STERİL VÜCUT SIVILARINDA HÜCRE SAYIM KAMARASI VE SYSMEX UF-1000İ CİHAZI İLE LÖKOSİT SAYIM SONUÇLARININ KARŞILAŞTIRILMASI DR. MERVE ÖZKAN 1,DR.SERAP YAĞCI 1, DR.MİHRİBAN YÜCEL 1, DR. BEDİA DİNÇ 1 1 SAĞLIK BİLİMLERİ ÜNİVERSİTESİ ANKARA SAĞLIK UYGULAMA VE ARAŞTIRMA MERKEZİ, TIBBİ MİKROBİYOLOJİ LABORATUVARI, ANKARA
SUNUM PLANI BULGULAR TARTIŞMA SONUÇ
FLOW SİTOMETRİ (AKAN HÜCRE ÖLÇER) Flow Sitometri Akan bir sıvının içerisindeki hücrelerin veya biyolojik partiküllerin fiziksel ya da kimyasal özelliklerinin incelenmesi
HÜCRELERİN DEĞERLENDİRİLMESİ Forward Scatter Channel(FSC) Yaklaşık büyüklük DNA-RNA İÇERİĞİ BOYUT Side Scatter Channel(SSC) Yaklaşık granülarite ve iç yapı SİTOPLAZMİK GRANÜLARİTE ŞEKİL Floresans(FL- 1/2/3) Yaklaşık floresan miktarı
KULLANIM ALANLARI Hücre ölümü, hücresel özelikler, proliferasyon Hücre canlılık analizi Hücre döngüsünün incelenmesi Mikroorganizma sayısı, tür analizi İlaç alım ölçümleri İmmünofenotipleme
FLOW SİTOMETRİ CİHAZI İLE ANALİZ EDİLEBİLECEK ÖRNEKLER KAN KEMİK İLİĞİ BOS EKLEM SIVISI PERİTON SIVISI PLEVRA SIVISI ALVEOLER LAVAJ SIVISI İDRAR DOKU BİYOPSİ ÖRNEKLERİ
BOS TA BEYAZ KÜRE SAYILARI NORMAL: 0-5/mm 3 BAKTERİYEL MENENJİT:5-20000/mm 3 VİRAL MENENJİT:20-2000/mm 3 TÜBERKÜLOZ MENENJİTİ:5-2000/mm 3 Bailey&Scotts s Diagnostic Microbiology 13th Edition(7-902)
PERİTON Periton sıvısında mililitrede 300 e kadar lökosit bulunması normaldir. Bailey&Scotts s Diagnostic Microbiology 13th Edition(7-902)
Steril vücut sıvılarında hızlı inceleme!!! Makroskobik, biyokimyasal, hücre sayımı, hücre analizi Hücresel analiz İnflamasyon, enfeksiyon, travma ayırıcı tanısında önemli
Steril vücut sıvılarında hücre sayımı için önerilen altın standart yöntem hücre sayım kamarasında mikroskobik sayım yapılmasıdır. Objektiflik? Zaman? Deneyim? Mikroskobik sayım Sysmex UF- 1000i(Sysmex Co.,Kobe Japonya)
Şubat 2017-Temmuz 2017 tarihleri arasında hastalardan Ankara Eğitim ve Araştırma Hastanesi Tıbbi Mikrobiyoloji Laboratuvarı na gönderilen 158 steril vücut sıvısı
CİNSİYET KADIN 95 (%60,127) ERKEK 63(%39,873) HASTALARIN YAŞ ARALIĞI 0-88
158 Steril Vücut Sıvısı Periton Sıvısı(n=88) BOS(n=65) Eklem Sıvısı(n=3) Plevra Sıvısı(n=2)
ÖRNEKLERİN KLİNİKLERE GÖRE DAĞILIMI PERİTON DİYALİZİ 64 (%40,50) ÇOCUK SAĞLIĞI VE HASTALIKLARI SER. 3(%1,89) YENİDOĞAN YBÜ 25(%15,82) ACİL ÇOCUK POLK. 3(%1,89) NEFROLOJİ SERVİSİ 16(%10,12) ORTOPEDİ VE TRAVMATOLOJİ POLK. 2(%1,26) BEYİN VE SİNİR CERRAHİ YBÜ 13(%8,22) GASTROENTEROLOJİ SERVİSİ 1(%0,63) NÖROLOJİ SERVİSİ 7(%4,43) ACİL YBÜ 1(%0,63) İÇ HASTALIKLARI SERVİSİ 7(%4,43) ANESTEZİ VE REANİMASYON YBÜ 1(%0,63) ÇOCUK YBÜ 5(%3,16) GENEL CERRAHİ SERVİSİ 1(%0,63) ACİL AMELİYATHANE CERRAHİ YBÜ 4(%2,53) ACİL SERVİS(İLK MÜDAHALE) 1(%0,63) BEYİN VE SİNİR CERRAHİ SERVİSİ 4(%2,53)
Gelen örnekler deneyimli laboratuvar teknisyeni tarafından Neubauer sayım kamarasında ışık mikroskobunda x400 büyütmede sayıldı. Örnekler eş zamanlı olarak Sysmex UF-1000i(Sysmex Co., Kobe Japonya) cihazında çalışıldı.
