BİYOBENZER ÜRÜNLERDE KALİTE KONTROLÜ. Biyofarmasötikler ve Biyobenzerler 7 Mayıs 2012, Ege Palas, İzmir

Ebat: px

Şu sayfadan göstermeyi başlat:

Download "BİYOBENZER ÜRÜNLERDE KALİTE KONTROLÜ. Biyofarmasötikler ve Biyobenzerler 7 Mayıs 2012, Ege Palas, İzmir"

Ilkin Baykara
8 yıl önce
İzleme sayısı:

1 BİYOBENZER ÜRÜNLERDE KALİTE KONTROLÜ Biyofarmasötikler ve Biyobenzerler 7 Mayıs 2012, Ege Palas, İzmir Doç. Dr. Ercüment Karasulu Ege Üniversitesi İlaç Geliştirme ve Farmakokinetik Araştırma- Uygulama Merkezi (ARGEFAR)

Dr. Ercüment Karasulu Ege Üniversitesi İlaç Geliştirme

2 İRDELEME

3 İRDELEME Bu ürünlerin üretimi ülkemizde yapılamamaktadır, ihtiyaç ithalat ile karşılanmaktadır. Türkiye de 2011 yılında 10 milyar dolarlık ilaç harcamasının yaklaşık %5 bu ilaçlara ayrılmıştır. Ancak bu ilaçlar kutu bazında ancak 1.7 milyar kutuda 9 milyon kutu yani %0.5 ine karşılık gelmektedir.

Türkiye de 2011 yılında 10 milyar dolarlık ilaç harcamasının yaklaşık %5

4 İRDELEME İnsülin için Türkiye de harcanan kutu 2010 yılında 6.5 milyon kutu,195 milyon dolar 2011 yılında 7.5 milyon kutu, 180 milyon dolar olmuştur.

5 İRDELEME Kanser tedavisinde kullanılan mabslar ( trastuzumab vb.) ve trosinkinaz inhibitörleri için, Türkiye 2011 yılında 240 milyon dolar para harcamıştır. Bunun sadece 67.2 milyon doları Trastuzumab için harcanmıştır.

6 Biyobenzer Bir Ürün Geliştirmesi Bu konuda devlet politikası ve desteğinin olması şarttır. Destek verilmediği durumda Türkiye yeni gelecek biyoteknoloji ürünlerinin maliyetini belki de karşılayamayacak, Belkide SGK bütçesi bu ilaçlara kaynak ayıramayacaktır.

Destek verilmediği durumda Türkiye yeni gelecek biyoteknoloji

7 Biyobenzer Bir Ürünün Geliştirme Yaklaşımı Hücre Bankası Karakterizasyonu Fiziko Kimyasal Karakterizasyon Preklinik ve Toksikolojik Değerlendirme Klinik Değerlendirme

8 Referans Bir Ürünle Kıyaslamada Biyofarmasötikler Yapının Konfirmasyonu Biyobenzerler Yapının Tanımlanması

9 Yapısal Karakterizasyon ve Doğrulama Analizleri Aminoasit Analizleri Peptid Karakterizasyonu Haritası Sülfidril Grupları ve Disülfid Köprüleri Karbonhidrat Yapıları (Glikan Tayini)

10 SAR PRO HYP GLN ASP GLU HIS NVA ASN SER GLY THR ARG ALA TYR CY VAL MET TRP PHE ILE LEU LYS 1-Aminoasit Analizleri Amaç referans ürün ile test ürünün aminoasit yapıları, dizilişleri ve N-terminal / C-terminal yapılarının belirlenmesi ve karşılaştırılmasıdır. Yapının aydınlatılması ve ayni zamanda parçalanmasının izlenmesinde kullanılır. mau DAD1 A, Sig=338,10 Ref=390,20 (AMINO3\AA D) mau DAD1 B, Sig=262,16 Ref=324,8 (AMINO3\AA D) min min HPLC UV / FLD, LC MS/MS

494 - CY2 11.887 - VAL 12.092 - MET 12.895 - TRP 13.300 - PHE 13.493 - ILE 14.125 - LEU 14.

