KULLANIM TALİMATLARI- SUPPLEMENT FOR FUNCTIONAL COMPLEMENT C1 INACTIVATOR COMBI KIT

Transkript

1 KULLANIM TALİMATLARI- SUPPLEMENT FOR FUNCTIONAL COMPLEMENT C1 INACTIVATOR COMBI KIT Ürün Kodu: RK019 İçerik: 2 x Functional activity plates 1 x Antigenic quantitation plate Ilgili kalibratör ve kontrol Yukarıdaki RID plakların kullanımı için uygun prospektüse bakın: RIN108 for Functional C1 Inactivator RIN008 for Antigenic C1 Inactivator Prospektüs kodu: RIN132, Versiyon: 10 Ekim 2005, Sayfa 1

2 Verilen prosedürlerin kullanılması önerilir ve belirtilen yöntemler dışında kullanılan yöntemlerden elde edilen sonuçların geçerliliği garanti edilemez. HUMAN C1 INACTIVATOR FUNCTIONAL ACTIVITY BINDARID KIT İn vitro diagnostik kullanım için Ürün Kodu: RC002.3 BINDARID, Binding Site Group Ltd., Birmingham, UK in markasıdır. Ürün Binding Site Group Ltd, PO Box 11712, Birmingham B14 4ZB, UK tarafından üretilmiştir. Telefon: +44 (0) Fax: +44 (0) KULLANIM AMACI Bu kit sitratlı insan plazmasında C1 inaktivatör aktivitesini değerlendirmek için tasarlanmıştır. 2 ÖZET VE AÇIKLAMA İlk komplement bileşen C1 üç alt bileşenleri olan C1q, C1r ve C1s oluşan bir makromoleküldür. Kompleman kaskadın aktivasyonuna göre aktive olan C1r ye inactivator C1 bağlanması C1 tarafından C4 komplemanın daha fazla proteolizini önler. Fonksiyonel C1 inactivatörün eksikliği kalıtsal anjiyonörotik oedma ile ilişkilidir. Bu tür bireylerde, C1 inactivator konsantrasyonları % 20 ye kadar normal olabilir, ancak hiçbir aktivitesi yoktur (ref. 1). Radyal immunodifüzyon (RID) biyolojik sıvılarda çözünebilen çeşitli antijen konsantrasyonunu ölçmek için kullanılan rütin bir tekniktir. Özellikle, bu yöntem esas olarak Mancini ve arkadaşlarının ve Fahey & McKelvey in yaptığı (ref. 2) çalışmalardan türetilmiştir (refs. 3 & 4). Bu kitte, presipite halkaların kalitesi değerlendirilir (aşağıya bakın). 3 TEST PRENSİBİ Yöntem doğal plazma örnekleri üzerinde radyal immunodifüzyon tarafından yapılan C1r çökmesi karşılaştırmalarını içerir ve aynı örnekler ısı-birleştirilmiş IgG eklenerek tedavi edildi. Bu komplent kaskadın aktivasyonuna neden olur ve böylece aktive olan C1r e C1 inaktivatör bağlanır. Örnek RID plakalara uygulanır ve insan C1r ye mono-spesifik antikor içeren bir agaroz jel ile silindirik bir kuyuda radyal olarak difüzyon oluşur. Doğru koşullarda antijen-antikor kompleksleri oluşur ve bu kompleks bir presipite halka oluşturur. C1r ile kompleks oluşturarak C1 inaktivator etkin bir şekilde C1r molekülün antijenik birçok bölgesini maskeler ve bu halka çapında bir bozulmaya neden olur. Fonksiyonal olarak inaktif C1 inaktivatör içeren örnekler halka çapının hiçbir kaybını göstermez. 4 REAKTİFLER 4.1 RID plakaları (folyo torbalar içinde bulunur). Bunlar agaroz jelde insan C1r karşı monospesifik koyun poliklonal antikorları içerir. Yedi örneğe kadar normal ve anormal kontroller dahil plaka başına çalışılabilir. Koruyucular: 0.099% sodium azide, 0.1% E-amino-n-caproic acid (EACA), 0.01% benzamidine. 4.2 Normal Kontrol(ler) Liyofilize olarak bulunur. Koruyucular: 0.099% sodyum azide, 0.1% EACA, 0.01% benzamidine. 4.3 Anormal Kontrol(ler) Liyofilize olarak bulunur. Koruyucular: 0.099% sodyum azide, 0.1% EACA, 0.01% benzamidine. 4.4 Heat Aggregated IgG Liyofilize olarak bulunur. Koruyucular: 0.099% sodyum azide. 5 DİKKAT Bu kit içinde insan serumunun tüm donörleri serumda test edildi ve Hepatit C virüs ve insan immün yetmezliği karşıtı antikorlar (HIV 1 & 2) için ve Hepatit B yüzey antijeni (HBsAg) için negatif bulundu. Ancak bu testlerde enfektif ajanların yokluğunu garanti edemeyiz. Uygun kullanım ve atık yöntemleri tüm potansiyel olarak infektif malzeme için kurulmalıdır ve prosedürler sadece eğitimli personel tarafından yapılmalıdır. Plakalar ve diğer kit bileşenleri koruyucu olarak 0.099% sodyum azit içerir. Deri ve mukoza membranı ile temasından kaçının ve yutmayın. Eğer temas olursa, bol su ile yıkayın ve tıbbi destek alın. Patlayıcı metal azid kurşun ve bakır su tesisatının azit ile reaksiyonu sonucu oluşabilir; azit birikimini önlemek için bol su ile reaktifi lavaboda akıtın. Farklı lot numaralarına sahip reaktifleri değiştirmeyin. Test sayısı çok olan çalışmalarda, tüm reaktiflerin aynı lottan alındığından emin olun. 6 SAKLAMA VE STABİLİTE Açılmamış kitler 2-8 C'de saklanmalıdır ve kit kutu etiketi üzerinde verilen son kullanma tarihine kadar kullanılabilir. DONDURMAYIN. Tek tek bileşenlerin son kullanma tarihleri bileşen etiketi üzerinde verilmiştir. RID plakalar 2-8 C de saklanmalıdır ve fazla sıcaklık zarar verebilir. Dondurma jele zarar verir bu nedenle RID plakalar buzdolabında soğutucu materyallerden uzakta tutulmalıdır. Yüksek sıcaklıklardan jelde nem kaybına neden olduğu ve perforansını etkilediği için kaçınılmalıdır. Açılmamış plakalar kuyularda biriken yoğunlaşmayı önlemek için düz ve baş aşağı (en üst etiketli ambalaj) saklanmalıdır. Jelin zarar görmesini önlemek için plakaları dikkatli şekilde kullanın. Açılmamış kontroller ve heat-aggregated IgG 2-8 C'de saklanmalıdır. Çözündürüldüğünde 2-8 C de en az bir hafta stabildir, fakat uzun süreli saklama için bölünerek saklamalı ve dondurulmalıdır (-20 C veya altında). Diğer tüm reaktifler 2-8 C'de saklanmalıdır. 