: Periodontal cep içine metronidazol verilişi için mikroküre yüklü filmlerin hazırlanması üzerine çalışmalar

Transkript

1 ANKARA ÜNİVERSİTESİ BİLİMSEL ARAŞTIRMA PROJELERİ KOORDİNASYON BİRİMİ KOORDİNATÖRLÜĞÜNE Proje Türü Proje No Proje Yöneticisi Proje Başlığı : Hızlandırılmış Destek Projesi (HDP) : 13H : Yrd. Doç.Dr. Müge Kılıçarslan : Periodontal cep içine metronidazol verilişi için mikroküre yüklü filmlerin hazırlanması üzerine çalışmalar Yukarıda bilgileri yazılı olan projemin sonuç raporunun e-kütüphanede yayınlanmasını; İSTİYORUM İSTEMİYORUM GEREKÇESİ: Proje Yöneticisi Yrd. Doç.Dr. Müge KILIÇARSLAN İmza

2 ANKARA ÜNİVERSİTESİ BİLİMSEL ARAŞTIRMA PROJESİ SONUÇ RAPORU Periodontal cep içine metronidazol verilişi için mikroküre yüklü filmlerin hazırlanması üzerine çalışmalar Yrd.Doç.Dr. Müge KILIÇARSLAN Ecz. Miray GÖRGÖZ 13H Başlama : Bitiş: Rapor: Ankara Üniversitesi Bilimsel Araştırma Projeleri Ankara - " 2014 "

3 RAPOR I. Projenin Türkçe ve İngilizce Adı ve Özetleri Türkçe Başlık: Periodontal cep içine metronidazol verilişi için mikroküre yüklü filmlerin hazırlanması üzerine çalışmalar İngilizce Başlık: Studies on preparation of microsphere loaded films to apply metronidazol into the periodontal pocket. Özet Bu çalışma metronidazol ün periodontal cep içine salınması için, mikroküre yüklü filmlerin hazırlanması için tasarlandı. Etkin madde salımını modifiye edebilmek ve mikroküreleri periodontal cebe daha kolay yerleştirmek için metronidazol yüklü etil selüloz mikroküreler sodyum karboksimetilselüloz ve Methocel K15M film formülasyonlarına gömüldü. Metronidazol yüklü mikroküreler çözücü buharlaştırma yöntemi ile hazırlandı. Mikrokürelerin yüzde ürün verimi, işlem etkinliği ve partikül büyüklüğü analizleri yapıldı. Mikrokürelerden in vitro etkin madde salımı dializ bag metodu ile gerçekleştirildi. Filmler solvent casting tekniği ile yapıldı ve mikroküre gömülmüş filmler, dökümden önce mikrokürelerin polimer çözeltisinde disperse edilmei ile hazırlandı.film formülasyonlarının kalınlık ve ağırlık tekdüzeliği tespit edildi ve in vitro etkin madde salımı mikroküre formülasyonlarıyla aynı metod ile gerçekleştirildi. Bu çalışma filmlerden etkin madde salımı hızlı iken, etil selüloz mikrokürelerle altı saaten daha uzun süre etkin madde salımı sağlanabildiğini gösterdi. Fakat mikrokürelerin elde edilen boyutta uygulanmasının zorluğundan dolayı adhezif filmlere gömüldü ve ani salım azaltılabildi ve etkin madde salımı modifiye edilebildi. Burada incelenen salım sistemlerinde, periodontal hastalıklarda kullanılan diğer katı ilaç şekillerine göre metronidazolün periodontal cep içine daha kolay uygulanması ve uzatılmış salımının avantajlı olabileceği belirlenmiştir. Abstract This study was designed to prepare microsphere embedded film formulations for the delivery of metronidazole into the periodontal pocket. Metronidazole loaded ethylcellulose microspheres were embedded to Sodium carboxymethylcellulose and Methocel K15M film formulations to be able to modify the drug release and easy insertion of the microspheres to the periodontal pocket. Metronidazole loaded microspheres were prepared by solvent evaporation method. The percentage yield value, incorporation efficiency, particle size analyses of the microspheres were carried out. In-vitro drug release studies of microspheres was performed by dialysis bag method. Films were prepared by solvent casting technique and microsphere embedded films were casted after microspheres were dispersed in polmer solution. Thickness and weight uniformity of film formulations were determined and in vitro drug release were performed by the same method with microsphere formulations. This study showed that, the drug release more than 6 hours can be obtained with ethlylcellulose microsphere and by modification of microsphere formulations while the drug release was faster from films. But due to the difficulty of insertion of microsphere at these sizes, the microspheres were embedded into the adhesive films and the burst release could be decreased and drug release could be

