Siemens BN II üstünde kullanım için Freelite İnsan Kappa Free kit. in-vitro diagnostik kullanım için Ürün Kodu: LK016.T İÇERİKLER. Sayfa No.

Transkript

1 İÇERİKLER 1 Kullanım amacı 2 Özet ve açıklama 3 Prensip 4 Reaktifler 5 Dikkat 6 Saklama ve stabilite Örnek toplama ve hazırlama 7 Metodoloji 8 9 Kalite kontrol 10 Sınırlamalar 11 Beklenen değerler 12 Performans özellikleri 13 Bibliyografi Deutsch Français Español Português Sayfa No. Siehe Seite Cf. page Página Veja páginas Siemens BN II üstünde kullanım için Freelite İnsan Kappa Free kit in-vitro diagnostik kullanım için Ürün Kodu: LK016.T Üretici: The Binding Site Group Ltd., 8 Calthorpe Road, Edgbaston, Birmingham,B15 1QT, UK. Telefon: +44 (0) Fax: +44 (0) info@bindingsite.co.uk Avrupa ve ABD de, Freelite The Binding Site Group Ltd. tescilli markasıdır, Birmingham, UK BN Siemens Healthcare Diagnostics, Inc markasıdır. FDA (USA) Bilgi Analit İsmi: Complexity Cat.: 1 KULLANIM AMACI Kappa Hafif Zincirler Moderate Bu kit Siemens BN II üstünde serum ve idrarda free hafif zincirlerin kantitasyonu için amaçlanır. Free hafif zincirlerin ölçümü, multiple myeloma, lenfositik neoplaziler, Waldenstrom s makroglobulinemia, AL amyloidosis, hafif zincir birikim hastalığı ve systemic lupus erythematosus gibi bağ doku hastalıklarının tanısı ve izlenmesinde diğer laboratuvar ve klinik bulgularla birlikte yardımcıdır. 2 ÖZET VE AÇIKLAMA Immunoglobulin molekülleri immunoglobulin sınıfını tanımlayan iki aynı ağır zincir (,,, veya μ) ve iki aynı hafif zincirden (κ veya λ) oluşur. Her hafif zincir ağır zincire kovalent olarak bağlanır ve iki ağır zincir hinge bölgesinde kovalent olarak bağlanır. Sağlıklı bireylerde serumdaki hafif zincirin çoğunluğu bu formda bulunur, ağır zincire bağlanır. Ancak free hafif zincirin (FLC) düşük seviyeleri plazma hücreleri tarafından FLC aşırı üretimi ve salgılanmasından dolayı normal bireylerin serumunda bulunur. Serumda her iki hafif zincirin moleküler ağırlığı 22.5kD iken κ free hafif zincir (κ- FLC) ağırlıklı olarak monomer olarak bulunur ve λ free hafif zincir (λ-flc) 45kD moleküler ağırlıkla kovalent olarak bağlı dimer olarak bulunur. Bu κ-flc ve λ-flc için farklı glomerular filtrasyon oranına yol açar ve bağlı 2.0 κ - λ oranı ile kıyaslandığında serumda gözlenen oran κ- FLC - λ-flc açıklanabilir. İdrardaki FLC seviyeleri düşüktür. Sağlıklı böbrekte tubular hücreler seçici olarak tüm FLC tekrar absorbe eder bu nedenle idrardaki varlıkları muhtemelen idrar yoluna salgılamadan dolayıdır. Monoclonal FLC yükselen serum seviyeleri malignant plazma hücre çoğalması (ör. çoklu myeloma), AL amyloidosis ve light chain deposition hastalığı ile ilişkilidir. Polyclonal FLC artan serum seviyeleri SLE gibi otoimmun hastalıklarla ilişkili olabilir. İdrarda daha FLC seviyelerinin görünmesi böbrek hastalıkları veya çoklu myeloma gibi malignant lymphoproliferative hastalığının göstergesi olabilir. Lymphoid malignancy ile ilişkili monoklonal urinary FLC, Bence Jones proteini olarak adlandırılır (1-13). 