B ProbeTec ET Mycoplasma pneumoniae (MP) Amplified DNA Assay Türkçe ABD Patent Nos. 5,27,184; 5,547,861; 5,648,211; 5,712,124; 5,744,311; 5,846,726; 5,851,767; 5,866,336; 5,919,63; 5,928,869; 5,958,7; 6,54,279; 6,9,552; 6,117,635; 6,277,582; 6,316,2; 6,656,68; 6,743,582. Ekin sonundaki sembol açıklamalarına bakın. U KULLANIM AMACI BD ProbeTec ET System ile kullanılmak üzere tasarlanmış olan BD ProbeTec ET Mycoplasma pneumoniae (MP) Amplified DNA Assay (BD ProbeTec ET Mycoplasma pneumoniae [MP] Amplifiye edilmiş DNA Testi) Mycoplasma pneumoniae DNA sının doğrudan ve kalitatif olarak tespit edilmesi için Dizi Yerdeğiştirme Amplifikasyonu (SDA) teknolojisini kullanır. Test, klinik belirtiler ve semptomlar gösteren ve diğer pnömoni tanı kanıtları bulunan hastalardan alınan boğaz swablarını (aktarım besiyeri ile veya olmaksızın) test etmede kullanım amaçlıdır. Test, Mycoplasma pneumoniae kaynaklı pnömoninin olası tanısına yardımcı olarak kullanılabilir. 81961 26/4 ÖZET VE AÇIKLAMA Mycoplasma pneumoniae solunum epitel hücrelerine yapışan hücre duvarı bulunmayan plevrapnömoni benzeri bir organizmadır ve salgın pnömoninin (CAP) yaklaşık %15 ila 2 sinden sorumludur. M. pneumoniae enfeksiyonu olan hastaların klinik tablosu, Chlamydophila pneumoniae gibi diğer solunum yolu patojenlerinin sebep olduğu enfeksiyonlar görülen hastalardan önemli ölçüde farklılık göstermez, bu sebeple tanı birincil olarak laboratuvar testine dayalıdır. 1 M. pneumoniae enfeksiyonları bütün yaş gruplarında görülebilir, genç yetişkinlerde genellikle ana sebep olarak algılanmasına rağmen M. pneumoniae pnömonisi insidansının yaş ile arttığı görülmüştür, bu sebeple, bu patojenin yaşlılarda önemi vurgulanmaktadır. 2 Bulaşma insandan insana solunum damlacıkları ile gerçekleşir ve semptomlar ateş, titreme, öksürük, göğüs ağrısı, boğaz ağrısı ve genişleyen lenf düğümlerini kapsar. M. pneumoniae pnömonisinin klinik semptomları sıklıkla hafif ve bir süre devam ettikten sonra kendiliğinden kaybolan tarzdadır. Bununla birlikte, plevral efüzyon, pnömotosel, akciğer absesi, pnömotoraks, bronşiyektaz, kronik interstisyel fibröz ve solunum distres sendromunu içeren önemli pulmoner komplikasyonlar oluşabilir. Yaygın olarak tanınmayan bir komplikasyon, solunum yetmezliğine sebep olabilen bronşiyolit obliteranstır. 2 Özellikle orta yaşlı ve yaşlı bireylerde hastaneye yatırılmayı gerektiren ciddi enfeksiyonların oluştuğu bilinmektedir. 3 Pnömoni tanısı ve etiyolojisi, aşırı antibiyotik kullanımı ilişkin artan endişe nedeniyle daha fazla önem kazanmıştır. Bununla birlikte, Amerika Bulaşıcı Hastalıklar Birliği paneli, mevcut hiçbir tanı testinin in vitro gelişme için özel hücresiz besiyeri ve 2 3 hafta inkübasyon gerektiren M. pneumoniae yi 4 güvenilir ve hızlı biçimde saptayamadığı sonucuna ulaşmıştır. Mycoplasma enfeksiyonunun geriye dönük tanısı serolojik olarak mümkündür. Bununla birlikte, bu yöntem değişken hassaslığa ve özgünlüğe sahiptir ve sonuçların doğru yorumlanması için konvalesan dönem serumlarının toplanması gerekir. 2 Nükleik asit amplifikasyonunu kullanan hızlı teknikler tanı koymada yardımcı olabilir, böylece uygun planlanan tedavi zamanında uygulanabilir. PROSEDÜR İLKELERİ BD ProbeTec ET Mycoplasma pneumoniae (MP) Amplified DNA Assay amplifikasyon primerleri ve floresan etiketli detektör probunu kullanarak hedef DNA nın eşzamanlı amplifikasyonu ile tespitini temel almaktadır. SDA reaktifleri tek kullanımlık iki ayrı microwellde kurutulmuştur. İşlenen örnek, amplifikasyon primerlerini, floresan etiketli detektör probunu ve amplifikasyon için gerekli diğer reaktifleri içeren Priming Microwelline eklenir. Primerler M. pneumoniae P1 geninin 73 baz çiftinden oluşan korunmuş bölgesini amplifiye etmek için tasarlanmıştır. İnkübasyondan sonra, reaksiyon karışımı SDA için gerekli iki enzimi (DNA polimeraz ve restriksiyon endonükleaz) içeren Amplifikasyon İşlemi Microwelline aktarılır. Amplifikasyon Microwelleri kontaminasyonu önlemek için kapatılır ve daha sonra her reaksiyonun amplifiye ürünlerin oluşumu açısından izlendiği, ısıl olarak kontrol edilen floresan okuyucularda inkübe edilir. Her reaksiyon, amacı amplifikasyon için uygun koşulların mevcut olduğunu doğrulamak ve test inhibitörlerinin varlığına bağlı olarak hatalı-negatif sonuç bildirme olasılığını azaltmak olan bir Dahili Amplifikasyon Kontrolünü (IAC) koamplifiye eder ve tespit eder. M. pneumoniae, DNA sının varlığı veya yokluğu, örneğe ait PAT (Eşikten Sonra Geçişler) sonuçlarının önceden belirlenen eşik değeri ile ilişkilendirilmesiyle belirlenir. Cihaz sonuçları pozitif, negatif veya belirsiz olarak otomatik olarak bildirir. REAKTİFLER VE MATERYALLER BD ProbeTec ET Mycoplasma pneumoniae (MP) Amplified DNA Assay (BD ProbeTec ET Mycoplasma pneumoniae [MP] Amplifiye edilmiş DNA Testi) şunları içerir: Mycoplasma pneumoniae (MP) Priming Microwelleri, (1x24) 6 Oligonükleotid 7,5 pmol, dntp ler 15,2 nmol, 2 Detektör Probu 22,5 pmol, Sentetik Oligonükleotid 6 kopya Mycoplasma pneumoniae (MP) Amplifikasyon Microwelleri, (1x24) Restriksiyon Enzimi: 33 Birim, DNA Polimeraz 14 Birim 1 Priming Kapağı, 16 Yapışkanlı kapak (1/2), 8 Atık Çantası BD ProbeTec ET Respiratory and Media Diluent and Control Kit (CF*/LP**/MP) (BD ProbeTec ET Solunum ve Ortam Seyreltim Sıvısı ve Kontrol Kiti [CF*/LP**/MP]): İçindekiler: Solunum ve Ortam Seyreltim Sıvısı: Bisin, Potasyum Fosfat, Potasyum Hidroksit, DMSO ve Proclin; 1 (CF/LP/MP) Pozitif Kontrol: 1.5 ng Salmon Sperm DNA, 47,3 µg Tris, 9, µg EDTA, 3.6 Kopya
CF Plasmid, 4.8 Kopya LP Plasmid, 5.4 Kopya MP Plasmid; 1 (CF/LP/MP) Negatif Kontrol: 1.5 ng Salmon Sperm DNA, 47,3 µg Tris, 9, µg EDTA; 1 adet 2 ml Geçme Kapaklı Tüp * BD ProbeTec ET Chlamydiaceae Family (CF) Amplified DNA Assay e (BD ProbeTec ET Chlamydiaceae Familyası [CF] Amplifiye edilmiş DNA Testi) karşılık gelir ** BD ProbeTec ET Legionella pneumophila (LP) Amplified DNA Assay e (BD ProbeTec ET Legionella pneumophila [LP] Amplifiye edilmiş DNA Testi) karşılık gelir BD ProbeTec ET Swab Diluent and Control Kit (tcf/tmp)* (BD ProbeTec ET Swab Seyreltim Sıvısı ve Kontrol Kiti [tcf/tmp]): İçindekiler: Swab Seyreltim Sıvısı: Bisin, Potasyum Fosfat, Potasyum Hidroksit, DMSO ve Proclin; 1 (tcf/tmp) Pozitif Kontrol: 1.75 ng Salmon Sperm DNA, 78,8 µg Tris, 15, µg EDTA, 6. Kopya CF Plasmid, 8. Kopya LP Plasmid, 9. Kopya MP Plasmid; 1 (tcf/tmp) Negatif Kontrol: 1.75 ng Salmon Sperm DNA, 78,8 µg Tris, 15, µg EDTA * t ismi yalnızca Boğaz Swabı ile (aktarım besiyeri olmaksızın) kullanıma yönelik reaktiflere tekabül eder. Cihaz, ekipman ve sarf malzemeleri: BD ProbeTec ET Instrument and Instrument Plate (BD ProbeTec ET Cihazı ve Cihaz Plağı), BD ProbeTec ET Priming and Warming Heater (BD ProbeTec ET Priming Isıtıcısı), BD ProbeTec ET Lysing Heater (BD ProbeTec ET Lize İşlemi Isıtıcısı), BD ProbeTec ET Lysing Rack (BD ProbeTec ET Lise İşlemi Yuvası), BD ProbeTec ET Pipettor, stand, and Power Supply (BD ProbeTec ET Pipetör, Stand ve Güç Kaynağı), BD ProbeTec ET Accessories Kit (BD ProbeTec ET Aksesuar Kiti), BD ProbeTec ET 2 ml and 4 ml Sample Tubes and Caps (BD ProbeTec ET 2 ml ve 4 ml Örnek Tüpleri ve Kapaklar), BD ProbeTec ET Pipette Tips (BD ProbeTec ET Pipet Uçları) Gerekli fakat sağlanmamış malzemeler: Sınıf II Biyolojik Güvenlik Kabini (BSC), vorteks karıştırıcı, -2 C ve/ veya -7 C (veya daha soğuk) sıcaklık döngüsüz dondurucu, 16. x g kapasiteli mikrosantrifüj, su banyoları, dijital termometre, vida kapaklı su banyosu yuvası, 2 ml örnek tüpü yuvası ve diğer uygun örnek tüp yuvaları, BBL CultureSwab EZ swablar, tek kullanımlık eldivenler, 2 1 µl lik mikropipetler, aerosole dayanıklı pipet uçları, distile su, moleküler biyoloji ölçekli su, Alconox lu* %1 (h/h) sodyum hipoklorit * 7,5 g Alconox u 1 L %1 (h/h) sodyum hipoklorit çözeltisinde çözün ve karıştırın. Her gün yenisini hazırlayın. Saklama ve İşleme Gereklilikleri: BD ProbeTec ET MP reagent packs (BD ProbeTec ET MP reaktif paketleri) 2 33 C de saklanabilir. Son kullanım tarihi geçen açılmamış reaktif paketlerini kullanmayın. Açılan bir torba, microweller uygun şekilde tekrar kapatıldıkları sürece 8 hafta boyunca veya daha önce geliyorsa son kullanma tarihine kadar stabildir. Dondurmayın. BD ProbeTec ET Respiratory and Media Diluent and Control Kit (CF/LP/MP) (BD ProbeTec ET Solunum ve Ortam Seyreltim Sıvısı ve Kontrol Kiti [CF/LP/MP]) 2 33 C de saklanabilir. Son kullanma tarihi geçen reaktifleri kullanmayın. Dondurmayın. BD ProbeTec ET Swab Diluent and Control Kit (tcf/tmp) (BD ProbeTec ET Swab Seyreltim Sıvısı ve Kontrol Kiti [tcf/tmp]) 2 33 C de saklanabilir. Son kullanma tarihi geçen reaktifleri kullanmayın. Dondurmayın. Uyarılar ve Önlemler In vitro Diyagnostik Kullanım içindir. 