JAA 2008/02. REAKTİFLER Directigen Meningitis Individual Tests: Haemophilus influenzae tip b:

Transkript

1 B Directigen Meningitis Individual Tests Haemophilus influenzae tip b, Streptococcus pneumoniae, Grup B Streptococcus veya Neisseria meningitidis Grup B / Escherichia coli K1 saptanması amaçlıdır JAA 008/0 U Türkçe KULLANIM AMACI Directigen Meningitis Individual Tests (Menenjit Tek Testleri), serebrospinal sıvı (CSF), serum veya idrarda H. influenzae tip b, S. pneumoniae, N. meningitidis Grup B ve Escherichia coli K1 e karşı antijenlerin doğrudan kalitatif olarak ön tespitinde kullanılan lateks lam aglütinasyon testleridir. Bu test, CSF ve serumda, Grup B Streptococcus a karşı antijenlerin doğrudan kalitatif olarak tespit edilmesinde de kullanılabilir. Buna ek olarak test kiti, H. influenzae tip b, S. pneumoniae, Grup B Streptococcus ve N. meningitidis Grup B şüpheli kolonilerinden doğrulama ve serogruplamaya olanak tanır. Bu bakteri antijenlerinden herhangi birini içeren bir örnek, ilgili antikor kaplı lateks bilyeleriyle reaksiyona girdiğinde, gözle görünür aglütinasyon oluşur. ÖZET VE AÇIKLAMA Özellikle küçük çocuklarda bakteremi ve menenjit tanısı zor olabilir. Çocukların %55 i bir doktor tarafından muayene edilmiş ve menenjit tespit edilmeden önce antibiyotik tedavisi başlatılmıştır. 1 CSF te mikrobiyal antijenlerin saptanması, tanı mikrobiyolojisinde hızlı ve yardımcı bir yöntemdir. Kısmi tedavi edilen menenjitte tek önemli test olabilir, çünkü Gram boyası ve kültürü negatif sonuç verebilmektedir. Belirli bir antijenin saptanması, klinik açıdan önemli bir bulgu ve antimikrobiyal tedavinin seçilmesinde yardımcı bir araçtır. Haemophilus influenzae tip b, Neisseria meningitidis ve Streptococcus pneumoniae nin bakteriyel menenjit vakalarının yaklaşık %84 ünden sorumlu üç ajan olduğu bildirilmiştir. 3 Grup B Streptococcus ve Escherichia coli K1 yeni doğan çocuklarda ana bakteriyel patojenlerdir. 4-7 Grup B streptococci ve E. coli K1 suşları çoğunlukla vajinada ve/veya rektumda koloni haline gelir ve maternal septisemi ve neonatal septisemi ile pnömoni ve menenjitle ilişkilendirilebilir. 8 E. coli K1 polisakkarit antijeninin, Neisseria meningitidis Grup B antijenine yapısal ve immünolojik açıdan benzer olduğu gösterilmiştir. 9,10 Directigen Neisseria meningitis Grup B Lateks Reaktifi iki antijeni birbirinden ayırmaz, fakat neonatal E. coli K1 menenjiti tanısında yararlı olabilir. Yenidoğanlarda Grup B streptococci ve E. Coli K1 ile ilişkilendirilen yüksek morbidite ve mortalite, son derecede önemli olan bu organizmaların hızlı ve doğru şekilde tanınmasını sağlar. 4 Hasta sıvılarında (CSF, serum, idrar) patojenik mikroorganizmaların karakteristik eksoantijenlerinin tespitinde immünolojik yöntemler, kültür gibi geleneksel yöntemlerden genel olarak daha hızlıdır. Bu teknikler karşıt immünoelektroforez (CIE) ile lateks aglütinasyonunu kapsar Lateks aglütinasyon prosedürünün, saflaştırılmış antijenin tespitinde CIE den daha hızlı ve duyarlı olduğu bulunmuştur PROSEDÜR İLKELERİ Spesifik antikorlar lateks bilyelerinin yüzeyine bağlıdır. Lateks partikül agregasyonu, spesifik antijenlerin mevcudiyetinde pozitif aglütinasyonun hızlı olarak görülmesini sağlayacak kadar büyür. Bu spesifik çözünebilir polisakkarit antijenleri, H. influenzae tip b, S. pneumoniae ve N. meningitidis Grupları A, B, C, Y veya W135 ve Escherichia coli K1 enfeksiyonu sonucu CSF, serum veya idrarda, ve de Grup B Streptococcus enfeksiyonu sonucu CSF veya serumda birikir. Bu antijenler Directigen Meningitis Combo Test Kit veya Meningitis Individual Kits ile saptanabilir (bkz. Ticari Takdim Şekli ). REAKTİFLER Directigen Meningitis Individual Tests: Haemophilus influenzae tip b: Reaktif 1 (1,0 ml), Anti-H. influenzae tip b, Tavşan Poliklonal Antikor Kaplı Lateks Süspansiyonu, Reaktif A (0,5 ml), Kontrol Lateksi, Tavşan İmmünoglobülin Kaplı Lateks Süspansiyonu, her biri %0, sodyum azit (koruyucu) içerir, Kontrol + (1,5 ml), Polivalent Pozitif Antijen Kontrolü, Grup B Streptococcus ve N. meningitidis Grupları A, C, Y ve W135, H. influenzae tip b, S. Pneumoniae antijenleri, Kontrol - (1,5 ml), Negatif Antijen Kontrolü, glisin tamponlu tuz çözeltisi, her biri %0, sodyum azit (koruyucu) içerir. Streptococcus pneumoniae: Reaktif 1 (1,0 ml), Anti-S. pneumoniae, Tavşan Poliklonal Antikor Kaplı Lateks Süspansiyonu, Reaktif A (0,5 ml), Kontrol Lateksi, Tavşan İmmünoglobülin Kaplı Lateks Süspansiyonu, her biri %0, sodyum azit (koruyucu) içerir, Kontrol + (1,5 ml), Polivalent Pozitif Antijen Kontrolü, N. meningitidis Grupları A, C, Y ve W135, H. influenzae tip b, S. Pneumoniae antijenleri, Kontrol - (1,5 ml), Negatif Antijen Kontrolü, glisin tamponlu tuz çözeltisi, her biri %0, sodyum azit (koruyucu) içerir. Grup B Streptococcus: Reaktif 1 (1,0 ml), Anti-Grup B Streptococcus, Tavşan Poliklonal Antikor Kaplı Lateks Süspansiyonu, Reaktif A (0,5 ml), Kontrol Lateksi, Tavşan İmmünoglobülin Kaplı Lateks Süspansiyonu, her biri %0, sodyum azit (koruyucu) içerir, Kontrol + (1,5 ml), Polivalent Pozitif Antijen Kontrolü, Grup B Streptococcus ve N. meningitidis Grupları A, C, Y ve W135, H. influenzae tip b, S. pneumoniae antijenleri, Kontrol - (1,5 ml), Negatif Antijen Kontrolü, glisin tamponlu tuz çözeltisi, her biri %0, sodyum azit (koruyucu) içerir.