3 PRENSİP Nefelometri ile çözünebilir antijenin konsantrayonunu değerlendirme reaksiyon kabında veya küvette uygun antikor içeren solüsyona test örneğinin eklenmesini içerir. Işık demeti küvetin içinden geçer ve antijen-antikor reaksiyonu devam ettiği için, küvetten geçen ışık çözülemeyen immun kompleksler oluştuğu için giderek dağılır. Işık saçılması gelen ışıktan uzak bir açıda ışık yoğunluğu ölçülerek izlenir. Küvetteki antikor fazladır bu nedenle oluşan immun kompleksin miktarı antijen konsantrasyonu ile orantılıdır. Bilinen antijen konsantrasyonunun kalibratörlerinin serileri ilk olarak antijen konsantrasyonuna karşı ölçülen ışık saçılımının eğrisi üstünde bir kalibrasyon üretmek için test edilir. Bilinmeyen antijen konsantrasyonunun örnekleri sonra test edilebilir ve kalibrasyon eğrisinden sonuçlar okunabilir. Nefelometrik testlerin duyarlılığı partikül artışının kullanılmasıyla arttırılabilir. (6) Bu, antijenantikor reaksiyonunun ilgili ışık-saçılım sinyalini arttıran uygun boyutta partikül için antikora bağlanma gerektirir. 4 REAKTİFLER 4.1 Lateks reaktif: polistiren lateks üstüne kaplı polyklonal monospesifik antikordan oluşur. Koruyucu: %0.05 ProClin, %0.1 E-amino-n-caproic asit (EACA) ve %0.01 benzamadin. 4.2 Standart ve kontroller: free hafif zincir içeren insan serumu içerir. Stabilize sıvı formda sağlanır ve koruyucu olarak %0.099 sodyum azid, %0.1 EACA ve %0.01 benzamidin içerir. 4.3 Ek reaktif: koruyucu olarak %0.099 sodyum azid içerir. *ProClin Rohm ve Haas Corp. markasıdır, Philadelphia, PA. 5 DİKKAT Bu kitte sağlanan insan serumunun tüm donorleri serum test edilmiştir ve hepatit B yüzey antijeni (HBsAg) ve insan immunodeficiency virüs (HIV1 ve HIV2) ve hepatit C virüsü için antikorlar için negatif bulunmuştur. Kullanılan testler FDA (USA) tarafından onaylıydı veya AB de in vitro diagnostik kullanım için açıklanmıştı (Direktif 98/79/EC, Ek II); ancak bu testler bulaşıcı maddelerin yokluğunu garanti edemez. Uygun kullanım ve atma yöntemleri tüm potensiyel olarak bulaşıcı materyaller için olduğu gibi belirlenmelidir, her zaman uygun koruyucu ekipman ve giysi giyen kullanıcılar dahil (ancak bunlarla sınırlı değil). Sadece bu tip yöntemlerde tam olarak eğitim alımış personel bu prosedürleri gerçekleştirmek için izinli olmalıdır. Bu ürün sodyum azid ve ProClin 300 içerir ve dikkatle kullanılmalıdır. Yutmayın veya cilt (özellikle bozulmuş cilt veya açık yaralar) veya mukoza ile temasına izin vermeyin. Eğer temas meydana gelirse bol su ile yıkayın ve acil tıbbi yardım alın. Patlayıcı metal azidler kurşun ve bakır ile sodyum azidin uzun süreli teması halinde oluşabilir; reaktifin atımında azid birikimini önlemek için bol su ile yıkayın Insert Code: SIN055, Version: 14 th June 2013, Page 1 of 17