7 ÖRNEK ALMA VE HAZIRLAMA Taze veya derin dondurulmuş (-20 o C veya altında) sitratlı plazma örneklerini kullanın. Partiküler madde içeren mikrobiyal olarak kirlenmiş, hemolize olmuş ve çok lipemik plazma ve örnekler kullanılmamalıdır. Kan örneklerinden hemolizi önlemek için en kısa sürede ayrılmış serum ve doğal olarak oluşan pıhtı venepuncture tarafından alınmalıdır. Plazma teste başlamadan önce 48 saate kadar 2-8 o C de stabildir ya da uzun süreli saklamalar için ayrı olarak saklanmalı ve -20 o C de yada daha altında tutulmalıdır. Tekrarlanan donmadan ve çözündürmeden kaçının. 8 YÖNTEM (Tam prosedürün bir özeti bu talimat broşürü sonunda verilmiştir). 8.1 İçerik x Human C1 Inactivator F.A. Bindarid (radial immunodiffusion plates in foil pouches) x Gel Dividers x Human C1 Inactivator F.A. Normal Control (lyophilised) x Human C1 Inactivator F.A. Abnormal Control (lyophilised) x Heat Aggregated Gamma Globulin (lyophilised) x kullanım kılavuzu 8.2 Gerekli olan ancak sağlanmayan materyaller: Örnek tüpleri, santrifüj gibi test örneği hazırlamak ve toplamak için kullanılan ekipman Kontrollerin ve örneğin doğru dilüsyon edilmesi için pipetler Örnek uygulaması için mikropipetler. Bunlar doğru şekilde 10μL lik hacimlerin dağıtılmasını sağlar. Binding Site Mikropipetler (Kod AD041) yada Hamilton enjektör önerilir mm kadar presipite ring çapları ölçen ve büyüten Jeweller s Eyepiece (Kod AD040) yada dijital RID plaka okuyucu (AD400) Serum fizyolojik(0.9%/0.15m) C inkubator. 8.3 Reaktif hazırlama RID Plaka (lar) Jelin kontaminasyonunu önlemek için plakalar tozsuz bir ortamda kullanılmalıdır. Folyo ambalajından plakaları alın ve kabını çıkarın. Eğer yoğunlaşma gözlenirse, jel üzerine düşen damlacıkları önlemek için plaka kabından çıkarılırken baş aşağı tutulmalıdır. Saklamada veya transit de jelin yarılması gibi oluşabilecek zararı önlemek için plaka kontrol edilmelidir. Kuyularda oluşan yoğunlaşma veya jel yüzeyinde oluşan buharlaşma için dakika (gerekirse daha fazla) oda sıcaklığında plakayı açık bırakın. Hala nem görünürse örnekleri kuyulara asla uygulamayın. Plaka bölme: Kullanım öncesi sağlanmış jel bölücüleri kullanarak plakayı dört bölüme ayırın. Her bir bölücü merkezi plaka etiketine dayanan stabilize kol ile köşeyi aşağı doğru keserek jel üzerine dikkatlice yerleştirin. Jeli kesmek için kol üzerine sıkıca basın ve bu pozisyonda bırakın. Eğer plakanın bir bölümü önce kullanılacaksa yada şüpheli yüksek konsantrasyon ölçüldüğünde örneklerde başka bir yerde plaka üzerinde oluşan antikor tükenmesi meydana gelirse, plaka bölümleme önerilir. İlk kullanımdan sonra bölünen plakaları kendi folyo torbalarına tekrar koyun ve 2-8 C'de jel bölücü (ler) ile saklayın. Sağ tarafı yukarı dönük bölünmüş plakaları saklayın ve dört hafta içinde kullanın Heat-aggregated IgG (HAG) HAG etiket üzerinde belirtilen distile suyun miktarı kullanılarak çözündürülmelidir Örnek Her bir örnek iki kısma bölünerek alınmalıdır. Bunların ilki 1 part saline ile 3 part örnek oranında serum fizyolojik ile karıştırılmalıdır (örneğin 50µL saline ile 150µL örnek karıştırın). İkinci kısım 1 part HAG ile 3 part örnek oranında HAG ile karıştırılmalıdır (örneğin 50µL HAG ile 150µL örnek karıştırın). Her iki kısım RID plakalara uygulanmadan önce 37 C de 60 dakika boyunca inkübe olmalıdır. Prospektüs kodu: RIN108, Versiyon: 24 Ekim 2009, Sayfa 1

3 8.3.4 Kontroller Hem normal hemde anormal kontroller etiketleri üzerinde belirtilen dilüsyon miktarı kullanılarak çözündürülmeldir. Çözünme tamamlandığında, kontroller hasta örnekleri gibi aynı yolla çalışılmalıdır (bölüm bakın). 8.4 Kalibratörler ve örneklerin uygulaması Kontroller ve test örnekleri yavaşça kullanımdan hemen önce karıştırın. 10µL normal kontrol/saline karışımı ile bir kuyuyu ve normal kontrol/hag karışımı ile ikinci kuyuyu doldurun. 10µL anormal kontrol/saline karışımı ile üçüncü kuyuyu ve anormal kontrol/hag karışımı ile dördüncü kuyuyu doldurun. Kalan kuyulara örnek/saline ve örnek/hag karışımlarını doldurun. C. Jel bulanık olabilir D. Jel zayıf, çukurlanmış olabilir i) Plaka dondurulmuş kurumuş iii) Örnek uygulama veya kurumuş Plaka dondurulmuş Saklamayı gözden geçirin. Yukarıda B (iii) de belirtildiği gibi Yukarıda B (iii) de belirtildiği gibi Saklamayı gözden geçirin. 