4 modified. It is determined that, in the delivery system investigated here, easier application and prolonged release of metronidazole into the periodontal pocket can be advantageous in comparison to the other solid dosage forms used for periodontal disease. II. Amaç ve Kapsam Projede; periodontal cep içine metronidazol salımı sağlayabilecek mikroküre ve film formülasyonlarının hazırlanması, bu formülasyonların geliştirilmesi ve kritik kalite özelliklerinin sağlanabilmesi için formülasyon modifikasyonlarının geliştirilmesi ve hazırlanan mikrokürlerin periodontal cep içinde kalış süresini uzatabilmek için adheziv film materyali içine mikroküre yükleyerek uzun süreli etken madde salımı yapan ilaç formülasyonunun geliştirilmesi amaçlanmıştır. Çalışmamızın mikroküreler ile ilgili kısmına anabilim dalı imkanlarının el verdiği ölçüde başlanmış, ancak gider listesinde belirtilen eksiklikler çalışmanın yürütülmesini aksattığı için çalışmanın film hazırlama, mikrokürelerde formül iyileştirme aşaması ve mikrokürelerin film içine yüklenerek formülasyon geliştirme aşaması proje destekleri ile alınacak imkanlarla tamamlanacaktır. Yapılması planlanan proje, 1. Daha önce üzerinde çalışılmamış bir etken madde-polimer kombinasyonu ile metronidazol yüklü mikrokürlerinin hazırlanması, 2. Daha önce çalışılmamış bir etken madde polimer kombinasyonu ile uygun kalınlık ve esneklikte ve de adhesiv filmlerin hazırlanması, yeni bir ilaç şekli geliştirilmesi ve bu ilaç taşıyıcı sistemlerin geliştirilmesinde yaşanabilecek formülasyon sorunlarının çözümüne yönelik olarak yapılan çalışmaların daha sonra benzer çalışmalar yapacaklar açısından veri oluşturması, 3. Bu iki ilaç taşıyıcı sistemin birleştirilerek daha önce periodontal lokal ilaç uygulamaları için kullanılmamış olan mikroküre yüklü film formülasyonunun hazırlanması ve daha az dozda etken maddenin periodontal cepte daha uzun sürede açığa çıkışını gerçekleştirebilecek ve adheziv oluşu ile hasta uyuncu ve hekimin uygulama ve doze etme kolaylığını sağlayacak etkin bir formülasyon geliştirilmesi gibi konularda önemli bilimsel veriler elde edilebilecek bir çalışmadır. III. Materyal ve Yöntem Materyal Metronidazol (Embil, Turkey), etilselüloz ve NaCMC (Sigma-Aldrich-USA), Methocel K15M (Dow Chemical-Germany), sukros stearat (Croda GmbH, Germany), aseton, metanol ve dializ membrane (diameter 23 mm,m.w. cutoff: 12,400) ve membran kapatıcıları (Sigma-Aldrich, Steinheim, Germany), n-heksan (Merck Darmstadt, Germany) ve propilen glikol (Aklar,Turkey) ve bazı tampon maddeleri kullanılmıştır. Yöntem 1. Etken madde analizi ve analiz yöntem validasyonu üzerine çalışmalar Proje başvurusunda belirtildiği gibi; metronidazol, UV spektrofotometrik olarak analiz edilebilen bir etken maddedir. Bu amaçla etken maddenin çalışılması düşünülen ph 6.75