2 Neisseria meningitidis Grup B / E. coli K1: Reaktif 1 (1,0 ml), Anti-N meningitidis Grup B / E. coli K1 Fare Monoklonal Antikor Kaplı Lateks Süspansiyonu, Reaktif A (0,5 ml), Kontrol Lateksi, Fare İmmünoglobülin Kaplı Lateks Süspansiyonu, her biri %0, sodyum azit (koruyucu) içerir, Kontrol + (1,5 ml), Polivalent Pozitif Antijen Kontrolü, N. meningitidis Grupları A, C, Y ve W135, H. influenzae tip b, Grup B Streptococcus ve S. pneumoniae antijenleri, Kontrol - (1,5 ml), Negatif Antijen Kontrolü, glisin tamponlu tuz çözeltisi, her biri %0, sodyum azit (koruyucu) içerir. Önlemler: In vitro Diyagnostik Kullanım içindir. Klinik örneklerde hepatit virüsü ve İnsan İmmün Yetmezlik Virüsü de dahil olmak üzere patojenik mikroorganizmalar bulunabilir. Kan veya diğer vücut sıvılarıyla kontamine olan tüm öğelerle çalışılırken, Standard Precautions (Standart Önlemler) 18 1 ve kurumsal düzenlemeler takip edilmelidir. Örnek kaplarını ve kontamine olmuş diğer malzemeleri atmadan önce otoklav yoluyla sterilize edin. Reaktifler: Son kullanma tarihini geçen ürünleri kullanmayın. Buzdolabından çıkardıktan sonra, reaktiflerin kullanım öncesi oda sıcaklığına (15 C) gelmesini bekleyin. Damlanın doğru yere gittiğinden emin olmak için, reaktif dağıtma şişesi dik tutulmalı, tek seferde bir serbest düşüşlü damla dağıtmalıdır. Uyarı: Sodyum azit içeren reaktifler solumayla, cilt temasıyla ve yutulduğu takdirde çok zehirlidir. Asitlerle temas etmesi çok zehirli gazların açığa çıkmasına neden olur. Ciltle teması halinde, derhal bol suyla yıkayın. Sodyum azit, kurşun ve bakırla reaksiyona girerek yüksek oranda patlayıcı metal azit oluşturabilir. Atma işleminde, azit oluşumunu önlemek için yüksek hacimde suyla çalkalayın. Kontroller: Kontrol + ve Kontrol - uygun sonuçlar vermezse kiti kullanmayın. Test Kartları: Kartlar doğru reaksiyonlar için kesinlikle düz olmalıdır. Gerekirse, kartları kıvrımın aksi yönüne arkaya doğru bükerek yassılaştırın. Kart testi alanlarında parmak izi çıkmamasına özen gösterilmelidir, aksi takdirde yağlanma meydana gelir ve test sonuçları hatalı çıkar. Her kartı bir kez kullanın ve atın. Kartları orijinal ambalajında, oda sıcaklığında kuru bir alanda saklayın. Test alanlarının sınırları dahilinde yayarken, kart yüzeyini plastik karıştırıcıyla çizmemeye özen gösterin. Örnek, test alanının dış perimetresine yayılmazsa, başka bir kart test alanı kullanın. Test Lamları (Cam): Cam lam kullanılırsa, lamı dezenfekte edin ve tekrar kullanmadan önce yıkayın. Fenolik bir dezenfektan önerilir. Tüm deterjan ve/veya dezenfektanların tekrar kullanım öncesi lamdan tamamıyla uzaklaştırıldığından emin olun. Rotasyon: Mekanik rotasyon için tavsiye edilen hız ± rpm dir, fakat rpm arasındaki rotasyon, elde edilen sonuçları önemli oranda etkilemez. Çevirici yatay düzlemde çapı yaklaşık cm olan bir daire çizmelidir. Rotasyon esnasında test örneklerinin kurumasını önlemek için hafifçe ıslatılmış bir nemlendirici kılıf kullanılmalıdır. Reaktiflerin Saklanması: Aldıktan sonra, reaktiflerin bulunduğu kartonu çıkarın ve 8 C de buzdolabına koyun. DONDURMAYIN. Reaktifler kullanılmıyorken renk kodlu kapakların karışmamasına özen gösterilerek yeniden kapatılmalı ve buzdolabına geri konmalıdır. ÖRNEK TOPLAMA VE KULLANMA Örnek toplama ve işleme prosedürlerinin ayrıntıları için uygun metinlere bakın. Örnekler mümkün olduğunca kısa sürede test edilmelidir; örnek hemen test edilemiyorsa, 8 C (en fazla 48 saat) veya -0 C de saklanmalıdır. Serum, test veya saklama öncesi tüm kandan ayrıştırılmalıdır. ÖRNEK ÖN İŞLEMESİ Kaplı cam test tüplerinin (borosilikat) C de (kaynar) su banyosunda kullanımı, örnek ön işlemede en etkili yoldur. Isıtma bloğunda cam test tüpleri kullanılabilse de, bir örneğin tamamen ısıtılmasındaki daha büyük varyasyon, tüp boyutu ve örnek hacmindeki varyasyonların bir sonucu olarak dikkate alınabilir. PROSEDÜRLER Test alanı, tüm reaktifler, test örnekleri ve test bileşenleri, kullanım esnasında oda sıcaklığında (15 C) olmalıdır. Sağlanan malzemeler : Reaktifler altında listelenen tüm malzemeler: çalışma istasyonu ve aksesuarlar. Gerekli fakat sağlanmamış malzemeler: Test lamları (cam) veya tek kullanımlık kartlar (Directigen Meningitis, jenerik, 1 test döngüsü), Directigen Örnek Tamponu, Çevirici, (Bkz Ticari Takdim Şekli ) ± rpm, Nemlendirici kılıf, Mikropipetör, 50 µl dağıtım, Pipet uçları } Ayrıca CSF, serum ve idrar örneklerinin hazırlanması, saklanması ve kullanımı için gerekli ekipman ve laboratuvar malzemeleri de gerekmektedir. Örnek Hazırlama (CSF): 1. H. influenzae tip b, S. pneumoniae ve Grup B Streptococcus için CSF örneklerini test ederken, örnekleri 3 dakika boyunca C ye (örn; su banyosu veya ısıtma bloğu) ısıtın ve kullanmadan önce oda sıcaklığına gelmesini bekleyin. Optimum duyarlılık için, N. meningitidis Grup B / E. coli K1 testi, ısıtılmamış örnekler üzerinde yapılmalıdır (bkz. Prosedürün Kısıtlı Olduğu Alanlar ).. Türbidite gösteren CSF örneklerinde, test öncesi x g de 10 dakika boyunca ısıttıktan sonra santrifüje tabi tutun. Süpernatant sıvı, test örneği olarak kullanılacaktır. 