Kara dut (Morus nigra L.) un antikandidal aktivitesi (*)

Türk Mikrobiyol Cem Derg (2007) 37 (3) : 169-173 1993 Türk Mikrobiyoloji Cemiyeti / Turkish Microbiological Society ISSN 0258-2171 Kara dut (Morus nigra L.) un antikandidal aktivitesi (*) Anticandidal activity of black mulberry (Morus nigra L.) Nimet Yi it 1, Demet Yi it 2, Ufuk Özgen 3, A.Esin Aktafl 4 Atatürk Üniversitesi 1 Sa l k Hizmetleri Meslek Yüksekokulu T bbi Laboratuar Bölümü, 2 Erzincan E itim Fakültesi, Fen Bilimleri E itimi, 3 Eczac l k Fakültesi, Farmakognozi Anabilim Dal 4 T p Fakültesi Mikrobiyoloji ve Klinik Mikrobiyoloji Anabilim Dal letiflim / Correspondence: Nimet Yi it Adres / Address: Atatürk Üniversitesi Sa l k Hizmetleri Meslek Yüksek Okulu T bbi Laboratuar Bölümü Aziziye Araflt rma Hastanesi Binas Erzurum Tel: 0 442 3166333/2430 Fax: 04423156044 Gsm: 0533 4678717 E-mail: nnimyigit@e-kolay.net - nimyigit@hotmail ÖZET Bu çal flmada kara dut ((Morus nigra L.) meyvelerinin su ve metanol ekstrelerinin antikandidal aktivitesi araflt r lm flt r. Meyveler Erzincan bölgesinden toplanm flt r. Ekstrelerin antikandidal aktivitesi klinik örneklerden izole edilen Candida türlerine karfl (Candida albicans, Candida glabrata, Candida tropicalis, Candida pseudotropicalis, Candida parapsilosis, Candida krusei, Candida kefyr, Candida guilliermondii, Geotricum candidum) disk difüzyon yöntemi ile de erlendirilmifl ve minimal inhibitör konsantrasyon (M K) de erleri belirlenmifltir. Çal flma sonucunda, su ve metanol ekstrelerinin C. albicans, C. parapsilosis, C.tropicalis and Geotricum candidum izolatlar üzerinde antikandidal aktiviteleri belirlenmifltir. Anahtar Kelimeler: Ekstraksiyon, Morus nigra L., antikandidal aktivite. SUMMARY In this study, aqueous and methanol extracts of the fruits of black mulberry (Morus nigra L.) were investigated for their in vitro anticandidal activities. The fruits were collected from Erzincan region. The anticandidal activity of extracts againts some clinical isolates of Candida spp. (Candida albicans, Candida glabrata, Candida tropicalis, Candida pseudotropicalis, Candida parapsilosis, Candida krusei, Candida kefyr, Candida guilliermondii, Geotricum candidum) were evaluated based on inhibition zone using the disc-diffusion assay, minimal inhibition concentraration (MIC) values. As a result of this study, water and methanol extracts of Morus nigra L. demonstrated anticandidal activity against C. albicans, C. parapsilosis, C.tropicalis and Geotricum candidum isolates. Key Words: Extraction, Morus nigra L., anticandidal activity. G R fi Dünya nüfusunun giderek artmas, beslenmede dengesizlik ve endüstriyel alanlar n giderek geliflmesi sonucu sa l kla ilgili sorunlar da giderek artm flt r. Günümüzde bilim ve teknolojideki büyük ilerlemelere ra men do al kaynaklar n bilinçsizce tüketimi ve karfl lafl lan ekonomik güçlükler, do al kaynaklar n çok amaçl kullan mlar n zorunlu k lm flt r. Di er taraftan infeksiyöz hastal klarla mücadelede bugüne kadar gelifltirilen do- al ve sentetik antibiyotiklerin mikroorganizmalar n direnç kazanmalar sonucu etkisiz kalmalar ve çeflitli yan etkilerinin bulunmas t p ilmini yeni ve de iflik antimikrobial maddeler keflfetmek için do aya yöneltmifltir. T bbi bitkiler ve bunlardan elde edilen bitkisel ilaç hammaddeleri üzerinde yap lan çal flmalar önem kazanm flt r. Buna ba l olarak da günümüzde çeflitli hastal klar