PA-254035.05-1 - KULLANIM TALİMATLARI KULLANIMA HAZIR KAPLI ARAÇLAR PA-254035.05 Rev.: Nov 2012 KULLANIM AMACI (Mueller Hinton Çikolata Agar), klinik örneklerden elde edilen güç üreyen bakterilerin izolasyonu ve kültivasyonu için kullanılmaktadır. Neisseria gonorrhoeae nin duyarlılık testi için de kullanılabilir. PROSEDÜR İLKELERİ VE AÇIKLAMASI Mikrobiyolojik yöntem. 1960 ların başlarında klinik mikrobiyoloji laboratuvarları bakterilerin antibiyotik ve kematerapötik ajanlara duyarlılığını belirlemek için çok çeşitli prosedürler kullandığından, Bauer, Kriby ve diğerleri, orijinal olarak gonokokların izolasyonu için tasarlanan bir besiyeri olan Mueller Hinton Agarın test ortamı olarak seçildiği standardize bir prosedür geliştirmiştir. 1-4 Sonraki bir uluslararası işbirliği çalışması, ortamın görece iyi tekrarlanabilirliği, formülün basitliği ve bu besiyeri kullanılarak biriken bilimsel verilerin bolluğu sebebiyle bu amaçla Mueller Hinton Agarın değerini doğrulamıştır. 5 CLSI ya göre, Streptococcus pneumoniae'nin disk difüzyon duyarlılık testi için önerilen besiyeri Mueller Hinton Agar with 5% Sheep Blood dır. Haemophilus influenzae için önerilen besiyeri Haemophilus Test Medium (HTM) Agardır. Yorumlama kriterleri, CLSI Document M2, Performance Standards for Antimicrobial Disk Susceptibility Tests; Approved Standard a dahil edilen CLSI Document M100 (M2) de verilmiştir. 6 Neisseria gonorrhoeae için önerilen besiyeri tanımlı bir gelişme desteği olan GC Agardır. Diğer verilere göre, hemin ve Iso-VitaleX içeren Mueller Hinton Agar N. gonorrhoeae nin penisilin ve spektinomisine karşı rutin duyarlılık testleri için kullanılabilir. 7 Mueller Hinton Agar ısıtılmış kan veya hemoglobin ve gelişme faktörleri ile zenginleştirildiğinde (örn., BD IsoVitaleX) Neisseria ve Haemophilus un izolasyonu için seçici olmayan bir besiyeri olarak önerilmiştir. 8 da, sığır etki ekstraktı ve kazein pepton besinleri sağlar. Nişasta koton swablardan türeyen yağ asitleri gibi toksik bileşikleri emer. Hemoglobin X faktörünü sağlar. BD IsoVitaleX, Haemophilus influenzae nin gelişimi için gerekli olan V faktörü (=NAD) dahil vitamin ve gelişme faktörlerini sağlar. REAKTİFLER 1 Litre Saf Su için Formül* Sığır Eti Ekstraktı 2,0 g Kazein Asit Hidrolizatı 17,5 Nişasta 1,5 Hemoglobin 10,0 IsoVitaleX 10,0 ml Agar 17,0 g ph 7,3 +/- 0,2 *Performans kriterlerini karşılamak üzere gereken şekilde ayarlanmış ve/veya desteklenmiştir. BD IsoVitalex Enrichment aşağıdaki gelişim faktörlerini içerir (1 litre saf su için formül*): Vitamin B 12 0,01 g L-Glutamin 10,0 Adenin 1,0 Guanin Hidroklorür 0,03 p-aminobenzoik Asit 0,013 Nikotinamid Adenin Dinükleotid (NAD) 0,25
Tiyamin Pirofosfat 0,1 Ferrik Nitrat 0,02 Tiyamin Hidroklorür 0,003 Sistin Hidroklorür 25,9 L-Sistin 1,1 Glikoz 100,0 *Performans kriterlerini karşılamak üzere gereken şekilde ayarlanmış ve/veya desteklenmiştir. ÖNLEMLER. Yalnızca profesyonel kullanım içindir. Mikrobiyal kontaminasyon belirtileri, renk değişimi, kuruma, çatlama veya diğer bozulma belirtileri görülen plakları kullanmayın. Kuruma sebebiyle bu besiyerinin aşırı büzülmesi hatalı duyarlılık sonuçlarına yol açabilir. Aseptik kullanım prosedürleri, biyolojik tehlikeler ve kullanılmış ürünün atılmasıyla ilgili olarak GENEL KULLANIM TALİMATLARI belgesine bakın. SAKLAMA VE RAF ÖMRÜ Alındıktan sonra plakları kullanana kadar orijinal kaplı ambalajında karanlıkta 2 ila 8 C de saklayın. Dondurmaktan ve aşırı ısıtmaktan kaçının. Plaklar son kullanma tarihine kadar (ambalaj etiketine bakın) ve önerilen inkübasyon sürelerinde inkübe edilebilir. 