3. Test Prosedürü nde anlatıldığı üzere test örneği (uygun şekilde ısıtılmış veya ısıtılmamış). Örnek Hazırlama (Serum): 1. En az 0,4 ml 1:1 serum örneklerini Directigen Örnek Tamponuyla seyreltin ve karıştırın.. Örnekleri 5 dakika boyunca C de ısıtın (örn; su banyosu veya ısıtma bloğu) ve kullanmadan önce oda sıcaklığına soğumaya bırakın. 3. Ahşap bir uygulama çubuğu kullanarak, oluşan protein pıhtısını kırın ve dikkatlice vorteks uygulayın (yaklaşık 5 saniye). 4. Minimum x g de 15 dakika boyunca santrifüje tabi tutun. 5. Süpernatant sıvıyı Test Prosedürü nde açıklandığı gibi test edin.

3 Örnek Hazırlama (Konsantre Olmayan İdrar): 1. En az 0,4 ml 1:1 idrar örneklerini Directigen Örnek Tamponuyla seyreltin ve karıştırın.. Örnekleri 5 dakika boyunca C de ısıtın (örn; su banyosu veya ısıtma bloğu) ve kullanmadan önce oda sıcaklığına soğumaya bırakın. 3. Minimum x g de 10 dakika boyunca santrifüje tabi tutun. 4. Süpernatant sıvıyı Test Prosedürü nde açıklandığı gibi test edin. Örnek Hazırlama (Konsantre İdrar): 1. Bulanık olan veya partikülat madde içeren idrar örnekleri, konsantrasyon öncesinde 10 dakika boyunca x g de santrifüje tabi tutulmalıdır.. İdrar örnekleri Minicon B-15 konsantrasyon cihazı (Amicon Corporation, Danvers, Massachusetts, ABD) ile 5 kat konsantre edilebilir. 3. En az 00 µl 1:1 idrarı Directigen Örnek Tamponuyla seyreltin ve karıştırın. 4. Örnekleri 5 dakika boyunca C de ısıtın (örn; su banyosu veya ısıtma bloğu) ve kullanmadan önce oda sıcaklığına soğumaya bırakın. 5. Minimum x g de 10 dakika boyunca santrifüje tabi tutun. 6. Süpernatant sıvıyı Test Prosedürü nde açıklandığı gibi test edin. Kolonilerin Doğrulanmasında Kültürden Hazırlama: 1. Directigen Meningitis lateks reaktifleriyle test edilmeye uygun olan organizmaların morfolojik ve Gram boyası özelliklerine uygun 18 4 saatlik kültürlerden elde edilen agar yüzeyindeki şüpheli kolonileri bulun. Not: Gram boyası test öncesi, organizmaların Directigen Meningitis lateks reaktifleriyle test edilmeye uygun olduğunu doğrulamak için uygulanmalıdır.. 0,5 ml (yaklaşık 10 damla) Kontrol reaktifini küçük bir cam test tüpüne pipetleyin (10 x 75 mm veya eşdeğeri). 3. Steril bir spiral kullanarak orijinal veya alt kültür plakasından benzer morfolojide, izole edilmiş birkaç ( 3) koloni seçin ve McFarland #1 türbidite standardına eşit bir süspansiyona ulaşmak için yukarıdaki tüp içinde süspanse edin. Not: Aşırı inokülasyon, hatalı sonuçlara yol açabilecek yoğun süspansiyon verebilir. 4. Süspansiyonu 3 dakika boyunca C de ısıtın (örn.: kaynar su banyosu veya ısıtma bloğu) ve test öncesi oda sıcaklığına soğumaya bırakın. 5. Minimum 1400 x g de 10 dakika boyunca santrifüje tabi tutun. 6. Test Prosedürü nde açıklandığı gibi örnekleri test edin. Not: Atipik aglütinasyon modelleri gözlenirse, Prosedürün Kısıtlı Olduğu Alanlar a bakın. Kullanıcı Tarafından Kalite Kontrolü: Adım 1, Test Prosedürü nde açıklandığı üzere, test edilen her örnek serisine Kontrol + ve Kontrol - yi dahil edin. Gerekli kalite kontroller ilgili yerel, devlet ve/veya federal düzenlemeler veya akreditasyon gerekliliklerine veya laboratuvarınızın standart Kalite Kontrol prosedürlerine uygun olarak gerçekleştirilmelidir. Kullanıcının, uygun Kalite Kontrol uygulamaları için ilgili CLSI (eski adı NCCLS) yönergelerine ve CLIA düzenlemelerine uyması önerilir. Test Prosedürü (CSF, serum, idrar, konsantre idrar ve koloni doğrulama): Reaktifleri buzdolabından çıkarın ve reaktif tepsisini kit Çalışma İstasyonunda bulunan yuvaya yerleştirin. NOT: Bkz. Prosedür Tablo Açıklamaları, sayfa 10, katlanmış. Bu kitler için tavsiye edildiği üzere yalnızca test kartı veya 1 döngülü cam lam kullanın. Cam lamı kullanmadan önce, tiftiksiz bir bezle tamamen temizleyin. 1. Bir damla Kontrol + yı daire 1, bölüm A ya damlatın. Bir damla Kontrol - yi daire, bölüm A ya koyun.. 50 µl test örneğini daire 1 ve, bölüm B ye mikropipetleyin. Sonraki test örnekleri bölüm C deki daire 1 ve ye ya da bölüm A, B ve C deki daire 3 ve 4 e konabilir. 3. Dağıtma şişesini kapağından tutarak, her reaktifi tamamen karıştırabilmek için dikkatlice sallayın (ters çevirmeden). Şişenin kapağını açmadan önce, uç kısımda lateks kalmadığından emin olmak için, şişenin tabanını tezgah üstüne hafifçe vurun. 