VOGES PROSKAUER TESTİ HAZIRLAYANLAR Gamze ÖZLÜ (040559023) Prof. Dr. Figen ERKOÇ Gazi Eğitim Fakültesi
Bu test, bazı mikroorganizmaların glukozu fermente ederek, nötral bir ürün olan acetylmethylcarbinol'u (acetoin) meydana getirme yeteneğini tayinde ve özellikle Enterobacteriacea familyasındaki bazı bakteri türlerinin [Klebsiella pneumoniae (+), E. coli (-)] identifikasyonunda kullanılır. Glukoz, önce pirüvik asit'e metabolize olur. Pirüvik asit, glikolizde en önemli kilit intermediyerdir (ara ürün). Pirüvik asidin yıkılması, ilgili bakternin türüne göre aerobik veya anaerobik yolla olur. Glukozun fermentasyonu sonu acetoin ve bunun nötral bir redüksiyon ürünü olan 2,3-butanediol da (CH 3.CHOH.CH 3 ) meydana gelmektedir. NOT: Metil red, fenol red den (fenol kırmızısı) farklıdır çünkü ph 6.2 ve üstünde sarı; ph 4.4 ve altında kırmızıdır. Fenol kırmızısı ph 6.8 nın altında sarıya döner. Bu iki indikatörü karıştırırsanız, testi değerlendirmede zorlanırsınız.
Voges Proskauer testi (VP) ile metil red testi (MR), ortamlarının aynı olması nedeniyle birlikte uygulanabilir. Her ikisi de IMViC testinin birer parçasıdır. Metil red pozitif olanlarda (organik asit fazla olmasından dolayı), VP reaksiyonu negatif olabilir. Nötral ürünler meydana gelmeyebilir (genel bir kural değil). İlk başlangıçta MR testi pozitif görülebilir. İnkübasyon süresi uzarsa acetoin oluşabilir. Bütilen glikol metabolik yolunu kullanan bakteriler acetoin üretir. Bütilen glikol metabolik yolunu kullanan organizma ekilen MR-VP broth a VP reaktifleri eklenince KOH varlığında son ürün olan acetoin, diasetil e dönüşür. Kreatin de reaktifde katalizör olarak bulunur. Diasetil kırmızı rengi oluşturur. Dolayısıyla kırmızı renk pozitif sonuç olarak kabul edilir. Reaktifler eklendikten sonra bakır rengi oluşursa test negatiftir.
Voges Proskauer Testi Kaynaklar: http://www.vet.chula.ac.th/~vph/lecture5.pdf http://www.mc.uky.edu/oaa/curriculum/iid98/manual/00labtoc.htm VP pozitif sonuç
Materyal MR/VP besi yeri (Clark-Lubs, ph 6, 9,5 ml). 2) Mikroorganizmaların saf ve taze kültürleri. 3) Kontrol, pozitif (E. cloacae, K. pneumoniae) ve negatif (E. coli) suşlarının kültürleri 4) O'Meara ayıracı (veya Barzit VP ayıracı). 5) Ekilmemiş besi yerleri.
Metod İçinde glukoz bulunan tamponlu besi yerine kültürlerden ekilir ve 37 C de 2-7 gün inkübe edilir. Bu sürenin sonunda kültürlere ve ekilmemiş tüplere indikatörden (O'Meara) 1 ml ilave edilerek hafifçe çalkalanır ve su banyosunda (37 C de) 4 saat tutulur. Aralıklı olarak hafifçe çalkalanır.
Değerlendirme Besi yerinin üstünde 2-5 dakika içinde pembe rengin oluşumu, acetoin varlığını ortaya koyduğundan pozitif reaksiyon olarak kabul edilir. Eğer sarı renk meydana gelirse negatif olarak dikkate alınır. O'Meara testi, ortamda oluşan acetoin'e bağlıdır. Bu madde de, oksijenin bulunduğu durumda alkali ortamda okside olur ve diasetil (CH 3.CO.CO.CO 3 ) meydana gelir. Bu son madde de, kreatin'le reaksiyona girerek pembe renk meydana getirir.
Kırmızı renk pozitif sonuç Pembe renk pozitif sonuç
Dikkat edilecek noktalar Reaktifler kullanılmadan önce iyice kontrol edilmelidir. Bazen reaktif ilavesinden 1 saat sonra bakır renkli gibi bir görünüm meydana gelebilir. Negatif olarak dikkate alınmalıdır. Et infüzyon broth, içinde acetoin ve diasetil bulunabilmesinden dolayı tercih edilmemelidir.
Bazı bakterilerde V-P testi sonuçları TEST SUŞU ÜREME METİL RED VOGES PROSKAUER Escherichia coli ATCC 25922 iyi / çok iyi + - Klebsiella pneumoniae ATCC 13883 Klebsiella pneumoniae ATCC 10031 Enterobacter cloacae ATCC 13047 iyi / çok iyi + - iyi / çok iyi + - iyi / çok iyi - + Serratia marcescens ATCC 14756 iyi / çok iyi + - +
KAYNAKLAR: www.mikrobiyoloji.org http://www.mc.uky.edu/oaa/curriculum/iid9 8/manual/00labtoc.htm http://www.emdchemicals.com/analytics/m icro_manual/tedisdata/prods/1_05712_0 500.html (tablonun alındığı kaynak) http://www.vet.chula.ac.th/~vph/lecture5.p df