8.5 Inkübasyon Örnek uygulama sonunda, kapak sıkıca kapanır ve plaka oda sıcaklığında (yaklaşık C de) düz saklanır. Jelin inkübasyon sırasında kurumasına izin verilmemelidir. Buharlaşmayı en aza indirmek için, plakalar inkübasyon sırasında ya folyo torbalar içinde ya da nemli bir kutuda (nemli kağıt mendil içeren kapalı plastik kutu ) saklanabilir. Minimum önerilen difüzyon 96 saattir. Final halka çapı sıcaklıktan etkilenebilir. Aşırı sıcaklıktan kaçınılmalıdır. 8.6 Kalite Kontrol Kontrol hasta örnekleri için aynı şekilde tedavi edilmelidir. HAG ile normal kontrol serum fizyolojik ile normal kontrol tarafından verilen halka ile karşılaştırıldığında halka kalitesindeki bozulmayı gösterebilir. Buna karşılık, anormal kontrolün farklı kullanımları arasında ring kalitesinin hiçbir farkı olmaz. 9 HALKA DEĞERLENDİRMESİ VE SONUÇLARIN YORUMLANMASI 9.1 Halka değerlendirme Gerekli difüzyon zamanı sonrası, halka yoğunluğu bir jeweller s mikroskop parça ile çıplak gözle değerlendirilmelidir. Karanlık bir odada ve aydınlık bir arka planı ile kullanılması önemlidir. Numuneler ve kontroller arasında halka yoğunluğundaki farklara dikkat edin ve aşağıdaki yorumlama örneğine bakın. 9.2 Yorumlama Aşağıdaki şekiller fonksiyonal olarak normal ve C1 inaktivatör inaktif örneklerle beklenen presipite halkaların yoğunluğuna örnek olarak verilmiştir. Normal plazma C1 Inactivator (functionally inactive) plazma 3+1 Saline 3+1 HAG 3+1 Saline 3+1 HAG 10.2 Tek başına IC1 Inactivator Funtional Activity ölçümleri ile teşhis yapılamaz ve tedavi başlatılamaz. Klinik hikayesi ve diğer laboratuvar bulguları dikkate alınmalıdır Eğer beklenmeyen değerler elde edilirse, tercihen taze bir örnek ile test tekrar edilmelidir. Eğer sorunlar çözülemezse, lütfen tedarikçiye başvurun. 11 BIBLIOGRAFYA 1. Zicarrdi R J Cooper N R (1978). Modulation of the Antigenicity of C1r and C1s by C1 Inactivator. J. Immunol., 121, Fahey, J L & McKelvey, E M (1965). Quantitative determination of serum immunoglobulins in antibody-agar plates. J. Immunol., 94, Mancini, G, Vaerman, J P et al (1964). Protides of the biological fluids (XI Colloquium). Peters H. (ed), Publ. Elsevier Publishing Co., Amsterdam p Mancini, G, Carbonar, A O et al (1965). Immunodiffusion. Immunochem, 2, PROSEDÜR ÖZETİ 12.1 Her bir örnek veya kontrolü iki kısma bölerek alın µL heat aggregated IgG ile 150µL örneği karıştırılarak heat aggregated IgG ile bölünen bir kısmı kullanın μL serum fizyolojik solüsyonu ile 150µL örneği karıştırılarak serum fizyolojik ile bölünen ikinci kısımı kullanın C de 1 saat boyunca kontrol ve örnekleri inkübe 12.5 RID plaka(lar) dan oluşan buharlaşma için yoğunlaşmaya bırakın μl miktarlarda RID plaka(lar)a kontrol ve örnekler uygulayın Kapağı değiştirin ve oda sıcaklığında (yaklaşık C) 96 saatte inkübe 12.8 Aynı örnekler ve kontrollerin kullanılan farklı kısımları arasında ring yoğunluğunu karşılaştırın. Zayıf halka Çok zayıf halka/ Halkalar görünür görünmez 10 PROSEDÜRÜN SINIRLAMALARI 10.1 SORUN GİDERME Problem Olası neden (ler) Öneriler A. Halka oluşmamışsa 1. Kontrol(ler) Kontrol ihmal edilmiş Testi tekrar 2.Test örneği Örnek ihmal edilmiş Testi tekrar 3. Kontrol(ler) ve test örneği B. Yuvarlak halkalar oluşmamışsa Plaka bozulmuş kullanarak testi tekrar b) Ürünün miadı geçmiştir. Yeni bir plaka/kit kullanarak testi tekrar i) Zayıf örnek uygulama Testi tekrar kurumuş iii) Örnek uygulama veya kurutulmuş iv) Lokal antikor tükenmesi olabilir (Plakadaki yüksek konsantrasyonlu test örneklerinden dolayı). kullanarak testi tekrar b) Ürünün miadı geçmiştir. Yeni bir plaka/kit kullanarak testi tekrar Minimum zamanda plakayı açık bırakılarak testi tekrar Nemli bir kutu veya kapalı folyo ambalajı içinde kapağı kapalı şekilde inkübe Örneği dilüe edin ve testi tekrar Prospektüs kodu: RIN108, Versiyon: 24 Ekim 2009, Sayfa 2

4 HUMAN C1 INACTIVATOR BINDARID RADIAL IMMUNODIFFUSION KIT İn vitro diagnostik kullanım için Ürün Kodu: RN019.3 BINDARID, Binding Site Group Ltd., Birmingham, UK in markasıdır. Ürün Binding Site Group Ltd, PO Box 11712, Birmingham B14 4ZB, UK tarafından üretilmiştir. Telefon: +44 (0) Fax: +44 (0) FDA (USA) Information Analyte ID Code: 1026 Test System ID Code: Complexity Cat: High 1 KULLANIM AMACI Bu kit angiodema tedavisine ve tanısına yardımcı olarak serumda insan C1 Inactivatorü (C1 esteraz inhibitörü) ölçmek için tasarlanmıştır. 