BD Mueller Hinton II Agar BD Mueller Hinton II Agar 150 mm BD Mueller Hinton II Agar, Square

Transkript

1 KULLANIM TALİMATLARI KULLANIMA HAZIR PLAK BESİYERİ PA Rev.: Şubat 2017 BD Mueller Hinton II Agar BD Mueller Hinton II Agar 150 mm BD Mueller Hinton II Agar, Square KULLANIM AMACI Çeşitli plak formatlarında bulunan BD Mueller Hinton II Agar, Klinik ve Laboratuvar Standartları Enstitüsü (CLSI) ve European Committee on Antimicrobial Susceptibility Testing (EUCAST - Avrupa Antimikrobiyal Duyarlılık Testi) ile standart hale getirildiği üzere, hızlı gelişen aerobik organizmaların klinik izolatlarının antimikrobiyal ajanlara duyarlılığının belirlenmesi için standardize disk difüzyon prosedüründe kullanılır. 1,2 PROSEDÜR İLKELERİ VE AÇIKLAMASI Mikrobiyolojik yöntem ların başlarında klinik mikrobiyoloji laboratuarları bakterilerin antibiyotik ve kemoterapötik ajanlara duyarlılığını belirlemek için çok çeşitli prosedürler kullandığından, Bauer, Kriby ve diğerleri, orijinal olarak gonokokların izolasyonu için tasarlanan bir besiyeri olan Mueller Hinton Agarın test ortamı olarak seçildiği standardize bir prosedür geliştirmiştir. 1-5 Sonraki bir uluslararası işbirliği çalışması, ortamın görece iyi tekrarlanabilirliği, formülün basitliği ve bu besiyeri kullanılarak biriken bilimsel verilerin bolluğu sebebiyle bu amaçla Mueller Hinton Agarın değerini doğrulamıştır. 6 CLSI ve EUCAST Bauer-Kirby prosedürü için performans standartlarını yayınlamıştır ve ayrıntılar için bu belgelere danışılmalıdır. 7,8 Diğer ulusal standartlar antimikrobiyal duyarlılık testleri için Bauer-Kirby prosedürüne göre geliştirilmiştir. Bu standartlarda, inokülum yoğunlukları, inokülasyon yöntemi, oluşan zon boyutları ve yorumlama modu CLSI ve EUCAST tavsiyelerine göre değişebilir. Bauer-Kirby prosedürü, kağıt disklere aşılanan antimikrobiyal maddelerin agar jeli içerisinde difüzyonunu temel alır. 9 Yüksek ve düşük antimikrobiyal konsantrasyonlarda disklerin kullanıldığı ve bunların yorumlanması için inhibisyon zonlarının varlığı veya yokluğunun değerlendirildiği daha eski yöntemlerden farklı olarak bu yöntem antimikrobiyal ajanın tek bir konsantrasyonunu içeren diskler kullanır ve zon çapları minimum inhibitör konsantrasyonlar (MIC) ile ilişkilidir. 1-3,7-9 Test prosedürüne göre, organizmanın standardize edilmiş bir süspansiyonu besiyerinin tüm yüzeyine sürülür. Ardından, belirli miktarda antibiyotik veya diğer antimikrobiyal ajanlar ile aşılanmış kağıt diskler besiyeri yüzeyine yerleştirilir, plak inkübe edilir ve her bir disk etrafındaki inhibisyon zonları ölçülür. Organizmanın bir ajana karşı duyarlı (S), ara (I) veya dirençli (R) olduğun belirlenmesi elde edilen zon boyutlarının CLSI Belge M100 (M2) de Tablo 2A ila 2D dekilerle karşılaştırılması ile yapılır. 10 Organizmanın bir ajana karşı duyarlı (S) veya dirençli (R) olduğun belirlenmesi elde edilen zon boyutlarının EUCAST Kesme Noktası Tabloları ndakilerle karşılaştırılması ile yapılır. 11 Disk difüzyon duyarlılık testlerini etkileyen çeşitli faktörler tanımlanmıştır. Bunlar besiyeri üzerinde aşırı yüzey nem, agar derinliği, disk potensi, inokülum konsantrasyonu, ph ve test organizmaları tarafından ß -laktamaz üretimidir. 6-9,12 BD Mueller Hinton II Agar düşük seviyelerde timin ve timidin düzeyleri ve kontrol edilmiş kalsiyum ve magnezyum düzeyleri içerecek şekilde üretilmiştir Hammaddelerin timin ve timidin düzeyleri trimetoprim-sulfametoksazol (STX) diskler ve Enterococcus faecalis ATCC TM ile disk difüzyon prosedürü kullanılarak belirlenmiştir. Kalsiyum ve magnezyum düzeyleri hammaddeler test edilerek ve aminoglikozit antibiyotikler ve Pseudomonas aeruginosa ATCC ile doğru zon çapları oluşturmak için gerektiği şekilde kalsiyum ve/veya magnezyum kaynakları ile desteklenerek kontrol edilmektedir. Her bir BD Mueller Hinton II Agar plaka formatının agar derinliği CLSI ve EUCAST tavsiyelerini karşılayacak şekilde ayarlanmıştır. 7,8 PA Sayfa 1 / 10