Sysmex UF-1000i 2 kanal Sediment kanalı RBC Bakteri kanalı WBC, TNC ( çekirdekli hücreler) Floresan boyama ve RBC lizisi sonrası Sonuç Hücre sayıları, histogram, scattergram BF(Body Fluid) modu 398 µl 25 örnek/saat 1 örnek 3 dk
Cihaz her açılışında cihazda yüksek ve düşük kontrol solüsyonları çalışıldı.(uf II kontrol materyal) İdrar modunda açılan cihaz vücut sıvısı moduna geçerken oto yıkama ve aksan kontrolü yapmaktadır(kontaminasyonu önlemek ve vücut sıvıları idrardan daha visköz sıvılar olduğundan kanallardaki akış hızını hzılandırmak için). Aynı zaman vücut sıvısı modunda çalışırken aşırı yüklenmeyi önlemek ve doğru sonuçlar alabilmek için her bir veya iki örnekte bir oto yıkama yapıldı.
İSTATİSTİKSEL ANALİZ Pearson korelasyon analizi Sonuçların uyumu Sınıf içi korelasyon katsayısı(skk)
BULGULAR Lökosit açısından Periton örneklerde Sysmex ve DM nin korelasyonu r=0,794 (Pozitif yönde yüksek ilişkili) Lökosit açısından BOS örneklerde Sysmex ve DM nin korelasyonu r=0,450 (Pozitif yönde orta düzey ilişkili)
Lökosit açısından Eklem örneklerde Sysmex ve DM nin korelasyonu r=0,985 (Pozitif yönde yüksek ilişkili) Lökosit açısından bütün örneklerde Sysmex ve DM nin korelasyonu r=0,817 (Pozitif yönde yüksek ilişkili)
TARTIŞMA Steril vücut sıvılarının incelenmesinde referans yöntem sayım kamarasında mikroskobik sayım Değerlendiren kişiye göre sonuçlarda değişkenlik Zaman alıcı Emek yoğun Deneyimli personel(7/24)
Sysmex UF-1000İ Hızlı Güvenilir Bakteri ve maya? (BF modu) Lökositlerde PMNL-MNL ayrımı?
Nikolaos ve ark. (2008) 161 BOS Sysmex UF-1000i / UF100 ve mikroskobik analiz ve lökosit sayımlarının karşılaştırılması Sysmex UF100 cihazında lenfositlerin lökosit olarak sınıflandırılması ile hemorajik ve ventriküler drenajla elde edilen örneklerin çalışılmasında problem(plateletler ve hücre debrisleri) Sysmex UF-1000i cihazında bu problemler gözlenmemektedir. Sonuçlar mikroskobik analiz ile uyumlu ve korele (p=0.734) Menenjitin bakteriyel, viral, fungal ayırıcı tanısında yararlı Nikolaos E.N., Delanghe J.R., Evaluation of Sysmex UF-1000i for use in cerebrospinal fluid analysis, Clinica Chimica Acta, 392(2008) 30-33
Buoro ve ark. (2015) 67 BOS Sysmex UF-1000i(BF) ve mikroskobik analiz ile yapılan sayımlarda lökosit sayılarının karşılaştırılması Lökosit sayıları uyumlu(r=0.99) Sonuçlar uyumlu, otomatize sistemle hızlı ve güvenilir tanı Buoro S., Esposito S.A., Alessio M.G., Crippa A., Ottomano C., Lippi G., Automates Cerebrospinal Fluid Cell Counts Using the New Body Fluid Mode of Sysmex UF-1000i, Journal of Clinical Laboratory Analysis 00: 1-11(2015)
Li ve ark. (2014) 198 BOS Sysmex XE-5000(BF) ve mikroskobik analizle yapılan lökosit sayım sonuçlarının karşılaştırılması Sysmex XE-5000 PMNL-MNL ayrımı + Sayım sonuçları uyumlu(r=0.833) Li A., Grönlund E., Brattsand G., Automated white blood cell counts in cerebrospinal fluid using the body fluid mode on the platform Sysmex XE-5000, Scandinavian Journal of Clinical & Laboratory Investigation, 2014; 74: 673-680)
71 steril vücut sıvısı BOS(n=35), periton sıvısı(n=12), plevra sıvısı(n=11), eklem sıvısı(n=10), dren sıvısı(n=1), perikard sıvısı(n=1), safra sıvısı(n=1) Makroskobisi pürülan olan yedi örnekte cihaz ve mikroskobik değerlendirme arasında sapan değerler Sapandeğerler varken SKK 0,128 (p=0,139). Sapan değerler çıkarıldığı zaman SKK 0,963 (p<0,001). Pürülan olmayan örneklerde Sysmex UF-1000i otomatize akım sitometrisi cihazı alternatif yöntem olarak kullanılabilir. Pürülan örneklerde hücre sayımı mutlaka sayım kamarası kullanılarak mikroskobik olarak gerçekleştirilmelidir.
SONUÇ Sysmex UF-1000i cihazının lökositleri PMNL ve MNL olarak gruplandıramaması cihazın mikroskobik incelemenin yerini almasını zorlaştırmaktadır. Aynı zamanda vücut sıvısı modunda bakteri ve maya hücrelerini sayabilme özelliğinin eklenmesi daha doğru bir değerlendirme olanağı sunacaktır. Ama rutinin dışında da acil, personel sıkıntısı olan durumlarda hızlı ve güvenilir sonuçlar verebilir.
TEŞEKKÜR EDERİM.