2 ÖZET VE AÇIKLAMA C1 inactivator serin proteaz inhibitörlerinin serpin ailesinin bir üyesidir. Klasik kompleman yolunun bir inhibitörü olarak davranır ve bir solüsyon içinde serbest kalan C1r:C1s:C1 inactivator kompleksi kovalent şekilde aktif C1r ve C1s e bağlanır böylece C4 ve C2 kırılmaları azalır. C1 inactivator de koagülasyonun protein sayılarını ve fibrinolitik yollarını düzenler. C1 inaktivatör eksikliği kalıtsal komplement bileşen eksikliklerinde yaygın olarak görülür. Bu eksiklik herediter anjioödeme (dokuların şişmesi sonucu kan damarı geçirgenliği artar) neden olur. İki tip eksiklik vardır: tip I işlevsel olarak aktif C1 inactivatorun azalmış serum düzeylerinde oluşur ve tip II işlevsel olarak inaktif C1 inactivatorun normal veya yükselmiş düzeylerinde bulunur. Sonradan oluşan C1 inactivator eksikliği lenfomalar veya myelomas için ikincil olarak belirlenmiş tüm vakalarda nadir olarak görünür(refs. 1-3). Radyal immunodifüzyon (RID) biyolojik sıvılarda çözünebilen çeşitli antijen konsantrasyonunu ölçmek için kullanılan rütin bir tekniktir. Özellikle, bu yöntem esas olarak Mancini ve arkadaşlarının ve Fahey & McKelvey in yaptığı (ref. 4) çalışmalardan türetilmiştir (Refs 5 & 6). 3 TEST PRENSİBİ Yöntem uygun bir mono-spesifik antikor içeren bir agaroz jel ile silindirik bir kuyuda radyal olarak antijen difüzyonu ile oluşur. Doğru koşullarda antijen-antikor kompleksleri oluşur ve bu kompleks bir presipite halka oluşturur. Bu komplekslerin oluşumu ve bozunması dengeye ulaşıncaya kadar halka boyutu artacaktır, bu noktada completion olarak adlandırılır. Bu aşamada, halka çapının karesi ve antijen konsantrasyonu arasında doğrusal bir ilişki vardır. Konsantrasyonları bilinen örneklerle üretilen halka çapları ölçülerek bir kalibrasyon eğrisi çizilebilir. Sonra, bilinmeyen bir örnekte antijen konsantrasyonu örnek tarafından oluşan halka çapı ölçülerek belirlenir ve kalibrasyon eğrisinde okunur. Bu kit ile kullanılabilecek üç farklı yöntem vardır (Bölüm 8.4 bakınız). Bunlar prosedür BİR ve İKİ dir ve halkalar tamamlandığında ölçülür. Prosedür BİR için doğrudan protein konsantrasyonunu halka çapına dönüştüren bir referans tablo (ideal lineer kalibrasyon eğrisi dayanır) bulunduğu için lineer bir kalibrasyon eğrisi Prosedür İKİ için çizilir. Prosedür ÜÇ kullanma, halka çapları tamamlanmadan önce ölçülür; çizilen kalibrasyon eğrisi lineer olmayacaktır. 4 REAKTİFLER 4.1 RID plakaları (folyo torbalar içinde bulunur). Bunlar agaroz jelde C1 inactivator karşıtı monospesifik antikor içerir. Bir plakada on dört numuneye kadar (kalibratörler dahil) çalışılabilir. Koruyucular: 0.099% sodyum azid, 0.1% E-amino-n-kaproik asit (EACA), 0.01% benzamit. 4.2 Kalibratörler. C1 inaktivatörün yüksek, orta ve düşük konsantrasyonlarını içerin üç set şeklinde stabilize sıvı form da bulunurlar. Şişe etiketlerde verilen C1 inactivator konsantrasyonları piyasada bulunan bir standart ile karşılaştırılarak elde edilmiştir; ancak mevcut standart doğruluğunu uluslararası anlaşma yokluğunda garanti edemez. Koruyucular: 0.099% sodyum azid, 0.1% EACA, 0.01% benzamidine % Bovine Serum Albumin (BSA) solüsyonu. Bu stabilize sıvı şeklinde bulunur ve bir dilüent olarak kullanılır. Koruyucular: 0.099% sodyum azid, 0.1% EACA, 0.01% benzamit. 4.4 Kontrol Serum. Bu stabilize sıvı şeklinde bulunur. Beklenen C1 inaktivatör konsantrasyonu şişe etiketi üzerinde yazılıdır. Koruyucular: 0.099% sodyum azid, 0.1% EACA, 0.01% benzamit. 5 DİKKAT Bu kit içinde insan serumunun tüm donörleri serumda test edildi ve Hepatit C virüs ve insan immün yetmezliği karşıtı antikorlar (HIV 1 & 2) için ve Hepatit B yüzey antijeni (HBsAg) için negatif bulundu. Ancak bu testlerde enfektif ajanların yokluğunu garanti edemeyiz. Uygun kullanım ve atık yöntemleri tüm potansiyel olarak infektif malzeme için kurulmalıdır ve prosedürler sadece eğitimli personel tarafından yapılmalıdır. Plakalar, kalibratörler,kontroller ve BSA koruyucu olarak 0.099% sodyum azit içerir. Deri ve mukoza membranı ile temasından kaçının ve yutmayın. Eğer temas olursa, bol su ile yıkayın ve tıbbi destek alın. Patlayıcı metal azid kurşun ve bakır su tesisatının azit ile reaksiyonu sonucu oluşabilir; azit birikimini önlemek için bol su ile reaktifi lavaboda akıtın. Verilen prosedürlerin kullanılması önerilir ve belirtilen yöntemler dışında kullanılan yöntemlerden elde edilen sonuçların geçerliliği garanti edilemez. Farklı lot numaralarına sahip reaktifleri değiştirmeyin. Test sayısı çok olan çalışmalarda, tüm reaktiflerin aynı lottan alındığından emin olun. 6 SAKLAMA VE STABİLİTE Açılmamış kitler 2-8 C'de saklanmalıdır ve kit kutu etiketi üzerinde verilen son kullanma tarihine kadar kullanılabilir. DONDURMAYIN. Tek tek bileşenlerin son kullanma tarihleri bileşen etiketi üzerinde verilmiştir. RID plakalar 2-8 C de saklanmalıdır ve fazla sıcaklık zarar verebilir. Dondurma jele zarar verir bu nedenle RID plakalar buzdolabında soğutucu materyallerden uzakta tutulmalıdır. Yüksek sıcaklıklardan jelde nem kaybına neden olduğu ve perforansını etkilediği için kaçınılmalıdır. Açılmamış plakalar kuyularda biriken yoğunlaşmayı önlemek için düz ve baş aşağı (enüst etiketli ambalaj) saklanmalıdır. Jelin zarar görmesini önlemek için plakaları dikkatli şekilde kullanın. Açılmamış kalibratör ve kontroller 2-8 C'de saklanmalıdır. Çözündürüldüğünde 2-8 C de en az bir hafta stabildir, fakat uzun süreli saklama için bölünerek saklamalı ve dondurulmalıdır (-20 C veya altında). Diğer tüm reaktifler 2-8 C'de saklanmalıdır. 