11 2- Peptide Karakterizasyonu/Haritası Çok sayıda aminoasitin birleşmesinden oluşan peptidlerin yapılarının tayini protein karakterizasyonunda son derece önemlidir. Burada proteinleri oluşturan peptid zincirlerinin belirlenerek referans ve test ürüne ait peptid haritalarının çıkarılması ve karşılaştırılmasıdır. Araştırma/Geliştirme ve üretim süreçlerinde izlenir.

Burada proteinleri oluşturan peptid zincirlerinin belirlenerek referans ve test ürüne ait

12 Peptid Kütle Doğruluğu Sequence Name Label Mass Target Sequence Mass Match Difference (ppm) light chain A(1-19) light chain A(26-47) light chain A(48-56) light chain A(64-93) light chain A(94-107) light chain A( ) light chain A( ) light chain A( ) light chain A( ) light chain A( ) light chain A( ) light chain A( ) light chain A( ) Target Sequence Match Difference Sequence Name Label Mass Mass (ppm) heavy chain A(1-19) heavy chain A(20-38) heavy chain A(39-67) heavy chain A(39-65) heavy chain A(44-65) heavy chain A(44-67) heavy chain A(66-72) heavy chain A(68-72) heavy chain A(73-87) heavy chain A(77-87) heavy chain A(88-98) heavy chain A(99-105) heavy chain A( ) heavy chain A( ) heavy chain A( ) heavy chain A( ) heavy chain A( ) heavy chain A( ) heavy chain A( ) heavy chain A( ) heavy chain A( ) heavy chain A( ) heavy chain A( ) heavy chain A( ) heavy chain A( ) heavy chain A( ) heavy chain A( ) heavy chain A( ) heavy chain A( ) heavy chain A( ) heavy chain A( ) heavy chain A( ) heavy chain A( ) heavy chain A( ) heavy chain A( ) heavy chain A( ) heavy chain A( ) heavy chain A( )

76 light chain A(113-130) 1945.0199 1945.0197 0.09 light chain A(131-146) 1796.8922 1796.888 2.38 light chain A(150-173) 2676.2669 2676.2627 1.55 light chain A(150-187) 4160.01 4160.0033 1.

13 3- Sülfidril Grupları ve Disülfid Köprüleri Disülfid köprüleri bir proteinin çeşitli peptid zincirlerini birbirine bağlayarak, proteinin üç boyutlu yapısının doğruluğuna ve stabilitesine önemli katkıda bulunur. Buradaki amaç referans ve test üründe yer alan serbest sülfidril gruplarının ve disülfid köprülerinin tayini ve bunların karşılaştırılmasıdır.

14 4- Karbonhidrat Yapıları (Glikan Tayini) Glikoproteinler polipeptid iskeletlerine kovalent olarak bağlı oligosakkarit (glikan) zincirlerini içeren proteinlerdir. Glikan zincirleri glikoproteinlerin karakterizasyonunda önemli bir yer tutmaktadır. Buradaki amaç referans ve test ürünün glikan içeriklerinin (nötral şekerler, aminoşekerler ve sialik asit ile bunların oluşturduğu oligosakkarit zincirler) tespit edilip karşılaştırılmasıdır. Ürünün stabilitesinin izlenmesini sağlar. Belli glikan yapılarının ilaç etkililiğini düşürdüğü ve agregasyona neden olduğu bilinmektedir.

Buradaki amaç referans ve test ürünün glikan içeriklerinin (nötral şekerler, aminoşekerler ve sialik asit ile bunların oluşturduğu

15 Fizikokimyasal Özellikler Molekül Ağırlığı / Boyutu Tayini İzoform Deseni Elektirik Yük Değişimi Molar Soğurum Katsayısı

16 1- Molekül Ağırlığı / Boyutu Tayini Molekül ağırlığı (ve ya boyutu), küçük organik bileşiklerden glikoproteinlere kadar tüm sınıflar için kimlik tanılamasında kilit rol oynayan bir özelliktir. Buradaki amaç referans ve test ürünün molekül ağırlıklarının belirlenerek karşılaştırılmasıdır. Calculated mass (A) = Measured mass (A) = Mass Accuracy = 5.7 ppm MALDI/ Q TOF, Size Exclusion Chromatography

Buradaki amaç referans ve test ürünün molekül ağırlıklarının belirlenerek karşılaştırılmasıdır.