5 simulated saliva (yapay tükrük) ortamında ve mikroküre ve filmlerde etken madde yükleme kapasitesi tayini için de su ve metanol de UV spektrofotometrik yöntem kalibrasyonları ve analitik yöntem validasyonları ile bu farklı çözünme ortamlarında teşhis ve tayin sınırları, doğruluk, kesinlik, doğrusallık aralığı gibi veriler tayin edilmiştir. Bu analiz sırasında da proje ile temin edilen Hellma Kuartz mikroküvet kullanılmıştır. Bu kalibrasyon verilerinden hareketle mikroküre ve filmlerde işlem etkinliği ve çözünme hızı tayini yapılmıştır. Tüm çalışmalarda sabit ph da çalışmak çok önemli olduğundan sürekli olarak taze hazırlanan tampon çözeltiler proje kapsamından alınan masa üstü ph metre ile gerçekleştirilmiştir (Tablo 1-6) 2. Mikroküre İmalatı Mikroküreler çözücü buharlaştıma metodu ile hazırlanmıştır. Bu amaçla etkin madde ve seçilen polimerin fizikokimyasal özellikleri göz önünde bulundurularak su/ yağ tipi emülsiyondan hareketle çalışılmıştır. Etkin madde ve etil selüloz aseton-metanol karışımında çözülmüştür. Çözücü karışımında 10 ml metanol sabit tutularak, 30ml, 50mL ve 70mL aseton ile çözücü karışımları hazırlanmış ve sırasıyla bu hacimlerle M1, M2 ve M3 mikroküre formülleri hazırlanmıştır. Karışıma %3 a/h oranında hesaplanmış miktarda sukroz stearat ilave edilmiştir. (Dispersiyon ajanına ve miktarına proje öncesi yapılmış olan bazı çalışmalarımızla kara verilmiştir. Bu karışım 10 C ye soğutularak maddelerin çözünmesi sırasında çözücünün uçması önlenmiş muş ve yine 10 C ye soğutulmuş 200mL sıvı parafin e 1183rpm hızla karıştırarak ilave edilmiştir (Stir-Pak, Cole Parmer, USA) ve karışım 37 C ye kademeli olarak ısıtılmış ve 3 saat bu sıcaklıkta karıştırılarak çözücünün uçurulması sağlanmıştır. Katılaşan mikroküreler vakumla filtre edilmiş ve n-hekzan ile yıkanarak oda sıcaklığında kurutulmuştur. Bu formüllerin tümünde (M1-M3) etkin madde/polimer oranı ¼ olarak ayarlanmış, bir de çözücü hacmi 60 ml olan M2 formülü modifiye edilerek polimer miktarı artırılmış ve diğer tüm deneysel koşullar sabit tutularak M4 (etkin madde/polimer: 1/6) formülü hazırlanmıştır (Tablo 7). 3. Film Formülasyonları ve Mikroküre Yüklü Film Formülasyonları Film formülasyonları solvent casting metodu ile hazırlandı. Etkin madde %40 (a/a) oranınd adistile suda çözüldü, ve sonra %40 (a/a) oranında NaCMC (F1 ve F3) veya Methocel K15 M(F2 ve F4) distile suda disperse edildi ve 400 rpm hızla manyetik karıştırıcıda karıştırıldı. Tüm formülasyonlarda %20 a/a oranında propilen glikol plastizer olarak ilave edildi. Bu orana ve plastizere bazı ön denemeler sonunda filmin kırılganlığı, gözenekliliği gibi karakteristikleri incelenerek karar verildi. Hava kabarcıksız olarak elde edilen bu karışım 5 cm çapta cam kalıba dökülerek düzeç ayarı yapılmış bir düzlemde oda sıcaklığında 1 gün süre ile kurutuldu. Etkin madde miktarı, her bir 3.5mm çaplı insertte 1mg (F1 ve F2) ve 2 mg (F3 ve F4) olacak şekilde hesaplanarak kullanıldı. Mikroküre yüklü filmlerin hazırlanmasında ise; %40 a/a NaCMC veya %40 a/a Methocel K15M 20 ml distile suda çözülmüş, %20a/a propilen glikol ilave edilmiş ve hesaplı miktarda mikroküre ( M1 veya M4) polimer çözeltisine ilave edilmiş ve farklı iki mikroküre formülasyonunun farklı iki polimerle hazırlanmış film içinde formülasyonları hazırlanmıştır (NaCMC içinde M1, Methocel K15M içinde M1, NaCMC içinde F4 ve Methocel K15M içinde M4 ). Mikroküre ilavesinden sonra homojen bir dispersiyon elde etmek için yine manyetik karıştırıcıda karıştırılmış ve cam kalıplara dökülmüş ve yine düzeç ayarı yapılmış düzlemde oda sıcaklığında bekletilerek kurutulmuş ve periodontal uygulama için her bir insert içinde (5x5mm) 1 mg etkin madde olacak şekilde hesaplama yapılarak formülasyonlar hazırlanmıştır (Şekil 2a ve 2b).