7 ÖRNEK ALMA VE HAZIRLAMA Taze veya derin dondurulmuş (-20 o C veya altında) serum örneklerini kullanın. Partiküler madde içeren mikrobiyal olarak kirlenmiş, hemolize olmuş ve çok lipemik serum ve örnekler kullanılmamalıdır. Kan örneklerinden hemolizi önlemek için en kısa sürede ayrılmış serum ve doğal olarak oluşan pıhtı venepuncture tarafından toplanmalıdır. Serum teste başlamadan önce 48 saate kadar 2-8 o C de stabildir ya da uzun süreli saklamalar için ayrı olarak saklanmalı ve -20oC de yada daha altında tutulmalıdır. Tekrarlanan donmadan ve çözündürmeden kaçının. Bu kitte bulunana BSA gerektiğinde dilüent olarak kullanılabilir, bu malzemenin viskozitesini koruyacaktır. Böylece sonuçlar normal serum benzer bir viskozite sahip kalibratör ile doğru şekilde karşılaştırılabilir. 8 YÖNTEM (Tam prosedürün bir özeti bu talimat broşürü sonunda verilmiştir). 8.1 Gerekli materyaller x Human C1 Inactivator NL Bindarid (folyo ambalajda radyal immunodiffusion plakaları) x Gel dividers x Human C1 Inactivator NL Calibrator (sıvı kalibratör) x 5mL 7% BSA x Human C1 Inactivator NL Control Serum (sıvı kontrol serumu) x talimat broşürü, RID referans tablosu içerir 8.2 Gerekli olan ancak sağlanmayan materyaller Örnek tüpleri, santrifüj gibi test örneği hazırlamak ve toplamak için kullanılan ekipman Kalibratör (ler) ve kontrollerin çözdürülmesi ve örneğin doğru dilüsyon edilmesi için pipetler Örnek uygulaması için mikropipetler. Bunlar doğru şekilde 5 μl lik hacimlerin dağıtılmasını sağlar. Binding Site Mikropipetler (kod AD041) ya da Hamilton enjektör önerilir mm kadar presipite ring çapları ölçen ve büyüten Jeweller s mercek (Kod AD040) ya da digital RID plaka okuyucu (Kod AD400) Grafik kağıdı. 8.3 Reaktif hazırlama RID plaka (lar) Jelin kontaminasyonunu önlemek için plakalar tozsuz bir ortamda kullanılmalıdır. Folyo ambalajından plakaları alın ve kabını çıkarın. Eğer yoğunlaşma gözlenirse, jel üzerine düşen damlacıkları önlemek için plaka kabından çıkarılırken baş aşağı tutulmalıdır. Saklamada veya transit de jelin yarılması gibi oluşabilecek zararı önlemek için plaka kontrol edilmelidir. Kuyularda oluşan yoğunlaşma veya jel yüzeyinde oluşan buharlaşma için dakika (gerekirse daha fazla) oda sıcaklığında plakayı açık bırakın. Hala nem görünürse örnekleri kuyulara asla uygulamayın. Plaka bölümleme: Kullanım öncesi sağlanmış jel bölücüleri kullanarak plakayı dört bölüme ayırın. Her bir bölücü merkezi plaka etiketine dayanan stabilize kol ile köşeyi aşağı doğru keserek jel üzerine dikkatlice yerleştirin. Jeli kesmek için kol üzerine sıkıca basın ve bu pozisyonda bırakın. Eğer plakanın bir bölümü önce kullanılacaksa yada şüpheli yüksek konsantrasyon örnekler ölçüldüğünde plaka üzerinde başka bir yerde oluşan antikor tükenmesi meydana gelirse, plaka bölümleme önerilir. İlk kullanımdan sonra bölünen plakaları kendi folyo torbalarına tekrar koyun ve 2-8 C'de jel bölücü (ler) ile saklayın. Sağ tarafı yukarı dönük bölünmüş plakaları saklayın ve dört hafta içinde kullanın Kalibratörler: Kalibratör daha önce dilüe edilemelidir ve kullanım öncesi hemen yavaşça karıştırılmalıdır. Prosedür İKİ ve ÜÇ için orta ve düşük kalibratötler bir kalibrasyon eğrisi gerektiğinde sadece kullanılmalıdır. Prospektüs kodu: RIN008, Versiyon: 6 Ağustos 2009, Sayfa 1

5 8.3.3 Kontrol: Sıvı kontrol serumu kullanım öncesi hemen yavaşça karıştırılarak dilüe edilmemiş plakalara uygulanmalıdır Örnekler: Örnekler gerekli miktarlarda dilüe edilmemelidir. Eğer yüksek C1 inactivator konsantrasyonu içeren örnek ölçülecekse, dilüsyon gerekebilir. Bu gibi durumlarda en az 20μL test örneği BSA in uygun hacmi ile karıştırılmalıdır. Plakaların tespit limitleri altında C1 inactivator konsantrasyonları elde etmek için aşağıdakilerden birinin yapılması tavsiye edilir: i) Konsantre örnek uygulayın ii) Kuyuya çift doldurma yapın (Bölüm 8.5 bakın) Prosedürler Prosedür BİR: RID referans tablo Bu yöntem bir kalibrasyon eğrisi çizimi gerektirmez-her bir halka çapına uygun örnek konsantrasyonu RID referans tablosunda doğrudan okunur. Minimum 72 saatlik bir difüzyon zamanı içinde halkalar tamamen çökmesi için bırakılmalıdır. Doğru performansı sağlamak için kullanılan yüksek kalibratör her plakada çalıştırılmalıdır Prosedür İKİ: Difüzyon tamamlandığında kalibrasyon eğrisi Bu yöntemde, iki dilüsyonları artı dilüsyonsuz kalibratör doğrusal bir kalibrasyon eğri oluşturmak için kullanılır. Minimum 72 saatlik bir difüzyon zamanı içinde halkalar tamamen çökmesi için bırakılmalıdır. Kuyuları korumak için bir kalibrasyon eğrisi aynı anda kullanılan aynı lotlu çeşitli plakalar için kullanılabilir. Doğru performansı sağlamak için kullanılan yüksek kalibratör her plakada çalıştırılmalıdır Prosedür ÜÇ: Difüzyon tamamlanmadan önce Kalibrasyon eğrisi Bu yöntemde, iki dilüsyon artı dilüsyonsuz kalibratör halka tamamlanmadan önce ölçülen doğrusal olmayan bir kalibrasyon eğrisi oluşturmak için kullanılır. Önerilen minimum difüzyon süresi 18 saattir. Ayrı bir kalibrasyon eğrisi kullanılan her bir plaka için çizilmelidir. 