TEMİZLİK VE KİŞİSEL BAKIM ÜRÜNLERİNDE ANALİTİK YÖNTEM GEÇERLİLİĞİ Analytical Method Validation in Cleaning and Personel Care Products Doç.Dr. Hasan ERTAŞ Ege Üniversitesi Fen Fakültesi Kimya Bölümü Bornova/İZMİR hasan.ertas59@gmail.com hasan.ertas@ege.edu.tr 1
Outline Analitik Yöntem Geçerliliği (AYG) nedir? (What is the AMV?) Neden AYG ye ihtiyaç duyulur? (Why do we need to have an AMV?) Hangi etmenler incelenmelidir? (Which parameters should be assessed?) 2
AYG nedir? What is the AMV? Basit olarak; analitik gerekliliği tarif eden bir işlemdir ve ilgili yöntemin uygulamadaki gereklilikleri karşılama kapasitesine sahip olduğunu gösterir. AMV is basically the process of defining an analytical requirement and confirming that the method under consideration has capabilities consistent with that the application requires. 3
AYG neden gereklidir? Why is method validation necessary? AYG yi gerçekleştirmek için çok sayıda neden vardır; Innumerable reasons exist to accomplish the AMV; ticari olarak ürünleri değerlendirmek, valuing goods for trade purposes sağlık sistemine yardımcı olmak, Supporting healthcare İçme suyu kalitesini, gıda ve beslenme maddelerini test etmek, checking the quality of drinking water, food and feed, Uçak yapımında kullanılan alaşımların uygunluğunu bulmak için element içeriğini analizlemek Analysing elemental composition of alloy to confirm its suitability for use in aircraft construction, Suç amaçlı olarak vücut sıvılarında adli analiz. Forensic analysis of body fluids in criminal investigation. 4
Hangi Etmenler incelenmelidir? Which parameters are to be assessed? 5
ANALİTİK YÖNTEM GEÇERLİLİĞİ (AYG) ANALYTICAL METHOD VALIDATION (AMV) YAZILIM VALİDASYONU Validation Of Software CİHAZ VALİDASYONU Validation of Equipment SİSTEM UYGUNLUK System Suitability ANALİTİK YÖNTEM VALİDASYONU Analytical Method Validation 6
YAZILIM VALİDASYONU Validasyon, işlemi yazılım ile başlar FDA düzenlemeleri mevcut 21 CFR part 11 Intra ve Internet düzenlemeleri mevcut Verilerin Güvenliği önemli 7
CİHAZ VALİDASYONU INSTRUMENT VALIDATION Tasarım Kalifikasyonu Design Qualification(DQ) Kurulum Kalifikasyonu Installation Qual(IQ) İşletim Kalifikasyonu Operational Qual (OQ) Performans Kalifikasyonu Performance Qual(PQ) 8
Tasarım Kalitesi (DQ) Laboratory Test, GLP, cgmp ve ISO 9000 9
Cihaz Kurulum Kalitesi Test yapılır Voltaj, basınç, yükseklik, ağırlık Pompa akış hızı Dedektör dalga boyu doğruluğu Gradient doğrusallığı Enjektör tekrarlanabilirliği ve doğruluğu Dedektör doğrusallığı Kolon fırını sıcaklığı 10
Cihaz İşletme Kalitesi Testi Cihaz büyük tamir gördüğü zaman veya modifiye edildiği zaman yapılır 11
Cihaz Performans Kalitesi En kötü senaryoya göre test yapılır 12
SİSTEM UYGUNLUK k (Alıkonma faktörü) R (Tekrarlanabilirlik) RRT (Bağıl Alıkonma Süresi) Rs (Piklerin Ayrılabilirliği) T (Kuyruklanma Faktörü) N (Teorik Plaka Sayısı) RSD (Bağıl Standart Sapma) 13
Yöntem validasyonunun nasıl yapılacağına ilişkin standart ve yönetmelikler (EN ISO/IEC 17025). Bunlar akreditasyon, GMP vb onay süreci için bir temel oluşturur. Sektörlere göre farklılık arz edebilir (gıda, farmasötik vb). Kılavuz ile yönetmelikte yer alan standartları farklandırır. ICH, FDA ve EMA. 14
ICH e GÖRE VALİDASYON PARAMETRELERİ Seçimlilik (Specificity) Doğrusallık (Linearity) Aralık (Range) Doğruluk (Accuracy) Kesinlik (Precision) Belirtme Sınırı (Detection Limit) Niceleme Sınırı (Quantitation Limit) Sağlamlık (Robustness) Sistem Uygunluk Testleri (System Suitability Testing) 15