1. Klinik örneklerde hepatit virüsü ve İnsan İmmün Yetmezlik Virüsü de dahil olmak üzere patojenik mikroorganizmalar bulunabilir. Kan veya diğer vücut sıvılarıyla kontamine olan tüm öğelerle çalışılırken, Standard Precautions (Standart Önlemler) 5-8 ve kurumsal düzenlemeler takip edilmelidir. 2. BD ProbeTec ET Swab Diluent and Respiratory and Media Diluent (BD ProbeTec ET Swab Seyreltim Sıvısı ve Solunum ve Ortam Seyreltim Sıvısı) dimetil sülfoksit (DMSO) içerir. DMSO solunduğunda, ciltle teması halinde veya yutulduğunda tehlikelidir. Gözle temas ettirmekten kaçının ve çalışırken her zaman eldiven kullanın. Gözlerle temas etmesi halinde, derhal bol suyla yıkayın ve bir doktora danışın. Ciltle teması halinde, derhal bol suyla yıkayın. 3. BD ProbeTec ET tasarımı, test ortamında amplikon kontaminasyonu olasılığını düşürdüğünden bu işlem için özel çalışma alanları gerekmese de, kontaminasyonun önlenmesi, özellikle de işlem sırasında örnek kontaminasyonunun önlenmesi için diğer önlemlerin alınması gerekmektedir. 4. Kullanılmamış Priming Microwelleri ve Amplifikasyon İşlemi Microwellerini içeren reaktif torbaları açıldıktan sonra dikkatlice tekrar KAPATILMALIDIR. Reaktif torbalarını tekrar kapatmadan önce torbada desikant bulunduğundan emin olun. 5. Amplifikasyon İşlemi Microwellerini içeren plak, BD ProbeTec ET Priming Isıtıcısından BD ProbeTec ET Cihazına taşınmadan önce Yapışkanlı kapak kullanılarak uygun şekilde KAPATILMALIDIR. Plağın kapatılması amplifikasyon ve tespit için kapalı bir reaksiyon sağlar ve cihazın ve çalışılan alanın amplifikasyon ürünleri ile kontamine olmasını önlemek için gereklidir. Kapatma malzemesini microwellerden kesinlikle çıkarmayın. 6. Sıvı kalıntısı (sıvının Priming Microwellinden Amplifikasyon İşlemi Microwelline aktarılmasından sonra) içeren Priming Microwelleri hedef kontaminasyon kaynağı oluştururlar. Priming Microwellerini atmadan önce yapışkanlı kapakla dikkatle kapatın. 7. Çalışma alanının amplifikasyon ürünleri ile kontaminasyonunu önlemek için test edilen Amplifikasyon İşlemi Microwellerini atmak için reaktif paketleriyle sağlanan atık çantalarını kullanın. Atmadan önce çantaların düzgün şekilde kapatıldığından emin olun. 8. Örneklerin çapraz kontaminasyonunun önüne geçmek için, örnek işleme ve test prosedürleri sırasında belirtilen adımlarda ELDİVEN DEĞİŞTİRİN. Eldivenler örnekle temas ederse, diğer örneklerin kontamine olmasını önlemek için eldivenleri derhal değiştirin. 9. Çalışma alanının veya ekipmanın örneklerle kontamine olması halinde, kontamine olan alanı %1 (h/h) sodyum hipoklorit ve Alconox çözeltisiyle iyice temizleyin ve suyla iyice durulayın. Diğer testlere devam etmeden önce yüzeyin tamamen kurumasını bekleyin. 2
1. İşlenmiş örnekleri Priming Microwellerine aktarmak için ve örneklerin Priming Microwellerinden Amplifikasyon İşlemi Microwellerine aktarılması için sadece BD ProbeTec ET Pipetörü ve BD ProbeTec ET Pipet uçlarını kullanın. 11. Kullanılmış pipet uçlarını, örnek tüplerini, Priming Microwellerini ve diğer tek kullanımlık malzemeleri atarken belirlenen laboratuvar uygulamalarını kullanın. Tek kullanımlık malzemeleri dikkatle atın. Atık kaplarını ¾ oranında dolduklarında veya günlük olarak (hangisi daha önce gerçekleştirilirse) kapatın ve atın. 12. Farklı lot numaralarına sahip kitlerdeki Microwelleri, Kontrolleri veya işlem reaktiflerini değiştirmeyin veya birbirleriyle karıştırmayın. 13. BD ProbeTec ET cihazına temizlemeyle giderilemeyen şekilde sıvı dökülmesi veya DNA ile kontamine olması gibi beklenmedik durumlar oluştuğunda Teknik Servis i arayın. ÖRNEK TOPLAMA VE NAKİL 1. Örnek Toplama Örnekler Clinical Microbiology Procedures Handbook 9 veya kendi laboratuvarınızın prosedür kılavuzu tarafından önerilen şekilde toplanmalıdır. BBL CultureSwab EZ (BD kat. no. 22144) aktarım besiyeri olmaksızın saklanan boğaz swablarının toplanması için kullanılmalıdır. 2. Örneklerin saklanması ve nakledilmesi Boğaz Swabları (aktarım besiyeri olmaksızın): Örnekler en fazla 2 gün süreyle 18 33 C de saklanabilir/taşınabilir. Örnekler en fazla 3 gün süreyle 2 8 C de soğuk koşullarda saklanabilir. Örnekler en fazla 14 hafta süreyle -2 C veya altında saklanabilir. 2SP Besiyerinde Boğaz Swabları: 9 Örnekler hemen 2 8 C de buzdolabında saklamalıdır. Taşıma süresi birkaç dakikadan fazla ise kuru buz veya soğuk paketler üzerinde taşıyın. Örnekler en fazla 2 gün süreyle 2 8 C de saklanmalıdır. Daha uzun süre saklama gerektiren örnekler -7 C de saklanmalıdır. TEST PROSEDÜRÜ Sistem bileşenlerinin çalıştırılması ve bakımına ilişkin özel talimatlar için BD ProbeTec ET Sistemi Kullanıcı Kılavuzu na başvurun. A. Cihazın Hazırlanması: 1. Cihaz açılmalı ve test gerçekleştirilmeden önce cihazın ısınması beklenmelidir. a. Lize İşlemi Isıtıcısı ve Priming Isıtıcısının ısınması ve stabilizasyonu yaklaşık olarak 9 dakika sürer. Lize İşlemi Isıtıcısı için ayarlanan sıcaklık değeri 114 C dir. Priming Isıtıcısının Priming bileşeni için ayarlanan sıcaklık değeri 72,5 C dir. Priming Isıtıcısının Isıtma bileşeni için ayarlanan sıcaklık değeri 54 C dir. b. BD ProbeTec ET cihazı yazılım kontrolü altındadır ve ısınması yaklaşık olarak 3 dakika sürer. 2. Isıtıcı sıcaklıkları teste başlamadan önce kontrol edilmelidir. BD ProbeTec ET System Maintenance Log üzerindeki sıcaklıkları kaydedin. a. Lize İşlemi Isıtıcısı Plastik kapağı çıkarın ve sıcaklığın dengeye gelmesi için 15 dakika bekleyin. Termometre 112 116 C yi göstermelidir. b. Priming Isıtıcısı Priming Isıtıcısının termometresi 72 73 C yi göstermelidir. Isıtma İşlemi Isıtıcısının termometresi 53,5 54,5 C yi göstermelidir. 3. BD ProbeTec ET ekranında görüntülenen sıcaklığı kontrol edin. Sıcaklık okuması 47,5 55, C aralığında olmalıdır. BD ProbeTec ET System Maintenance Log üzerindeki sıcaklıkları kaydedin. B. Pipetör: BD ProbeTec ET Pipetör tuş takımı fonksiyonlarına ilişkin detaylı açıklamalar için BD ProbeTec ET Sistemi Kullanıcı Kılavuzu na başvurun. Ayrıca, BD ProbeTec ET Pipetör her kullanımdan sonra temizlenmelidir. BD ProbeTec ET Pipetörün doğru temizlenmesi ve bakımı hakkında yol göstermesi için Teknik Servis temsilcinize başvurun. BD ProbeTec ET MP Testinin gerçekleştirilmesi için aşağıdaki programlar gereklidir. Program 1 işlenen örneklerdeki sıvıyı MP Priming Microwellerine aktarır. Program 5, MP Priming Microwellerindeki sıvıyı MP Amplifikasyon İşlemi Microwellerine aktarır. Pipetörü şu şekilde programlayın: Program 1: 1. Pipetörü AÇIN. Pipetör bir kez bip sesi verir, ZERO (Sıfır) yanıp söner, Software Version # (Yazılım Sürüm No.) yanıp söner ve bir kez daha bip sesi verir. 2. Mavi Prog (Program) tuşuna basın. Program 1 i seçmek için 1 görüntülenene kadar Vol (Ses) tuşuna basın. Enter a (Giriş) basın. 3. Programlama moduna girmek için Prog (Program) tuşuna basın ve tuşu basılı tutun. Prog (Program) tuşundan parmağınızı çekerken aynı zamanda pipetin ucuyla veya bir atacın ucuyla Special Function Key e (Özel Fonksiyon Tuşu) basın. 4. Fill e (Doldur) basın. 2 görüntülenene kadar yukarı okuna basın. Enter a (Giriş) basın. 5. Disp e (Dağıt) basın. 15 görüntülenene kadar yukarı ok tuşuna basın. Enter a (Giriş) basın. 3
6. Programı kaydetmek ve çıkmak için Enter a (Giriş) bir kez daha basın. Programlamanın tamamlandığını belirten bir bip sesi duymanız gerekir. 7. Adımlar arasında ilerlemek için tetikleyiciye basarak programınızı doğrulayın. Her adımda, aspirasyon/ dağıtım hızını Vol (Hacim) tuşunu kullanarak ayarlayın. Her adımda Hız göstergesi görüntülenir. Hız göstergesini Fill (Doldur) ve Disp (Dağıt) adımları için 2 kare gösterecek şekilde ayarlamak üzere Vol (Ses) tuşunu kullanın. Program 5 1. Prog (Program) tuşuna basın. Program 5 i seçmek için 5 görüntülenene kadar Vol (Ses) tuşuna basın. Enter a (Giriş) basın. 2. Programlama moduna girmek için Prog (Program) tuşuna basın ve tuşu basılı tutun. Prog (Program) tuşundan parmağınızı çekerken aynı zamanda pipetin ucuyla veya bir atacın ucuyla Special Function Key e (Özel Fonksiyon Tuşu) basın. 3. Fill e (Doldur) basın. 1 görüntülenene kadar yukarı okuna basın. Enter a (Giriş) basın. 4. Disp e (Dağıt) basın. 1 görüntülenene kadar yukarı ok tuşuna basın. Enter a (Giriş) basın. 5. Mix e (Karıştır) basın. 5 görüntülenene kadar yukarı ok tuşuna basın. Enter a (Giriş) basın. 6. Programı kaydetmek ve çıkmak için Enter a (Giriş) bir kez daha basın. Programlamanın tamamlandığını belirten bir bip sesi duymanız gerekir. 