n tedavisinde bitkilerden elde edilen do al kaynakl ilaçlar n kullan m da ciddi ölçüde artm flt r (1-3). Kara dut ( Morus nigra L. ) ülkemizde çok bilinen ve hemen hemen her yerde yetiflen bir meyvedir. Vatan Türkistan olan dut, bat da ran, Irak, Türkiye, Akdeniz ülkelerinden Avrupa'ya ve do uda Çin'e kadar çok genifl bir alana yay lm flt r (4,5). Morus nigra L. 10-15m boyunda kal n dall genifl tepeli bir a açt r. Gövdeleri esmer gri renk- (*) XVI.Bitkisel laç Hammaddeleri Toplant s B HAT ( Haziran 2006, Erzurum) sunulmufltur. 169

Kara dut (Morus nigra L.) un antikandidal aktivitesi te sürgünleri tüylüdür. Esmer gri renkli kabuk kal n ve uzunlamas na çatlakt r. Yapraklar n döken bir a açt r. Yapraklar genifl yumurta biçiminde 6-12cm boyundad r. Yaprak uçlar k sa damla dip k s m derin yürek fleklindedir. Kenarlar kaba diflli genelde parçal d r (4,5). Çiçekleri bir veya iki evcikli erkek çiçeklerin ço- u bir araya toplanm fl sapl ve baflak kuruluflunda, difli çiçekler de baflak kuruluflunda fakat daha k sa ve yumru görünüflünde k sa sapl ya da dal dala oturufl durumdad r. Çiçek yapraklar tüylü, yumurtal k yuvarlakça yumurta biçiminde tepecik uzun tüylüdür. Olgunlaflmaya bafllayan meyve parlak k rm z, tam olgunlaflm fl meyve siyah renklidir (4,5). Bitkinin yaprak ve kök kabuklar n n çay, meyvelerin ise reçel ve flurubu yap l r veya kurutularak kurusu yenir. Halk aras ndan kök kabu u atefl düflürücü özelli- e sahip oldu undan çay olarak kullan lmaktad r. Yapraklar ve kökleri tenya düflürücü, idrar söktürücü ve kan flekeri düzenleyici olarak kullan - l r. Meyve ve meyvelerden haz rlanan marmelat flurup ve pekmez özellikle bademcik iltihaplar n n giderilmesinde, a z ve difl yaralar n n iyilefltirilmesinde kullan l r. Özellikle de çocuklarda pamukcuk olarak bilinen ve Candida türü mikroorganizmalar n sebep oldu u infeksiyonlar n iyilefltirilmesinde kullan l r (4,5). Bu çal flmada kara dut meyvelerinden elde edilen su ve metanol ekstrelerinin çeflitli klinik örneklerden izole edilen Candida türleri üzerindeki antikandidal etkisi araflt r lm flt r. GEREÇ VE YÖNTEM Çal flmada; 20 C.albicans, 8 C.glabrata, 8 C.tropicalis, 8 C. Parapsilosis, 8 C.pseudotropicalis, 8 C. krusei, 6 C. kefyr, 6 C. guilliermondii ve 4 Geotricum candidum suflu olmak üzere toplam 76 Candida suflu kullan lm flt r. Standart sufl olarak ise C.albicans ATCC 90028, C.parapsilosis ATCC 22019, C.krusei ATCC 6258 sufllar kullan lm flt r. Candida türlerine ait sufllar Atatürk Üniversitesi T p Fakültesi Mikrobiyoloji ve Klinik Mikrobiyoloji Anabilim Dal 'nda de iflik klinik örneklerden izole edilmifl ve tan mlanm flt r. Çal flmada kullan lan Candida türleri ve izole edildikleri klinik örnekler Tablo 1 de gösterilmifltir. De iflik klinik örneklerden izole edilen Candida türlerinin tan mlanmas, germ tüp oluflturma, Tween 80'li m s r unlu jeloz besiyerinde hif, pseudohif, blastospor ve klamidospor araflt r lmas ve AP 20C AUX identifikasyon sistemi kullan larak yap lm flt r. Çal flmada kullan lan kara dut (Morus nigra L) meyveleri Erzincan yöresinden toplanm flt r. Meyveler oda s s nda kurutulmufl ve ö ütülerek toz haline getirilmifltir. Kara dut meyveleri ö ütülerek toz haline getirildikten sonra su ve metanol ekstreleri elde edilmifltir. Toz haline getirilen meyvelerden 20 gram tart larak 200 cc su ve metanol içerisinde 5 saat süre ile geri çeviren so utucuda ekstre