2 REAKTİFLER BD Mueller Hinton II Agar 1 Litre Saf Su için Formül* Sığır Eti Ekstraktı 2,0 g Kazein Asit Hidrolizatı 17,5 Nişasta 1,5 Agar 17,0 ph 7,3 +/- 0,2 *Performans kriterlerini karşılamak üzere gereken şekilde ayarlanmış ve/veya desteklenmiştir. ÖNLEMLER. Yalnızca profesyonel kullanım içindir. Mikrobiyal kontaminasyon belirtileri, renk değişimi, kuruma, çatlama veya diğer bozulma belirtileri görülen plakları kullanmayın. Kuruma sebebiyle bu besiyerinin aşırı büzülmesi hatalı duyarlılık sonuçlarına yol açabilir. Aseptik kullanım prosedürleri, biyolojik tehlikeler ve kullanılmış ürünün atılmasıyla ilgili olarak GENEL KULLANIM TALİMATLARI belgesine bakın. SAKLAMA VE RAF ÖMRÜ Alındıktan sonra plakları kullanana kadar orijinal kaplı ambalajında karanlıkta 2 ila 8 C de saklayın. Dondurmaktan ve aşırı ısıtmaktan kaçının. Plaklar son kullanma tarihine kadar (ambalaj etiketine bakın) ve önerilen inkübasyon sürelerinde inkübe edilebilir. 10 plaklık açılmış yığınlardan alınan plaklar temiz bir alanda, 2 ila 8 C de saklandığında bir hafta kullanılabilir. KULLANICI TARAFINDAN KALİTE KONTROLÜ Kullanıcı tarafından kalite kontrolü için, uygun CLSI 10 ve EUCAST 18 'e veya geçerli ise, ulusal standartlara başvurulmalıdır. Temsili örnekleri her besiyerinde aşağıdaki suşlar ile inoküle edin (detaylar için, bkz. Örnek Türleri ve Test Prosedürü). Plakları tercihen ters konumda, aşağıda belirtilen sıcaklık, zaman ve atmosferik koşula göre inkübe edin. BD Mueller Hinton II Agar plakları ve kullanılan antimikrobiyal diskler uygun performans açısından haftada en az iki kere test edilmelidir. PA Sayfa 2 / 10

3 Tablo 1: CLSI 19 ve EUCAST ilkelerine göre kalite kontrol suşlarının inhibisyon zonu çapı aralıkları için beklenen test sonuçları 20 Suş Antimikrobiyal ajan Aralık (mm) İnkübasyon Escherichia coli Ampisilin (10 µg) CLSI: ATCC İmipenem (10 µg) Gentamisin (10 µg) Amikasin (30 µg) Siprofloksasin (5 µg) Trimetoprim-Sulfametoksazol SXT (1,25 µg-23,75 µg) Escherichia coli ATCC Amoksisilik/Klavulanik Asit (30 µg) Amisilin/Sulbaktam (30 µg) CLSI: Enterococcus faecalis ATCC Trimetoprim-Sulfametoksazol CLSI: (1,25 µg-23,75 µg) Siprofloksasin (5 µg) Staphylococcus aureus ATCC Tetrasiklin (30 µg) Gentamisin (10 µg) CLSI: Eritromisin (15 µg) Klindamisin (2 µg) Staphylococcus aureus ATCC Tetrasiklin (30 µg) Gentamisin (10 µg) CLSI: Eritromisin (15 µg) Klindamisin (2 µg) Pseudomonas aeruginosa ATCC Aztreonam (30 µg) Amikasin (30 µg) CLSI: Gentamisin (10 µg) İmipenem (10 µg) İnoküle edilmemiş Renksiz ila açık kehribar 1 : CLSI ve EUCAST ilkelerine göre kalite kontrol suşları için test sonuçları 2 : CLSI ve EUCAST ilkelerine göre kalite kontrol suşları için test sonuçları 3 : CLSI ilkelerine göre kalite kontrol suşları için test sonuçları PROSEDÜR Sağlanan Malzemeler BD Mueller Hinton II Agar (birkaç farklı plak formatında sağlanmıştır; bkz. Ambalaj/ Ticari Takdim Şekli). Mikrobiyolojik açıdan kontrol edilmiştir. Sağlanmayan Malzemeler 1. CLSI uyarınca: Standart inokülum hazırlanması için BD Trypticase TM Soy Broth (Soya- Kazein Dijeste Broth) veya Mueller Hinton II Broth (katyon-ayarlı) gibi 7 ml hacimde tüpe konulmuş inokülum broth u ve inokülumun seyreltilmesi için steril broth veya tuz çözeltisi. 