10 plaklık açılmış yığınlardan alınan plaklar temiz bir alanda, 2 ila 8 C de saklandığında bir hafta kullanılabilir. KULLANICI TARAFINDAN KALİTE KONTROLÜ Temsili örnekleri aşağıdaki suşlar ile inoküle edin (detaylar için, bkz. GENEL KULLANIM TALİMATLARI belgesi). Plakları 35 ± 2 C de karbondioksitçe zenginleştirilmiş aerobik atmosferde inkübe edin. Plakları 18 ila 24 ve 42 ila 48 saat inkübasyondan sonra okuyun. Suşlar Gelişim Sonuçları Haemophilus influenzae ATCC 10211 İyi ila mükemmel gelişim Neisseria gonorrhoeae ATCC 43069 Orta ila mükemmel gelişim Neisseria meningitidis ATCC 13090 İyi ila mükemmel gelişim Streptococcus pneumoniae ATCC 6305 İyi ila mükemmel gelişim İnoküle edilmemiş Çikolata rengi, opak, hafif homojen olmayabilir Duyarlılık testlerinin inokülasyon ve inkübasyonu için Test Prosedürüne bakınız. Test suşu Duyarlılık Testi Diski Zon büyüklüğü* (mm) Neisseria gonorrhoeae ATCC 49226 Penicillin P-10 33-40 Spektinomisin SPT-100 25-31 * Zon büyüklükleri en az 3 farklı lotundan elde edilen sonuçlara dayanır PROSEDÜR Sağlanan malzemeler (90 mm Stacker plaklar). Mikrobiyolojik açıdan kontrol edilmiştir. Sağlanmayan Malzemeler Yardımcı kültür ortamı, reaktifler ve gerekli laboratuvar ekipmanı. Örnek Türleri prensip olarak, güç üreyen organizmalar içerdiğinden şüphe edilen enfeksiyonlardan elde edilen tüm örnek türleri için, yalnızca bu bölgeler için olmasa da özellikle vücudun başlıca steril bölgeleri (örn., serebrospinal sıvı, abseler) için ve bir altkültür besiyeri olarak kan kültürlerinden elde edilen örnekler için kullanılabilir. Esas kullanımı, Columbia Agar with 5% Sheep Blood gibi rutin olarak kullanılan kan agar besiyerinde gelişemeyen PA-254035.05-2 -
Neisseria, Haemophilus ve diğer bakterilerin seçici olmayan izolasyonuna yöneliktir. (aynı zamanda bkz PERFORMANS ÖZELLİKLERİ VE PROSEDÜRÜN KISITLI OLDUĞU ALANLAR). Bu besiyerinin Neissseria gonorrhoeae nin penisilin G ve spektinomisin ile rutin duyarlılık testleri için kullanımı saf kültürlerin kullanımını gerektirir. Doğrudan duyarlılık testleri için örnekle beraber inoküle etmeyin! Örnek Toplama ve Nakil Neisseria gonorrhoeae, N. meningitidis, Haemophilus ve diğer güç üreyen organizmalar advers çevresel koşullara oldukça duyarlıdır. Bu sebeple, bütün örnekler için uygun aktarım besiyeri kullanılmalıdır. Örnekler olabildiğince kısa sürede laboratuara gönderilmelidir ve aktarım besiyeri kullanılsa bile 24 saatten eski olmamalıdır. Optimum aktarım sıcaklığı 20 ila 25 C dir. Buzdolabına koymayın! 