6 IV. Analiz ve Bulgular 1) Metronidazol ün ph 6.75 Tampon ve metanolde kalibrasyon ve validasyon çalışmaları: Metronidazolün % 0,01 Sodyum azid içeren ph 6,75 fosfat tamponu içerisindeki 1 mg/ml derişimindeki stok çözeltisinden hareketle 0,001 mg/ml ile 0,02 mg/ml arasındaki derişimlere seyreltme yapılarak tampon ortamı için bir seri farklı derişimdeki çözeltiler hazırlanmış ve absorbansları önceden belirlenmiş maksimum dalga boyu değerinde (321 nm) okunmuştur. Her bir derişim ve buna karşılık gelen absorbans değerleri grafiğe geçirilmiş ve doğru denklemi elde edilmiştir. Tüm analizlerde bu doğru denklemi kullanılmıştır. Aynı şekilde etkin maddenin metanol içinde hazırlanan bir serisinde maksimum absorbans gösterdiği 312nm de ölçümler alınmıştır. Validasyon çalışması kapsamında doğruluk, orta kesinlik, seçicilik, teşhis ve tayin sınırı, doğrusallık parametreleri incelenmiştir (Tablo 1-6). (Tablo ve Şekiller rapor sonunda toplu olarak verilmiştir) 2) Hazırlanan bu mikroküre formülasyonları üzerinde aşağıda yer alan testler uygulanarak periodontal uygulama açısından uygun olan formül belirlenmeye çalışılmıştır. 1. % Ürün verimi: Elde edilen toplam mikroküre miktarı formülde kullanılan toplam katı miktarı ile orantılanarak hesaplanmıştır. 2. % İşlem etkinliği: Yaklaşık etkin madde içerdiği teorik olarak hesaplanan mikroküreler tartılarak, metanolde çözülmüş, etkin madde konsantrasyonu UV spektrofotometrik metod ile (Shimadzu UV mini 1240, Japon) 312 nm de tayin edilmiştir. Her formül için üçer pararlel ile deneyler yapılmıştır. Bu çalışmalarda da proje ile alınmış olan, çoklu manyetik karıştırıcı kullanılmıştır. Bu sayede aynı anda çık sayıda paralel deney ve formül ile çalışılabilmiş ve hepsinde sabit hız ve sıcaklık temin edilerek hassas çalışma yapılabilmiştir. 3. Partikül büyüklüğü analizi: Lazer difraktometresi (Sympatec HELOS-H0728 GmbH) kullanılarak ve mikrokürelerin çözünmediği n-hekzanda süspande edilmesi ile ölçümler yapılmıştır. 4. In vitro çözünme hızı tayini: Diializ membran metodu kullanılarak çalışımış, 1mg etkin madde içereke mikroküre miktarı işlem etkinliği verilerinden yararlanarak hesaplanmış ve dializ bag içine konulan 1mL ph 6,75 fosfat tamponda süspande edilmiştir. Her iki taraftan kıskaçları ile kapatılan memranlar da 50 ml of ph 6,75 fosfat tamponda ve 37 C de termostatik horizontal çalkalayıcıda (Thermo Scientific, MaxQ Mini 4450 Shaker) 75rpm de çalkalayarak yapılmıştır. Önceden belirlenen zaman aralıklarında 3mL of ortam sıvısı alınmış, yerine yine aynı sıcaklıkta 3 ml taze tampon çözeltisi konularak işleme devam edilmiştir. Etkin madde miktarı UV spektrofotometrik yöntemle ve tampon için belirlenen kalibrasyon denklemleri kullanılarak 312 nm de yapılan okumaların sonunda tayin edilmiştir (Şekil 1). 3) Film Formülasyonlarının karakteristik özelliklerinin belirlenmesi için, 1. Mikroküresiz filmlerde 3.5 mm çaplı dairesel diskler kesilmiş ve ağırlıkları tayin edilmiştir (n=6). Mikroküreli filmlerde ise 5x5 mm kare insertler kesilerek tartılmıştır (n=3). Bu şekilde herbir insert ağırlığının eşit olup olmadığı kontrol edilerek film casting metodunun başarılı şekilde yapılıp yapılmadığı gözlenmiştir.