7. Adımlar arasında ilerlemek için tetikleyiciye basarak programınızı doğrulayın. Her adımda, aspirasyon/ dağıtım/karıştırma hızını Vol (Ses) tuşunu kullanarak ayarlayın. Her adımda Hız göstergesi görüntülenir. Hız göstergesini aspirasyon ve dağıtım fonksiyonları için 2 kare gösterecek şekilde ayarlamak üzere Vol (Ses) tuşunu kullanın. Karışım hızını 3 kare gösterecek şekilde ayarlamak için Vol (Ses) tuşuna basın. Programın Gözden Geçirilmesi Programlar prosedüre başlanmadan önce gözden geçirilmelidir. Programı gözden geçirmek için, pipetörü AÇIN. Mavi Prog (Program) tuşuna basın. Uygun program numarası (1 veya 5) görüntülenene kadar Vol (Ses) tuşuna basın. Enter (Giriş) tuşuna basın. Programda adım adım ilerlemek için pipetleme tetikleyicisini kullanın. Program 1: Bu program 2 µl çeker; MP microwelline 15 µl dağıtır. Pipetör ekranında aşağıdaki ifade görüntülenmelidir: Fill 2 µl SII (2 µl SII doldur) Dispense 15 µl SII (15 µl SII dağıt) Program 5: Bu program 1 µl çeker; 1 µl dağıtır ve 5 µl yi üç kez karıştırır. Pipetör ekranında aşağıdaki ifade görüntülenmelidir: Fill 1 µl SII (1 µl SII doldur) Dispense 1 µl SII (1 µl SII dağıt) Mix 5 µl SIII (5 µl SIII karıştır) Zero (Sıfır yanıp söner) C. Plak Yerleşimi: Test türü, örnek tanıtıcısı, kontrol lotu numarası ve kit lotu numarası sisteme girildikten sonra BD ProbeTec ET cihazı, Plak Yerleşim Raporu oluşturur. Plak Yerleşim Raporu test edilecek her plak için örneklerin ve kontrollerin fiziki yerleşimini gösterir. Bu konumlandırma Priming Microwelli ve Amplifikasyon İşlemi Microwelli plaklarının her ikisi tarafından da kullanılır. MP testi için, Priming Microwelleri katı, koyu kızıl kahverengi microwell stripleridir. Amplifikasyon İşlemi Microwelleri koyu kızıl kahverengi çizgili microwell stripleridir. D. Boğaz Swabı (aktarım besiyeri olmaksızın) Örnek İşleme: NOTLAR: BD ProbeTec ET Swab Diluent in (tcf/tmp) (BD ProbeTec ET Swab Seyreltim Sıvısı [tcf/tmp]) oda sıcaklığına gelmesini bekleyin ve kullanmadan önce yavaşça ters çevirerek karıştırın. İstenen BD ProbeTec ET Swab Diluent (tcf/tmp) miktarını temiz bir kaba aktarın. İhtiyaç duyulan miktarı hesaplamak için her örnek için 1 ml kullanın ve pipetleme işlemini kolaylaştırmak için fazladan 1 2 ml ekleyin. Seyreltim Sıvısının kontaminasyonunu önlemek için: Kalan Seyreltim Sıvısını Şişeye Geri Koymayın. 1. İşlem görecek her boğaz swabı için bir 4 ml Örnek Tüpü etiketleyin. 2. Örneklerin oda sıcaklığına gelmelerini bekleyin. 3. Her Örnek Tüpüne 1 ml Swab Seyreltim Sıvısı (tcf/tmp) pipetleyin. 4. Swabı yerleştirin. Swabı seyreltim sıvısının içinde 5 1 sn çevirerek karıştırın. 5. Örnek swablarını tüpün iç kısmına sürüp sıvının tüpün tabanına akmasını sağlayın. 6. Swabı sıçramamasına dikkat ederek çıkarın. NOT: Sıvı damlaması çalışma alanının kontaminasyonuna neden olabilir. 7. Swabı aktarım tüpüne yerleştirin ve atın. 8. Tüpün kapağını sıkıca kapatın. 9. Tüpü 5 sn boyunca vorteksleyerek karıştırın. 1. Diğer boğaz swabları için 3 9 adımlarını tekrarlayın. 11. Kontrolleri hazırlayın. Boğaz Swabı Kontrolü Hazırlığına Bakın (Bölüm F). 12. Plak Yerleşim Raporunu kullanarak örneği ve kontrolleri, Lize İşlem Yuvasına sırayla yerleştirin. 13. Örnekleri BD ProbeTec ET Lize İşlemi Yuvasındaki konumlarına kilitleyin. 14. BD ProbeTec ET Lize İşlemi Yuvasını BD ProbeTec ET Lize İşlemi Isıtıcısına yerleştirin. 15. Örnekleri 1 dakika boyunca ısıtın. 4
16. 1 dakika sonra BD ProbeTec ET Lize İşlemi Yuvasını BD ProbeTec ET Lize İşlemi Isıtıcısından çıkarın ve en az 15 dakika soğumaya bırakın. Tüpün tabanında olabildiğince çok kondensat toplamak için yuvayı tezgahın üzerine hafifçe vurun. NOT: Örnekleri lize ettikten sonra: a. 18 33 C de 6 saate kadar saklanabilir ve tekrar lize edilmeden test edilebilirler. b. 2 8 C de 3 güne kadar saklanabilirler. Örnekler testten önce vortekslenerek karıştırılmalı ve tekrar lize edilmelidir. c. -2 C de 14 güne kadar saklanabilirler. Örnekler testten önce oda sıcaklığında çözülmeli, vortekslenerek karıştırılmalı ve tekrar lize edilmelidir. 17. Örnekler BD ProbeTec ET MP Test Çalıştırması Prosedürü için hazırdır (Bölüm G). E. Boğaz Swabı (2SP Besiyeri) Örnek İşleme Prosedür Notları: Bütün sıvı aktarımları arasında pipet uçlarını değiştirin. Aerosol bariyer uçların kullanılması tavsiye edilir. BD ProbeTec ET Respiratory and Media Diluent (CF/LP/MP) (BD ProbeTec ET Solunum ve Ortam Seyreltim Sıvısı [CF/LP/MP]) oda sıcaklığına gelmesini bekleyin ve kullanmadan önce yavaşça ters çevirerek karıştırın. İstenen BD ProbeTec ET Respiratory and Media Diluent (CF/LP/MP) miktarını temiz bir kaba aktarın. İhtiyaç duyulan miktarı hesaplamak için her örnek için,4 ml kullanın ve pipetleme işlemini kolaylaştırmak için başka bir 1 2 ml ekleyin. Seyreltim Sıvısının kontaminasyonunu önlemek için: Kalan Seyreltim Sıvısını Şişeye Geri Koymayın. 1. Örneklerin oda sıcaklığına gelmelerini bekleyin. 2. Test edilecek her örnek için bir 2 ml vida kapaklı tüp etiketleyin. 3. Her vida kapaklı tüpe 4 µl Solunum ve Ortam Seyreltim Sıvısı (CF/LP/MP) aktarın. Aşağıdaki 4 6 adımları bir Biyolojik Güvenlik Kabininde (BSC) gerçekleştirilmelidir: 4. İyice karıştırmak için örneklere 5 15 sn puls vorteks uygulayın. 5. 2 µl örneği etiketli tüpe pipetleyin. NOT: Eğer örnek hacmi 2 µl den az ise (örnek en az 1 µl olmalıdır), moleküler biyoloji ölçekli su kullanarak hacmi 2 µl ye tamamlayın. 6. Örneklerin eklenmesinden sonra eldivenleri değiştirin. NOT: Adım 7 ye geçmeden önce bir su banyosunu distile su ile doldurun ve kaynatın. 7. 5 sn puls vorteksleyin. 8. Kontrolleri hazırlayın. 2SP Ortam Kontrolü Hazırlığına Bakın (Bölüm F). 9. Örnekleri ve kontrolleri kaynama yuvasına aktarın. 1. Kaynama yuvasını kaynar suda 1 dakika bekletin. 11. 1 dakika sonra kaynama yuvasını çıkarın ve tüpleri oda sıcaklığında 15 dakika soğumaya bırakın. UYARI: Kaynar suyla yanmamak için dikkat edin, su banyosu yuvası veya su banyosu yüzeyleri sıcak olabilir. 12. Soğuttuktan sonra, yaklaşık 5 sn santrifüjleyin (16 x g). NOT: Örnekleri kaynattıktan sonra: 18 33 C de 6 saate kadar saklanabilir ve tekrar kaynatmadan test edilebilirler. 2 8 C de 3 güne kadar saklanabilirler. Örnekler testten önce vortekslenerek karıştırılmalı ve tekrar lize edilmelidir. -2 C de 14 güne kadar saklanabilirler. Örnekler testten önce oda sıcaklığında çözülmeli, vortekslenerek karıştırılmalı ve tekrar kaynatılmalıdır. 13. Örnekler BD ProbeTec ET MP Test Çalıştırması Prosedürü için hazırdır (Bölüm G). F. Kontrolü Hazırlığı: Boğaz Swabı Kontrol Hazırlığı 1. Her test çalışması (test edilecek plak) için, bir Negatif Kontrol (tcf/tmp) Tüpü ve bir Pozitif Kontrol (tcf/tmp) Tüpü hazırlayın. Bir plak birden fazla reaktif paketi lot numarası içeriyorsa, kontroller her lot için test edilmelidir. 2. Negatif Kontrol (tcf/tmp) tüpünün kapağını çıkarın. 3. Yeni bir pipet ucu kullanarak, 1 ml Swab Seyreltim Sıvısı ekleyin. 4. Tüpün kapağını sıkıca kapatın. 5. Pozitif Kontrol (tcf/tmp) tüpünün kapağını çıkarın. 6. Yeni bir pipet ucu kullanarak, 1 ml Swab Seyreltim Sıvısı ekleyin. 7. Tüpün kapağını sıkıca kapatın. 8. Kontrol tüplerini 5 sn boyunca vorteksleyerek karıştırın. 9. Kontrol tüpleri lize edilmeye hazırdır. Boğaz Swab İşlemine Bakın (Bölüm D). 2SP Ortam Kontrol Hazırlığı: 1. Her test çalışması (test edilecek plak) için, bir Negatif Kontrol (CF/LP/MP) Tüpü ve bir Pozitif Kontrol (CF/LP/MP) Tüpü hazırlayın. Bir plak birden fazla reaktif paketi lot numarası içeriyorsa, kontroller her lot için test edilmelidir. 2. Kullanımdan önce Solunum ve Ortam Seyreltim Sıvısını hafifçe tersine çevirin. 3. Negatif Kontrol (CF/LP/MP) tüpünün kapağını çıkarın. 5
4. Her kontrol tüpü için yeni bir pipet ucu kullanarak 2 µl moleküler biyolojik kullanım için uygun su ekleyin. 5. Her kontrol tüpü için yeni bir pipet ucu kullanarak 4 µl Solunum ve Ortam Seyreltim Sıvısı ekleyin. 6. Tüpün kapağını sıkıca kapatın. 7. Pozitif Kontrol (CF/LP/MP) tüpünün kapağını çıkarın. 8. Her kontrol tüpü için yeni bir pipet ucu kullanarak 2 µl moleküler biyolojik kullanım için uygun su ekleyin. 9. Her kontrol tüpü için yeni bir pipet ucu kullanarak 4 µl Solunum ve Ortam Seyreltim Sıvısı ekleyin. 1. Tüpün kapağını sıkıca kapatın. 11. Kontrol tüplerini 5 sn boyunca vorteksleyerek karıştırın. 12. Kontroller kaynatılmaya hazırdır. 2SP Ortam Örnek İşlemine Bakın (Bölüm E). G. BD ProbeTec ET MP Test Çalıştırması Prosedürü: NOT: Test prosedürünü gerçekleştirmeden önce, işlenmiş örnekleri ve işlenmiş kontrolleri, her ikisi de BD ProbeTec ET Pipetör ile uyumlu olan BD ProbeTec ET 2 ml lik Örnek Tüp Sporu veya BD ProbeTec ET Lize İşlemi Yuvası gibi 2 ml veya 4 ml örnek tüpü kapasiteli bir yuvaya yerleştirin. 1. Soğutulmuş örnekler ve kontrollerden kapakları çıkarın ve atın. 2. Kontaminasyonu önlemek için devam etmeden önce ELDİVENLERİ DEĞİŞTİRİN. 