7 EUCAST uyarınca: Standart inokülum preparatı için %0,9 salin (5 ml miktarında) Baryum sülfat karşılaştırma standardı (0,5 ml 0,048 M BaCl2 2 [%1,175 a/h BaCl 2. 2H 2 O] ila 99,5 ml 0,18 M [0,36 N] H 2 SO 4 [%1 h/h]) veya 3. İnokülumun süspansiyonunun türbiditesini 0,5 McFarland standardına eşdeğer olacak şekilde ayarlamak için fotometrik bir cihaz. 4. Yukarıdaki materyallere (1-3) alternatif olarak, BD Prompt TM Inoculation System (volümetrik inokülum hazırlama aracı) kullanılabilir. 7,8,25 PA Sayfa 3 / 10

4 5. CLSI uyarınca kültürlerin kontrolü: Staphylococcus aureus ATCC 25923, Escherichia coli ATCC and ATCC 35218, Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853, Enterococcus faecalis ATCC 29212, and Klebsiella pneumoniae ATCC EUCAST uyarınca kontrol kültürleri: Staphylococcus aureus ATCC 29213, Escherichia coli ATCC ve ATCC 35218, Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853, Enterococcus faecalis ATCC ve ATCC 51299, Klebsiella pneumoniae ATCC ve Staphylococcus aureus NCTC BD Sensi-Disc TM duyarlılık test diskleri gibi, belirli miktarda antimikrobiyal ajan aşılanmış kağıt diskler 7,8. 7. BD Sensi-Disc 6-, 8- veya 12-Place Dispenser gibi bir dağıtma cihazı. Mueller Hinton II Agar Square plaklar için aynı zamanda uygun bir dağıtıcı da mevcuttur. 8. Boyutu milimetre cinsinden ölçebilen, cetvel veya başka bir cihaz. 9. Yardımcı kültür ortamı, reaktifler ve gerekli laboratuvar ekipmanı. Örnek Türleri Bu ürün klinik örneklerden izole edilmiş saf kültürlerin duyarlılık testi için kullanılır (aynı zamanda bkz. PERFORMANS ÖZELLİKLERİ VE PROSEDÜRÜN KISITLI OLDUĞU ALANLAR). Doğrudan antimikrobiyal duyarlılık testinin kan kültürleri ve idrar kültürleri üzerinde gerçekleştirilebileceği belirtilmektedir bununla birlikte testler tekrarlanmalı saf kültürler ile doğrulanmalıdır Test Prosedürü Bu metodoloji, CLSI 7 ve EUCAST 8 tarafından önerildiği şekilde doğrudan koloni süspansiyonunu açıklar.2 1. Kanlı agar gibi seçici olmayan besiyerinden saf, taze (=gece boyu) bir kültürün mevcut olduğundan emin olun. CLSI uyarınca: Rutin duyarlılık testleri için, inokülum, kolonilerin doğrudan salin veya sıvı besi yeri süspansiyonu yapılarak hazırlanabilir. EUCAST uyarınca: Rutin duyarlılık testleri için, inokülum morfolojik olarak benzer, çeşitli kolonilerin doğrudan salini yapılarak hazırlanabilir. 2. Bu süspansiyonu hemen, inkübasyon olmaksızın 0,5 McFarland standardının baryum sülfat standardı türbiditesine ayarlayın. Standart ve test inokülumunun türbiditesi her iki tüpü ince siyah çizgiler bulunan beyaz zemin önünde tutarak karşılaştırılmalıdır veya fotometrik bir cihaz kullanılabilir. 3. Rutin test amaçlı olarak BD Prompt Inoculation System gibi, türbidite ayarlanması olmaksızın doğrudan standardizasyona izin veren araçları içeren alternatif inokülum hazırlama yöntemleri kabul edilebilir bulunmuştur İnokülumu optimum olarak 15 dak. içerisinde kullanın. Süspansiyon, daima hazırlıktan itibaren 60 dakika içinde kullanılmalıdır. Steril bir swabı uygun bir şekilde seyreltilmiş inoküluma daldırın ve fazla sıvının akması için swabı tüpün iç üst duvarına bastırarak birkaç kez döndürün ve aşırı inokülasyondan kaçının. 