7 2. Manuel mikrometre kullanılarak (NSK Micrometer (25mm), Japan Micrometer) filmin değişik yerlerinden kalınlık ölçümleri yapılmıştır (Table 2). 3. Filmlerde işlem etkinliği tayini için; mikroküresiz filmler ph 6.75 fosfat tamponunda çözülerek, mikroküreli filmler ise metanolde çözülerek etkin madde miktar tayini UV spektrofotometrik olarak gerçekleştirilmiştir. 4. In vitro çözünme hızı tayini mikrokürelerde uygulanan dializ membran metodu ile teorik oarak 1 mg etkin madde içeren insertler ile gerçekleştirilmiş ve üç paralel çalışılmıştır (Şekil 2a-b). 5. Film formülasyonlarının optik mikroskopta görüntüleri alınarak da mikrokürelerin film kuruması sırasında bir değişime uğrayıp uğramadığı kontrol edilmiştir (Şekil 3ad). Not: Proje kapsamında hizmet alımı olarak belirtilen SEM analizi yapılmamıştır. Bu harcama (yaklaşık 920,40TL) yapılmamıştır. Optik mikroskop ile çalışmalar tamamlanmıştır. V. Sonuç ve Öneriler Yapılan çalışmada; 1. Etkin maddeye ait UV spektrofotometrik analiz yönteminin tekrarlanabilir, kesin ve LOD ve LOQ verileri açısından yapılacak işlem etkinliği ve in vitro çözünme hızı verilerini doğru bir şekilde analiz etmeye uygun olduğu bulunmuştur (Tablo 1-6) 2. Mikroküre imalatında çözücü miktarının en düşük olduğu formülasyonda (M1) en düşük ürün verimi elde edilmiştir. Çözücünün az miktarda oluşu iç faz viskozluğunun artışına neden olması ayrıca çözücünün daha kısa sürede buharlaşması ile karıştırıcı aletlerine fazla yapışma olması ile ürün veriminin düştüğüne karar verilmiştir. 3. Mikroküre imalatında çözücü miktarındaki artışa bağlı olarak mikrokürelerin ortalama partikül büyüklükleri M1 den M3 e düşmüştür ( Tablo 7). 4. Ortalama partikül büyüklüğü verileri M2 ve M3 ün faklılığını gösterirken, çözünme hızı verilerinin benzer olduğu bulunmuştur (Şekil 1) 5. Filmlerde filmkalınlığının mikroküresiz filmlerde standart spmasının mikrokürelki olanlardan daha düşük olduğu yani dah homojen film dökülebildiği tespit edilmiştir. 6. Mikroküreli filmlerde film kalınlığı artarken diğer yandan film kalınlık verilerindeki sapğma artmıştır. Bu da mikrokürlerin de ortalama partikül büyüklüğü farklılığına bağlı olduğu gözlenmiştir. 7. Daha kalın filmlerden etkin madde salımının daha yavaş olduğu tespit edilmiştir (F3 ve F4) 8. Mikroküresiz filmlerde ani etkin madde salımı olduğu gözlenmiştir (Şekil 2a ve b). Bu durum periodontal uygulamada istediğimiz etkin madde salım hızına uygun değildir. 9. Mikroküreler içine etkin madde yükleyip filme bunu yükleyince etkin maddenin ani