3. Plak Yerleşim Raporunu kullanarak, Priming Microwell plağını hazırlayın bkz Plak Yerleşimi (Bölüm C) 4. Microwell torbalarını aşağıdaki şekilde tekrar kapatın: a. Torbayı düz bir yüzeye koyun. Açık ucu bir elinizle düz şekilde tutun. b. Basınç uygulayarak parmağınızı kilidin dışından torbanın bir ucundan diğer ucuna doğru kaydırın. c. Torbayı kapalı olduğundan emin olmak için kontrol edin. 5. BD ProbeTec ET Pipetörde Program 1 i seçin. 6. Pipet uçlarını takın. Boşluk topuzunu tamamen dışarı çekerek BD ProbeTec ET Sistem Pipetörünü genişletin. NOT: Sızıntıyı önlemek için pipetör uçlarının tamamen yerleştiğinden emin olun. 7. 1. örnek sütunundan 2 µl çekin. 8. Pipetörü yavaşça çekin, pipet uçlarıyla kuyucukların kenarlarına dokunun ve Priming Microwellerindeki ilgili sütuna (1 A-H) 15 µl dağıtın. NOT: Kontaminasyona neden olacağından pipetörü örneklerin veya microwellerin üzerinde çekmeyin. Ani hareketler damlama ve aerosollere neden olabilir. 9. Uçları atın. Pipetleme tetiğini bırakarak pipetörü sıfırlayın. NOT: Çalışma alanını kontamine edebileceğinden uçları atarken damlama ve aerosol olmamasına özen gösterin. 1. Yeni uç takın, pipetörü genişletin ve 2. örnek sütunundan 2 µl çekin. 11. Pipetörü yavaşça çekin, pipet uçlarıyla kuyucukların kenarlarına dokunun ve Priming Microwellerindeki ilgili sütuna (2 A-H) 15 µl dağıtın. 12. Uçları atın. 13. Çalışma için kalan örnekleri aktararak devam edin. 14. Priming Microwell plağını Priming İşlem Kapağıyla kapatın ve plağı oda sıcaklığında en az 2 dakika inkübasyona bırakın. (6 saat sürebilir.) NOT: İşlenilen örnekleri yeni kapaklar kullanarak kapatın. ELDİVENLERİ DEĞİŞTİRİN. 15. Priming inkübasyonu sonrasında Amplifikasyon İşlemi Microwell plağını hazırlayın. Amplifikasyon İşlemi Microwellerini bir plakta Plak Yerleşim Raporuna uygun şekilde konfigüre edin (priming plağıyla aynı şekilde). Microwell torbalarını adım 4 te açıklanan şekilde tekrar kapatın. 16. Priming Microwell plağının kapağını çıkarın ve plağı Priming Isıtıcısına aktarın. Amplifikasyon İşlemi Microwell plağını ön ısıtma işlemi için DERHAL Isıtma İşlemi Isıtıcısına yerleştirin. 17. Zamanlayıcıyı 1 dakikaya ayarlayın. (NOT: Bu adım zaman açısından kritiktir.) 18. 1 dakikalık (+/- 1 dakika) inkübasyon sonrasında pipetörde Program 5 i seçin. 19. Pipet uçlarını takın ve Priming Microwelli plağının 1. sütunundan 1 µl çekerek Amplifikasyon İşlemi Microwelli plağının 1. sütununa aktarın. Pipet uçlarının kuyucukların kenarlarına değmesini sağlayın ve sıvıyı dağıtın. Dağıtma işleminden sonra pipetörün kuyucuklardaki sıvıyı otomatik olarak karıştırmasını sağlayın. Pipetörü plaktan dikkatle uzaklaştırın. Diğer kuyucuklara dokunmaktan kaçının. 2. Uçları atın. Yeni uç takın ve Priming Microwellerindeki reaksiyon karışımını Amplifikasyon İşlemi Microwellerine sütun sütun aktarmaya, her sütun için yeni uçlar kullanarak devam edin. 21. Son sütun da aktarıldığında, bir Yapışkanlı kapağın desteğini çıkarın (Yapışkanlı kapak (1/2) 6 kolon kapsayabilir. Plak 6 sütunu aşarsa bir TAM yapışkanlı kapak kullanılmalıdır.) Yapışkanlı kapağı kenarlarından tutun ve microwellerin üzerine uygulayın. Yapışkanlı kapağın uygulanmasıyla ilgili olarak Isıtma İşlemi Isıtıcısı yönergelerine bakın. Tüm microwellerin tamamen kapatılmasını sağlamak için yapışkanlı kapağı aşağı doğru bastırın. 22. BD ProbeTec ET kullanıcı arayüzünde taşıyıcıyı dışarı çıkarın ve kapıları açın ve plak kapağını kaldırın. Kapatılan Amplifikasyon İşlemi Microwelli plağını DERHAL (3 sn içinde) BD ProbeTec ET Cihazına aktarın ve çalışmayı başlatın. (Detaylı bilgi için BD ProbeTec ET Sistemi Kullanıcı Kılavuzuna başvurun.) 23. Çalışmayı başlattıktan sonra, aşağıdaki temizlik prosedürüyle devam edin: a. Priming Microwellerini Yapışkanlı kapakla kapatın ve plağı Priming Isıtıcısından çıkarın. UYARI: Sıcaklık 7 C nin üzerindedir - Plağı çıkarmak için ısıya dayanıklı eldiven kullanın. b. Plağı tezgah üzerinde 5 dakika soğumaya bırakın. 6
c. Kapatılmış Priming Microwellerini yapışkanlı kapağın iki yanından tutarak ve kuyucukları bir birim olarak yukarı doğru kaldırarak plaktan çıkarın. Kapatılmış microwelleri bir Atık Çantasına koyun ve kapatın. d. Metal plağı temizleyin: Plağı %1 (h/h) sodyum hipoklorit - Alconox çözeltisiyle temizleyin. Plağı suyla durulayın. Plağı temiz bir kağıt havluya sarın ve tekrar kullanmadan önce tamamen kurumasını bekleyin. 24. Çalışma tamamlandığında, sonuçların bir çıktısı alınır. 25. Plak taşıyıcısını yuvadan çıkarın, kapıyı açın ve plağı çıkarın. Kapağı kapatın ve plak yuvasını tekrar cihazın içine yerleştirin. 26. Kapatılmış Amplifikasyon İşlemi Microwellerini plaktan çıkarın. DİKKAT: Yapışkanlı kapakları malzemelerini microwellerden çıkarmayın. Kapatılmış microwelller, yapışkanlı kapağın üst ve altından tutularak ve plağın dışına, yukarı doğru kaldırılarak bir birim olarak kolayca çıkarılabilir. Kapatılmış microwelleri Atık Çantasına yerleştirin. Çantayı kapatın. 27. Metal plağı temizleyin: Plağı %1 (h/h) sodyum hipoklorit - Alconox çözeltisiyle temizleyin. Plağı suyla durulayın. Plağı temiz bir kağıt havluya sarın ve tekrar kullanmadan önce tamamen kurumasını bekleyin. 28. Günün son çalıştırma işleminden sonra, aşağıdaki temizleme prosedürlerini uygulayın: a. Kağıt havlu veya gazlı bezleri %1 (h/h) sodyum hipoklorit ve Alconox çözeltisiyle ıslatın ve tezgahlara ve Lize İşlemi Isıtıcısı, Priming Isıtıcısı, örnek tüp sporu, su banyosu, santrifüj ve BD ProbeTec ET Cihazının dış yüzeylerine uygulayın. Çözeltinin 2 3 dakika boyunca bu yüzeylerde kalmasını sağlayın. Kağıt havlu ve gazlı bezleri suyla ıslatın ve temizleme çözeltilerini temizleyin. Temizleme çözeltilerini uygularken ve suyla durularken havlu ve gazlı bezleri sık sık değiştirin. Kağıt havlu veya gazlı bezleri ELIMINase, DNA AWAY veya %1 (h/h) sodyum hipoklorit ve Alconox ile ıslatın ve Pipetör tutacağını silin (SADECE TUTACAĞI SİLİN). 2 3 dakika sonra tutacağı suyla ıslatılmış kağıt havlu veya gazlı bez kullanarak silin. b. Lize İşlemi Yuvasını, Lize İşlemi Yuvası tabanını, Lize İşlemi Yuvası kapağını ve plakları veya su banyosu yuvasını 1 2 dakika boyunca %1 sodyum hipoklorit ve Alconox a batırın. Suyla tamamen durulayın ve havayla kurumaya bırakın. c. Pipetörü tekrar şarj edin. d. Kapalı Atık Çantasını ve biyolojik tehlike atığını kontamine atık malzemelere ilişkin prosedürlere uygun şekilde atın. 29. Aşağıdaki prosedürleri en azından haftalık olarak gerçekleştirin. a. Su banyolarındaki suyu atın. b. Su banyolarını %1 (h/h) sodyum hipoklorit ve Alconox çözeltisiyle temizleyin. Su ile çalkalayın ve kurumaya bırakın. c. Distile su ile tekrar doldurun. Kalite Kontrolü Kalite kontrolleri ilgili yerel, devlet ve/veya federal gereklilikler veya akreditasyon gerekliliklerine veya laboratuvarınızın standart Kalite Kontrol prosedürlerine uygun olarak gerçekleştirilmelidir. Kullanıcının, uygun Kalite Kontrol uygulamaları için ilgili CLSI (eski adı NCCLS) yönergelerine ve CLIA düzenlemelerine uyması önerilir. Swab Seyreltim Sıvısı ve Kontroller, Swab Seyreltim Sıvısı ve Kontrol Kitinde (tcf/tlp/tmp) birlikte sağlanmaktadır. Solunum ve Ortam Seyreltim Sıvısı ve Kontroller, Solunum ve Ortam Seyreltim Sıvısı ve Kontrol Kitinde (CF/LP/MP) birlikte sağlanmaktadır. Her örnek tipinde / plaka üzerinde test çalışmasında ve her yeni reaktif lotu numarası için bir pozitif ve bir negatif kontrol bulunmalıdır. Kontroller tesadüfi olarak konumlandırılabilir. Pozitif kontrol önemli reaktif hatalarını izlemek içindir. Negatif kontrol reaktif ve/veya ortam kontaminasyonunu izlemek içindir. Pozitif ve negatif kontrol örnek sonuçlarının raporlanması için sırasıyla pozitif ve negatif olarak test edilmelidir. Kontroller beklenen performansı göstermezse, test çalışması geçersiz sayılır ve cihaz hasta sonuçlarını raporlamaz. Çalışma Kontrolleri beklenen sonuçları vermezse, yeni bir kontrol seti, yeni microweller ve işlenen örnekleri kullanarak tüm çalışmayı tekrarlayın. Yeniden test etme için yeterli olmayan miktarda işlenmiş örnek kalırsa, birincil örneğin başka bir kısmını yeniden işleyin. Tekrarlanan kontroller beklenen sonuçları vermezse Teknik Servis le temas kurun (bkz. Sonuçların Yorumlanması ). Priming Microwellerinin içine bir Dahili Amplifikasyon Kontrolü (IAC) yerleştirilmiştir. IAC, örnek matriksinin varlığında amplifiye olan nükleik asit hedefi içerir. IAC nin tasarlanma amacı, amplifikasyon reaksiyonun doğruluğunu onaylamak ve işlenen örnekteki potansiyel inhibisyonun tespit edilmesini sağlamaktır. Örnek İşlem Kontrolleri Örnek işlem kontrolleri ilgili akreditasyon kurumlarının gerekliliklerine uygun şekilde test edilebilir. Pozitif ve negatif kontrollerle tüm test sistemi test edilmelidir. Bu amaçla, bilinen pozitif örnekler, bilinmeyen örneklerle birlikte işlenip test edilerek kontrol olarak kullanılabilir. İşlem kontrolleri olarak kullanılan örnekler prospektüse göre saklanmalı, işlenmeli ve test edilmelidir. Pozitif ve negatif kontroller, boğaz swabları (aktarım besiyeri ile veya olmaksızın, sırasıyla Swab Kontrol ve Solunum ve Ortam Kontrolleri) test ederken örnek işleme prosedürlerinin etkililiğini kontrol etmek için tasarlanmıştır çünkü kontroller örneklere benzer şekilde işlem görür. DNA Kontaminasyonu Varlığının İzlenmesi Çalışma alanının ve ekipman yüzeylerinin DNA kontaminasyonu varlığı açısından izlenmesi için aşağıdaki test prosedürleri en az ayda bir kez gerçekleştirilmelidir. Kontaminasyonun bir sorun oluşmadan önce tespit edilebilmesi için ortamın izlenmesi önemlidir. 1. Test edilecek her alan* için bir BBL CultureSwab EZ swabı kullanın. 7