9,10 Test Prosedürü Güç üreyen organizmaların izolasyonu için, örneği, laboratuara ulaştırıldıktan sonra mümkün olan en kısa sürede sürme yöntemi ile ekin. Sürme plak, temel olarak karışık flora içeren örneklerden saf kültürleri izole etmek için kullanılır. Alternatif olarak, eğer materyal doğrudan swabdan geliştirilecekse, swabı kenarın yüzeyinde küçük bir alanın üzerinde döndürün; ardından bu inoküle edilmiş alandan sürme yöntemi ile ekim yapın. Örnek vücudun normal flora içeren bir bölgesinden toplanmışsa, izole edilecek patojen maddeye bağlı olarak uygun seçici bir besiyerine de inoküle edilmelidir. Neisseria gonorrhoeae için, BD Martin-Lewis Agar, modified ya da BD GC-Lect Agar plakası, ve Haemophilus için, BD Chocolate Agar with IsoVitaleX and Bacitracin plakası dahil edilmelidir. Plakları 35 ± 2 C de karbondioksitçe zenginleştirilmiş aerobik atmosferde inkübe edin. Plakları 18 ila 24 ve 42 ila 48 saat inkübasyondan sonra okuyun. N. gonorrhoeae nin rutin duyarlılık testi için, saf bir kültür olması gereken izolat, McFarland 0.5 standardının türbiditesini karşılamak üzere BD Trypticase Soy Broth içinde süspanse edilir. İnokülum bulanıklığının ayarlanmasından 15 dakika sonra uygun şekilde seyreltilen inoküluma steril bir swab batırın ve kalan sıvıyı tüpe akıtmak için tüpün iç kenarı boyunca birkaç kez kuvvetlice çevirin. İnokülasyonun eşit dağılması için her sürme işleminden sonra plağı 60 çevirerek tüm agar yüzeyini üç kez inoküle edin. Diskleri bir antimikrobiyal disk dağıtıcı aracılığıyla aseptik önlemler alarak uygulayın. Diskleri, merkezleri arasında en az 24 mm olacak şekilde yerleştirin. Penisilin ve sefalosporin disklerinin Petri kabı kenarından en az 10 mm uzakta olması tercih edilir. Diskler agara yerleştirildikten sonra, besiyeri yüzeyi ile tam temas sağlamak için bunları steril bir iğne veya forseps ile bastırın. Diskler BD Sensi-Disc 6- veya 8-place self-tamping dispenser kullanılarak yüklenmişse bu adım gerekli değildir. Diskler uygulandıktan sonra 15 dakika içerisinde, plakları ters çevirin ve %5 karbondioksit ile zenginleştirilmiş aerobik atmosferde 35 ila 37 C de 20 ila 24 saat boyunca inkübe edin. Sonuçlar da tipik koloni morfolojisi aşağıdaki gibidir: Haemophilus influenzae Küçük, nemli, inci gibi, karakteristik "fare" kokusuna sahip Neisseria gonorrhoeae Küçük, grimsi beyaz ila renksiz, mükoid. Neisseria meningitidis Orta ila geniş, mavimsi gri, mükoid. Streptococcus pneumoniae Küçük, düz veya daha büyük mükoid yeşilimsi koloniler, besiyerini çevreleyen koloniler yeşilimsi olabilir Duyarlılık testleri: Zonlar plakanın en üstünden okunmalıdır. Penisilin duyarlılığı bir betalaktamaz testi, örn., BD Cefinase testi, ile doğrulanmalıdır. PERFORMANS ÖZELLİKLERİ VE PROSEDÜRÜN KISITLI OLDUĞU ALANLAR, normal flora dahil güç üreyen ve güç üremeyen bakterilerin geliştiği zenginleştirilmiş, seçici olmayan bir besiyeridir. Bu sebeple, örneklerin aynı zamanda uygun seçici besiyerlerinde inoküle edilmesi önerilir. PA-254035.05-3 -