4. Bir damla Reaktif 1 i daire 1 ve, bölüm A ve daire 1, bölüm B ye dağıtın. İlave örnekler test edilecekse, uygun şekilde, daire 1, bölüm C ye ve daire 3 bölüm A, B ve C ye birer damla damlatın. 5. Bir damla Reaktif A yı (Kontrol Lateks Süspansiyonu) daire, bölüm B ye dağıtın. İlave örnekler test edilecekse, uygun şekilde, daire, bölüm C ye ve daire 4 bölüm A, B ve C ye birer damla damlatın. 6. Her bir dairedeki örnekleri ve lateks reaktiflerini plastik bir karıştırıcıyla, sırayla önce ilk ucu sonra diğer daire için zıt yöndeki ucu kullanarak karıştırın. Karıştırıcıyı atın. 7. Lamı veya kartı mekanik bir çevirici üzerine yerleştirin ve 10 dakika boyunca ± rpm hızında döndürün. Buharlaşmayı önlemek için nemlendirici kılıf kullanın dakika sonunda hemen test sonuçlarını yüksek yoğunluklu akkor ışık altında makroskopik biçimde okuyun. TEST SONUÇLARININ YORUMLANMASI Önce Kontrol + ve Kontrol - test sonuçlarını kaydedin. Kontrol + 10 dakika içinde Reaktif 1 le aglütinasyon vermelidir. Kontrol - ise aglütinasyon göstermemelidir. Reaktif A içeren dairedeki aglütinasyon, reaksiyonu yorumlanamaz kılar. Hasta test sonuçlarını kaydedin: Pozitif Test: Reaktif 1 ile aglütinasyon göstermelidir. Reaktif 1 ile her türlü aglütinasyon derecesi, ilgili antijenin bulunduğunu belirtir. Reaktif A Aglütinasyonu, reaksiyonu yorumlanamaz kılar. Negatif Test: Reaktif 1 veya Reaktif A ile aglütinasyon göstermemelidir. 3

4 PROSEDÜRÜN KISITLI OLDUĞU ALANLAR Bu lateks aglütinasyon testleri, bakteriyel kültür yerine kullanılamaz. Bakteriyel menenjit enfeksiyonunu doğrulayıcı tanısı yalnızca uygun kültür prosedürleriyle mümkündür ve rutin olarak gerçekleştirilmelidir. Enfeksiyonun erken safhasındaki örnekler gibi çok düşük antijen seviyesi içeren örnekler hatalı negatif sonuç verebilir. Ayrıca, çok yüksek antijen konsantrasyonlu örnekler, hatalı negatif sonuçlar vererek prozon etkiler gösterebilir. Kapsamlı biçimde araştırılmış olmasa da, prozon fenomeni, yalnızca, aşırı derecede yüksek antijen seviyeleriyle inoküle edilen örneklerde görülebilir, klinik örneklerde görülmez. Bu test, CSF, serum ve idrarda H. influenzae tip b, S. pneumoniae, N. meningitidis grup B ve E. coli K1 ve de CSF ve serumda Grup B Streptococcus a karşı antijenlerin kalitatif olarak tespit edilmesi içindir. Bununla birlikte test kiti, H. influenzae tip b, Grup B Streptococcus, S. pneumoniae ve N. meningitidis Grup B şüpheli kolonileriyle de kullanılabilir. Diğer örnek türleriyle performansı test edilmemiştir. Directigen Meningitis Tek Testleri, kan kültürü ortamıyla kullanılamaz. Pozitif veya negatif Grup B streptokok sonucu yalnızca, Grup B streptokok antijeninin varlığının veya yokluğunun bir göstergesidir ve Grup B streptokok hastalığının varlığı veya yokluğu açısından tanı oluşturmaz. Bu cihaz, Grup B streptokok septisemi ve/veya menenjit tanısında bakteriyel kültürün yerine kullanılmamalıdır. Grup B streptokok antijeni için pozitif veya negatif bir sonuç, ön tahmin niteliği taşımaktadır. Sonuç, kültürle doğrulanmalıdır. Grup B streptokok antijeninin doğrudan kalitatif olarak tespitinde önerilen tek bebek örneği, serum ve serebrospinal sıvıdır. Bebek idrarının, Grup B streptokok antijeninin doğrudan kalitatif tespitinde kullanılan cihazlarla test edilmesi, şu anda tavsiye edilmemektedir; bu testin güvenilir bir Grup B streptokok hastalığı prediktörü olarak kullanımını destekleyecek yeterlilikte performans verileri henüz bulunmamaktadır. Kapsüler bir antijene sahip olmayan Pneumococcal ve H. influenza tip B suşları, immünolojik tekniklerle saptanamayabilir. H. influenzae reaktifinin çapraz reaksiyonlarının, Escherichia coli K mevcudiyetinde oluştuğu bilinmektedir. Diğer çapraz reaksiyonlar, yorumlanamaz ve hatalı pozitif sonuç alınabilir ve uygun örnek hazırlamayla azaltılabilir veya yok edilebilir (bkz. Örnek Ön İşlemesi ve PROSEDÜRLER Örnek Hazırlama ). N. meningitides Grup B ve E. Coli K1 antijeni ile inoküle edilen CSF örnekleri ile yapılan çalışmalar, duyarlılıktaki kaybın, ısıtılmamış örneklere kıyasla, ısıtma sonrası oluşabileceğini belirtmektedir. İşlenmemiş serum ve idrar örnekleri, lateks reaktifleriyle yorumlanamaz sonuçlar verebilir. Bkz. PROSEDÜRLER Örnek Hazırlama. Her derecede türbidite gösteren CSF örnekleri veya işlenmiş idrar örnekleri, test öncesi x g de 10 dakika boyunca ısıttıktan sonra santrifüje tabi tutulmalıdır. Süpernatant sıvı, test örneği olarak kullanılacaktır. Yorumlanamaz veya şüpheli hatalı pozitif sonuçlar veren, PROSEDÜRLER Örnek Hazırlama bölümüne göre işlenen idrar örnekleri, MILLIPORE MillexHA 0,45 µm filtre (#SLHA-050S) kullanılarak filtrelenebilir ve reaktif test lateks(ler)i ve ilgili kontrol lateks(ler)i ile yeniden test edilebilir. Yorumlanamaz veya atipik aglütinasyon reaksiyonları veren koloni doğrulama örnekleri için, Kontrol - reaktifli süpernatantın 1:10 seyreltiği gerekebilir. Bir McFarland # 1 türbidite standardından büyük bakteriyel süspansiyonlardan kaçınmaya özen gösterilmelidir. İdrar lateks aglütinasyon testleri, lokalizasyon belirtileri olmadan ateşi yükselen bebeklerde patojenik organizma varlığının ön tespitinde kullanılabilir. Fakat, bebeklerde idrar antijenin atılımı, Haemophilus influenzae tip b (Hib) aşılarının uygulanmasının ardından 3 14 gün veya en fazla gün devam edebilir. Antijenin görülme sıklığı ve süresi, hastaya ve verilen aşıların tipine bağlıdır. Hastanın aşı geçmişi, aşılanan bebeklerde pozitif idrar Hib antijeni sonuçlarının doğru yorumlanabilmesi açısından önemlidir. -4 Çapraz reaksiyonlar, Directigen S. pneumoniae lateks reaktifiyle, viridan streptokok grubunun (S. mitis, S. sanguis II, S. salivarius) 5 bazı suşları ile üretilebilir. Viridan streptokok grubunun S. pneumoniae den ayırt edilmesi için ilave testlere gerek duyulabilir. Gram boyası, koloni doğrulama prosedürüyle kullanılmadan önce uygulanmalıdır. Morfolojik açıdan benzer olan, fakat şüpheli koloniyle Gram boyası tutarsızlığı olan kan kültürü plakalarından elde edilen belirli bakteri izolatları, Grup B Strep lateksi ile spesifik olmayan aglütinasyon ve/veya hatalı pozitif reaksiyon sergileyebilir (beta-hemolitik patojenik olmayan Neisseria türleri). BEKLENEN DEĞERLER Haemophilus influenzae tip b, Neisseria meningitidis ve Streptococcus pneumoniae nin bakteriyel menenjit vakalarının yaklaşık %84 ünden sorumlu üç ajan olduğu bildirilmiştir. 3 PERFORMANS ÖZELLİKLERİ Duyarlılık: Retrospektif bir klinik değerlendirmede, 177 serebrospinal sıvı (ısıtılmış ve ısıtılmamış) 31 serum ve 40 idrar örneği, Directigen Meningitis lateks reaktifleri ve karşıt immünoelektroforez (CIE) ile test edilmiştir (Tablo 1, bkz. sayfa 7). Test edilen 48 örnek, orijinal olarak kültür veya CIE doğrulanmış Haemophilus influenzae tip b, Streptococcus pneumoniae, Neisseria meningitidis Grup B veya Grup B streptokok enfeksiyonu vakalarının görüldüğü hastalardan türetilmiştir. E. coli K1 duyarlılığı, vücut sıvılarına inoküle edilmiş tam hücre E. coli K1 kullanılarak belirlenmiş ve piyasada bulunan lateks aglütinasyon reaktifiyle karşılaştırılmıştır. Directigen Neisseria meningitidis Grup B Lateks (Reaktif 1), CSF (4/4), serum (4/4), idrar (3/4) ve konsantre idrarda (4/4) E. coli K1 i saptayabilir. Son nokta duyarlılıkları, piyasada bulunan başka bir lateks reaktifinde gözlenenlere eşit veya onlardan daha iyidir. 15 Directigen Meningitis lateks reaktifleri, CSF, serum ve idrar örneklerinde antijenin tespit edilmesi açısından CIE ye eşittir veya CIE den daha duyarlıdır. Her Directigen lateks reaktifi, CSF, serum ve idrara aşılanmış kısmen saf antijenin saptanmasındaki etkinliği açısından karşıt immünoelektroforez ile karşılaştırılmıştır. Her bir antijene özgü ticari antiserum, CIE testinde kullanılmıştır. Directigen lateks reaktifleri CIE den daha duyarlıdır. 15 Ayrıca, kültürü doğrulanmış Grup B streptokok enfeksiyonlu hastalardan alınan CSF (ısıtılmış ve ısıtılmamış) ve idrar örnekleri üzerinde retrospektif bir çalışma gerçekleştirilmiştir. Directigen ile, sekiz CSF örneğinin 7 sinde, 5 konsantre olmayan idrar örneğinin sinde ve 5 kat konsantre on idrar örneğinin onunda antijen saptanmıştır. 4

5 Özgünlük: Directigen Meningitis reaktiflerinin özgünlüğü, beş enstitüde yürütülen klinik çalışmalarda, prospektif CSF, serum ve idrar örneklerinin test edilmesiyle belirlenmiştir (Tablo, bkz sayfa 7). Elde edilen veriler, test edilen lateks ve örneğe dayalı olarak, %97 özgünlük aralığı gösterir. Koloni Doğrulama: Lateks reaktifleri, organizmaların morfolojik özelliklerini karşılayan izole edilmiş kolonilerin süspansiyonları kullanılarak test edilmiştir. Performans özellikleri Tablo 3 te listelenmiştir (bkz. sayfa 7). TİCARİ TAKDİM ŞEKLİ Kat. No. Açıklama Directigen Kitleri: 560 H. influenzae tip b Test Kiti, ( hasta testi, 60 kontrol) S. pneumoniae Test Kiti, ( hasta testi, 60 kontrol) Group B Strep Test Kiti, ( hasta testi, 60 kontrol) N. meningitidis Grup B / E. coli K1 Test Kiti, ( hasta testi, 60 kontrol) N. meningitidis Grupları A, C, Y ve W135 Test Kiti, ( hasta testi, 60 kontrol) Meningitidis Combo Test Kiti, ( hasta testi, 60 kontrol). Directigen Kartları (tek kullanımlık): Meningitis, jenerik, 1 test dairesi, lu Kutu N. meningitidis Grupları A, C, Y ve W135, 10 test dairesi, lu Kutu Directigen Örnek