2. Swab uygulanacak her alan için bir Örnek Tüpü etiketleyin ve her tüpe 1 ml Swab Seyreltim Sıvısı (tcf/tmp) pipetleyin. 3. İlk swabı Seyreltim Sıvısına batırın ve ilk alanı geniş bir süpürme hareketiyle silin. 4. Swabı Seyreltim Sıvısı içinde karıştırın, swabı akıtın, tüpün kapağını kapatın ve 5 saniye süreyle vorteksleyin. Swabları atın. 5. Swab uygulanan her alan için bu işlemi tekrarlayın. 6. Tüpleri Lize İşlemi Yuvasına yerleştirin ve Lize İşlemi Isıtıcısında 1 dakika ısıtın. Yuvayı ısıtıcıdan çıkarın ve devam etmeden önce örnekleri 15 dakika soğumaya bırakın. 7. Tüpler ısıtılırken, swab uygulanan yüzeylerdeki tampon karışımı kalıntısını ortadan kaldırmak için suyla ıslatılmış temiz havlular kullanın. 8. Örnekler soğuduktan sonra, BD ProbeTec ET MP Test Çalıştırması Prosedürü ile devam edin (Bölüm G). * Test edilmesi önerilen alanlar şunlardır: Lize İşlemi Yuvası, Lize İşlemi Isıtıcısı, su banyosu yuvası, mikrosantrifüj, Priming Isıtıcısı, siyah microwell plakları, pipetör tutacağı, cihaz dokunmaya duyarlı tuşları, cihazın klavyesi, su banyolarının kuru yüzeyleri, örnek sporlarının yüzeyleri ve çalışılan tezgahların yüzeyleri ile örnek işlem alanlarıdır. Bir alan pozitif sonuç verirse, bu alanı %1 (h/h) sodyum hipoklorit ve Alconox çözeltisi ile temizleyin. Tüm alanın temizlik çözeltisiyle ıslatıldığından emin olun ve temizlik çözeltisinin yüzey üzerinde en az 2 dakika boyunca veya kuruyana kadar kalmasına izin verin. Gerektiğinde temizleme çözeltisinin fazlasını temiz bir havluyla alın. Alanı suyla ıslatılmış temiz bir havluyla silin ve yüzeyi kurumaya bırakın. Alanı tekrar test edin. Negatif sonuç alana kadar bu işlemi tekrarlayın. Kontaminasyon sorunu çözülemezse, daha fazla bilgi için Teknik Servis i arayın. TEST SONUÇLARININ YORUMLANMASI M. pneumoniae DNA sının varlığı veya yokluğu, örneğe ait PAT (Eşikten Sonra Geçişler) sonuçlarının önceden belirlenen eşik değeri ile ilişkilendirilmesiyle belirlenir. PAT sonucu reaksiyonun sonucu olarak üretilen sinyalin büyüklüğünün belirlenmesi için kullanılan bir ölçüttür. Bu ölçüm için, daha büyük sayılar eşiğe amplifikasyonun erken fazında ulaşıldığı gösterirken, daha küçük sayılar eşiğe daha sonra, reaksiyon sırasında ulaşıldığını gösterir. PAT sonucunun büyüklüğü örnekte bulunan M. pneumoniae DNA sının miktarını göstermez. Test kontrollerinin sonuçları beklenenden farklıysa, hasta sonuçları raporlanmamalıdır. Beklenen kontrol değerleri için Kalite Kontrol bölümüne bakın. Raporlanan sonuçlar aşağıdaki şekilde belirlenir: PAT Sonucu MP Hedefi IAC Hedefi Sonuç Yorum Rapor > > veya = Pozitif SDA ile saptanan M. pneumoniae DNA sı = > Negatif SDA ile saptanmayan M. pneumoniae DNA sı 8 M. pneumoniae türü için pozitif, mevcut veya yakın zaman öncesine ilişkin enfeksiyonu gösterir. M. pneumoniae için tahmini negatif. Mevcut DNA seviyesi testin saptama sınırının altında olabileceğinden M. pneumoniae enfeksiyonu yok sayılamaz. = = Belirlenemeyen Amplifikasyon kontrolü inhibe edilmiştir. Sonucun yorumlanması için ilave test gereklidir. a a İşlenmiş örnek tüpünden tekrar BD ProbeTec ET MP Testi. İşlenmiş örnekten yeterli hacim kalmazsa, orijinal örnekten tekrarlayın veya eğer gerekliyse yeni bir örnek alın. Tekrar sonucu pozitif veya negatifse, yukarıda açıklanan şekilde yorumlayın. Sonuç belirlenemiyorsa yeni bir örnek alınmalıdır. MP ve IAC Eşiğinin Belirlenmesi: M. pneumoniae hedef DNA sı için eşik değerleri ve IAC başlangıçta pozitif ve negatif kontrollerden elde edilen verilerin Algılayıcı İşletim Özelliği eğri analiziyle belirlenmiştir. Bu eşik değerleri klinik çalışmalarda kontrol edilmiş ve doğrulanmıştır. PROSEDÜRÜN KISITLI OLDUĞU ALANLAR 1. BD ProbeTec ET MP Testi boğaz swabları ile değerlendirilmiştir (2SP aktarım besiyeri ile veya olmaksızın). Diğer örnek türleriyle performansı belirlenmemiştir. 2. BD ProbeTec ET MP Testi yalnızca bir yaş ve üzeri hastalarda değerlendirilmiştir. 3. Birçok tanı amaçlı testte olduğu gibi, BD ProbeTec ET MP Testinden gelen sonuçlar da doktorun kullanabileceği diğer laboratuvar verileri ve klinik verilerle ilişkili olarak yorumlanmalıdır. Diğer klinik belirtiler, semptomlar ve pnömoninin tanı kanıtları ile birlikte bu testten pozitif bir sonuç alınması Mycoplasma pneumoniae kaynaklı pnömoninin göstergesidir. 4. Negatif bir sonuç Mycoplasma pneumoniae kaynaklı pnömoni tanısını yok saymak için kullanılmamalıdır çünkü test sonuçları hatalı örnek toplanması, teknik hata, örnek karışması, eşzamanlı antibiyotik tedavisi veya örnekteki Mycoplasma pneumoniae DNA sı miktarının testin analitik duyarlılığının altında olmasından etkilenebilir. Bu sebeple, kültür, seroloji ve/veya doğrulanmış nükleik asit amplifikasyon testi gibi ilave tanı test prosedürleri gerekebilir. 5. M. pneumoniae den gelen nükleik asitler başarılı antimikrobiyal tedavi sonrasında da ortamda kalabileceğinden, tedavinin başarılı olup olmadığını değerlendirmek için BD ProbeTec ET MP Testi kullanılamaz. 6. Testin optimum performans göstermesi için örneğin doğru şekilde toplanması ve işlenmesi gerekir. 7. BD ProbeTec ET MP Testi, yalnızca test prosedürü ve BD ProbeTec ET Sistemi hakkında eğitim almış personel tarafından kullanılmalıdır.
8. BD ProbeTec ET MP Testi kalitatif sonuçlar sunar. PAT sonucunun büyüklüğüyle örnekte bulunan M. pneumoniae DNA sının miktarı arasında herhangi bir ilişki kurulamaz. BEKLENEN SONUÇLAR A: Görülme Sıklığı M. pneumoniae testinde gözlenen pozitiflik oranı kullanılan test yöntemi, hastanın yaşı, altta yatan risk faktörlerinin varlığı, coğrafi bölge ve en önemlisi yerel hastalık görülme sıklığına bağlı olarak değişkenlik gösterecektir. B: PAT Sonucu Frekans Dağılımı Prospektif Çalışma Not: Bütün BD ProbeTec ET MP Test sonuçları SP-4 aktarım ortamına akıtılan boğaz swabı kültür sonuçları ile karşılaştırılmıştır. Klinik çalışma tasarımının detaylı tanımı için Performans Özellikleri bölümüne bakın. Amerika Birleşik Devletleri ve Kanada daki yedi klinik tesisten 316 hastadan prospektif olarak toplanan toplam 316 boğaz swabı (aktarım besiyeri olmaksızın saklanan) BD ProbeTec ET MP Testi ile test edilmiştir. Kültür sonuçları ile karşılaştırılan başlangıç MP PAT Sonuçlarının frekans dağılımı Şekil 1 de gösterilmiştir. Prospektif olarak alınan ve 2SP aktarım besiyerine akıtılan boğaz swablarının altmış dördü aynı zamanda BD ProbeTec ET MP Testi ile test edilmiştir. Kültür sonuçları ile karşılaştırılan başlangıç MP PAT Sonuçlarının frekans dağılımı Şekil 2 de gösterilmiştir. Retrospektif Çalışma 2SP aktarım besiyerine akıtılan ve dondurularak saklanan retrospektif boğaz swablarının yetmiş sekizi Avrupa da bir klinik tesiste BD ProbeTec ET MP Testi ile test edilmiştir. Orijinal kültür sonucu ile karşılaştırılan başlangıç MP PAT Sonuçlarının frekans dağılımı Şekil 3 te gösterilmiştir. Aynı örneklerden orijinal PCR sonucu ile karşılaştırılan başlangıç MP PAT Sonuçlarının frekans dağılımı Şekil 4 te gösterilmiştir. Şekil 1: MP PAT Sonucu Frekans Dağılımı Kültür ile Karşılaştırılan Prospektif Boğaz Swabı (aktarım besiyeri olmaksızın) Sonuçları 35 3 313 25 Frekans 2 15 (-) (+) Kültür - Kültür + 1 5 1 2 1-19 2-39 4-6 MP PAT Sonucu Kültür Sonucu 1 19 2 39 4 6 Toplam Negatif Pozitif 313 1 Toplam 314 2 316 2 315 1 9
Şekil 2: MP PAT Sonucu Frekans Dağılımı Kültür ile Karşılaştırılan Prospektif Boğaz Swabı (2SP Besiyeri) Sonuçları 7 6 62 5 Frekans 4 3 (-) (+) Kültür - Kültür + 2 1 1 1 MP PAT Sonucu Kültür Sonucu 1 19 2 39 4 6 Toplam Negatif Pozitif 62 1 Toplam 63 1 64 Şekil 3: MP PAT Sonucu Frekans Dağılımı Kültür (2SP Besiyeri) ile Karşılaştırılan Retrospektif Boğaz Swabı (2SP Besiyeri) Sonuçları 1 63 1 14 12 12 1 Frekans 8 6 (-) (+) Kültür - Kültür + 4 3 3 2 1 1-19 2-39 4-6 MP PAT Sonucu Kültür Sonucu 1 19 2 39 4 6 Toplam Negatif Pozitif 3 1 Toplam 3 1 3 12 19 3 12 19 1