8.5 Kalibratörler ve örneklerin uygulaması Kalibratör, kontrol ve test örnekleri yavaşça kullanımdan hemen önce karıştırılmalıdır. Bir mikropipet kullanarak 5μL yüksek kalibratör ile gerekli sayıda kuyuyu doldurun. Prosedür İKİ ya da ÜÇ takip edilirse, orta ve düşük kalibratör ile gerekli sayıda kuyuyu doldurun. Sonra kalan kuyuları uygun şekilde 5μL dilüe edilen test örnekleri ve kontroller ile doldurun. Plakalar kalibratör/test örnek uygulaması sırasında uzun süre açık bırakılmamalıdır çünkü bu jelin aşırı kurumasına neden olur. Not: C1 inaktivatörün düşük konsantrasyonlarını içeren şüpheli örnekler için, kuyuya bir 'çift doldurma' yapılabilir. Kuyu başlangıçta 5μL numune ile doldurulur ve 30 dakika kadar jel içinde tamamen diffüz olması için bırakılır. Kapak bu zaman diliminde çıkarılmamalıdır. Sonra, önceki gibi aynı örnek hacmi kullanılarak ikinci doldurma yapılabilir ve normal olarak plaka inkübe edilir. Sonuçlar iki örnek hacmi için düzeltilmiş olmalıdır ve normal tek doldurma' prosedürü ile elde edilenlerden daha az doğru olacaktır. 8.6 İnkübasyon Örnek uygulama sonunda, kapak sıkıca kapanır ve plaka oda sıcaklığında (yaklaşık C de) düz saklanır. Jelin inkübasyon sırasında kurumasına izin verilmemelidir. Buharlaşmayı en aza indirmek için, plakalar inkübasyon sırasında ya folyo torbalar içinde ya da nemli bir kutuda (nemli kağıt mendil içeren kapalı plastik kutu ) saklanabilir. Minimum inkübasyon Prosedür ÜÇ için 18 saat ve difüzyonun tamamlanması (Prosedür BİR ve İKİ) için 72 saattir. Final halka çapı sıcaklıktan etkilenebilir; yüksek kalibratör için beklenen halka boyutu C de inkübe edildiğinde 9mm (±0.3mm) dir. Aşırı sıcaklıktan kaçınılmalıdır. 8.7 Kalite Kontrol Kontrol bir test örneği gibi kullanılmalıdır. Kontrol için elde edilen değerler şişe etiketi üzerinde belirtilen ±10% konsantrasyon içinde olmalıdır. 9 HALKA ÖLÇÜMÜ VE SONUÇ İŞLEMLERİ Gerekli difüzyon zamanı sonrası, halka çapları bir jewellers merceği veya Digital RID plaka okuyucu kullanarak en yakın 0.1mm için ölçülmelidir. Bir mercek ile okunduğunda, parlak aydınlatma ve karanlık bir arka plan kullanın. Zorluklarda deneyimli değilseniz, makroskopik olarak plakayı görüntüleyin ve bir iğne kullanarak plakanın arkasındaki halkaların kenarlarını işaretleyin. Bu işaretler arasındaki mesafe o zaman daha kolay ölçülebilir. Örnek: Test örneği Dilüsyon Halka çapı (mm) Tablo değeri Original örnek kons. C1 inactivator Serum A Neat C1 inactivator Serum B Neat >11 >703 >703 C1 inactivator Serum B (Tekrar) 1/ * * Aşağıdaki gibi hesaplandı: Tablo değeri x Önerilen diln. /Gerçek diln., i.e. 406mg/L x (1)/(1/2) gibi. Prosedür İKİ Üç kalibratör konsantrasyonları ile oluşan presipite halkaların çaplarının karesi C1 inaktivator konsantrasyonlarına (kalibratör şişe etiketi üzerinde verilen) karşı çizilir. C1 inaktivator konsantrasyonları yatay (x) ekseni boyunca olmalı ve dikey (y) ekseni halka çapları karesi boyunca olmalıdır. En iyi line üç nokta ile çizilir; y-kesim noktası mm 2 aralığında olmalıdır. C1 inaktivator konsantrasyonu kalibrasyon eğrisinden belirlenir; kullanılan dilüsyon faktörü ile elde edilen örnek konsantrasyonunu ayarlamayı unutmayın. Örnek hesaplama: C1 inaktivator kalibratörler tamamlandığında bir C1 inaktivator test plakasında aşağıdaki halka çaplarını verdi: Kalibratör Kons. Halkanın (mm) çapı(d) D karesi (mm 2 ) Yüksek Orta Düşük Bir kalibrasyon eğrisi aşağıdaki sonuçlar kullanılarak çizilir: Diameter Squared (mm²) Test Sample C1 Inactivator Concentration Önerildiği gibi dilüsyonsuz uygulanan bilinmeyen bir örnek bu plaka üzerinde 7.0 mm çapında halka verir. Yukarıdaki eğriye göre, bu 240mg/L bir C1 Inaktivator konsantrasyonuna karşılık gelir. Bunun yanında dilüe edilmemiş örnekte C1 Inaktivator konsantrasyonu = 35.0mg/Ldir. Prosedür ÜÇ Prosedür İKİ için kalibrasyon eğrisi çizin. Grafik düz bir çizgi değildir fakat artan protein konsantrasyonu ile azalan eğime sahip bir eğridir. y-kesim noktası Prosedür İKİ için belirtilmelidir. Test örneği protein konsantrasyonu kalibrasyon eğrisinden belirlenir; kullanılan dilüsyon faktörü ile elde edilen örnek konsantrasyonunu ayarlamayı unutmayın. Örnek hesaplama: C1 inactivator kalibratör 18 saat sonra bir C1 inactivator plakasında aşağıdaki halka çaplarını verdi: Kalibratör Kons. Halkanın (mm) çapı(d) D karesi (mm 2 ) Yüksek Orta Düşük Bir kalibrasyon eğrisi aşağıdaki sonuçlar kullanılarak çizilir: Not: Prosedür BİR ve İKİ için halka çapları tamamlanması için geliştirilmiş olmalıdır. Herhangi bir