Tamponu, 8 ml Directigen Meningitis Negatif Kontrol Reaktifi, 9 ml, 4 lü Kutu Macro-Vue Card Test Rotator, nemlendirici kılıflı, ± rpm, otomatik zamanlayıcı, sürtünme gücü, Model 51-II. REFERANSLAR 1. Rothrock, S.G., S.M. Green, J. Wren, D. Letai, L. Daniel-Underwood, E. Pillar: Pediatric bacterial meningitis: is prior antibiotic therapy associated with unaltered clinical presentation?, Annals Emerg. Med. 1:146 15, Fasola, E. and P. Ferrieri: Laboratory diagnostic methods for central nervous system infections, Neuro. Clinics N. Amer. 3:79 90, Morbidity and Mortality Weekly Report (CDC), Surveillance summary: bacterial meningitis and meningococcemia, United States, 8:77 79, Finegold, S.M. and Martin, W.J.: Bailey and Scott s Diagnostic Microbiology, 6th Ed., C.V. Mosby Co., Baker, C.J.: Summary of the workshop on perinatal infections due to group B Streptococcus, NIH News, J. Infec. Dis., 136:137 15, Mulder, C.J.J., Van Alphen, L. and Zanen, H.C.: Neonatal meningitis caused by Escherichia coli in the Netherlands., J. Infect. Dis., 150:935, Sarff, L.D., McCracken, G.H., Jr., Schiffer, M.S., Glocle, M. P., Robbins, J.B. and Orskov, F.: Epidemiology of Escherichia coli K1 in healthy and diseased newborns., Lancet, 1: , Blaunstein, H., Tucker, E.B. and Gibson, B.C.: Identification and significance of Streptococcus agalactiae, Am. J. Clin. Path., 51:07 13, Kasper, D.L., Winkelhake, J.L., Zollinger, W.D., Brandt, B.L. and Artenstein, M.S.: Immunochemical similarity between polysaccharide antigens of Escherichia coli 07:K1(L): NM and group B Neisseria meningitidis, J. Immunol., 110:6 68, Lifely, M.R., A.S. Gilbert and C. Moreno: Sialic acid polysaccharide antigens of Neisseria meningitidis and Escherichia coli: esterification between adjacent residues., Carbohydr. Res., 94:193 03, Edwards, E.A.: Immunologic investigations of meningoccoccal disease, group-specific Neisseria meningitidis antigens present in the serum of patients with fulminant meningococcemia., J. Immunol. 106: , Whittle, H. C., Egler, J.J., Tugwell, P. and Greenwood, B.M.: Rapid bacteriological diagnosis of pyogenic meningitis by latex agglutination. Lancet, :619 61, Ingram, D.L., Anderson, P. and Smith, D.H.: Countercurrent immunoelectrophoresis in the diagnosis of disease caused by Haemophilus influenzae type b., J. Ped., 81: , Newman, R.B., Stevens, R.W. and Gaafar, H.H.: Latex agglutination test for the diagnosis of Haemophilus influenzae meningitis., J. Lab. Clin. Med., 76: , Data on file at BD Diagnostic Systems. 16. Tilton, R.C., Dias, F. and Ryan, R.W.: Comparative evaluation of three commercial products and counterimmunoelectrophoresis for the detection of antigens in cerebrospinal fluid, J. Clin. Microbiol., 0:31 34, Rench, M.A., Metzger, T. G. and Baker, C. J.: Detection of group B. streptococcal antigen in body fluids by a latexcoupled monoclonal antibody assay, J. Clin. Microbiol., 0:85 854, Clinical and Laboratory Standards Institute Approved Guideline M9-A3. Protection of laboratory workers from occupationally acquired infections, 3rd ed. CLSI, Wayne, PA. 19. Garner, J.S Hospital Infection Control Practices Advisory Committee, U.S. Department of Health and Human Services, Centers for Disease Control and Prevention. Guideline for isolation precautions in hospitals. Infect. Control Hospital Epidemiol. 17: U.S. Department of Health and Human Services Biosafety in microbiological and biomedical laboratories, HHS Publication (CDC) 4th ed. U.S. Government Printing Office, Washington, D.C. 1. Directive 000/54/EC of the European Parliament and of the Council of 18 September 000 on the protection of workers from risks related to exposure to biological agents at work (seventh individual directive within the meaning of Article 16(1) of Directive 89/391/EEC). Official Journal L6, 17/10/000, p

6 . Jones, R.G., Bass, J.W., Weisse, M.E., and Vincent, J.M. Antigenuria after immunization with Haemophilus influenzae oligosaccharide CRM197 conjugate (HbOC) vaccine. Pediatr. Inf. Dis. J. 1991; 10: Goepp, J.G., Hohenboken, M., Almeido-Hill, J., and Santocham, M. Persistent urinary antigen excretion to infants vaccinated with Haemophilus influenzae tybe b capsular polysaccharide conjugated with outer membrane protein from Neisseria meningitidis. Pediatr. Inf. Dis. J. 199; 11: Rothstein, E.P., Madore, D.V., et al. Comparison of antigenuria after immunization with three Haemophilus influenzae type b conjugate vaccines. Pediatr. Inf. Dis. J. 1991; 10: Holmberg, H., Danielsson D., Hardie, J., Krook, A., Whiley, R.: Cross-reactions between α-streptococci and omniserum, a polyvalent pneumoccocal serum, demonstrated by direct immunofluorescence, immunoelectroosmophoresis, and latex agglutination, J. Clin Microbiol., 1: ,