5. İnokülasyonun eşit dağılması için her sürme işleminden sonra plağı 60 çevirerek tüm agar yüzeyini üç kez inoküle edin. 6. CLSI uyarınca: Antimikrobiyal ajan ile aşılanmış diskleri uygulamadan önce, varsa yüzey neminin emilmesi için kapak 3 5 dakikalığına aralık bırakılabilir ve plak oda sıcaklığında tutulabilir, bu süre 15 dakikayı aşmamalıdır. Diski bir antimikrobiyal disk dağıtıcı aracılığıyla aseptik önlemler alarak uygulayın. Diskleri, merkezleri arasında en az 24 mm olacak şekilde yerleştirin. EUCAST uyarınca: Diskleri aseptik önlemler alarak inokülasyondan itibaren 15 dakika içinde kurutulmuş plakaya uygulayın. Plakaya maksimum altı disk yerleştirin. 7. Diskler agara yerleştirildikten sonra, besiyeri yüzeyi ile tam temas sağlamak için bunları steril bir iğne veya forseps ile bastırın. Diskler BD Sensi-Disc self-tamping dispenser kullanılarak yüklenmişse bu adım gerekli değildir. 8. Diskler uygulandıktan sonra 15 dakika içerisinde, plakları ters çevirin (tercihen) ve inkübatöre yerleştirin. Plaklar yüksek karbondioksit konsantrasyonu altında inkübe edilmemelidir. Tavsiye edilen inkübasyon koşulları için bkz. CLSI ve EUCAST. 7,8,10,11 PA Sayfa 4 / 10

5 Sonuçların Okunması 1. İnkübasyondan sonra, birleşik gelişim alanı görülmelidir. Yalnızca izole koloniler gelişirse, inokülum çok zayıftır ve test tekrar edilmelidir. 2. CLSI uyarınca: Kumpas, cetvel veya bu amaç için hazırlanmış bir şablon kullanarak, en yakın milimetreye yuvarlayarak, disk çapını da dahil etmek suretiyle tam inhibisyon zonlarının (çıplak gözle karar vererek) çapını ölçün. Ölçme cihazı, siyah, yansıtıcı olmayan arka plana tutulan ve üstten aydınlatılan ters çevrilmiş plağın altına tutulur. 7 EUCAST uyarınca: Kumpas, cetvel kullanarak, en yakın milimetreye yuvarlayarak, disk çapını da dahil etmek suretiyle tam inhibisyon zonlarının (çıplak gözle karar vererek) çapını ölçün. Ölçme cihazı, siyah, yansıtılmış ışıkla aydınlatılmış arka plana tutulan ters çevrilmiş plağın altına tutulur. Plak gözden yaklaşık 30 cm mesafede tutulur Son nokta çıplak gözle saptanabilen, hiçbir görünür gelişim göstermeyen alan olarak alınmalıdır. Belirgin inhibisyon zonunun kenarına yakın, güçlükle saptanabilen küçük kolonilerin zayıf gelişimlerini göz ardı edin. 4. CLSI uyarınca: Vankomisin ile test edildiğinde enterekokların olduğu gibi oksasilin diskler ile test edildiğinde Staphylococcus aureus bir istisnadır. Bu durumlarda, gizli dirençli MRSA suşları veya vankomisine dirençli enterokoklar ile gösterilen diskin etrafında ince bir tabaka gelişim saptanması için iletilen ışık kullanılmalıdır. 7,26 Proteus türleri ile, inhibisyon zonu ölçmeye yetecek kadar belirgin ise, zon içerisinde herhangi bir kümelenmeyi göz ardı edin. Trimetoprim ve sülfonamidler ile, besiyerindeki antagonistler zayıf gelişime neden olabilir; bu sebeple, zayıf gelişimleri (gelişimin %20 veya daha azı) göz ardı edin ve zon çapını belirlemek için daha belirgin olan sınırı ölçün. EUCAST uyarınca: Çift zonların olması durumunda, aksi özellikle belirtilmedikçe iç zon ölçülmelidir. 8 Sonuçların Hesaplanması ve Yorumlanması CLSI uyarınca: Disklerin etrafında ölçülen zon çapları CLSI Belge M100 da (M2) Tablo 2A ila 2D dekiler ile karşılaştırılmalıdır. 10 Spesifik organizmalar ile elde edilen sonuçlar ardından dirençli, orta düzey veya duyarlı olarak bildirilebilir. EUCAST uyarınca: Kesme noktası tablolarına başvurarak zon çaplarını yorumlayın. 