edilmifltir. Ekstreler süzülerek evaporatörde bas nç alt nda 40 C de su ve metanol uçurularak yo- unlaflt r lm fl liyofilizasyon cihaz ile liyofilize edilmifltir. Bu ekstreler Atatürk Üniversitesi Eczac l k Fakültesi Farmakognozi Anabilim Dal 'nda haz rlanm flt r. Çal flmada ekstrelerin antikandidal aktivitesi disk difüzyon yöntemi ile araflt r lm flt r. Ekstrelerden su ve metenolle çözülerek 30 mg/ml konsantasyon haz rlanm fl ve 6 mm çapl steril ka t disklere emdirilmifl ve çözgen maddelerin uzaklaflt - r lmas sa lanarak çal flmada kullan lan diskler haz rlanm flt r. Çal flmada kullan lan Candida türlerine ait sufllar n Sabouraud Dextrose Agar (SDA) besiyerlerinde 48 saatlik kültürlerinden serum fizyolojik içerisinde MacFarland 0.5 bulan kl k efleline eflde erde süspansiyonlar haz rlanm flt r. Bu süspansiyonlar SDA besiyerlerine ekilerek yay lmas n sa lamak için bir süre beklenmifl ve diskler besiyerine yerlefltirilmifltir. 24 ve 48 saatlik inkü- 170

Nimet Yi it, Demet Yi it, Ufuk Özgen, A.Esin Aktafl basyodan sonra inhibisyon zon çap oluflup oluflmad kontrol edilmifl ve oluflan zon çaplar ölçülerek kaydedilmifltir. Pozitif kontrol olarak amfoterisin B içeren ticari diskler ve negatif kontrol olarak da metanol ve su içeren diskler kullan lm flt r (6). Çal flmada minimal inhibisyon konsantrasyonun (M K) belirlenmesi için disk difüzyon yönteminde aktivite belirlenen sufllar n Sabouraud Dekstroz Buyyon besiyerinde (SDB) taze kültürleri ve MacFarland 0,5 bulan kl k efleline eflde- erde süspansiyonlar haz rlanm flt r. Meyve ekstrelerinin SDB içerisinde bir seri dilüsyonlar (0,075-10 mg/ml) haz rlanm flt r. M K de erleri mikrodilüsyon yöntemi ile belirlenmifltir (7). BULGULAR Çal flmada kullan lan Candida türleri ve izole edildikleri klinik örnekler Tablo 1 de gösterilmifltir. Tablo 1. Çal flmada kullan lan Candida türleri ve izole edildikleri klinik örnekler. Candida Türleri Kan drar Balgam CAPD s v s A z yara C.albicans 10 5 - - 2 3 C.glabrata 1 4 2 - - 1 C.tropicalis 5 1 - - 2 - C.pseudotropicalis 2 3 - - - 3 C. parapsilosis 5 1 1-1 - C. krusei - 3 1 1-3 C. guilliermondii - 5-1 - - C. kefyr 3 2 1 - - - Geotricum candidum 1-1 - - 2 Çal flma sonucunda kara dut (Morus nigra L.)'un su ve metanol ekstrelerinin C. albicans, C. parapsilosis, C.tropicalis ve Geotricum candidum türlerine ait sufllar üzerinde antikandidal aktivitesi belirlenmifltir. 48 saatlik inkübasyon süresi sonunda zon çaplar nda de ifliklik kaydedilmemifltir. Sonuçlar Tablo 2 de verilmifltir. Tablo 2. Kara dut ekstrelerinin Candida türlerine antifungal etkisi. Candida türleri nhibisyon zonu (mm) MIC (mg/ml) Su ekstresi Metanol ekstresi Su ekstresi Metanol ekstresi C. albicans 21 25 2,5 1,25 C.parapsilosis 15 20 5 2,5 C.tropicalis 17 18 5 2,5 Geotricum candidum C.albicans ATCC 90028 TARTIfiMA 9 9 1,25 0,625 20 23 2,5 1,25 T bbi bitkiler ile tedavi gelene i binlerce y ld r Anadolu'da devam etmektedir. Bu bitkilerin bir k sm ekstre ve ya olarak kullan l rken, bir k sm da çi ve ifllenmifl olarak yenilmektedir. laçla tedaviye alternatif olarak do al tedavi günümüzde de süregelmektedir (4,5). Kara dut (Morus nigra L) Anadolu'da oldukça yayg n olarak tüketilen bir meyvedir. Bitkinin meyveleri olgunlaflt ktan sonra toplan r ya kurutulur k fla saklan r ya flurubu yap l r yada yenir. Yaprak ve kök kabuklar kurutulduktan sonra porselen kaplar içinde muhafaza edilir. Meyvelerden haz rlanan