Şekil 4: MP PAT Sonucu Frekans Dağılımı PCR (2SP Besiyeri) ile Karşılaştırılan Retrospektif Boğaz Swabı (2SP Besiyeri) Sonuçları 45 4 39 35 Frekans 3 25 2 15 1 5 (-) (+) 15 11 9 4 PCR - PCR + 1-19 2-39 4-6 MP PAT Sonucu PCR Sonucu 1 19 2 39 4 6 Toplam Negatif Pozitif 15 11 4 Toplam 26 4 9 39 78 C. Kontroller Klinik değerlendirme sırasında, solunum ve ortam kontrolleri (CF/LP/MP) kullanılarak toplam 47 çalışma yürütülmüştür. Bütün çalışmalar kabul edilebilir kontrol sonuçları vermiştir. Swab kontrolleri (tcf/tmp) kullanılarak toplam 78 çalışma yürütülmüştür. Boğaz swabları ile çalışma hata oranı %2,6 dır (2/78). Çalışmaların ikisi kontrol hatası vermiştir; bir çalıştırmada hem pozitif hem de negatif kontroller hatalı, ikinci çalışmada yalnızca negatif kontrol hatalıdır. Hatalardan biri prosedüre bağlı bir hata, diğeri kullanıcının kontrolleri BD ProbeTec ET MP Test prospektüsünde belirtildiği gibi vortekslememesi sebebiyle oluşan bir hatadır. CF/LP/MP kontrolleri ve tcf/tmp kontrollerinin PAT sonuçları sırasıyla Tablo 1 ve 2 de özetlenmiştir. Tablo 1: Solunum ve Ortam (CF/LP/MP) Kontrollerinin MP PAT Sonuç Özeti Kontrol N. Aralık 5. Persentil Ortalama Medyan 95. Persentil MP Negatif 47 MP Pozitif 47 21,7 49,9 27,5 42,2 44,2 48,5 9 39 Tablo 2: Swab (tcf/tmp) Kontrollerinin MP PAT Sonuç Özeti Kontrol N. Aralık 5. Persentil Ortalama Medyan 95. Persentil MP Negatif 76 MP Pozitif 77 21 51,6 34,7 45,4 46,4 5,4 Performans Özellikleri Prospektif Çalışma BD ProbeTec ET MP Testi, 22 23 solunum dönemi sırasında Amerika Birleşik Devletleri ve Kanada da yedi klinik merkezde prospektif olarak değerlendirilmiştir. Bu klinik merkezler, boğaz swab örneklerini değerlendirmiştir. Her hastadan bir boğaz swabı (aktarım besiyeri olmadan saklanan CultureSwab EZ) ve bir polyester swab alınmıştır. Bir boğaz swabı (CultureSwab EZ aktarım besiyeri olmadan saklanan) BD ProbeTec ET Sisteminde BD ProbeTec ET MP Testi ile test etmede kullanılmıştır. Toplamayı takiben polyester swab referans Mycoplasma kültürü ve PCR testi için SP-4 ortamında süspanse edilmiştir. Bu sebeple, prospektif olarak alınan örneklerden BD ProbeTec ET MP Test sonuçları SP-4 ortamından boğaz swab kültürü sonuçları ile karşılaştırılmıştır. Çalışmada bütün prospektif örnekler üzerinde bütün referans testleri gerçekleştirmek için Mycoplasma test yöntemlerinde uzmanlığına göre sekiz klinik merkez seçilmiştir. Her hastadan polyester boğaz swabları sonrasında atılan SP-4 ortama akıtılmış ve inoküle edilen flakon hemen -7 C de saklanmıştır. İnoküle edilmiş dondurulmuş SP-4 flakonları referans test tesisine ulaştığında, broth eritilmiş ve SP-4 broth ortamında seri olarak seyreltilmiştir. Orijinal SP-4 örneğinin bir kısmı ve her seyreltmenin bir kısmı SP-4 agara inoküle edilmiştir. Bütün pozitif SP-4 kültürleri ve SP-4 plak agar besiyerinde izole edilen bütün organizmalar M. pneumoniae 16S rrna geni için PCR yöntemi ile M. pneumoniae olarak doğrulanmıştır. Belirsiz bütün sonuçlar işlenen örnekten veya orijinal örnekten (yeterli işlenmiş örnek olmaması durumunda) tekrarlanmıştır. Başlangıçta ve tekrarda (yani, son olarak) belirsiz sonuç veren örnek performans özelliklerine dahil edilmemiştir. Başlangıçta belirsiz sonuç veren ve pozitif veya negatif olarak tekrarlanan örnek performans özelliklerine dahil edilmiştir. Başlangıçta belirsiz sonuç veren ve yeterli miktarda örnek kalmaması sebebiyle tekrarlanamayan örnek başlangıçta belirsiz sonuç olarak kalmış ve performans özelliklerine dahil edilmemiştir. 15 63 11
316 hastadan toplanan toplam 316 boğaz swabı (aktarım besiyeri olmadan saklanan) çalışmaya dahil olmak için gerekli kriterlere uygundur (yani, radyografik pnömoni kanıtı, hasta yaşı 1, antibiyotik kullanımı 14 gün, geçerli örnek tipinin toplanması, uygun referans yöntemlerinin yürütülmesi, vb.). BD ProbeTec ET MP Testinin performans özelliklerini hesaplamak için boğaz swablarından elde edilen sonuçlar (aktarım besiyeri olmaksızın) SP-4 besiyerine akıtılan paralel boğaz swabından elde edilen kültür sonucu ile karşılaştırılmıştır. Kültür test sonucu pozitif ise örnek pozitif olarak kabul edilmiştir. Kültür test sonucu negatif ise örnek negatif olarak kabul edilmiştir. Boğaz swablarının sonuçları (aktarım besiyeri olmaksızın) Tablo 3 te özetlenmiştir. Tablo 3: Kültür ile Karşılaştırılan BD ProbeTec ET MP Testi Prospektif Boğaz Swabı Sonuçları (aktarım besiyeri olmaksızın) Kültür Bölge MP Testi Pozitif Negatif Toplam 1 Pozitif Negatif 83 83 Duyarlılık (%95 CI) Toplam 83 83 NA 2 Pozitif 1 a 1 Negatif 25 25 Toplam 26 26 NA 3 Pozitif Negatif 1 b 89 9 Toplam 1 89 9 4 Pozitif Negatif 21 21 % (/1) (% %97,5) Toplam 21 21 NA 6 Pozitif Negatif 29 29 Toplam 29 29 NA 7 Pozitif 1 a 1 Negatif 66 66 Toplam 67 67 NA Genel Pozitif 2 2 Negatif 1 313 314 Toplam 1 315 316 NA = Geçerli değildir % (/1) (% %97,5) Özgüllük (%95 CI) %1 (83/83) (%95,7 %1) %96,2 (25/26) (%8,4 %99,9) %1 (89/89) (%95,9 %1) %1 (21/21) (%83,9 %1) %1 (29/29) (%88,1 %1) %98,5 (66/67) (%92 %1) %99,4 (313/315) (%97,7 %99,9) Belirlenemeyen Başlangıç/Son a İki SP-4 örneğinde doğrudan PCR testi gerçekleştirilmiştir; her iki örnek de PCR pozitiftir. b Bir SP-4 örneğinde doğrudan PCR testi gerçekleştirilmiştir; örnek PCR negatiftir. c Başlangıçta belirsiz olan bir sonuç; örnek negatif olarak tekrar test edilmiştir. Prospektif olarak alınan ve (2SP aktarım besiyerine akıtılan) boğaz swablarının altmış dördü aynı zamanda BD ProbeTec ET MP Testi ile de test edilmiştir. 2SP besiyerine akıtılan boğaz swablarının sonuçları SP-4 besiyerinden elde edilen kültür sonuçları ile kıyaslanmıştır. Kültür test sonucu pozitif ise örnek pozitif olarak kabul edilmiştir. Kültür test sonucu negatif ise örnek negatif olarak kabul edilmiştir. 2SP aktarım besiyerinde saklanan boğaz swablarının sonuçları Tablo 4 te özetlenmiştir. / / 1/ c / / / 1/ 12
Tablo 4: Kültür ile Karşılaştırılan BD ProbeTec ET MP Testi Prospektif Boğaz Swabı Sonuçları (2SP Besiyeri) Kültür Bölge MP Testi Pozitif Negatif Toplam 2 Pozitif 1 a 1 Negatif 29 29 Duyarlılık (%95 CI) Toplam 3 3 NA 3 Pozitif Negatif 1 b 33 34 Toplam 1 33 34 Genel Pozitif 1 1 Negatif 1 62 63 Toplam 1 63 64 NA = Geçerli değildir % (/1) (% %97,5) % (/1) (% %97,5) Özgüllük (%95 CI) %96,7 (29/3) (%82,8 %99,9) %1 (33/33) (%89,4 %1) %98,4 (62/63) (%91,5 %1) Belirlenemeyen Başlangıç/Son a SP-4 örneğinde doğrudan PCR testi gerçekleştirilmiştir; örnek PCR pozitiftir. b SP-4 örneğinde doğrudan PCR testi gerçekleştirilmiştir; örnek PCR negatiftir. c Başlangıçta belirsiz olan bir sonuç; örnek belirsiz olarak tekrar test edilmiştir. BD ProbeTec ET MP Testi çalışmasında kaydolan her hastadan alınan swablardan biri kültür ve PCR testi için SP-4 besiyerine akıtılmıştır. Tüm pozitif, tutarsız (MP Test-pozitif, kültür negatif veya tersi) ve tutarlı negatif örneklerin yaklaşık %1 u, doğrulanmış bir M. pneumoniae ye özgü PCR yöntemi ile test edilmiştir. Bütün PCR testleri bir klinik tesiste gerçekleştirilmiştir. Toplam 21 hasta M. pneumoniae PCR testi ile test edilen örneklere sahiptir. Tablo 5, kültür, BD ProbeTec ET MP Testi ve PCR testinden elde edilen genel sonuç kombinasyonlarını özetlemektedir. Kültür Sonucu Tablo 5: Prospektif Hasta Test Yöntemleri ve MP Test Sonuçlarının Özeti BD ProbeTec ET MP Test Sonuçları Boğaz Swabı 2SP Besiyeri PCR Sonucu 1/1 / 1/1 c Hasta Sayımı + 1 + + + 1 + I + 1 + 1 M/D M/D 242 M/D 53 M/D 1 7 M/D M/D 1 Açıklama: M/D = Mevcut değildir + Pozitif Sonucu gösterir Negatif Sonucu gösterir I = Belirlenemeyen Retrospektif Çalışma Prospektif çalışmada az sayıda pozitif örneğe rastlanması sebebiyle BD, Avrupa da 78 boğaz swab örneğini akıtan ve 2SP aktarım besiyerinde donduran bir tesis belirlemiştir. Bu retrospektif örnekler sekiz yıla kadar dondurularak saklanmış, örneklerin çoğu (%69, 54/78) üç yıldan kısa süre saklanmıştır. 78 retrospektif örnek, kültür ve PCR kombinasyonu veya yalnızca PCR ile karakterize edilmiştir. 78 örneğin hepsi PCR sonuçlarına sahiptir (63 pozitif, 15 negatif). 63 PCR pozitif örneğin, 19 u pozitif M. pneumoniae kültür sonuçlarına sahiptir. Geri kalan 44 PCR pozitif örnekte ve 15 PCR negatif örnekte kültür testi gerçekleştirilmemiştir. BD ProbeTec ET MP Testi retrospektif kültür sonuçları ile %84,2 (16/19) pozitif yüzde benzerliğe sahiptir. Kültür test sonucu veya PCR sonucu pozitif ise örnek pozitif olarak kabul edilmiştir. Mevcut PCR sonucu negatif ise örnek negatif olarak kabul edilmiştir. 2SP aktarım besiyerinde saklanan boğaz swablarının BD ProbeTec ET MP Testinin, mevcut kültür ve/veya PCR sonuçlarına kıyasla yüzde benzerlik hesapları Tablo 6 da özetlenmiştir. 13