7 Tablo 1 Saklanan Örneklerde Directigen ve CIE Karşılaştırması Örnek Mevcut Olan Antijen Yöntemler Pozitif Sayısı Negatif Sayısı H. influenzae tip b Directigen CIE S. pneumoniae Directigen CIE 33 1 CSF 4 4 Grup B Streptococcus Directigen CIE N. meningitidis Grup B Directigen CIE H. influenzae tip b Directigen CIE 5 4 Serum 17 5 S. pneumoniae Directigen CIE H. influenzae tip b Directigen CIE İdrar S. pneumoniae Directigen CIE Grup B Streptococcus Directigen CIE 3 Tablo H. influenzae tip b, S. pneumoniae, Grup B Streptococcus veya N. meningitidis Grup B Enfeksiyonu Olmayan Hastalardan Alınan Örneklerin Test Edilmesi Örnek Lateks Reaktifi Test edilenlerin sayısı H. influenzae tip b 146 CSF S. pneumoniae 146 Grup B Streptococcus 37 N. meningitidis Grup B / E. coli K1 148 Serum İdrar İdrar kons. 5 x Şüpheli Organizma H. influenzae tip b S. pneumoniae Grup B Streptococcus N. meningitidis Grup B / E. coli K1 H. influenzae tip b S. pneumoniae Grup B Streptococcus N. meningitidis Grup B / E. coli K1 H. influenzae tip b S. pneumoniae Grup B Streptococcus N. meningitidis Grup B / E. coli K1 Test edilenlerin sayısı Tablo Koloni Doğrulama Performans Özellikleri Directigen Meningitis / Biyokimyasal Tanıma Bağıl Duyarlılık (%95 Güven Aralığı) Negatif Sayısı Bağıl Özgünlük (%95 Güven Aralığı) Özgünlük % si % Yorumlanamaz Başlangıç Testi H. influenzae tip b 11 % (9 ) %98,5 (9 ) %3,6 S. pneumoniae 14 %93 (84 98) %79,0 (66 88) 1 %0 Grup B Streptococcus 19 % (95 ) %90,5 (80 96) 1 %0 N. meningitidis Grup B 106 %85 (55 98) % (96 ) %4,7 1 Bkz. Prosedürün Kısıtlı Olduğu Alanlar. 1:10 seyreltimle tekrarlama testi sonrası sonuçlar. 7

8 Manufacturer / Výrobce / Producent / Fabrikant / Tootja / Valmistaja / Fabricant / Hersteller / ÊáôáóêåõáóôÞò / Gyártó / Ditta produttrice / Gamintojas / Producent / Fabricante / Výrobca / Tillverkare / Производител / Producãtor / Üretici / Proizvoðaè Catalog number / Katalogové èíslo / Katalognummer / Catalogusnummer / Kataloogi number / Tuotenumero / Numéro catalogue / Bestellnummer / Áñéèìüò êáôáëüãïõ / Katalógusszám / Numero di catalogo / Katalogo numeris / Numer katalogowy / Número do catálogo / Katalógové èíslo / Número de catálogo / Каталожен номер / Numãr de catalog / Katalog numarası / Kataloški broj Authorized Representative in the European Community / Autorizovaný zástupce pro Evropskou unii / Autoriseret repræsentant i EU / Erkend vertegenwoordiger in de Europese Unie / Volitatud esindaja Euroopa Nõukogus / Valtuutettu edustaja Euroopan yhteisössä / Représentant agréé pour la C.E.E. / Autorisierte EG-Vertretung / ÅîïõóéïäïôçìÝíïò áíôéðñüóùðïò óôçí ÅõñùðáúêÞ Êïéíüôçôá / Hivatalos képviselet az Európai Unióban / Rappresentante autorizzato nella Comunità europea / Ágaliotasis atstovas Europos Bendrijoje / Autorisert representant i EU / Autoryzowane przedstawicielstwo w Unii Europejskiej / Representante autorizado na União Europeia / Autorizovaný zástupca v Európskom spoloèenstve / Representante autorizado en la Comunidad Europea / Auktoriserad representant i EU / Оторизиран представител в ЕU / Reprezentant autorizat în Uniunea Europeanã / Avrupa Topluluğu Yetkili Temsilcisi / Ovlašæeni predstavnik u Evropskoj zajednici ограничения Use by / Spotøebujte do / Anvendes før / Houdbaar tot / Kasutada enne / Viimeinkäyttöpäivä / A utiliser avant / Verwendbar bis / Çìåñïìçßá ëþîçò / Felhasználhatóság dátuma / Usare entro / Naudokite iki / Brukes før / Stosowaæ do / Utilizar em / Použite do / Usar antes de / Använd före / Използвайте до / A se utiliza pânã la / Son kullanma tarihi / Upotrebiti do YYYY-MM-DD / YYYY-MM (MM = end of month) / RRRR-MM-DD / RRRR-MM (MM = konec mìsíce) ÅÅÅÅ-MM-DD / ÅÅÅÅ-MM (MM = slutning af måned) / JJJJ-MM-DD / JJJJ-MM (MM = einde maand) AAAA-KK-PP / AAAA-KK (KK = kuu lõpp) VVVV-KK-PP / VVVV-KK (kuukauden loppuun mennessä) AAAA-MM-JJ / AAAA-MM (MM = fin du mois) / JJJJ-MM-TT / JJJJ-MM (MM = Monatsende) / ÅÅÅÅ-ÌÌ-ÇÇ / ÅÅÅÅ-ÌÌ (ÌÌ = ôýëïò ôïõ ìþvá) / ÉÉÉÉ-HH-NN / ÉÉÉÉ-HH (HH = hónap utolsó napja) AAAA-MM-GG / AAAA-MM (MM = fine mese) / MMMM-MM-DD / MMMM-MM (MM = mënesio pabaiga) ÅÅÅÅ-MM-DD / ÅÅÅÅ-MM (MM = slutten av måneden) RRRR-MM-DD / RRRR-MM (MM = koniec miesi¹ca) AAAA-MM-DD / AAAA-MM (MM = fim do mês) / RRRR-MM-DD / RRRR-MM (MM = koniec mesiaca) aaaa-mm-dd / aaaa-mm (mm = fin del mes) / ÅÅÅÅ-MM-DD / ÅÅÅÅ-MM (MM = slutet på månaden) / ГГГГ-ММ-ДД / ГГГГ-ММ (ММ = края на месеца) / AAAA-LL-ZZ / AAAA-LL (LL = sfârºitul lunii) / YYYY-AA-GG / YYYY-AA (AA = ayın sonu) / GGGG-MM-DD / GGGG-MM (MM = kraj