11 Spesifik organizmalar ile elde edilen sonuçlar ardından dirençli veya duyarlı olarak bildirilebilir. Spesifik büyüme özellikleri, yorumlama ve diğer kılavuz belgeler hakkındaki ek bilgiler için bkz. EUCAST. PERFORMANS ÖZELLİKLERİ VE PROSEDÜRÜN KISITLI OLDUĞU ALANLAR Mueller Hinton Agar stafilokoklar, enterokoklar, Enterobacteriaceae üyeleri ve aerobik gramnegatif çubuklar (örn. Pseudomonas spp) gibi hızlı gelişen aerobik veya fakültatif anaerobik bakterilerin duyarlılık testi için kullanılan standart bir besiyeridir. Duyarlılığın yorumlanmasına yönelik kılavuz belgeler yıllık olarak güncellenir ve elde edilen sonuçların yorumlanması için en yeni sürüme bakılmalıdır. 10,11 Güç üreyen türlerin (örn. Haemophilus spp., Neisseria spp. ve Streptococcus pneumoniae ve streptococci) test edilmesi için farklı prosedürler, ortam ve koşullar geliştirilmiştir. CLSI ve EUCAST standardize prosedür zorunlu anaerobik organizmalar, Mueller Hinton Agar da zayıf veya yavaş gelişme hızı gösteren organizmalar veya gelişme hızı açısından belirgin suşlar arası varyasyon gösteren organizmaların test edilmesi için uygulanmaz. 7,8 Geç üreyen organizmalar (örn. Haemophilus influenzae) CLSI ve EUCAST tarafından tavsiye edilen şekilde test edilmelidir. 7,8 Dahili Performans Değerlendirmesi BD Mueller Hinton II Agar (tüm plaka formatları) karakterize dirençli mekanizmaları olanlar da dahil olmak üzere tavsiye edilen kalite kontrol (KK) suşlarını kullanarak dahili olarak valide edilmiştir (Amoksilin-Klavulanik asit AMC-3 ileescherichia coli ATCC 35218, Klebsiella pneumoniae ATCC , Enterococcus faecalis ATCC 51299, Staphylococcus aureus NCTC 12493, Staphylococcus aureus ATCC 29213). 19,20,34 Tablo 2 KK suşları ve karakterize direnç mekanizması olan suşlar için valide edilmiş antimikrobiyal maddeleri özetler. Aksi belirtilmedikçe, valide edilmiş antimikrobiyal maddeler için belirlenmiş inhibisyon zonu boyutları, ilgili CLSI ve EUCAST inhibisyon zonu çap aralıkları dahilindedir. 19,20 mecc dirençli tipi barındıran klinik MRSA izolatları kullanılan ilave performans çalışmaları BD Mueller Hinton II Agar'ın mecc-pozitif MRSA suşlarını doğru tespit ettiğini göstermiştir. 34,35 PA Sayfa 5 / 10

6 E. coli ATCC ,18 P. aeruginosa ATCC ,18 E. faecalis ATCC ,18 S. aureus ATCC E. coli ATCC ,18 S. aureus NCTC K. pneumoniae ATCC ,18 E. faecalis ATCC Tablo 2: Valide edilmiş antimikrobiyal madde ve kalite kontrol suşlarına genel bakış. Aksi belirtilmedikçe, inhibisyon zonu çapları, ilgili CLSI ve/veya EUCAST aralıkları dahilindedir.9 Iraksak inhibisyon zonları belirtilmiştir. 19,20 Antimikrobiyal ajan Disk içeriği (µg) Amikasin AN-30 Amoksisilin-klavulanik asit AMC-3 5 AMC-30 Ampisilin AM-2 3 AM-10 Ampisilin-sulbaktam SAM-20 Aztreonam ATM-30 Benzilpenisilin P-1 Sefadroksil Sefaleksin CFR-30 CN Sefepim FEP-30 Sefeksim CFM-5 Sefotaksim CTX Sefoksitin FOX-30 Sefpodoksim CPD-10 Ceftaroline CPT-5 2 Seftazidim CAZ Seftibuten CFT-30 Seftriakson CRO-30 Sefuroksim CXM-30 Kloramfenikol C-30 Siprofloksasin CIP-5 Klindamisin CC-2 Doripenem DOR-10 Ertapenem ETP-10 Erythromycin E-15 Fusidik asit FA-10 Gentamisin GM-10 GM-30 Imipenem IPM-10 Levofloksasin LVX-5 Linezolid LZD-10 Mecillinam MEC-10 Meropenem MEM-10 Minosiklin MI-30 Moksifloksasin MXF-5 Mupirosin MUP-200 Nalidiksik asit NA-30 PA Sayfa 6 / 10