17 2- İzoform Deseni Proteinlerin, amino asit bakımından çok az farklı olan, aynı ya da farklı genler tarafından kodlanan, genel aktiviteleri aynı olan çeşitli formları izoform olarak adlandırılır. Buradaki amaç referans ve test ürünün amino asit açısından (izoform desenleri) karşılaştırılmasıdır. IEF - Isoelectric Focusing (Elektroforez yöntemi)

18 3- Yük Değişimi Ürün gelişimi sürecinin konfirmasyonunda kritik bir süreçtir. Potensiyel parçalanma ürünlerinin aydınlatılmasında geliştirme ve üretim sürecinde izlenmelidir. IEF - Isoelectric Focusing (Elektroforez yöntemi),iexc,lc-uv

19 Elde Edilen Yük Profili Kıyaslaması Farklı Safsızlıkların İzolasyonu LC/MS esaslı karakterizasyon Benzer

20 4-Molar Soğurum Katsayısı Proteinlerin yapılarına bağlı olarak UV absorbansları farklı olacaktır. Bu bakımdan molar soğurum katsayısı protein karakterizasyonunda yardımcı bir ögedir. Buradaki amaç referans ve test ürünleri UV absorpsiyon katsayıları bakımından karşılaştırmak olacaktır. UV/VIS NIR

Bu bakımdan molar soğurum katsayısı protein karakterizasyonunda yardımcı

21 Safsızlıklar Truncated Düzeni Diğer Modifiye Formlar Agregatlar

22 1- Truncated Düzeni Hidrolitik enzimler ve ya kimyasallar peptid bağlarının ayrılmasını katalizleyebilir. Bu şekilde oluşan formlar, uygun bir yöntem ile tespit edilip referans ve test ürün bu formlar açısından karşılaştırılır. HPLC, SDS Page Elektroforez

23 2- Diğer Modifiye Formlar Diğer modifiye formlar: Amid bağı çıkarılmış, isomerize, uygun düzende olmayan S-S bağı, oksitlenmiş veya değiştirilmiş konjuge yapılar (yani, glycosylation, phosphorylation) saptanabilir. Kromatografik, elektroforetik ve/veya diğer ilgili analitik yöntemlerle karakterize edilebilir.

24 3- Agregatlar Uygun bir yöntem ile protein agregatlarının (biraraya gelmesi) tespit edilmesi ve referans ve test ürününün agregatlar açısından karşılaştırılması amaçlanmaktadır. Biyolojik agregasyon ilaç etkililiğinin düşmesine ve hastalarda immun cevabın oluşmasına sebep olur. Üretim, formülasyon ve stabilite testleri boyunca serbest ilacın agregasyon oranı düşük oranlarda aynı kalmalıdır.

25 Diğer Kalite Kontrol Analizleri Sekonder ve Tersiyer Yapı Tayini Isıl Stabilitelerin Onaylanması

26 1- Sekonder ve Tersiyer Yapı Tayini Proteinlerin sekonder ve tersiyer yapılarının tespit edilmesi karakterizasyonda önemli faktörlerden bir diğeridir. Amaç test ve referans ürünün sekonder ve tersiyer yapılarının tayinlerinin yapılmasıdır ve karşılaştırılmasıdır. 26

27 2- Isıl Stabilitelerin Onaylanması Proteinlerin ısıl stabiliteleri de karakterizasyonda yardımcı bir diğer öğedir. Burada amaç test ve referans ürünün ısıl stablitelerinin tayin edilmesi ve bu açıdan karşılaştırılmalarıdır. Diferantial Scaning Colorimetry (DSC)

28 TEŞEKKÜRLER..

Benzer belgeler

PROTEİNLERİN 3 BOYUTLU YAPISI

PROTEİNLERİN 3 BOYUTLU YAPISI PROTEİNLERİN 3 BOYUTLU YAPISI PROTEİNLERİN 3 BOYUTLU YAPISI 1-Primer Yapı (1 o ) 2-Sekonder Yapı (2 o ) -Alfa heliks -Beta kırmalı tabaka -Beta bendler (kıvrım, dirsek) -Tesadüfi