Tablo 6: Kültür (2SP Besiyeri) ve/veya PCR (2SP Besiyeri) ile BD ProbeTec ET CF Testi Retrospektif Boğaz Swabı (2SP Besiyeri) Sonuçlarının Karşılaştırılması Kültür ve/veya PCR Bölge MP Testi Pozitif Negatif Toplam 9 Pozitif 52 a 52 Negatif 11 b 15 26 Toplam 63 15 78 Pozitif Yüzde Benzerlik %82,5 (52/63) (%7,9 %9,9) Negatif Yüzde Benzerlik %1 (15/15) (%78,2 %1) Toplam Yüzde Benzerlik %85,9 (67/78) (%76,2 %92,7) a 52 örneğin 16 sı aynı zamanda M. pneumoniae için de kültür edilmiştir; 16 örneğin hepsi kültür-pozitiftir. b 11 örneğin 3 ü aynı zamanda M. pneumoniae için de kültür edilmiştir; 3 örneğin hepsi kültür-pozitiftir. Analitik Çalışmalar BD ProbeTec ET MP Testi amplifikasyon reaksiyonu hacmi, 1 µl işlenmiş örnektir. Analitik Duyarlılık BD ProbeTec ET MP Testinin analitik duyarlılığı M. pneumoniae organizmasından oluşan bir panel test edilerek belirlenmiştir. Her organizma için, bakteriyel süspansiyonlar reaksiyon başına 4, 8 ve 1.2 hücre seviyesine seyreltilmiştir. Boğaz swab örneği matriksi mevcut olması durumunda BD ProbeTec ET MP Testinin analitik duyarlılığı, swab örneklerinin reaksiyon başına, 4, 8 ve 1.2 hücre seviyesini sağlamak için 2 µl seyreltilmiş M. pneumoniae stok (ATCC 29342) ile inoküle edilmesiyle belirlenmiştir. 2SP aktarım besiyeri mevcut olması durumunda BD ProbeTec ET MP Testinin analitik duyarlılığı, 2SP besiyerinin reaksiyon başına, 4, 8, 1.6, 3.2 ve 4.8 hücre seviyesini sağlamak için seyreltilmiş M. pneumoniae (ATCC 29342) stok ile inoküle edilmesiyle belirlenmiştir. Bütün örnekler üçlü tekrarlar halinde işlenmiş ve test edilmiştir. %1 pozitifliğe dayalı olarak, farklı organizmalar ve örnek matrisleri için analitik duyarlılık Tablo 7 de özetlenmiştir. Bununla birlikte, gerçek Tespit Sınırı (LOD) test edilen en düşük seviyenin altında olabilir. Tablo 7: BD ProbeTec ET MP Testi İzolat Analitik Duyarlılığı M. pneumoniae suşu Analitik Duyarlılık (hücre/reaksiyon) ATCC 29342 4 ATCC 15531 4 ATCC 15293 4 ATCC 15377 4 ATCC 2985 4 ATCC 3955 4 ATCC 49894 4 ATCC 15492 4 İşlenmiş Boğaz Swabları 4 2SP Aktarım Besiyeri 4 14
Analitik Özgüllük BD ProbeTec ET MP Testi kullanılarak toplam 79 mikroorganizma (64 bakteri, 6 mantar ve 9 virüs) değerlendirilmiştir. McFarland 5 standardına eşdeğer bakteriyel süspansiyon kullanarak test edilen Coccidioides immitis hariç olmak üzere bakteriyel izolatlar 1,33 x 1 7 ila 2,67 x 1 9 CFU/mL veya hücre/ml aralığında konsantrasyonlarda test edilmiştir. Virüsler 1 x 1 6 viral partikül (VP) veya genom/ml lik bir konsantrasyonda test edilmiştir. Test edilen mikroorganizmaların hiçbiri pozitif sonuç vermemiş veya IAC ı inhibe etmemiştir (Tablo 8). Tablo 8: BD ProbeTec ET MP Testi Analitik Özgüllük Acholeplasma laidlawii Haemophilus parainfluenzae Mycoplasma synoviae Acinetobacter calcoaceticus Herpes Simplex Virus-1 Neisseria gonorrhoeae Actinomyces israelii Histoplasma capsulatum Neisseria meningitidis Adenovirus-5 Influenza virus A Neisseria mucosa Aeromonas hydrophila Influenza virus B Parainfluenza I virus Blastomyces dermatitidis Kingella kingae Peptostreptococcus anaerobius Bordetella bronchiseptica Bordetella parapertussis Bordetella pertussis Branhamella catarrhalis Candida albicans Chylamydophila pneumoniae, AR-39 Chlamydia trachomatis, sero L2 Klebsiella pneumoniae subsp. ozaenae tip 4 Klebsiella pneumoniae subsp. pneumoniae Lactobacillus acidophilus Legionella pneumophila Moraxella osloensis Porphyromonas asaccharolytica Prevotella melaninogenicus Pseudomonas aeruginosa Respiratory Syncytial virus, Uzun suş Rhinovirus Salmonella choleraesuis serotype enteritidis Citrobacter freundii Mycobacterium tuberculosis Salmonella choleraesuis serotype Coccidioides immitis Mycoplasma arginini typhi Corynebacterium diphtheriae Mycoplasma buccale Serratia marcescens Corynebacterium jeikeium Mycoplasma faucium Staphylococcus aureus, protein A Cryptococcus neoformans Mycoplasma fermentans üreten Cytomegalovirus Mycoplasma gallinarum Staphylococcus aureus, protein A Eikenella corrodens Mycoplasma gallisepticum üretmeyen Enterobacter aerogenes Mycoplasma genitalium Staphylococcus epidermidis Enterobacter cloacae Mycoplasma hominis Stenotrophomonas maltophilia Enterococcus faecalis Mycoplasma hyorhinis Streptococcus Grup B Enterococcus faecium Mycoplasma lipophilium Streptococcus mutans Enterovirus (Echovirus) Mycoplasma orale Streptococcus pneumoniae Escherichia coli Mycoplasma penetrans Streptococcus pyogenes Fusobacterium nucleatum Mycoplasma primatum Tatlockia (Legionella) micdadei Haemophilus influenzae Mycoplasma salivarium Ureaplasma urealyticum Veillonella parvula 15
İnterferant Maddeler Boğaz swab örneklerinde rastlanabilen potansiyel interferant maddeler M. pneumoniae suşu ATCC 29342 nin MP DNA sı yokluğunda veya 2 hücre/reaksiyon varlığında (aktarım besiyeri olmaksızın boğaz swabları) BD ProbeTec ET MP Testi ile test edilmiştir. MP DNA yokluğunda test edilen maddelerin hiçbiri Tablo 9 da listelenen konsantrasyonlarda pozitif sonuç vermemiştir. Tablo 9 da listelenen konsantrasyonlardaki maddelerin MP DNA sı var olması durumunda test edilen bütün örnekler pozitif sonuç vermiştir. Tablo 9: BD ProbeTec ET MP Testi İnterferans için taranan maddeler Boğaz Swab Örnekleri Test Edilen Maddeler Örnekteki Konsantrasyon Öksürük Şurubu Robitussin DM %25 Triaminic (üzüm) %25 Nazal Spreyler (havuzlanmış) Vicks Sinex %1 Neo-Synephrine (normal kuvvette) %1 Boğaz Spreyleri Cepacol (soğuk mentol) %25 Vicks Chloraseptic (kiraz) %25 Gargara Scope (orijinal nane) %25 Listerine (orijinal) %25 * Pastiller Halls Şekersiz Turunçgil Karışımı %25 Cold-Eeze Çinko %25 Organizmalar Chlamydophila pneumoniae 1 7 EB/mL Legionella pneumophila 1 7 CFU/mL Chlamydophila pneumoniae ve sırasıyla, 1 Legionella pneumophila 7 EB/mL ve 1 7 CFU/mL * 24 başlangıç sonucunun üçü belirsiz bulunmuştur. Güçlendirilmiş Örnek Çalışması Klinik çalışmada rastlanan pozitif örneklerin sayısını desteklemek için 25 boğaz swabı 5 x 1 4 hücre/ml M. pneumoniae ile güçlendirilmiştir (pozitif örnekler). Benzer şekilde, Mycoplasma-negatif boğaz swablarını taklit etmek için, 5 swab yalnızca L. pneumophila ve C. pneumoniae içeren bakteriyel süspansiyon ile güçlendirilmiştir. Bütün örnekler BD ProbeTec ET MP Testinde test edilmiştir. Sonuçlar Tablo 1 da özetlenmiştir. Toplam doğruluk %1 dür (75/75). Tablo 1: BD ProbeTec ET MP Testi Güçlendirilmiş Boğaz Swab Örneği Sonuçları BD ProbeTec ET MP Test Sonuçları Güçlendirme Düzeyi Pozitif Negatif Toplam Pozitif 25 25 Negatif 5 5 Toplam 25 5 75 Tekrarlanabilirlik Boğaz swabları için BD ProbeTec ET MP Testinin tekrarlanabilirliği PBS/BSA da hazırlanan 24 örneği (12 negatif ve 12 pozitif) kapsayan test panelleri ile üç laboratuvarda değerlendirilmiştir. Panel M. pneumoniae için negatif olan 12 örneği ve üç düşük ve üç yüksek M. pneumoniae-pozitif örneği içermektedir (sırasıyla 6 ve 1. hücre/reaksiyon). Ayrıca, sırasıyla 45 EB, 4 CFU ve 6 hücre/reaksiyon C. pneumoniae (CP), L. pneumophila (LP) ve M. pneumoniae (MP) içeren üç düşük pozitif örnek ve her biri sırasıyla 75 EB, 65 CFU ve 1. olan bu organizmaları içeren üç yüksek pozitif örnek mevcuttur. Her tesiste bir operatör, üç gün boyunca günde bir kez panelleri test etmiştir. Sonuçlar Tablo 11 de özetlenmiştir. 16
Tablo 11: BD ProbeTec ET MP Testi - Boğaz Swabı Tekrarlanabilirliği Günler arasında Tesis içinde Tesisler Arasında Panel Üyesi N. % Doğru Ortalama PAT SS %VK SS %VK MP-YÜKSEK 26* %1 5,5,,,, MP-DÜŞÜK 27 %1 47,5 1,32 2,78,31,65 CP/LP/MP-YÜKSEK 27 %1 5,5,61 1,22,, CP/LP/MP-DÜŞÜK 27 %1 48,7,,,, Negatif 17* %1, MP-negatif örnekler ile IAC 17* %1 51,9,15,28,7,13 * Prosedür hatası nedeniyle bir örnek analizden çıkarılmıştır. TİCARİ TAKDİM ŞEKLİ Aşağıdaki BD ProbeTeC ET ürünleri mevcuttur: Kat. No. Açıklama 44729 BD ProbeTec ET Mycoplasma pneumoniae (MP) Amplified DNA Assay 44731 BD ProbeTec ET Respiratory and Media Diluent and Control Kit 4473 BD ProbeTec ET Swab Diluent and Control Kit 44457 BD ProbeTec ET Accessories Kit 4471 BD ProbeTec ET Accessories II Kit 44458 BD ProbeTec ET Pipette Tips 6 x 12 44661 BD ProbeTec ET 2 ml Sample Tubes, Kapaklar ve Etiketler, 2 44679 BD ProbeTec ET 2 ml Caps, 1 44477 BD ProbeTec ET Instrument, Ex ABD 44478 BD ProbeTec ET Instrument, ABD ve Kanada 44479 BD ProbeTec ET Priming and Warming Heater, 22V 4448 BD ProbeTec ET Priming and Warming Heater, 12V 44482 BD ProbeTec ET Lysing Heater, 22V 44483 BD ProbeTec ET Lysing Heater, 12V 44487 BD ProbeTec ET Pipettor 4452 BD ProbeTec ET Lysing Rack REFERANSLAR 1. Waring, A.L., et.al. 21. Development of a genomics-based PCR assay for detection of Mycoplasma pneumoniae in a large outbreak in New York State. J Clin Micro 39:1385-139. 2. File T.M., Tan J.S., Plouffe J.F. 1998. The role of atypical pathogens: Mycoplasma pneumoniae, Chlamydia pneumoniae, and Legionella pneumophila in respiratory infection. Infect Dis Clin of NA 12:569-592. 3. Murray et al. 1999. Manual of clinical microbiology, 7th edition, ASM Press. 