7 E. coli ATCC ,18 P. aeruginosa ATCC ,18 E. faecalis ATCC ,18 S. aureus ATCC E. coli ATCC ,18 S. aureus NCTC K. pneumoniae ATCC ,18 E. faecalis ATCC Tablo 2: Devamı. Antimikrobiyal ajan Disk içeriği (µg), Netilmisin NET Nitrofurantoin FM Norfloksasin NOR-10 Ofloksasin OFX-5 Pefloksasin PEF-5 Piperasilin PIP-30 2 Piperasilin-tazobaktam PIP-30/TAZ Kinupristin-dalfopristin SYN-15 Rifampisin RA-5 Streptomisin S Teikoplanin TEC-30 Tetrasiklin TE-30 Tikarsilin TIC-75 Tikarsilin-klavulanik asit TIM-85 Tigesiklin TGC-15 Tobramisin NN-10 Trimethoprim TMP-5 4 Trimetoprim-sulfametoksazol SXT1,25-23,75 Vankomisin VA-5 Gösterilen inhibisyon zonları EUCAST ve CLSI aralığındadır. 1 CLSI antimikrobiyal maddenin test edilmesini tavsiye etmemektedir. 2 CLSI ve EUSCAT antimikrobiyal maddenin farklı konsantrasyonlarını tavsiye etmektedir. EUCAST önerileri uygulanmıştır. 3 Antimikrobiyal maddenin inhibisyon zonu tavsiye edilen EUCAST aralığında değildir (Mueller Hinton II Agar, 150 mm ve kare). 4 Antimikrobiyal maddenin inhibisyon zonu tavsiye edilen EUCAST aralığında değildir (Mueller Hinton II Agar, 90 mm). 5 Antimikrobiyal maddenin inhibisyon zonu tavsiye edilen EUCAST ve CLSI aralığında değildir (Mueller Hinton II Agar, 90mm). 6 Antimikrobiyal maddenin inhibisyon zonu tavsiye edilen CLSI aralığında değildir (Mueller Hinton II Agar, 90 and 150 mm) ancak tavsiye edilen EUCAST aralığındadır. Prosedürün kısıtlı olduğu alanlar Disk difüzyonu duyarlılık testi yalnızca saf kültürlerle kullanım için tasarlanmıştır. Duyarlılık testi hazırlanmadan önce izolatın Gram suşu ve olası tanımlamasının yapılması önerilmektedir. Bazı organizma-antimikrobiyal ajan kombinasyonlarında, inhibisyon zonu keskin sınırlı kenarlara sahip değildir ve hatalı yorumlamaya neden olabilir. Disk difüzyon duyarlılık testini etkileyen çeşitli faktörler tanımlanmıştır. Bunlar besiyeri, agar derinliği, disk potensi, inokülum konsantrasyonu, inokülum yaşı ve ph ı kapsar. 31 PA Sayfa 7 / 10

8 Hatalı inokülum konsantrasyonu uygun olmayan sonuçlar verebilir. İnokülum çok yoğun ise inhibisyon zonu çok küçük olabilir ve inokülum çok zayıfsa çok geniş ve ölçümü zor olabilir. Bu nedenle, düzgün olmayan kullanım nedeniyle potansiyel yanlış sonuç riskini minimuma indirmek için inokülum ve inoküle edilmiş plakaların kullanımına ilişkin CLSI ve EUCAST tavsiyelerinin takip edilmesi önemle önerilir.1 Antimikrobiyal disklerin uygun olmayan şekilde saklanması potens kaybına veya hatalı duyarlı sonuçlara neden olabilir. Uygun olmayan saklama sebebiyle besiyerinin aşırı büzülmesi hatalı duyarlı sonuçlara yol açabilir. Bir organizmanın spesifik bir antimikrobiyal ajana in vitro duyarlılığı ajanın in vivo olarak etkili olacağı anlamına gelmez. Sonuçların yorumlanmasında yol gösterici olması açısından ilgili referanslara bakın. 10,11,32,33 Timin veya timidin gerektiren bakteriler ile karşılaşılabilir. 27,28 Bu organizmalar düşük seviyelerde timin veya timidin içeren Mueller Hinton Agar da yeterli derecede gelişmeyebilir. Enterokokal bir izolatın penisilin veya glikopeptide bir aminoglikozit eklenmesi ile sinerjistik olarak etkilenmeyeceğinin bir göstergesi olarak yüksek miktarda gentamisin (120 mg) ve streptomisin (300 mg) içeren diskler kullanılarak aminoglikozitlere yüksek direncin taranması için yeni prosedürler geliştirilmiştir. 7,28,29 MRSA, dirençli enterokoklar, geniş spektrum, ß-laktamaz-üreten, gram-negatif basillerin saptanması ve testin kısıtlı olduğu diğer alanların saptanması ile ilgili kapsamlı bir açıklama için CLSI belgeleri M2 ve M7 ye ve EUCAST'e bakın. 7,8,10,11,30 Mueller Hinton II Agar ın, oksasilin diskleri çevresinde sisli bir inhibisyon zonu oluşturan MRSA nın saptanmasında güvenilir olduğu gösterilmiştir. 26 Şüphelenildiğinde, BD Oxacillin Screen Agar gibi ilave bir yöntem kullanılmalıdır Mevcut belgede ve CSLI ve EUCAST standardında verilen inokülasyon yöntemi, yorumlama, tavsiyeleri ve zon boyutlarının sınırları ulusal standartlara göre farklılık gösterebilir. 