçilmiş kan donörü numunelerinden alınan ve piyasada bulunan iki CMV IgG avidite testiyle CMV IgG düşük aviditeli antikorlar içerdiği şeklinde tanımlanan tek örnekler incelenmiştir. 24 numuneden 22'sinde düşük aviditeli CMV IgG antikorları saptanmıştır. 1 numunenin sonucu gri bölgede yer almıştır. Özgüllük Özgüllük (yüksek avidite sonuçlarının geç enfeksiyonlarla uyumu): CMV IgG avidite testinin özgüllüğü, yüksek aviditeli CMV IgG antikorları içerdiği saptanan CMV geç enfeksiyonları bulunan numune yüzdesi (referans laboratuvarlar tarafından tanımlanmıştır) olarak tanımlanır. Referans laboratuvar tarafından alınan ve (diagnostik teste dayanarak) geç CMV enfeksiyonları bulunduğu şeklinde tanımlanan toplam 95 tek numune incelenmiştir. 12 numunenin sonucu gri bölgede yer almış ve bu numuneler hesaplamaya dahil edilmemiştir. Numune tipi Özgüllük Diagnostik 90.9 (40/44) Gebe kadınlar 100 (51/51) Toplam 95.8 (91/95) Alt 95 güven Üst 95 güven Bağıl özgüllük (CMV IgG reaktif, CMV IgM non reaktif numunelerdeki yüksek avidite sonuçlarının primer enfeksiyonun yokluğuna işaret eden uyumu): Kan donörü testleri ve gebelik taramasından alınan toplam 365 numune (iki karşılaştırma yönteminde primer enfeksiyon yokluğuna işaret eden uyumlu yüksek avidite sonucu veren CMV IgG reaktif, CMV IgM non reaktif numunelerden hesaplanmıştır) incelenmiştir. 20 numunenin sonucu gri bölgede yer almış ve bu numuneler hesaplamaya dahil edilmemiştir. Numune tipi Bağıl özgüllük Kan donörleri 98.5 (130/132) Gebe kadınlar 100 (233/233) Toplam 99.5 (363/365) Alt 95 güven Üst 95 güven Aviditenin Dağılımı Akut ve geç CMV enfeksiyonunu ayırt etme kapasitesi, referans laboratuvarlar tarafından alınan ve aşağıdaki kategorilerden birine alınan 422 tek ve ardışık numuneyle gösterilmiştir: Kategori A: Enfeksiyonun varsayılan başlangıcından veya ilk kanama tarihinden < 90 gün sonra (başlangıçta CMV primer enfeksiyonu olan hastalardan elde edilen tek veya ardışık numuneler); n = 225 numune Kategori B: Enfeksiyonun varsayılan başlangıcından veya ilk kanama tarihinden gün sonra (başlangıçta CMV primer enfeksiyonu olan hastalardan elde edilen tek veya ardışık numuneler); n = 66 numune Kategori C: Enfeksiyonun varsayılan başlangıcından veya ilk kanama tarihinden > 180 gün sonra (başlangıçta CMV primer enfeksiyonu olan hastalardan elde edilen tek veya ardışık numuneler); n = 131 numune Düşük avidite, gri bölge ve yüksek avidite sonuçlarının tam dağılımı aşağıdaki grafikte verilmiştir: Kaynaklar 1 Boppana SB, Pass RF, Britt WS, et al. Symptomatic congenital cytomegalovirus infection: neonatal morbidity and mortality. Pediatr Infect Dis J 1992;11: , V 6.0 Türkçe 5 / 6

6 2 Alford CA, Stagno S, Pass RF, et al. Congenital and perinatal cytomegalovirus infections. Rev Infect Dis 1990;12: Peckham CS. Cytomegalovirus infection: congenital and neonatal disease. Scand J Infect Dis Suppl 1991;80: Fowler KB, Stagno S, Pass RF, et al. The outcome of congenital cytomegalovirus infection in relation to maternal antibody status. N Eng J Med 1992;326: Pass RF, Fowler KB, Boppana SB, et al. Congenital cytomegalovirus infection following first trimester maternal infection: symptoms at birth and outcome. J Clin Virol 2006;35: Revello MG, Gerna G. Maternal, fetal and neonatal diagnosis of congenital human cytomegalovirus infection. Expert Opin Med Diagn 2008;2(5): Grangeot-Keros L, Mayaux MJ, Lebon P, et al. Value of cytomegalovirus (CMV) IgG avidity index for the diagnosis of primary infection in pregnant women. J Infect Dis 1997;175: Macé M, Sissoeff L, Rudent A, et al. A serological testing algorithm for the diagnosis of primary CMV infection in pregnant women. Prenat Diagn 2004;24: Lazzarotto T, Guerra B, Lanari M, et al. New advances in the diagnosis of congenital cytomegalovirus infection. J Clin Virol 2008;41: Occupational Safety and Health Standards: Bloodborne pathogens. (29 CFR Part ). Fed. Register. 11 Directive 2000/54/EC of the European Parliament and Council of 18 September 2000 on the protection of workers from risks related to exposure to biological agents at work. Daha fazla bilgi için, lütfen söz konusu analizör için uygun olan kullanıcı kılavuzuna, ilgili aplikasyon sayfalarına ve gerekli tüm bileşenlerin ürün bilgisi ile Yöntem Sayfalarına bakın (ülkenizde mevcutsa). Bu Yöntem Sayfasında, ondalık sayıların tam ve kesirli kısımları arasındaki işaretlemek için ondalık ayırıcısı olarak her zaman nokta kullanılır. Binler basamağı için ayırıcı kullanılmaz. Semboller Roche Diagnostics, ISO standardında listelenenlerin yanı sıra aşağıdaki sembol ve işaretleri kullanmaktadır. GTIN Kit içeriği Reaktiflerin kullanılabileceği analizörler/cihazlar Reaktif Kalibratör Sulandırıldıktan veya karıştırıldıktan sonra hacim Global Ticari Ürün Numarası Önemli ilaveler veya değişiklikler kenarda bir değişiklik çubuğu ile gösterilir. 2014, Roche Diagnostics Roche Diagnostics GmbH, Sandhofer Strasse 116, D Mannheim 6 / , V 6.0 Türkçe