şüphe varsa, halkalar 24 saat sonunda çaplarında herhangi bir artış yoksa tekrar edilmelidir. Yüksek kalibratör halka tamamlandığında 9.0mm ± 0.3mm bir halka çapı vermelidir. Eğer halka çapı bu aralığın dışındaysa, Sorun Giderme (Bölüm 10.3) sayfasına bakınız. Prosedür BİR Her bir örnekte C1 inactivator konsantrasyonu önerildiği gibi dilüsyonsuz uygulanarak RID referans tablosundan doğrudan okunabilir. Dilüsyonsuz kalibratörden daha büyük halka çapları veren örnekler için elde edilen konsantrasyonlar tamamlanmamış difüzyon olasılığından dolayı yaklaşık olarak kabul edilir. Ayrıca bu tür örnekler lokal antikor azalmasına neden olabilir böylece yakındaki halka boyutlarını etkileyebilir; tercihen uygun şekilde dilüe edilmeli ve tekrar test edilmelidir. RID referans tablosunda en alt sınırın altında halka çapı veren örnekler daha konsantre bir biçimde tekrar test edilmelidir (Bölüm bakın). Önerilen örnek dilüsyonundan (neat gibi) gelen herhangi bir değişiklik, sonuçlar hesaplanırken dikkate alınmalıdır. Test sample Prospektüs kodu: RIN008, Versiyon: 6 Ağustos 2009, Sayfa 2 Diameter squared (mm²) C1 Inactivator concentration

6 Önerildiği gibi dilüsyonsuz uygulanan bilinmeyen bir örnek bu plaka üzerinde 6.1 mm çapında halka verir. Yukarıdaki eğriye göre, bu 180mg/L bir C1 Inaktivator konsantrasyonuna karşılık gelir. Bunun yanında dilüe edilmemiş örnekte C1 Inaktivator konsantrasyonu = 180mg/Ldir. 10 PROSEDÜRÜN SINIRLAMALARI 10.1 Prosedür BİR, yüksek kalibratör halka çapından (9.0mm gibi) daha fazla olan halka çaplarından oluşan sonuçlar yaklaşık olarak kabul edilmelidir (Bölüm 9 bakınız). Prosedür İKİ ve ÜÇ için, doğru sonuçlar yüksek ve düşük kalibratör değerleri arasında kalibrasyon eğrisi ile sınırlıdır- bu noktaların dışında ekstrapolasyon geçerli değildir. Bu aralıklar dışında sonuçlar veren örnekler uygun ve yeniden test edilmiş olarak dilüe edilmeli veya konsantre edilmelidir (Bölüm ) FDA (USA) bilgi- ön sayfaya bakın SORUN GİDERME Problem Olası neden (ler) Öneriler A. Halka oluşmamışsa: 1. Kalibratör (ler) Kalibratör ihmal edilmiş Testi tekrar 2. Test örneği i) Örnek konulmamış Testi tekrar 3. Kalibratör (lar) ve test ii) Konsantrasyon çok yüksek/düşük Plaka bozulmuş Dilute/konsantre edinve tekrar test örnekleri kullanarak Yeni bir plaka/kit kullanarak B. Fazla büyük halkalar oluşmussa: 1. Yüksek kalibratör (9.3mm den daha fazla) 2. Test örnekleri (yukarıda kabul edilebilir aralık - Bölüm 10.1 bkz) C. Küçük boyutta halkaların oluşması: 1. Yüksek kalibratör (8.7mm den daha az) 2. Test örnekleri (yukarıda kabul edilebilir aralık - Bölüm 10.1 bkz) D.Çift/çok halka oluşması i)halka yanlış ölçülmüş ii) Yanlış miktarlar uygulanmış iii) Yanlış miktar uygulanmış iv) Saklamada çözünmüş kalibratörün kısmi buharlaşması v) Plaka bozulmuş vi) Yakınındaki yüksek konsantrasyonlu test örneklerinden dolayı lokal antikor tükenmesi vii) Inkübasyon sıcaklığı çok yüksek olabilir (Bölüm 8.6 bakın). i) Konsantrasyon çok yüksek ii) Yanlış hacimler uygulanmış i) Yanlış halka ölçümleri alınmış ii) Yanlış miktar uygulanmış iii) Yanlış miktar uygulanmış iv) Kalibratör bozulmuş v) Inkübasyon sıcaklığı çok düşük olabilir (Bölüm 8.6 bakın). i) Konsantrasyon çok düşük ii) Yanlış hacimler uygulanmış i) Kuyunun yanında spesifik olmayan çökeltiler oluşabilir. (jelde PEG den dolayı). ii) Örnek iyi uygulanmamış iii) Kalibratör bozulmuş Mercek veya RID plaka okuyucu kullanarak tekrar ölçün. 5 μl miktarın uygulanıp uygulanmadığını kontrol a) Mikropipet arızalanmış olabilir işlemi kontrol edin ve b) Zayıf teknik -testi tekrar Yeni kalibratör/kit kullanarak Yeni kit kullanarak testi tekrar kullanarak Yeni bir kit kullanarak testi tekrar Sorumlu örnek(ler) dilüe edin ve yeni bir plaka kullanarak C de inkübe ederek Dilüe edin ve testi tekrar 5 μl miktarın uygulanıp uygulanmadığını kontrol Yukarıda B1 de belirtildiği gibi görmüştür. Yeni bir kalibratör kullanarak testi tekrar C de inkübe ederek Bölüm bakın ve testi tekrar 5 μl miktarın uygulanıp uygulanmadığını kontrol Halkanın dışını okuyun. Testi tekrar görmüştür. Yeni bir kalibratör kullanarak testi tekrar Prospektüs kodu: RIN008, Versiyon: 6 Ağustos 2009, Sayfa 3 Problem Olası neden (ler) Öneriler Yeni bir kit kullanarak testi tekrar iv) Örnek bozulmuş Taze örnekler kullanarak E. Yuvarlak şeklinde oluşmayan halkalar i) Örnek iyi uygulanmamış Testi tekrar F. Jelin bulanık olarak görünmesi G. Jel zayıf, çukurlanmış olabilir H. Kalibrasyon eğrisinin iyi çizilmemesi: 1. Lineer olmayan eğri (Prosedür İKİ) 2. Aralığın dışında y- kesim noktası olması (Bölüm 9) kurumuş iii) Örnek uygulama veya kurumuş iv) Lokal antikor tükenmesi olabilir (Plakadaki yüksek konsantrasyonlu test örneklerinden dolayı). i) Plaka dondurulmuş kurumuş iii)örnek uygulama veya kurumuş Plaka dondurulmuş i) Difüzyonun tamamlanmamış ii) Kalibratör halkaları küçük/büyük boyutta iii) Kalibratör eğrisi doğru çizilmemiş i) Kalibratör halkaları küçük/büyük boyutta ii) Kalibratör eğrisi doğru çizilmemiş kullanarak Yeni bir kit/plaka kullanarak Minimum zamanda plakayı açık bırakılarak testi tekrar Nemli bir kutu veya kapalı folyo ambalajı içinde kapağı kapalı şekilde inkübe Örneği dilüe edin ve testi tekrar Saklamayı gözden geçirin. Yukarıda E(ii) de belirtildiği gibi Yukarıda E(iii) de belirtildiği gibi Saklamayı gözden geçirin. 