7,8,31 REFERANSLAR 1. Bauer, A.W., W.M.M. Kirby, J.C. Sherris, and M. Turck Antibiotic susceptibility testing by a standardized single disk method. Am. J. Clin. Pathol. 45: Matuschek, E., D.F. Brown, and G. Kahlmeter. Development of the EUCAST disk diffusion antimicrobial susceptibility testing method and its implementation in routine microbiology laboratories. Clin. Microbiol. Infect. 2014; 20 (4): Ryan, K.J., F.D. Schoenknecht, and W.M.M. Kirby Disc sensitivity testing. Hospital Practice 5: Barry, A.L., F. Garcia, and L.D. Thrupp An improved single-disk method for testing the antibiotic susceptibility of rapidly-growing pathogens. Am. J. Clin. Pathol. 53: Mueller, J.H., and J. Hinton A protein-free medium for primary isolation of the gonococcus and meningococcus. Proc. Soc. Exp. Biol. Med. 48: Ericsson, H.M., and J.C. Sherris Antibiotic sensitivity testing. Report of an international collaborative study. Acta Pathol. Microbiol. Scand. Sec. B, Suppl CLSI. Approved standard: M02-A12 - Performance standards for antimicrobial disk susceptibility tests. CLSI, Wayne, PA, USA. Search for latest version at 8. EUCAST Disk Diffusion Method for Antimicrobial Susceptibility Testing. Search for latest version at 9. Woods, G.L., and J.A. Washington Antibacterial susceptibility tests: dilution and disk diffusion methods, p In P.R. Murray, E.J. Baron, M.A. Pfaller, F.C. Tenover, and R.C. Yolken (ed.), Manual of clinical microbiology, 6th ed. American Society for Microbiology, Washington, DC. 10. CLSI - Performance Standards for Antimicrobial Susceptibility. CLSI supplement M100S. Wayne, PA: Clinical and Laboratory Standards Institute. Search for latest version at The European Committee on Antimicrobial Susceptibility Testing. Breakpoint tables for interpretation of MICs and zone diameters. Search for latest version at Thornsberry, C., T.L. Gavan, and E.H. Gerlach Cumitech 6, New developments in antimicrobial agent susceptibility testing. Coordinating ed., J.C. Sherris. American Society of Microbiology, Washington, DC. PA Sayfa 8 / 10

9 13. Koch, A.E., and J.J. Burchall Reversal of the antimicrobial activity of trimethoprim by thymidine in commercially prepared media. Appl. Microbiol. 22: Ferone, R., S.R.M. Bushby, J.J. Burchall, W.D. Moore, and D. Smith Identification of Harper-Cawston factor as thymidine phosphorylase and removal from media of substances interfering with susceptibility testing to sulfonamides and diaminopyrimidines. Antimicrob. Agents Chemother. 7: Reller, L.G., F.D. Schoenknecht, M.A. Kenny, and J.C. Sherris Antibiotic susceptibility testing of Pseudomonas aeruginosa: selection of a control strain and criteria for magnesium and calcium content in media. J. Infect. Dis. 130: Pollock, H.M., B.H. Minshew, M.A. Kenny, and F.D. Schoenknecht Effect of different lots of Mueller-Hinton Agar on the interpretation of the gentamicin susceptibility of Pseudomonas aeruginosa. Antimicrob. Agents Chemother. 14: D'Amato, R.F., and C. Thornsberry Calcium and magnesium in Mueller-Hinton agar and their influence on disk diffusion susceptibility results. Current Microbiol. 2: The European Committee on Antimicrobial Susceptibility Testing. Routine and extended internal quality control for MIC determination and disk diffusion as recommended by EUCAST. Search for latest version at The European Committee on Antimicrobial Susceptibility Testing. Routine and extended internal quality control for MIC determination and disk diffusion as recommended by EUCAST. Version 6.0, CLSI. Performance Standards for Antimicrobial Susceptibility Testing. 