GENEL VALİDASYON PARAMETRELERİ Seçicilik/Seçimlilik LOD/LOQ Aralık Doğrusallık Kalibrasyon Grafiği Doğruluk/Duyarlık Gerçeklik Tekrarlanabilirlik/Tekrarüretilebilirlik Gerikazanım 16
Seçicilik Analizin daha önceden belirlenmiş koşullar altında bir örnek matriksi içinde diğer bileşenlerin varlığında ilgili analiti doğru bir şekilde tayin edebilme yeteneğidir. Bir analitik yöntemde yetersiz seçicilik durumu, gerçek analitin tayinini bozan girişimcilerle açıklanır. Selectivity Is the ability to distinguish the target analyte in the presence of matrix media. 17
Spesifiklik Seçiciliğin mükemmel halidir. Seçimlilik analitle birlikte muhakkak diğer bileşenlerin de olduğu konumda yöntemin şüphe getirmeyen bir tayin kapasitesini gösterir. Diğer bileşenler kimi safsızlıklar, bozunma ürünleri ve matriks içindeki bileşenler v.b. olabilmektedir. Specifity presents the ability to determine unequivocally the analyte in the presence of other components. 18
Belirtme sınırı: LOD Bir örnek ortamında analitin nitel analizine ilişkin bilgi verdiğinden dikkat edilmesi gereken en önemli noktalardan biri; örnekte olmayan bir maddeyi yanlış olarak belli bir derişimde vermek (pozitif yanılgı) yada örnekte aslında varolan maddenin saptanamadığı yönünde rapor vermektir (negatif yanılgı). 19
Reporting the absence of the analyte when it is infact present (Type I error) Reporting the presence of the analyte when it is actually absent (Type II error) 20
21
Belirtme sınırı: LOD LOD; makul istatistiksel kesinlik içersinde ölçülebilen en küçük derişimdir. LOD belli bir analitik prosedürle makul belirsizlik düzeyinde en küçük ölçümden (x L ) hesaplanan derişim (c L ) olarak da tanımlanabilir. x L = x bl + k s bl Burada x bl kör (blank) için saptanan değer ve s bl ise bu değerin standart sapmasıdır. Bu eşitlikte k ise istenilen güven sınırına göre seçilebilen bir çarpandır. 22
Detection Limit Lowest amount of analyte in a sample which can be detected but not necessarily quantitated as an exact value 23
Saptama alt sınırı (LOQ) LOQ; kabul edilebilir düzeyde tekrarlanabilirlik ve doğruluk ile saptanabilen en küçük derişim olarak tanımlanır. Ölçüm aralığının en düşük sınırı olarak da tanımlanabilir Quantitation Limit Lowest amaount of analyte in a sample which can be quantitatively determined with a suitable precision and accuracy 24
Ölçüm aralığı Gerçek örnek ortamında analitin kabul edilebilir kesinlik ve doğrulukla saptanabildiği derişim aralığıdır. Working Range Interval between the upper and lower concentration of analyte in the sample with a suitable precision, accuracy and linearity. Ölçüm aralığı doğrusal aralıktan daha geniş olabilir. Ölçüm aralığı analitle, matriksle ve performansa ilişkin aralıklara bağlı olarak verilmelidir. Doğruluk ve kesinlik, valide edilen tüm aralık için kabul edilir düzeyde olmalıdır 25
Doğrusallık Analiz sonuçlarının örnek ortamındaki analit derişimi ile sinyal arasındaki ilişkinin orantılı olduğu aralığıdır. Doğrusal aralığın belirlenmesinde kalibrasyon eğrilerinden yararlanılır. Its ability to obtain test results which are directly proportional to the concentration of analyte in the sample (dependent and independent variables) 26