2 Bu ürün sadece Kullanım Amacında belirtilen amaçlar için uygun eğitimli personel tarafından kullanılmalıdır. Bu talimatlara sıkı bağlılık her zaman esastır. Eğer parametreler kullanılan talimatlarda belirtilenlerin dışında ise sonuçlar muhtemelen geçersizdir. Farklı parti numaralı kitlerin reaktifleri değiştirilebilir DEĞİLDİR. Eğer çok sayıda test yapılıyorsa tüm reaktiflerin aynı gruptan olmasının sağlanmasına dikkat edilmelidir. Tekrar ölçüm Tekrar ölçüm higher dilüsyon lower dilüsyon Lower tekrar ölçüm limiti [ ] Upper tekrar ölçüm limiti [ ] Maks. Maks. tekrar ölçüm sayısı [ 5 ] Sonuç tekrar ölçüm limitleri içindeyse [ Aynı dilüsyon ] Take [ Lowest sonuç ] Sonuç 6 SAKLAMA VE STABİLİTE Açılmamış kit 2-8 C de saklanmalıdır ve kit kutusunun etiketinde gösterilen son kullanma tarihine kadar kullanılabilir. DONDURMAYIN. Lateks reaktif, kalibratör ve kontrol buharlaşma ve kontaminasyonu önlemek için önlemler alınması şartıyla açıldıktan sonra üç aya kadar 2-8 C de saklanabilir. 7 ÖRNEK TOPLAMA VE HAZIRLAMA Taze veya derin dondurulmuş serum veya idrar örnekleri kullanın. Serum venipunktür yoluyla alınmalıdır, pıhtılaşmaya izin verilmelidir ve sonra hemolizi önlemek için en kısa sürede ayrılmalıdır. Örnekler 21 güne kadar 2-8 C de saklanabilir, daha uzun süreli saklama için -20 C veya aşağısında dondurulmuş tutulmalıdır. Tekrarlanan dondurma /çözdürme döngülerinden kaçınılmalıdır. Mikrobiyel olarak kontamine idrar veya serum örnekleri, partiküler madde içeren örnekler ve lipemik veya hemolize olmuş serum örnekleri kullanılmamalıdır. 8 METODOLOJİ Birim [ mg/l ] Ondalık noktadan sonra basamakların sayısı [ 2 ] mg/l den IU/L ye dönüşüm faktörü [ ] mg/l den U/L ye dönüşüm faktörü [ ] mg/l den mol e dönüşüm faktörü [ ] Örnek dilüsyonu Örnek Dilüsyonu [ 1:100 ] Minimum Dilüsyon [ 1:1 ] Bulanıklık kontrolü Bulanıklık eşiği [ 0 ] Bit Bulanıklık faktörü [ 0 ] % Bulanıklık kontrolünün üst sınırı [ 0 ] Bit Eğer yapılacak bulanıklık kontrolünü istemiyorsanız, tüm değerleri 0 a ayarlayın. Yıkama Insert Code: SIN055, Version: 14 th June 2013, Page 2 of 17

3 Not: sonuçların tam yorumlanmasını sağlamak için free /lambda oranları tanımlanmalıdır; bu nedenle örnekler ayrıca Binding Site s Freelite Kappa Free kit (LK018.T) kullanılarak test edilmelidir. 8.1 Sağlanan materyaller x 2.0mL İnsan Kappa Free Reaktif x 3.0mL İnsan Kappa Free Ek Reaktif x 1.0mL İnsan Kappa Free Standart x 1.5mL İnsan Kappa Free Kontrol x 1.5mL İnsan Kappa Free High Kontrol 8.2 Gerekli ama sağlanmayan materyaller Test örneklerinin toplanması ve hazırlanması için ekipman ör. örnek tüpleri, santrifüj vs Tamamen operasyonel ve donanımlı BN II analizör. 8.3 Reaktif hazırlama Yüklemeden önce, reaktif aspirasyonuna müdahele edebileceğinden köpük ya da kabarcık oluşmamasını veya yüzeyde kalmamasını sağlayarak ters çevirerek hafifçe karıştırın. 8.4 Test prosedürü Kullanıcı test prosedürlerini yapmaya başlamadan önce BN II analizörünün çalışmasına aşina olmalıdır. Analizör üreticinin talimatlarına göre kullanım için hazırlanmalıdır ve test protokolü aşağıda belirtildiği gibi girilmelidir Parametreleri programlama Aşağıdaki gibi Definition-Reagent içinde kullanmak için reaktifleri belirleyin: İnsan Kappa Free Reaktif: İsim [ Kappa Free ] Kısaltma [ KF ] Tanım [ 1307 ] Şişe boyutu [ 5mL ] Ek Reaktif: İsim [ Kappa FLC SR ] Kısaltma [ KF SRP ] Tanım [ 1311 ] Şişe boyutu [ 