26 th ed. CLSI supplement M100S. Wayne, PA: Clinical and Laboratory Standards Institute; Wegner, D.L., C.R. Mathis, and T.R. Neblett Direct method to determine the antibiotic susceptibility of rapidly growing blood pathogens. Antimicrob. Agents Chemother. 9: Johnson, J.E., and J.A. Washington II Comparison of direct and standardized antimicrobial susceptibility testing of positive blood cultures. Antimicrob. Agents Chemother. 10: Waterworth, P.M., and M. Del Piano Dependability of sensitivity tests in primary culture. J. Clin. Pathol. 29: Hollick, G.E., and J.A. Washington II Comparison of direct and standardized disk diffusion susceptibility testing of urine cultures. Antimicrob. Agents Chemother. 9: Baker, C.N., C. Thornsberry, and R.W. Hawkinson Inoculum standardization in antimicrobial susceptibility testing: evaluation of overnight agar cultures and the rapid inoculum standardization system. J. Clin. Microbiol. 17: Hindler, J.A., and C.B. Anderbied Effect of the source of Mueller-Hinton agar and resistance frequency on the detection of methicillin-resistant Staphylococcus aureus. J. Clin. Microbiol. 21: Maskell, R., O.A. Okubadejo, R.H. Payne, and L. Pead Human infections with thymine-requiring bacteria. J. Med. Microbiol, 11: Haltiner, R.C., P.C. Migneault, and R.G. Robertson Incidence of thymidinedependent enterococci detected on Mueller-Hinton agar with low thymidine content. Antimicrob. Agents Chemother. 18: Murray, B.E The life and times of the Enterococcus. Clin. Microbiol. Rev. 3: CLSI. Approved standard: M7. Methods for dilution antimicrobial susceptibility tests for bacteria that grow aerobically. CLSI, Wayne, PA, USA.Search for latest version at Jorgensen, J.H., and J.D. Turnidge Susceptibility test methods: dilution and disk diffusion methods. In: Murray, P. R., E. J. Baron, J.H. Jorgensen, M. A. Pfaller, and R. H. Yolken (ed.). Manual of clinical microbiology, 8th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 32. Washington, J.A., and G.L. Woods Antimicrobial susceptibility tests: dilution and disk diffusion methods. P In Muarry, P.R., Baron, E.J., Pfaller, M.A., Tenover, F:C:, and Yolken, R:H. (ed.), Manual of clinical microbiology, 6 th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C PA Sayfa 9 / 10

10 33. Neumann, M.A., D.F. Sahm, C. Thornsberry, J.E. McGowan, Jr. Cumitech 6A, New developments in antimicrobial agent susceptibility testing: a practical guide. Coordinating ed., J.E. McGowan, Jr. American Society of Microbiology, Washington, D.C Data on file. Becton Dickinson. 35. Skov, R., A.R. Larsen, A. Kearns, M. Holmes, C. Teale, G. Edwards, and R. Hill. Phenotypic detection of mecc-mrsa: cefoxitin is more reliable than oxacillin J. Antimicrob. Chemother. 69: AMBALAJ/TAKDİM ŞEKLİ BD Mueller Hinton II Agar (Stacker 90 mm plakalar; [Standart boyut]) Kat. No Kullanıma hazır plak besiyeri, 20 plak Kat. No Kullanıma hazır plak besiyeri, 120 plak BD Mueller Hinton II Agar (150 mm) Kat. No Kullanıma hazır plak besiyeri, 20 plak BD Mueller Hinton II Agar, Square (120 x 120 mm) Kat. No Kullanıma hazır plak besiyeri, 20 plak EK BİLGİ Daha fazla bilgi için lütfen yerel BD temsilcinizle temasa geçin. Becton Dickinson GmbH Tullastrasse Heidelberg/Almanya Telefon: Faks: Reception_Germany@europe.bd.com Ticari markalar ilgili sahiplerinin mülkiyetindedir BD. BD, BD Logosu ve tüm diğer ticari markalar Becton, Dickinson and Company'nin mülkiyetindedir. PA Sayfa 10 / 10