Lösemide İmmünfenotipleme. Dr. Alphan Küpesiz Akdeniz Üniversitesi Tıp Fakültesi Çocuk Hematoloji BD / Antalya

Ebat: px

Şu sayfadan göstermeyi başlat:

Download "Lösemide İmmünfenotipleme. Dr. Alphan Küpesiz Akdeniz Üniversitesi Tıp Fakültesi Çocuk Hematoloji BD / Antalya"

Selim Dink
5 yıl önce
İzleme sayısı:

1 Lösemide İmmünfenotipleme Dr. Alphan Küpesiz Akdeniz Üniversitesi Tıp Fakültesi Çocuk Hematoloji BD / Antalya

2 İmmünfenotipleme İmmünhistokimya Yüzey ve intrasellüler antijenlerin immün ve kimyasal testlere verdiği reaksiyon değerlendirilir. Aspirasyon yaymaları veya parafinli dokulardan çalıșılabilir. Sitokimya: Myeloperoksidaz, spesifik esteraz, nonspesifik esteraz Lösemik hücre immünfenotipleme (1980 günümüz) Floresan mikroskopi Flow sitometri

3 Flow Cytometry? Flow: Cyto: Metry: Akmak, akım Hücre Ölçüm Akan Hücre Ölçer

4 Akan Hücre Ölçer nerede kullanılır? İmmünoloji Hematoloji Patoloji Mikrobiyoloji Genetik İlaç araștırması Toksisite testi Hücre kültür çalıșmaları Fonksiyonel çalıșmalar Kimya mühendisliği Biyoteknoloji Ziraat mühendisliği Zooloji

6 AHÖ neyi ölçer? Hücre çapı, hacmi, yüzey alanı ve granülaritesini ölçer. Yüzey proteinleri ile farklı hücre tiplerini ve sayısını belirler. Hücre içi DNA miktarı, enzimleri ve proteinlerini ölçer.

7 Sellüler Antijenler Sitokinler Yapı Enzimler Adezyon T cells B Cells Metabolik Reseptörler

10 AHÖ Çalıșma Tekniği Hücre püskürtücü Floresan sinyalleri Lazer ışını Orifis= 50 to 400 µ

11 Akan hücre ölçer (AHÖ) Optik Lazer kaynağı, filtre, lens, aynalar* Akıșkanlar bölümü Elektronik Bilgisayar

12 Lazer Ön saçılım hücre büyüklüğünü gösterir Photodiode Freq Fluorescence Yan saçılım hücre içeriğini gösterir

13 Floresan yoğunluğu FITC FITC FITC FITC FITC FITC Floresan yoğunluğu Hücre sayısı

14 Sarıların sayısı Mavilerin sayısı

15 Yan Saçılım (Side scatter) Her nokta bir hücreye karșılık gelir Ön Saçılım (Forward scatter)

16 AHÖ de Sık Kullanılan Florokromların Özellikleri Florokrom Eksitasyon nm Emisyon nm Fluorescein isothiocyanate (FITC) 495 (488) 525 Phycoerythrin (PE) 565 (488) 576 Peridinin chlorophyll protein (PerCP) Allophycocyanin (APC) 650 (633) 660 CY5 649 (633) 670 CY Texas Red (TxRed) PE-CY5 565 (488) 670 PE-CY7 565 (488) 767 PE-TxRed 565 (488) 620 APC-CY7 650 (633) 767 Green fluorescent protein (GFP) 498 (488) aminoactinomycin D (7-AAD) 546 (488) 650 Propidium iodide (PI) 305 (488) 617

17 AHÖ ile test çalıșması Deneyin dizaynı Örnek hazırlığı Uygun cihazın seçimi Cihazın kalibrasyon ve kompensasyonu İstenen verinin toplanması Verinin yorumlanması Tanısal sonuç verilmesi

18 Örnek toplama ve tașıma Periferik kan, kemik iliği, lenf nodu, BOS, bronkoalveoler lavaj sıvıları Akut lösemilerde immünfenotipleme için kemik iliği örneği șarttır. En az örnek miktarı: 2 ml periferik kan ve kemik iliği, 1 ml BOS Kemik iliği sinüs kanı ile seyreltilmiș olmamalıdır. Öncesinde periferik yayma ve Kİ yayması değerlendirilmelidir.