5mL ] ID UYARI: Kullanıcının önerilen bileşen tanımını kullanması mümkün olmadığı durumlarda başkası yerine seçilebilir. Bileşen barkodu, barkod okuyucu ile algılanmasını önlemek için siyah marker kalemle (veya şişeden soyulmuş olarak) kaplanmalıdır Kappa free test protokolü aşağıdaki gibi Definition-Assay içinde ayarlanmalıdır: Test ismi (test seçimi ile) Kısaltma [ KF ] Test İsmi Host için Tanımlama [ ] Listedeki Pozisyonu Versiyon [ ] Behring Test Kodu Testten türetilen [ 0 ] Örnek Tipi [ Serum ] Ölçüm Allow multiple lotlar Mini-batch Hazırlığı kesmeyin [ Kappa Free ] [ ] [ 0 ] Metod [ Sabit süre ] Lower Ölçüm Aralık Limiti [ 0.00 ] mg/l Önreaksiyon Önreaksiyon başlatma [ 0.0 ] Önreaksiyon durdurma [ sn ] [ 0.0 ] Faktör [ 1.0 ] Sabit eklenecek [ 0.0 ] İlk ölçüm [ sn ] [ 7.5 ] Son ölçüm [ sn ] [ 1080 ] Ortalama noktaların sayısı [ 4 ] VlinIntegral Start değerlendirme [ sn ] [ 0.0 ] Polinomik regres. [ 3 ] Upper preeval. oranı [ 0.0 ] Min. search penceresi [ 0.0 ] Stop değerlendirme [ sn ] [ 0.0 ] Preeval. Penceresi [ 0.0 ] Lower preeval. oranı [ 0.0 ] Min. regresyon süresi [ 0.0 ] Integral alan [ 0 ] Upper max. eval. offset [ 0.0 ] Variable start of eval. Küvet kontaminasyonu [ ] Dilüsyon probu kontaminasyonu [ ] Küvet yıkama yoğunluğu [ 500 ] Dilüsyon probu durulama yoğunluğu [ 100 ] Teknik parametreler Transfer aşaması 1. Transfer Aşamalarının sayısı Transfer kolu [ Sağ ] Yıkama Program no. [ 1 ] Prob temizleme yoğunluğu [ ] Prob durulama yoğunluğu [ 100 ] Sistem sıvısı [ Seyreltici ] Hacim [ µl ] [ 50 ] Dağıtma program no. [4] [ Reaktif ] [ Reaktif ] [ KF SRP ] Hacim [ µl ] [ 20 ] Dağıtma program no. [2] [ Örnek ] [ Reaktif ] [ ] Hacim[ µl ] [ 80 ] Dağıtma program no. [2] [ ] [Reaktif ] [ ]Hacim [ µl ] [ 0 ] Dağıtma program no. [1] [ ] [Reaktif ] [ ]Hacim [ µl ] [ 0 ] Dağıtma program no. [1] Hedef Karıştırma [ sn ] [ 0.0 ] Dağıtma program no. [7] Öninkübasyon Minimum [ 0 ] Maksimum [0] Bu transfer aşamasından sonra ölçümü başlatın Transfer aşaması 2. Transfer Aşamalarının sayısı Transfer kolu [ Sol ] Yıkama Program no. [ 1 ] Prob temizleme yoğunluğu [ ] Prob durulama yoğunluğu [ 100 ] Sistem sıvısı [ Seyreltici ] Hacim [ µl ] [ 50 ] Dağıtma program no. [1] [Reaktif ] [ Reaktif ] [ KF ] Hacim [ µl ] [ 40 ] Dağıtma program no. [2] Hedef Karıştırma [ sn ] [ 0.6 ] Dağıtma program no. [1] Öninkübasyon Minimum [ 0 ] Maksimum [0] Bu transfer aşamasından sonra ölçümü başlatın Yeni bir standart BS Kappa Free Std ismi ile ayarlanmalıdır Tanım Standart Standart ismi üstüne çift tıklayın ve aşağıdaki detayları girin: İsim [ BS Kappa Free Std ] Tanım [ 1309 ] Sona erme [ dk ] [ 60 ] Şişe boyutu [ 2mL ] Kalibratör ismi ve Kappa Free nin kesişiminde bir X ile alan üstüne çift tıklayın ve aşağıdaki detayları girin: Eğri üstündeki noktalar [ 6 ] sıfır kalibratör ile Start dilüsyon [ 1:10 ] Tanım [ ] Ekstrapolasyon Değer [ 0 ] bits İzin verilen sapma [ 7 ] % Aşağıdaki gibi yeni kontroller ayarlayın: Tanım Kontrol Kontrol ismi üstüne çift tıklayın: İsim [ Kappa Free High ] İsim [ Kappa Free ] Tanım [ 1320 ] Tanım [ 1322 ] Sona erme [ dk ] [ 60 ] Sona erme [ dk ] [ ] Şişe boyutu [ 2mL ] 60 Şişe boyutu [ 2mL ] Kontrol ismi ve Kappa Free nin kesişiminde alan üstüne çift tıklayın ve İzin verilen Sapma alanında % 20 girin. Insert Code: SIN055, Version: 14 th June 2013, Page 3 of 17