meseca) In Vitro Diagnostic Medical Device / Lékaøské zaøízení urèené pro diagnostiku in vitro / In vitro diagnostisk medicinsk anordning / Medisch hulpmiddel voor in vitro diagnose / In vitro diagnostika meditsiiniaparatuur / Lääkinnällinen in vitro -diagnostiikkalaite / Dispositif médical de diagnostic in vitro / Medizinisches In-vitro-Diagnostikum / In vitro äéáãíùóôéêþ éáôñéêþ óõóêåõþ / In vitro diagnosztikai orvosi eszköz / Dispositivo medico diagnostico in vitro. / In vitro diagnostikos prietaisas / In vitro diagnostisk medisinsk utstyr / Urz¹dzenie medyczne do diagnostyki in vitro / Dispositivo médico para diagnóstico in vitro / Medicínska pomôcka na diagnostiku in vitro / Dispositivo médico de diagnóstico in vitro / Medicinsk anordning för in vitro-diagnostik / Медицински уред за диагностика ин витро / Aparaturã medicalã de diagnosticare in vitro / In Vitro Diyagnostik Tıbbi Cihaz / Medicinski ureðaj za in vitro dijagnostiku Temperature limitation / Teplotní omezení / Temperaturbegrænsning / Temperatuurlimiet / Temperatuuri piirang / Lämpötilarajoitus / Température limite / Zulässiger Temperaturenbereich / ¼ñéï èåñìïêñáóßáò / Hõmérsékleti határ / Temperatura limite / Laikymo temperatûra / Temperaturbegrensning / Ograniczenie temperatury / Limitação da temperatura / Ohranièenie teploty / Limitación de temperatura / Temperaturbegränsning / Температурни / Limitare de temperaturã / Sıcaklık sınırlaması / Ogranièenje temperature Batch Code (Lot) / Kód (èíslo) šarže / Batch kode (Lot) / Chargenummer (lot) / Partii kood / Eräkoodi (LOT) / Code de lot (Lot) / Chargencode (Chargenbezeichnung) / Êùäéêüò ðáñôßäáò (Ðáñôßäá) / Tétel száma (Lot) / Codice del lotto (partita) / Partijos numeris (Lot) / Batch-kode (Serie) / Kod partii (seria) / Código do lote (Lote) / Kód série (šarža) / Código de lote (Lote) / Satskod (parti) / Код (Партида) / Numãr lot (Lotul) / Parti Kodu (Lot) / Kod serije Contains sufficient for <n> tests / Dostateèné množství pro <n> testù / Indeholder tilstrækkeligt til <n> test / Voldoende voor <n> tests / Küllaldane <n> testide jaoks / Sisältöon riittävä <n> testejä varten / Contenu suffisant pour <n> tests / Ausreichend für <n> Tests / ÐåñéÝ åé åðáñêþ ðïóüôçôá <n> åîåôüóåéò / <n> teszthez elegendõ / Contenuto sufficiente per <n> test / Pakankamas kiekis atlikti <n> testø / Innholder tilstrekkelig for <n> tester / Zawiera iloœæ wystarczaj¹c¹ do <n> testów / Contémo suficiente para <n> testes / Obsah vystaèí na <n> testov / Contenido suficiente para <n> pruebas / Räckertill <n> antal tester / Съдържанието е достатъчно за <n> теста / Conþine suficient pentru <n> teste / <n> testleri için yeterli miktarda içerir / Sadržaj dovoljan za <n> testova Consult Instructions for Use / Prostudujte pokyny k použití / Læs brugsanvisningen / Raadpleeg gebruiksaanwijzing / Lugeda kasutusjuhendit / Tarkista käyttöohjeista / Consulter la notice d emploi / Gebrauchsanweisung beachten / Óõìâïõëåõôåßôå ôéò ïäçãßåò ñþóçò / Olvassa el a használati utasítást / Consultare le istruzioni per l'uso / Skaitykite naudojimo instrukcijas / Se i bruksanvisningen / Zobacz instrukcja u ytkowania / Consulte as instruções de utilização / Pozri Pokyny na používanie / Consultar las instrucciones de uso / Se bruksanvisningen / Направете справка в инструкциите за употреба / Consultaþi instrucþiunile de utilizare / Kullanım Talimatları na başvurun / Pogledajte uputstvo za upotrebu 8

9 Negative control / Negativní kontrola / Negativ kontrol / Negatieve controle / Negatiivne kontroll / Negatiivinkontrolli / Contrôle négatif / Negative Kontrolle / Áñíçôéêüò Ýëåã ïò / Negatív kontroll / Controllo negativo / Neigiama kontrolë / Negativ kontroll / Kontrola ujemna / Controlo negativo / Negatívna kontrola / Control negativo / Отрицателен контрол / Etalon negativ / Negatif kontrol / Negativna kontrola Positive control / Pozitivní kontrola / Positiv kontrol / Positieve controle / Positiivne kontroll / Positiivinkontrolli / Contrôle positif / Positive Kontrolle / èåôéêüò Ýëåã ïò / Pozitív kontroll / Controllo positivo / Teigiama kontrolë / Positiv kontroll / Kontrola dodatnia / Controlo positivo / Pozitívna kontrola / Control positivo / Положителен контрол / Etalon pozitiv / Pozitif kontrol / Pozitivna kontrola 9

10 Prosedür Tablosu Test Performansı Pozitif Negatif 10

11 B m Becton, Dickinson and Company 7 Loveton Circle Sparks, Maryland 115 USA A BENEX Limited Bay K 1a/d, Shannon Industrial Estate Shannon, County Clare, Ireland Tel: Fax: MILLIPORE is a trademark of Millipore Corporation. BD, BD Logo, Directigen and Macro-Vue are trademarks of Becton, Dickinson and Company. 008 BD.