4. Bartlett, J.G., Dowell, S. F., Mandell, L.A., File, T.M., Musher, D.M., Fine, M.J. 2. Guidelines from the Infectious Diseases Society of America - Practice guidelines for the management of community-acquired pneumonia in adults. Clin Infect Dis. 31:347-82. 5. National Committee for Clinical Laboratory Standards. 21. Approved Guideline M29-A2. Protection of laboratory workers from occupationally acquired infections, 2nd ed. NCCLS, Wayne, Pa. 6. Garner. J.S. 1996. Hospital Infection Control Practices Advisory Committee, U.S. Department of Health and Human Services, Centers for Disease Control and Prevention. Guideline for isolation precautions in hospitals. Infect. Control Hospital Epidemiol. 17: 53-8. 7. U.S. Department of Health and Human Services. 1999. Biosafety in microbiological and biomedical laboratories, HHS Publication (CDC), 4th ed. U.S. Government Printing Office, Washington, D.C. 8. Directive 2/54/EC of the European Parliament and of the Council of 18 September 2 on the protection of workers from risks related to exposure to biological agents at work (seventh individual directive within the meaning of Article 16(1) of Directive 89/391/EEC). Official Journal L262, 17/1/2, p. 21-45. 9. Isenberg, H.D. (ed.) 1992. Clinical microbiology procedures handbook. Vol. 1. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 17
Manufacturer / Výrobce / Producent / Fabrikant / Tootja / Valmistaja / Fabricant / Hersteller / ÊáôáóêåõáóôÞò / Gyártó / Ditta produttrice / Gamintojas / Producent / Fabricante / Výrobca / Tillverkare / Производител / Producãtor / Üretici Use by / Spotøebujte do / Anvendes før / Houdbaar tot / Kasutada enne / Viimeinkäyttöpäivä / A utiliser avant / Verwendbar bis / Çìåñïìçßá ëþîçò / Felhasználhatóság dátuma / Usare entro / Naudokite iki / Brukes før / Stosowaæ do / Utilizar em / Použite do / Usar antes de / Använd före / Използвайте до / A se utiliza pânã la / Son kullanma tarihi YYYY-MM-DD / YYYY-MM (MM = end of month) / RRRR-MM-DD / RRRR-MM (MM = konec mìsíce) ÅÅÅÅ-MM-DD / ÅÅÅÅ-MM (MM = slutning af måned) / JJJJ-MM-DD / JJJJ-MM (MM = einde maand) AAAA-KK-PP / AAAA-KK (KK = kuu lõpp) VVVV-KK-PP / VVVV-KK (kuukauden loppuun mennessä) AAAA-MM-JJ / AAAA-MM (MM = fin du mois) / JJJJ-MM-TT / JJJJ-MM (MM = Monatsende) / ÅÅÅÅ-ÌÌ-ÇÇ / ÅÅÅÅ-ÌÌ (ÌÌ = ôýëïò ôïõ ìþvá) / ÉÉÉÉ-HH-NN / ÉÉÉÉ-HH (HH = hónap utolsó napja) AAAA-MM-GG / AAAA-MM (MM = fine mese) / MMMM-MM-DD / MMMM-MM (MM = mënesio pabaiga) ÅÅÅÅ-MM-DD / ÅÅÅÅ-MM (MM = slutten av måneden) RRRR-MM-DD / RRRR-MM (MM = koniec miesi¹ca) AAAA-MM-DD / AAAA-MM (MM = fim do mês) / RRRR-MM-DD / RRRR-MM (MM = koniec mesiaca) aaaa-mm-dd / aaaa-mm (mm = fin del mes) / ÅÅÅÅ-MM-DD / ÅÅÅÅ-MM (MM = slutet på månaden) / ГГГГ-ММ-ДД / ГГГГ-ММ (ММ = края на месеца) / AAAA-LL-ZZ / AAAA-LL (LL = sfârºitul lunii) / YYYY-AA-GG / YYYY-AA (AA = ayın sonu) Batch Code (Lot) / Kód (èíslo) šarže / Batch kode (Lot) / Chargenummer (lot) / Partii kood / Eräkoodi (LOT) / Code de lot (Lot) / Chargencode (Chargenbezeichnung) / Êùäéêüò ðáñôßäáò (Ðáñôßäá) / Tétel száma (Lot) / Codice del lotto (partita) / Partijos numeris (Lot) / Batch-kode (Serie) / Kod partii (seria) / Código do lote (Lote) / Kód série (šarža) / Código de lote (Lote) / Satskod (parti) / Код (Партида) / Numãr lot (Lotul) / Parti Kodu (Lot) Catalog number / Katalogové èíslo / Katalognummer / Catalogusnummer / Kataloogi number / Tuotenumero / Numéro catalogue / Bestellnummer / Áñéèìüò êáôáëüãïõ / Katalógusszám / Numero di catalogo / Katalogo numeris / Numer katalogowy / Número do catálogo / Katalógové èíslo / Número de catálogo / Каталожен номер / Numãr de catalog / Katalog numarası Authorized Representative in the European Community / Autorizovaný zástupce pro Evropskou unii / Autoriseret repræsentant i EU / Erkend vertegenwoordiger in de Europese Unie / Volitatud esindaja Euroopa Nõukogus / Valtuutettu edustaja Euroopan yhteisössä / Représentant agréé pour la C.E.E. / Autorisierte EG-Vertretung / ÅîïõóéïäïôçìÝíïò áíôéðñüóùðïò óôçí ÅõñùðáúêÞ Êïéíüôçôá / Hivatalos képviselet az Európai Unióban / Rappresentante autorizzato nella Comunità europea / Ágaliotasis atstovas Europos Bendrijoje / Autorisert representant i EU / Autoryzowane przedstawicielstwo w Unii Europejskiej / Representante autorizado na União Europeia / Autorizovaný zástupca v Európskom spoloèenstve / Representante autorizado en la Comunidad Europea / Auktoriserad representant i EU / Оторизиран представител в ЕU / Reprezentant autorizat în Uniunea Europeanã / Avrupa Topluluğu Yetkili Temsilcisi In Vitro Diagnostic Medical Device / Lékaøské zaøízení urèené pro diagnostiku in vitro / In vitro diagnostisk medicinsk anordning / Medisch hulpmiddel voor in vitro diagnose / In vitro diagnostika meditsiiniaparatuur / Lääkinnällinen in vitro -diagnostiikkalaite / Dispositif médical de diagnostic in vitro / Medizinisches In-vitro-Diagnostikum / In vitro äéáãíùóôéêþ éáôñéêþ óõóêåõþ / In vitro diagnosztikai orvosi eszköz / Dispositivo medico diagnostico in vitro. / In vitro diagnostikos prietaisas / In vitro diagnostisk medisinsk utstyr / Urz¹dzenie medyczne do diagnostyki in vitro / Dispositivo médico para diagnóstico in vitro / Medicínska pomôcka na diagnostiku in vitro / Dispositivo médico de diagnóstico in vitro / Medicinsk anordning för in vitro-diagnostik / Медицински уред за диагностика ин витро / Aparaturã medicalã de diagnosticare in vitro / In Vitro Diyagnostik Tıbbi Cihaz Temperature limitation / Teplotní omezení / Temperaturbegrænsning / Temperatuurlimiet / Temperatuuri piirang / Lämpötilarajoitus / Température limite / Zulässiger Temperaturenbereich / ¼ñéï èåñìïêñáóßáò / Hõmérsékleti határ / Temperatura limite / Laikymo temperatûra / Temperaturbegrensning / Ograniczenie temperatury / Limitação da temperatura / Ohranièenie teploty / Limitación de temperatura / Temperaturbegränsning / Температурни ограничения / Limitare de temperaturã / Sıcaklık sınırlaması Consult Instructions for Use / Prostudujte pokyny k použití / Læs brugsanvisningen / Raadpleeg gebruiksaanwijzing / Lugeda kasutusjuhendit / Tarkista käyttöohjeista / Consulter la notice d emploi / Gebrauchsanweisung beachten / Óõìâïõëåõôåßôå ôéò ïäçãßåò ñþóçò / Olvassa el a használati utasítást / Consultare le istruzioni per l'uso / Skaitykite naudojimo instrukcijas / Se i bruksanvisningen / Zobacz instrukcja u ytkowania / Consulte as instruções de utilização / Pozri Pokyny na používanie / Consultar las instrucciones de uso / Se bruksanvisningen / Направете справка в инструкциите за употреба / Consultaþi instrucþiunile de utilizare / Kullanım Talimatları na başvurun Positive control / Pozitivní kontrola / Positiv kontrol / Positieve controle / Positiivne kontroll / Positiivinkontrolli / Contrôle positif / Positive Kontrolle / èåôéêüò Ýëåã ïò / Pozitív kontroll / Controllo positivo / Teigiama kontrolë / Positiv kontroll / Kontrola dodatnia / Controlo positivo / Pozitívna kontrola / Control positivo / Положителен контрол / Etalon pozitiv / Pozitif kontrol 18
Negative control / Negativní kontrola / Negativ kontrol / Negatieve controle / Negatiivne kontroll / Negatiivinkontrolli / Contrôle négatif / Negative Kontrolle / Áñíçôéêüò Ýëåã ïò / Negatív kontroll / Controllo negativo / Neigiama kontrolë / Negativ kontroll / Kontrola ujemna / Controlo negativo / Negatívna kontrola / Control negativo / Отрицателен контрол / Etalon negativ / Negatif kontrol Contains sufficient for <n> tests / Dostateèné množství pro <n> testù / Indeholder tilstrækkeligt til <n> test / Voldoende voor <n> tests / Küllaldane <n> testide jaoks / Sisältöon riittävä <n> testejä varten / Contenu suffisant pour <n> tests / Ausreichend für <n> Tests / ÐåñéÝ åé åðáñêþ ðïóüôçôá <n> åîåôüóåéò / <n> teszthez elegendõ / Contenuto sufficiente per <n> test / Pakankamas kiekis atlikti <n> testø / Innholder tilstrekkelig for <n> tester / Zawiera iloœæ wystarczaj¹c¹ do <n> testów / Contémo suficiente para <n> testes / Obsah vystaèí na <n> testov / Contenido suficiente para <n> pruebas / Räckertill <n> antal tester / Съдържанието е достатъчно за <n> теста / Conþine suficient pentru <n> teste / <n> testleri için yeterli miktarda içerir m Becton, Dickinson and Company A BENEX Limited 7 Loveton Circle Bay K 1a/d, Shannon Industrial Estate Sparks, Maryland 21152 USA Shannon, County Clare, Ireland 8-638-8663 Tel: 353-61-47-29-2 Fax: 353-61-47-25-46 ATCC is a trademark of the American Type Culture Collection. Proclin is a trademark of Rohm and Haas Co. Alconox is a trademark of Alconox, Inc. CultureSwab is a trademark of Difco Laboratories, a subsidiary of Becton, Dickinson and Company. BD, BD Logo, BBL and BD ProbeTec are trademarks of Becton, Dickinson and Company. 26 BD