19 Örnek toplama ve tașıma Antikoagülan madde: Periferik kan ve kemik iliği için EDTA, heparin, ACD-A En geç 6 saat içinde çalıșılmalıdır. 24 saat içinde çalıșan merkezler mevcut. Oda sıcaklığında en fazla 24 saat bekleyebilir. Örnekte bozulma belirtisi varsa çalıșılmamalıdır. Örnekteki eritrositler dikkatle uzaklaștırılır. En uygun florokromlar seçilir.

20 Test kalitesinin belirlenmesi Normal hücrelere bağlanan antikorlar kontrol edilerek doğru ölçüm olup olmadığı değerlendirilir. (CD3+ ve CD4+)+(CD3+ ve CD8+) = CD3+ CD33 parlak hücreler = CD14 parlak + hc (monositler) Pan T antijenlerinin benzer sayıda olması gerekli (CD3, CD5, CD7 )

21 Anormal hücre grubunun saptanması Matürasyon evresinde duraklama ve hücre sayısında artıș Antijen sunumunda görülen senkronizasyonun bozulması (sig tașıyan B hücresinde halen TdT varlığı, CD15 tașımaya bașlayan myeloid hücrelerde CD34 varlığının sürmesi) Aberan antijen sunumunun tespit edilmesi (Myeloid hücrelerde CD19 pozitifliği, lenfoid hücrelerde CD33 varlığı)

22 Histogram örneği Y Axis Yan saçılım Daha büyük Apopitotik hücreler Ölü hücreler Büyük hücreler Granülarite X Axis Ön saçılım Canlı hücreler

23 İki Parametreli Histogram Tek pozitif PE Popülasyon Çift pozitif popülasyon PE FL Negatif Popülasyon FITC FL Tek pozitif FITC Popülasyon

24 Tam kan örneği Ön saçılım Yan saçılım Ön saçılım Yan saçılım

26 CD45 antijeni = Pan lökosit antijeni Yan saçılım Yan saçılım Ön saçılım

27 B Hücre Matürasyonu Behm, SJCRH, 2003 TdT: Terminal deoksinükleotidil transferaz

28 T Hücre Matürasyonu

29 Myeloid Hücre Matürasyonu HLA DR HLA DR CD34 CD34 AML tanısı için CD13, CD14, CD15, CD33, CD64 ve CD65 önemlidir. Olguların %95 i CD13 ve CD33 eksprese eder. CD117 AML olguları için spesifiktir. Behm, SJCRH, 2003

30 Antijen CD45 CD19 ccd79a CD7 ccd3 MPO CD13 CD33 CD117 CD41a CD235a (GPA) Hücre serisi Tüm lökositler B hücre B hücre T hücre T hücre Myeloid/monositik Myeloid/monositik Myeloid/monositik Myeloid/monositik/megakaryositik Megakaryositik Eritroid

31 Akut Lösemide İmmünfenotipik Sınıflandırma

32 Normal Kemik İliği Örnekleri 6 aylık infant 16 yașında ergen Yan saçılım

33 Lenfoblastların Histogram Görüntüsü

34 Üç yașında B hc ALL olgusu FAB-L1 blast

35 Onyedi yașında T hc ALL

36 My+ Pre-B hc ALL

37 Ly+ AML-M2

38 Bifenotipik ALL (Pre-B ALL)

39 Teșekkür ederim. Öneri:

49 A

Benzer belgeler

Flow Sitometrinin Malign Hematolojide Kullanımı. Dr. Alphan Küpesiz Akdeniz Üniversitesi Tıp Fakültesi Çocuk Hematoloji/Onkoloji BD Antalya

Flow Sitometrinin Malign Hematolojide Kullanımı Dr. Alphan Küpesiz Akdeniz Üniversitesi Tıp Fakültesi Çocuk Hematoloji/Onkoloji BD Antalya Neyi ölçer? Hücre çapı, hacmi, yüzey alanı ve granülaritesini