flurup gargara halinde a z ve bo az hastal klar na karfl kullan lmaktad r. Kökü veya kök kabu u müshil ve tenya düflürücü etkilere sahiptir. Yapraklar fleker hastal - na karfl kullan l r (4,5). Meyve bilefliminde flekerler, organik asitler (tatarik ve sitrik asit ), flavonoidler (isoquercitin) ve boyar maddeler bulunmaktad r. Bilefliminde bulunan papyriflavonal A, kuraridin, saphoraflavanone D ve saphoraiso flavanone A iyi bir antifungal ve güçlü antimikrobiyal aktivite göstermektedir. Candida türlerinden özellikle C.albicans üzerinde antifungal aktivite göstermektedir (8,9). 171

Kara dut (Morus nigra L.) un antikandidal aktivitesi Yine yap s nda bulunan 2-arylbenzofurans metisilin dirençli stafilokoklar üzerinde antimikrobiyal etki göstermektedir (10). Kara dut meyvelerinden elde edilen morin flavanoid yap s nda bir maddedir ve bu maddenin makrofajlar üzerinde antiinflamator aktivitesi belirlenmifltir. Yine meyvelerden elde edilen cyclosporin (CsA) maddesi ise otoimmun hastal klar n tedavisinde ve organ transplantasyonu s ras nda potansiyel immunsupresif ajan olarak kullan labilir (11). Morus genusuna ait türlerin (Morus alba L., Morus nigra L.) anti-hiv, antioksidativ, antihipotansiv ve sitotoksik aktivitesi bilinmektedir. Bu türler flavonoidler aç s ndan zengindir ve potansiyel olarak herpes simplex virus, rhinovirus, rotavirus ve HIV (Human Immunudeficiency V rus) üzerinde antiviral aktiviteleri mevcuttur (12,13). Özellikle bitkinin kök kabuklar ndan elde edilen moralbanone, kuwanon S, mulberroside C, cyclomorusin A, eudraflavone B hydroperoxide gibi maddeler bu antiviral etkiyi oluflturmaktad r(12). Morus türlerinin kök kabuklar özellikle Asya ülkelerinde halk hekimli inde antiinflamator, hipoglisemik ve antibakteriyel etkisinden dolay kullan lmaktad r. Kök kabuklar ndan elde edilen kloroform ekstrelerinin güçlü antimikrobiyel etkisi bulunmufltur (14). Bitkinin kök kabuklar ndan elde edilen etil asetat fraksiyonundaki kuwanin G maddesi a z patojeni olan Streptecoccus mutans üzerinde güçlü antibakteriyal özelli e sahip olarak bulunmufltur. Yine ayn molekül oral-karsinojenik a z patojenleri S.sobrinus S.sanguis ve peridontal patojen P.gingivalis üzerine antimikrobiyal etkisi belirlenmifl fakat C.albicans, A.actimomycetemcomitams, L.acidophilus ve L.casei üzerinde etkisi belirlenememifltir (15). Bonjar ve ark. (16) Yapt klar çal flmada Morus alba ve Morus nigra bitkilerinin yaprak metanol ekstrelerinin C.albicans, C.utilis ve Saccharomyces cerevisiae üzerinde anticandidal aktivitesini belirleyememifllerdir. Çal flmam z s ras nda yapt m z detayl literatür araflt rmas nda Morus nigra bitkisinin özellikle kök kabuk ve yaprak aksamlar üzerinde antioksidatif, antiinflamator, hipoglisemik, hiptansif ve sitotoksik çal flmalar n, meyve aksam nda ise fraksiyon çal flmalar ve meyve içerik tayin çal flmalar oldu u belirlenmifltir. Bitkinin meyve aksam nda ekstraksiyon ve antimikrobiyal çal flma say s az ve kapsaml antifungal çal flma ise bulunamam flt r. Bizim çal flmam zda bitkinin meyve aksam n n su ve metanol olmak üzere iki ekstraksiyonu haz rlanm fl ve bu ekstraksiyonlar klinik Candida izolatlar n n 9 fakl türüne ait toplam 76 farkl maya suflu üzerinde antikandidal aktivite aç s ndan araflt r lm flt r. Bu çal flmada yöntem olarak disk difüzyon yöntemi ve M K de erlerinin belirlenmesi için mikrodilüsyon dilüsyon yöntemi kullan lm flt