4 8.4.2 Kalibratör değeri girmek için Kalibratör ve Standart lotları üstüne tıklayın. Kullanıcı ilgili testi göremiyorsa görünene kadar ekran boyunca ilerleyin. Sol el kolonundaki kalibratör ismine çift tıklayın. Testin kalibratörü için lot numarası gibi barkodun 5 th ve 6 th numaralarını girin Kalibratör değerini (ilişikteki Ürün Veri kağıdından SIN055.DS) nominal değer alanına girin. Continue tıklayın ve ekrandan çıkmak için Save tıklayın Barkodlu reaktif grup numaralarını girmek için Kalibrasyon ve Reaktif üstüne tıklayın ve her reaktif için barkodun 5 th ve 6 th numaralarını girin ve Save butonuna tıklayın. Bunların analizörün girilen grup numarasını kontrol etmesinden itibaren girilmesi önemlidir Kontrol değerlerini girmek için Kalibrasyon ve Kontrol lotları üstüne tıklayın. Kullanıcı ilgili testi göremiyorsa, görünene kadar ekran boyunca ilerleyin. Sol el kolonundaki kontrol ismine çift tıklayın. Kontrol için lot numarası gibi barkodun 5 th ve 6 th numaralarını girin Kontrol değerini (ilişikteki Ürün veri kağıdından SIN055.DS) Nominal Value alanına girin. Continue tıklayın ve ekrandan çıkmak için Save tıklayın Test çalışma Kalibrasyon ve Referans eğrisi üstüne tıklayarak ve listeden testleri seçerek kalibrasyon isteyin. Her seçimden sonra Measure butonuna tıklayın. NB: Seçilen reaktif grup numaralarının doğru olmasını sağlamak için özel önem verilmelidir Kalibratör ve kontroller kullanıma hazır sağlanır. Kullanımdan hemen önce ters çevirme ile hafifçe karıştırın Reaktifleri raklara yerleştirin. Reaktifler 3-5 şeridine yerleştirilmelidir (Kılavuz 3 sayfa 40 bakın). Doğru örnek/reaktif aspirasyonuna müdahale edebileceğinden yüzeyde kabarcıklar veya köpük bulunan reaktifleri yüklemeyin Kalibratörleri ve kontrolleri şerit 6-9 içindeki raka yerleştirin Routine menüsündeki Request Controls üstüne tıklayarak kontrolleri isteyin. Kappa Free kontrolleri ve testin kesişiminde X üstüne tıklayın. Measure üstüne tıklayın Ölçüm aralığı Tüm örnekler ilk olarak standart 1/100 örnek dilüsyonunda test edilmelidir, yaklaşık ölçüm aralığı mg/L vererek. Bu neat idrar örneklerinde 1/5 örnek dilüsyonu ve 0.06mg/L kullanılarak serum örneklerinde 0.3mg/L duyarlılık sağlar. Spesifik olmayan çökelme yapay olarak arttırılmış veya flagged sonuçlar vererek neat serum testleriyle oluşabilir. Genel analizör dilüsyonu Yaklaşık aralık (mg/l) 1/1 (Urine only) / / / / / / KALİTE KONTROL Sağlanan kontroller yapılan tüm test çalışmalarında olmalıdır. Kappa free konsantrasyonu ilişikteki Ürün Veri Kağıdında (SIN055.DS) belirtilir. Çalışma esnasında elde edilen sonuçlar sadece elde edilen kontrol sonuçları belirtilen konsantrasyonların %±20 içindeyse kabul edilmelidir. Saklı eğri ile test edildiğinde kontrol ölçümü aralık dışıysa test tekrar kalibre