24 saatten daha fazla inkübe edin ve halkaları tekrar ölçün. Yukarıda B1 yada C1 de belirtildiği gibi (Orta ve düşük kalibratörler için geçerli benzer açıklamalar) Kalibrasyon eğrisinin doğru çizilip çizilmediğini kontrol Yukarıda B1 ya da C1 de belirtildiği gibi (Orta ve düşük kalibratörler için geçerli benzer açıklamalar) Kalibrasyon eğrisinin doğru çizilip çizilmediğini kontrol 10.1 Tek başına C1 inactivator ölçümleri ile teşhis yapılamaz ve tedavi başlatılamaz. Klinik hikayesi ve diğer laboratuvar bulguları dikkate alınmalıdır Eğer beklenmeyen değerler elde edilirse, tercihen taze bir örnek ile test tekrar edilmelidir. Eğer sorunlar çözülemezse, lütfen tedarikçiye başvurun. 11 BEKLENEN DEĞER Aşağıdaki sonuçlar bu kit kullanılarak elde edildi: C1 Inactivator Ortalama SD (n-1) Orta 95 Yüzde aralık Örnek sayısı Sağlanan bu veriler sınırlı sayıda normal İngiliz kan donörlerinden oluşturulmaktadır. C1 inactivatorün azalmış serum düzeyleri kalıtsal angiodema (tip 1), genellikle normalin % 30 dan daha azı ile ilişkilidir. Her kullanıcının uygun klinik şartlarında kendi C1 inactivator konsantrasyon aralıklarını oluşturması tavsiye edilir. 12 PERFORMANS ÖZELLİKLERİ 12.1 Kesinlik Kitin kesinliği (tekrarlanabilirliği) C1 inaktivator ın düşük, orta ve yüksek konsantrasyonlarını içeren insan serum kullanılarak tespit edilmiş yüzde varvasyon katsayısı (CV) ve ortalaması olarak ifade edilir. Bütün analizler kendi laboratuarınızda yapılmalıdır. Her bir değer aksi bir durum yoksa 10 ölçümden (çeşitli lotlardan alınan 5 ayrı plakada çift tespit) hesaplanır. Prosedür BİR ve İKİ için halkalar 72 saat sonra ölçülür. Prosedür ÜÇ için halkalar 18 saat sonra okunur. Örnek havuzu C1 inact. Prosedür BİR Prosedür İKİ Prosedür ÜÇ Ort. kons. CV Ort. kons. CV Ort. kons. Yüksek % % % Orta % % % Düşük % % % CV

7 12.2 Plaka içi ve Lotlar arasında varyasyonu: Plaka içi varvasyon ayrı lotlardan alınan 3 plaka kullanarak yapılan CV in tespitinin ortalama ± standart sapması olarak ifade edilir. Tek bir preparatın plaka başına altı ölçümü alınır. Lotlar arası varvasyon plakaların son lotlarından elde edilen CV ortalama çap değerleri olarak ifade edilir. Her bir lot için ortalama çap her bir lottan (plaka başına 6 halka ölçümü) 3 plakaya uygulanan bir preparat kullanılarak elde edilen tamamlandığında halka çapı kullanılarak ölçülür. C1 inactivator 13 BIBLIYOGRAFYA Plaka içi varvasyon Lotlar arası varvasyon Mean CV% ± SD CV % 0.92 ± 0.09 (N=3) 0.82 (N=3) 13.1 Protein Reference Unit Handbook of Clinical Immuno Chemistry (1990) Ed. A Milford Ward, Publ. PRU Publications, Sheffield, Sjoholm, AG. (1990). Inherited complement deficiency states: implications for immunity and immunological disease. APMIS 98, Cooper, NR (1985). The Classical complement pathway; Activation and regulations of the first complement component. Adv, immunol. 37, Fahey, JL & McKelvey, EM (1965). Quantitative determination of serum immunoglobulins in antibody-agar plates. J. Immunol,. 94, Mancini, G, Vaerman, J P et al. (1964). Protides of the biological fluids (XI colloquium). Peters H. (ed), Amsterdam, Elsevier Publishing Co., P Mancini, G, Carbonara, A O et al (1965). Immunochemical quantitation of antigens by single radial immunodiffusion. Immunochem, 2, Not: Yukarıdaki değerlere göre test numuneleri 5μL miktarlarda dilüe edilmeden uygulanır. Yüksek kalibratörler C'de inkübe olduğunda halka tamamlandığında 9.0mm ± 0.3mm bir halka çapı vermelidir. 14 PROSEDÜR ÖZETİ 14.1 Prosedür BİR, İKİ yada ÜÇ seçin. Prosedür ÜÇ eğer sonuçlara hızlı bir şekilde ihtiyaç varsa kullanılmalıdır Örnek dilüsyonları hazırlayın; bu sadece bilinen yüksek C1 inactivator konsantrasyonlu örnekler için gereklidir RID plaka(lar) dan oluşan buharlaşma için yoğunlaşmaya bırakın μl miktarlarda RID plaka(lar)a kalibratör, kontrol ve örnekler uygulayın Kapağı değiştirin ve oda sıcaklığında (yaklaşık C) sabit sürede (en az 18 saat) (Prosedür ÜÇ) yada halka tamamlanana kadar (en az 72 saat) (Prosedür BİR ve İKİ) inkübe 14.6 Halka çaplarını ölçün RID Referans Tablo (Prosedür BİR) sonuçları okuyun yada kalibratör eğrisi çizin ve sonuçları okuyun (Prosedür İKİ ve ÜÇ). 15 RID REFERANS TABLOSU mg/l birimde insan C1 inactivator konsantrasyonu için RID referans tablosu Halka çapı (mm) Kons Prospektüs kodu: RIN008, Versiyon: 6 Ağustos 2009, Sayfa 4