Emine Zuhal Kalaycı Çekin 1, Gülşah Malkoçoğlu 3, Nicolas Fortineau 2, Banu Bayraktar 1, Thierry Naas 2, Elif Aktaş 1

Karbapenem dirençli Pseudomonas aeruginosa izolatlarında karbapenemaz varlığının genotipik ve fenotipik yöntemlerle araştırılması ve MALDI-TOF MS aracılığı ile yüksek riskli klon tayini Emine Zuhal Kalaycı Çekin 1, Gülşah Malkoçoğlu 3, Nicolas Fortineau 2, Banu Bayraktar 1, Thierry Naas 2, Elif Aktaş 1 1 Şişli Hamidiye Etfal Eğitim ve Araştırma Hastanesi, Klinik Mikrobiyoloji Laboratuvarı, İstanbul 2 Medical Microbiology at the South Paris Medical School (University of Paris 11),Paris 3.Kocaeli Halk Sağlığı Laboratuvarı, Kocaeli

Pseudomonas aeruginosa -Fırsatçı patojen -En sık yoğun bakım enfeksiyonları Solunum sistemi Üriner sistem Dış kulak yolu Göz Yanık Yara infeksiyonları

Pseudomonas aeruginosa Hastane Enfeksiyonları DSÖ verilerine göre P. aeruginosa ya bağlı HE sıklığı %3-14 YB ve yanık ünitelerinde %20-40 Çoklu ilaç direnci Artmış mortalite ve morbidite

Pseudomonas aeruginosa Karbapenem Direnci En sık mekanizmalar OprD porin kaybı Efluks enzimlerinin aktivitesinin artması AmpC aşırı üretimi Karbapenemaz üretimi Karbapenemaz etkinliği olmayan β-laktamazların aşırı ekspresyonu

Pseudomonas türlerinde karşılaşılan karbapenemazlar En sık, Ambler sınıf B: Metallo-β-laktamazlar (VIM, IMP, SPM, NDM) Ambler sınıf A: KPC ve GES Ambler sınıf D: OXA-198

Karbapenemazların çoğu plazmidlerce taşınır Hızlı yayılım Horizontal transfer Karbapenemaz üreten çoğul dirençli Pseudomonas türlerinin hızlı ve doğru tespiti, infeksiyon kontrolü açısından son derece önemlidir.

P. aeruginosa yüksek riskli klonlar ST-235, ST-111, ST-175, ST253 ve ST395 en yaygın olanları Çoklu ilaca dirençli (MDR) Yaygın ilaca dirençli (XDR) suşlar hastane enfeksiyonlarından ve epidemilerden sorumlu

Amaçlar Seftolozan/Tazobaktam Duyarlılığını test etmek PZR Karbapenemaz varlığının araştırılması MALDITOF MS Yüksek riskli klon varlığının araştırılması Sekans Analizi Karbapenemaz geninin tayini

Yöntem Bakteri İzolatları: Ağustos 2015- Eylül 2016 Şişli Hamidiye Etfal EAH Klinik Mikrobiyoloji Laboratuvarı İmipenem veya meropenem antibiyotiklerinden en az birine dirençli 45 P. aeruginosa izolatı

Yöntem Duyarlılık testleri disk difüzyon yöntemi EUCAST kriterleri

Yöntem İmipenem ve seftazidim dirençli bir grup için (n=12) seftolozan/tazobaktam (ZERBAXA ) duyarlılığı E-test (Liofilchem, Italy) Karbapenemaz varlığının fenotipik tespiti için; Karbapenem inaktivasyon metodu(cim) Modifiye Carba NP testleri

Yöntem Karbapenemaz varlığının genotipik tespiti; PZR bla VIM bla IMP bla NDM bla KPC bla GES bla OXA-48 bla OXA-23 bla OXA-198 bla SIM bla GIM Dream-Taq Green PCR Master Mix (Thermo Scientific) Gene Amp PCR System 9700 (Applied Biosystems) thermal cycler

Yöntem Sekans Analizi Medical Microbiology Deparment, South Paris Medical School ABI Prism 3130 Genetic Analyzer (Applied Biosystems) http://www.bldb.eu:4567/

Yöntem MALDI-TOF MS Yüksek riskli klon (ST111, ST175, ST235, ST253, ST395) araştırılması Şişli Etfal EAH Klinik Mikrobiyoloji Laboratuvarında Bruker Microflex LT Etanol/formik asit ekstraksiyonu Tür tanımlaması ( skor > 2.0) FlexAnalysis programında kütle spektrumlarının incelenmesi ST111, ST175, ST235, ST253, ST395 ye özgü pik kayması CABROLIER, Nadège, et al. Journal of clinical microbiology, 2015

Bulgular Carba NP & CIM 2 izolat 45 izolat PZR Sekans 1 izolat VIM 2. izolat Karbapenemaz? 1 izolat VIM-38 MALDI- TOF 1 izolat (ST-253)

Duyarlılık Oranları 80 70 60 76 62 51 78 60 71 67 73 53 76 50 40 40 30 20 16 10 0 2 9

Bulgular

Seftolozan/tazobaktam (ZERBAXA ) İmipenem ve seftazidim dirençli 12 izolatta 3 izolatta duyarlı (%25) Sensitive Resistant MIC (µg/ml) 0.125 0.25 0.5 1 2 4 8 16 32 64 128 256 No. of P.aeruginosa isolates 0 0 0 1 0 2 0 1 1 1 0 6 Total 3 9

Bulgular Carba NP ve CIM 2 izolat Carba NP ve CIM Pozitif

ST-253 yüksek riskli klona özgü pik varlığı

Sonuç Karbapenem dirençli P. aeruginosa izolatları, çoklu/yaygın ilaca dirençli enfeksiyonlarda alternatif tedavi olması nedeniyle seftolozan/tazobaktam duyarlılığı açısından test edilmeli Karbapenem dirençli P. aeruginosa ya karşı seftolozan/tazobaktamın etkinliğini değerlendirmesi ve ülkemizdeki ilk verilerden olması açısından değerlidir

Sonuç

Sonuç MALDI-TOF MS ile Yüksek riskli klon (ST111, ST175, ST235, ST253, ST395) araştırılması Hızlı (tür düzeyinde tanımlama esnasında) Uygulaması kolay Güvenilir Ek maliyet ve ekipman gerektirmiyor Rutin laboratuvar uygulamalarına entegre edilebilir

TEŞEKKÜRLER