8 salımının azaldığı tespit edilmiştir. NaCMC içinde M1 mikroküreleri ile 6 saate varan etkin madde salımı gerçekleşmiştir. Böylece 1 saatte %100 e varan etkin madde salımı 6 saate kadar uzatılmıştır. Sonuç olarak bu çalışma ile tek başına mikrokürelerin periodontal cep içine yerleştirilmesini zorluğu aşılmış ve hastaya daha kolay uygulanabilecek, saf etkin maddenin uygulanışından daha az dozla, daha uzun süre uygulama bölgesinde kalabilen ve hastaya daha az rahatsızlık vererek uygulanabilecek bir ilaç şekli geliştirilmiştir. Proje kapsamında alınan cihazlar Ankara Üniversitesi Eczacılık Fakültesi Farmasötik Teknoloji Anabilim Dalı Araştırma Laboratuvarında halen aktif olarak kullanılmaktadır. VI. Geleceğe İlişkin Öngörülen Katkılar Proje kapsamında alınan cihazlar Ankara Üniversitesi Eczacılık Fakültesi Farmasötik Teknoloji Anabilim Dalı Araştırma Laboratuvarında halen aktif olarak kullanılmaktadır. Şu anda devam eden diğer yayın ve tez çalışmalarımız için de kullanılmaktadır ve kullanılacaktır. VII. Sağlanan Altyapı Olanakları ile Varsa Gerçekleştirilen Projeler Yapılan çalışmada hızlandırılmış destek projesi ile desteklenme sayesinde hızla yol alınmıştır. Alınan cihazlar da halen anabilim dalı çalışanları tarafından kullanılmaktadır ve bir 5. sınıf projesi daha bu cihazlar da kullanılarak tamamlanmıştır. Proje kapsamında temin edilen destek ile çalışmada analiz ve formülasyonlar daha kolay gerçekleşmiş olup, aynı zamanda 5. Sınıf projelerinden birinde de farklı bir etkin madde ve polimer ile film formülasyonları yine periodontal uygulamalar için hazırlanmış ve bu çalışmada hem dönem projesi olarak sunulmuş hem de çalışmanın bir diğer kısmı uluslar arası bir kongrede poster olarak sunulmak üzere kabul edilmiştir. M. Kilicarslan, M. Gorgoz, I. Erik, The Effects of Some Formulatıon Parameters on Clindamycin Phosphate Loaded Chitosan Film, 11th International Symposium on Pharmaceutical Sciences (ISOPS-11) Ankara, Turkey between June 09-12, VIII. Sağlanan Altyapı Olanaklarının Varsa Bilim/Hizmet ve Eğitim Alanlarındaki Katkıları Proje kapsamında yapılan çalışmalar poster olarak sunulmuş olup yayın aşamasındadır. Poster sunumuna ait dökümanlar pdf olarak ekte verilmiştir. Yayınlandığında BAP bilgilendirilecektir. M. Kılıçarslan, M. Görgöz, H. Karataş, Microsphere Embedded Film Formulations to Delivery of Metronidazole into The Periodontal Pocket, 17th International Pharmaceutical Technology Symposium, September , P37, pages, Antalya, Turkey. IX. Kaynaklar 1. Kassem, A.A., Ismail, F.A., Naggar, V.F et al., Preparation and evaluation of periodontal films based on polyelectrolyte complex formation, Pharm Dev Technol, 1-9,2014, (doi: / ). 2. Gad, H.A., El-Nabarawi A., Abd El Hady, S.S, Formulation and evaluation of PLA

9 and PLGA In situ implants containing secnidazole and/or doxycycline for treatment of periodontitis, AAPS PharmSciTech, 9(3), , Kılıçarslan,M., Karataş,H., Effect of Solvent Volume on Characteristics of Metronidazole Loaded Ethylecellulose Microspheres Prepared by Solvent Evaporation Method, 10thISOPS, Ankara,Türkiye, Book of Abstracts, 322, P , Kılıçarslan,M., Görgöz,M., Preparation and Evaluation of Periodontal Films Containing Metronidazole, 10thISOPS, Ankara, Türkiye, Book of Abstracts, 323, P- 247, Kilicarslan, M.,Gumustas,M.,Yildiz,S.,Baykara,T.,Preparation and characterization of chitosan-based spray-dried microparticles for the delivery of clindamycin phosphate to periodontal pockets, Cur Drug Del, 11, , Kilicarslan,M.,Koerber,M.,Bodmeier,R., In situ forming implants for the delivery of metronidazole to periodontal pockets: formulation and drug release studies, Drug Dev IndPharm, 40(5), , X. Ekler a. Mali Bilanço ve Açıklamaları Çalışmada hizmet alımı kapsamında istenen SEM analizi gerçekleştirilmemiştir. Filmlerden optik mikroskop ile görüntü alınabilmiş ve bu nedenle bu kalemdeki harcama kullanılmamıştır. Diğer menkul mal kaleminden alınan Quartz mikro küvet, masa üstü ph metre ve çoklu manyetik karıştırıcı sayesinde çalışma tamamlanabilmiştir. b. Makine ve Teçhizatın Konumu ve İlerideki Kullanımına Dair Açıklamalar Proje kapsamında alınan cihazlar Ankara Üniversitesi Eczacılık Fakültesi Farmasötik Teknoloji Anabilim Dalı Araştırma Laboratuvarında halen aktif olarak kullanılmaktadır. c. Teknik ve Bilimsel Ayrıntılar (varsa Kesim III'de yer almayan analiz ayrıntıları) Yapılan çalışmada hızlandırılmış proje ile desteklenme sayesinde hızla yol alınmıştır. Alınan cihazlar da halen anabilim dalı çalışanları tarafından kullanılmaktadır ve bir 5. sınıf projesi daha bu cihazlar da kullanılarak tamamlanmıştır. Proje kapsamında temin edilen destek ile çalışmada analiz ve formülasyonlar daha kolay gerçekleşmiş olup, aynı zamanda 5. Sınıf projelerinden birinde de farklı bir etkin madde ve polimer ile film formülasyonları yine periodontal uygulamalar için hazırlanmış ve bu çalışmada hem dönem projesi olarak sunulmuş hem de çalışmanın bir diğer kısmı uluslar arası bir kongrede poster olarak sunulmak üzere kabul edilmiştir. M. Kilicarslan, M. Gorgoz, I. Erik, The Effects of Some Formulatıon Parameters on Clindamycin Phosphate Loaded Chitosan Film, 11th International Symposium on Pharmaceutical Sciences (ISOPS- 11) Ankara, Turkey between June 09-12, 2015.