r. Çal flmam z sonucunda klinik örneklerden izole edilen 11 C.albicans suflu üzerinde Morus nigra metanol ve su ekstrelerinin antikandidal aktivitesi belirlenmifltir. Su ekstresi için ortalama zon çap olarak 21 mm, metanol ekstresi için 25 mm, 3 C.parapsilosis suflu için ortalama zon çap olarak su ekstresinde 15 mm, metanol ekstresinde 20 mm, 5 C.tropicalis suflu için ortalama zon çap olarak su ekstresinde 17 mm, metanol ekstresinde 18 mm, 3 Geotricum candidum suflu için ortalama zon çap olarak su ekstresinde 9 mm, metanol ekstresinde 9 mm zon çap kaydedilmifltir. Kullan lan referans sufllardan C.albicans ATCC 90028 suflu üzerinde su ekstresi 20 mm, metanol ekstresi ise 23 mm zon çap oluflturmufltur. KAYNAKLAR 1- Duman R, Do an H.H, Atefl A. Morchella conica (Pers.) Boudier ve Suillus luteus (L.) S.F. Gray Makrofungusunun Antimikrobiyal Aktiviteleri. S.Ü.Fen Edebiyat Fakültesi Dergisi 2003; 22:19-24. 2- Dulger B, Gonuz A. Antimicrobial Activity of Certain Plants Used in Turkhish Traditional Medicine. Asian Plant Sci 2004; 3: 104-107. 172

Nimet Yi it, Demet Yi it, Ufuk Özgen, A.Esin Aktafl 3-D grak M, Alma,M.H., Ilc m A., fien S. Antibacterial and Antifungal Effects of Various Commerical Plants Extracts. Pharm Biol 1999;37:216-220. 4- Baytop T. Türkiye'de Bitkiler le Tedavi. 2.Bask, Nobel T p Kitabevleri, stanbul 1999 : 200. 5-Davis P.H. Flora of Turkey and The East Agean Island. p: 642 Edinburgh University Pres, Edinburgh, 1982. 6-Murray P.R., Baron E.J., Pfaller M.A., Tenover F.C., Yolke R.H. Manual of Clinical Microbiology Vol 6, ASM Washington DC, 1995. 7-Zgoda J.R., Porter J.R. A convinent microdilution method for screening natural products againts bacteria and fungi: Pharma Biol 2001;39:221-225. 8-H.Y. Sohn, K.H.Son, C-S Kwon, G-S Kwon, S.S. Kong. Antimicrobial and Cytotoxic Activity of 18 Prenylated Flavonoids Isolated From Medicinal Plants: Morus Alba L., Morus Mongolica Schneider, Broussnetia Papyrifera (L) Vent, Saphora Flavescens Ait And Echinosophora Koreensis Nakai. Phytomedicine 2004;11: 666-672. 9-Barron D, Ibah m R.K. Isoprenylated Flavonoids-A Survey. Phytochemistry 1996; 43, 921-982. 10-Toshio Fukai, K yoshi Kaitou, Sumio Terada. Antimicrobial Activity of 2-Arylbenzofurans From Morus Species Againts Methicillin-Resistance Staphylococcus Aureus. Fitoterapia 2005; 76:708-711. 11-Fang S.H, Hou Y.C, Chao P.D. Pharmocokinetic and Pharmacodynamic Interactions of Morin and Cyclosporin. Toxical Appl Pharmacol 2005;15: 205;65-70. 12- Du J, He Z-D, J ang R-W, Ye W-C, Xu H-X, But P P-H. Antiviral Flavonoids From Root Bark of Morus Alba L. Phytochemistry 2003; 62: 1235-1238. 13-Ma S.C, Du J, But P.P.H, Deng X.L, Zhang Y.W, Doi V.E.C, Xu H.X, Lee S.H.S, Lee S.F. Antiviral Chinese Medicinal Herbs Againts Respiratory Syncytical Virus. J Ethnopharm 2002; 79:205-211. 14-Park Uy, K m Y.M, K m S.H And Chang D.S. Investigation of Optimum Extracting Condition and Antimicrobial Activity of The Extract From Root Bark of Morus Alba. Food Hyg Saf 1995; 10:139-145. 15-K.M Park, J.S You, H.Y Lee, N.I Baek and J.K Hwang. Kuwanon G. An Antibacterial Agent From The Root Bark Of Morus Alba Againts Oral Pathogens. J Ethnopharmacol 2003; 84: 2-3;181-185. 16-G.H Shahidi Bonjar, S. Agh ghi And A.Karimi Nik. Antibacterial And Antifungal Survey In Plants Used In Indigenous Herbal-Medicine of South East Regious of Iran. J Biol Sci 2004; 4:405-412. 173