Güç üreyen bakteri terimi, normalde kullanılan koyun kanı içeren birincil izolasyon besiyerlerinde gelişmeyen veya iyi gelişmeyen bakteriler ile ilişkilidir, örn. Haemophilus, patojen Neisseria ve diğer birkaç organizma. Bu besiyerine inoküle edilmesi gereken örnek türlerinin ve bu besiyerinin izolasyonları için kullanıldığı organizma türlerinin ayrıntılı açıklaması için referanslara bakın. 10,11 Bu besiyeri, besin açısından farklı streptokokların gelişimi desteklemek için test edilmemiştir. Bulaşıcı ajanlar olarak oluşan bakteri türlerinin sayısı ve türü oldukça fazladır. Bu sebeple, nadir olarak izole edilen veya yeni tanımlanan mikroorganizmalar için bu besiyeri rutin olarak kullanılmadan önce, ilk olarak söz konusu organizmanın saf kültürleri kültive edilerek uygunluğu kullanıcı tarafından test edilmelidir. Bu besiyerinde bulunan duyarlılık testi zonu büyüklükleri, tanımlı gelişim desteği olan GC Chocolate Agar dan kaydedilmiş CLSI Standard M2 6 da belirtilenlerle tam bir uyum göstermez. REFERANSLAR 1. Bauer, A.W., W.M.M. Kirby, J.C. Sherris, and M. Turck. 1966. Antibiotic susceptibility testing by a standardized single disk method. Am. J. Clin. Pathol. 45: 493-496. 2. Ryan, K.J., F.D. Schoenknecht, and W.M.M. Kirby. 1970. Disc sensitivity testing. Hospital Practice 5:91-100. 3. Mueller, J.H., and J. Hinton. 1941. A protein-free medium for primary isolation of the gonococcus and meningococcus. Proc. Soc. Exp. Biol. Med. 48: 330-333. 4. Barry, A.L., F. Garcia, and L.D. Thrupp. 1970. An improved single-disk method for testing the antibiotic susceptibility of rapidly-growing pathogens. Am. J. Clin. Pathol. 53: 149-158. 5. Ericsson, H.M., and J.C. Sherris. 1971. Antibiotic sensitivity testing. Report of an international collaborative study. Acta Pathol. Microbiol. Scand. Sec. B, Suppl. 217. 6. Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI, formerly NCCLS). Approved standard: M2. Performance standards for antimicrobial disk susceptibility tests. CLSI, Wayne, PA, USA.Search for latest version at www.clsi.org 7. Berger, U. 1992. Neisseriaceae. In: Mikrobiologische Diagnostik (F. Burkhardt, ed.). Thieme Verlag, Stuttgart, Germany. 8. Nash, P., and M.M. Krenz. Culture media. In: Manual of clinical microbiology, (Balows, A., et al., eds.). 5 th edition. American Society for Microbiology, Washington, D.C., USA. 9. Miller, J.M., and H.T. Holmes. 1995. Specimen collection, transport, and storage. In: Murray, P. R., E. J. Baron, M. A. Pfaller, F. C. Tenover, and R. H. Yolken (ed.). Manual of clinical microbiology, 6th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 10. Forbes, B.A., and P.A. Granato. 1995. Processing specimens for bacteria. In: P.R. Murray, E.J. Baron, M.A. Pfaller, F.C. Tenover, and R.H. Yolken (ed.), Manual of clinical microbiology, 6th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 11. P.R. Murray, E.J. Baron, M.A. Pfaller, F.C. Tenover, and R.H. Yolken (ed.). 1995. Manual of clinical microbiology, 6th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. AMBALAJ/TİCARİ TAKDİM ŞEKLİ Kat. No. 254035 Kullanıma Hazır Plak Besiyeri, cpu 20 Kat. No. 254082 Kullanıma Hazır Plak Besiyeri, cpu 120 EK BİLGİ Daha fazla bilgi için lütfen yerel BD temsilcinizle temasa geçin. Becton Dickinson GmbH Tullastrasse 8 12 D-69126 Heidelberg/Germany Phone: +49-62 21-30 50 Fax: +49-62 21-30 52 16 Reception_Germany@europe.bd.com PA-254035.05-4 -
http://www.bd.com http://www.bd.com/europe/regulatory/ ATCC is a trademark of the American Type Culture Collection BD, BD Logo and all other trademarks are property of Becton, Dickinson and Company. 2012 BD PA-254035.05-5 -