10 d. Sunumlar (bildiriler ve teknik raporlar) (Altyapı Projeleri için uygulanmaz) Proje kapsamında yapılan çalışmalar poster olarak sunulmuş olup yayın aşamasındadır. Poster sunumuna ait dökümanlar pdf olarak ekte verilmiştir. Yayınlandığında BAP bilgilendirilecektir. M. Kılıçarslan, M. Görgöz, H. Karataş, Microsphere Embedded Film Formulations to Delivery of Metronidazole into The Periodontal Pocket, 17th International Pharmaceutical Technology Symposium, September , P37, pages, Antalya, Turkey. e. Yayınlar (hakemli bilimsel dergiler) ve tezler (Altyapı Projeleri için uygulanmaz) Hazırlanma aşamasında olup yayınlandığında bilgi verilecektir. NOT: Verilen sonuç raporu bir (1) nüsha olarak ciltsiz şekilde verilecek, sonuç raporu Komisyon onayından sonra ciltlenerek bir kopyasının yer aldığı CD ile birlikte sunulacaktır. Sonuç raporunda proje sonuçlarını içeren, ISI nın SCI veya SSCI veya AHCI dizinleri kapsamında ve diğer uluslar arası dizinlerce taranan hakemli dergilerde yayınlanmış makaleler, III. Materyal ve Yöntem ve IV. Analiz ve Bulgular bölümleri yerine kabul edilir.

11 Proje Sonuç Raporu Tablo ve Şekiller (13H ) Tablo 1. Etkin maddenin metanol ve ph 6,75 Fosfat tamponundaki kalibrasyon parametreleri Ortam Eğim ( m ) Kesişim (n) Determinasyon Katsayısı (r²) Sy.x* Metanol 0, ,0008 0,9997 0, ph 6,75 0, ,0028 0,9999 0,00484 *Regresyon doğrusundan olan sapmalara ait standart sapma Tablo 2. Metronidazol ün ph 6,75 Fosfat tamponundaki doğruluk ve % geri elde verileri 1.Konsantrasyon (1 µg/ml ) 2.Konsantrasyon ( 10 µg/ml ) 3.Konsantrasyon ( 20 µg/ml ) Abs. C % Geri elde Abs. C % Geri elde Abs. C % Geri elde 0,062 1, ,1 0,550 9,988 99,88 1,106 20,14 100,7 0,060 1, ,5 0,550 9,988 99,88 1,099 20,01 100,0 0,057 0,990 98,99 0,552 10,02 100,2 1,102 20,06 100,3 0,058 1, ,8 0,554 10,06 100,6 1,106 20,14 100,7 0,063 1, ,9 0,562 10,21 102,1 1,101 20,04 100,2 0,058 1, ,8 0,552 10,02 100,2 1,098 19,99 99,95 Ortalama % Geri Elde 103,9 Ortalama % Geri Elde 100,5 Ortalama % Geri Elde 100,3 Standart Sapma 4,421 Standart Sapma 0,822 Standart Sapma 0,311 %Bağıl Sapma Standart (%BSS) 4,256 %Bağıl Standart Sapma (%BSS) 0,818 %Bağıl Standart Sapma (%BSS) 0,310