Kalibrasyon Grafiği Analitik yöntemler örnekte tayin edilmek istenen maddenin (analit) fiziksel ya da kimyasal özelliğine ilişkin bir sinyalin ölçülmesini içerir. Bu özellik analit derişimi ile orantılı olmalıdır. Orantı katsayısının hesaplanması işlemine ise kalibrasyon denir ve analit derişimi ile analite ilişkin sinyal arasındaki ilişkiyi tanımlar. İyi bir kalibrasyon olmaksızın, cihazın ölçüm sonuçları izlenemez ve doğru sonuç elde edilemez. 27
28
Duyarlık ölçüm sisteminin yanıtındaki değişime karşın gelen derişime (analit miktarı) oranıdır. Duyarlık kalibrasyon doğrusunun eğimine karşın gelir. Sensitivity Is the slope of linear regression curve 29
Doğruluk ölçülen değerin gerçek değere yakınlığıdır. Doğruluk gelişigüzel ve sistematik yanılgıların ölçüm sonucuna etkisini kapsar. Gerçeklik (trueness) ve kesinliğin (precision) bileşimidir. Kabul edilebilir bir ölçüm belirsizliğini içermelidir. Accuracy of an analytical method defines the closeness of agreement between the true and observed values. 30
Gerçeklik Bir dizi ölçüm sonucunun ortalama değerinin kabul edilen bir referans değerine yakınlığıdır. Gerçeklik kaymanın (bias) tam tersidir. Truness can be defined as closeness of mean of a series of multiple measurements to reference value. 31
Kesinlik Belli koşullar altında alınan bağımsız ölçüm sonuçlarının birbirine yakınlığıdır. Kesinlik yalnızca gelişigüzel yanılgıların dağılımına bağlıdır ve gerçek değer veya referans değer ile ilişkisi yoktur. Kesinlik azaldıkça tekrarlı ölçüm değerlerinin geniş bir aralıkta dağıldığı anlaşılır. Precision expresses the closeness of agreement between a series of measurements obtained from multiple sampling of the same homogenous sample under the prescribed conditions. 32
33
REPEATABILITY= KESİNLİK TEKRAR EDİLEBİLİRLİK Repeatability Aynı ölçüm koşulları altında aynı analitin ardışık ölçüm sonuçlarının birbirine yakınlığıdır. Aynı yerde Aynı kişinin Aynı cihazla Aynı ölçüm yöntemiyle kısa bir zaman aralığında ardışık alınan ölçümleri kapsar. 34
REPRODUCIBILITY TEKRARÜRETİLEBİLİRLİK Tekrarüretilebilirlik; ise aynı analitin farklı koşullar altında ölçüm sonuçlarının birbirine yakınlığıdır. Geçerli bir tekrarüretilebilrlik ifadesi için ölçüm koşullarındaki değişimler (ölçümün ilkesi,-ölçüm yöntemi, analizci, ölçüm cihazı, referans standart, yer ve çalışma süresi) belirtilmelidir. Lab tekrarlanabilirliği; diğer labların verilerini içermez. Bu terim aynı zamanda günlük varyasyon (Intermediate precision veya day-to-day variation) olarak da bilinir 35
ROBUSTNESS SAĞLAMLIK Analitik bir yöntemin sağlamlığı yöntem parametrelerinde bilerek yapılan küçük oynamalara karşı etkilenmeyen sonuç verme yeteneğinin bir ölçüsüdür. Bu terim normal kullanım sırasında elde edilen değerlerin güvenilirliği için türetilmiştir. Yöntem validasyonunda bir grup laboratuar arasında validasyon ortak çalışmaları içerdiği gibi, laboratuarlar arası karşılaştırmaları da içerir. Robustness is a measure of its capacity to remain unaffected by small, but delibrate variations in method parameters and provides an indicating of its reliability during normal usage. 36
GERİKAZANIM Gerikazanım Oranı en az % 70 En fazla % 110 olmalı Ancak tekrarlanabilirliğin iyi olduğu durumlarda % 50-70 arası bir oran kabul edilebilir. 37
References The Fitness for Purpose of Analytical Methods (Eurochem Guide 2014) ICH Guidelie Q2 (R). 38
Teşekkürler Thanks for your attention 39