12 Tablo 3. Metronidazol ün metanoldaki doğruluk ve % geri elde verileri 1.Konsantrasyon ( 2 µg/ml ) 2.Konsantrasyon ( 9 µg/ml ) 3.Konsantrasyon ( 20 µg/ml ) A C % Geri elde A C % Geri elde A C % Geri elde 0,120 2, ,7 0,502 8,719 96,88 1,072 18,64 93,2 0,115 1,986 99,3 0,500 9, ,84 1,069 18,58 92,9 0,115 1,986 99,3 0,500 9,08 100,84 1,066 18,53 92,7 0,116 2, ,2 0,499 9,06 100,63 1,072 18,64 93,2 0,119 2, ,8 0,495 8,98 99,82 1,065 18,51 92,6 0,118 2, ,9 0,501 9,09 101,04 1,074 18,67 93,35 Ortalama % Geri Elde 101,2 Ortalama % Geri Elde 100,0 Ortalama % Geri Elde 93,0 Standart Sapma 1,859 Standart Sapma 1,592 Standart Sapma 0,314 %Bağıl Standart Sapma (%BSS) 1,837 %Bağıl Standart Sapma (%BSS) 1,592 %Bağıl Standart Sapma (%BSS) 0,338 Tablo 4.Metranidazol ün ph 6,75 Fosfat tamponunda yapılan tekrarlanabilirlik çalışmasına ait bulgular 1 µg/ ml 10 µg/ ml 20 µg/ ml 1. Analist C 2. Analist C 1. Analist C 2. Analist C 1. Analist C 2. Analist C 2,12 2,30 9,751 9,970 19,81 19,93 2,23 2,32 10,06 10,21 19,97 20,08 2,38 2,43 10,17 10,23 20,12 20,12 2,03 2,14 9,988 9,988 20,14 20,01 2,10 2,21 10,02 10,06 20,06 20,14 2,07 2,05 10,21 10,02 20,04 19,99 Ortalama 2,15 2,24 10,03 10,08 20,02 20,04 SS 0,13 0,14 0,162 0,111 0,121 0,079 %BSS 5,95 6,15 1,618 1,098 0,603 0,395

13 Tablo 5. Metronidazol ün metanolde yapılan orta kesinlik çalışmalarına ait bulgular 1 µg/ ml 9 µg/ ml 20 µg/ ml 1. Gün C 2. Gün C 1. Gün C 2. Gün C 1. Gün C 2. Gün C 2,07 2,00 8,719 9,032 18,64 20,17 1,99 2,11 8,68 9,14 18,58 20,10 1,97 2,04 8,68 9,05 18,53 20,06 2,00 2,00 8,667 9,067 18,64 20,13 2,06 2,11 8,60 9,12 18,51 20,20 2,04 2,06 8,70 9,12 18,67 20,03 Ortalama 2,02 2,05 8,68 9,09 18,59 20,11 SS 0,04 0,05 0,042 0,043 0,063 0,065 %BSS 2,04 2,30 0,487 0,475 0,338 0,324 Teşhis ve Tayin Sınırları Tablo 6. Metronidazol ün metnol ve ph 6,75 tamponunda elde edilen LOD ve LOQ değerleri Ortam LOD LOQ Metanol 1,95 µg 5,9 µg ph 6,75 2,65 µg 8,03 µg

14 Tablo 7. Metronidazol yüklü mikrokürelerde ortalama partikül büyüklüğü (n=3), % işlem etkinliği (n=3) ve ürün verimi Kod Çözücü Hacmi (ml) Etkin Madde/ Polimer Ortalama Partikül Büyüklüğü ± SE (µm) Ürün verimi (%) İşlem Etkinliği ± SE M1 40 1/ ± ± M2 60 1/ ± ± M3 80 1/ ± ± 1.38 M4 60 1/ ± ± 1.49 Tablo 8. Film ve Mikroküre Yüklü Filmlerin Değerlendirilmesi Formülasyon Kodları Ağırlık (mg) ± SE Kalınlık İşlem Etkinliği (%) ± (µm) ± SE SE F ± ± ± 1,64 F ± ± ± 4.26 F ± ± ± 1.48 F ± ± ± 1.88 NaCMC içinde M ± ± ± 9.72 Methocel K15M içinde M ± ± ± 16.6 NaCMC içinde M ± ± ± 11.2 Methocel K15M içinde M ± ± ± 9.72

15 % Açığa Çıkan kümülatif etkin madde miktarı EK-11 Sonuç Raporu Formatı Zaman (Saat) M2 M3 M1 M4 Şekil 1. Mikrokürelerden etkin madde salımı verileri

16 Cumulative Drug Released (%) Cumulative Drug Released (%) EK-11 Sonuç Raporu Formatı (a) F2 F1 F Time (Hour) (b) Time (Hour) F2 F1 F4 F3 M4 in Methocel K15M M4 in NaCMC M4 Şekil 2. Mikroküreli (a;m1 b;m4) ve mikroküresiz film formülasyonlarında etkin madde salımı verileri

17 (a) (b) (c) (d) Şekil 3. Methocel K15M içinde M1(a) ve M4(b), NaCMC içinde M1(c) ve M4(d) mikroküreleri ile hazırlanan filmlerin optik mikroskop görüntüleri (x4)