edilmelidir. Eğer tekrar kalibrasyonda yeni eğri ile ölçülen kontrol değerleri hala aralık dışıysa, testi tekrarlamadan önce cihaz ve test parametreleri kontrol edilmelidir. Sorunlar sürerse, tedarikçiye başvurun 10 SINIRLAMALAR 10.1 Nefelometrik testler derecede lipemik veya hemolize olmuş örnekler veya seviyede dolaşan immun kompleksler (CICs) içeren örneklerin, bu örnek tiplerinin oluşturabileceği spesik olmayan dağılımın öngörülemeyen derecesinden dolayı ölçümü için uygun değildir. Beklenmeyen sonuçlar alternatif test yöntemi kullanılarak onaylanmalıdır Sadece free hafif zincir ölçümlerine dayanarak tanı yapılamaz ve tedavi verilmemelidir. Klinik geçmiş ve diğer laboratuvar bulguları dikkate alınmalıdır Antijen fazlalığı: Free veya free lambdanın konsantrasyonlarını içeren hasta örneklerinin küçük bir bölümü antijen fazlalığından dolayı involved hafif zincir için yanlışlıkla düşük sonuç verebilir. Bağımsız bir B hücre klonu tarafından üretilen hafif zincirin aminoasit bileşimi Freelite test ile örneğin antijen fazlalığı gösterebileceği seviyede etkileyecektir. Hemen hemen her durumda ilgili hafif zincirin konsantrasyonu hala quoted normal aralığın üstünde olacaktır (free için mg/L ve free lambda için mg/L) ve/veya karşıt hafif zincir konsantrasyonu quoted aralığın altında olacaktır ve/veya free /free lambda oranı quoted aralığın dışında olacaktır ( ). Örnekler, aşağıdaki durumlardan herhangi biri ile karşılaşılırsa antijen fazlalığını tespit etmek için 1/100 ve 1/2000 dilüsyonun ikisindede test edilmelidir: a) free hafif zincir konsantrasyonu veya free /free lambda oranını quoted aralığın dışında gösteriyorsa, b) Önceden antijen fazlalığı göstermiş bir hastaya ait örnek, veya c) diğer klinik veya laboratuvar bulgularıyla uyuşmayan örnek sonucu Her monoklonal FLC özgün amino asit kombinasyonları içerir. Bu nedenle beklenenin altında ölçümlere yol açarak immunoassay tarafından saptanamayan olmak için belli monoklonal proteinler için teorik olarak mümkündür. Özellikle bu Freelite test ile son derece nadiren oluşur. Şüpheli örnekler önce antijen fazlalığı için test edilmeli (yukarıda kısım 10.3 bakın) daha sonra diğer laboratuvar yöntemleri ile incelenmelidir (immunofixation ve serum protein elektroforez) Monoklonal proteinlerin doğası potansiyel olarak tutarsız sonuçlara yol açarak immunoassaylerde doğrusal olmayan yanıta sebep olabilir; bu örnekleri her zaman 1/100, 1/400, 1/2000, 1/8000 sırada test ederek önlenebilir. Bir dilüsyon aşamasının atlanılmasından kaçınılmalıdır Monoklonal proteinlerin çok değişken doğasından dolayı, farklı reaktif grupları bazı hasta örneklerinde epitoplar için farklı tepkiyebilir. Bu durumlarda örnek sonuçları multiple gruplar kullanılarak test edildiğinde değişebilir. Çoklu reaktif lotları karşısında hastalar izlenirken dikkat edilmelidir. Mümkün olan her durumda önceki ve şimdiki örneklerin yeni reaktif lotlarında test edilmesini ve sonuçların kıyaslanmasını öneririz. 11 BEKLENEN DEĞERLER Sağlanan aralıklar sınırlı sayıda örnekten elde edilmiştir ve sadece rehberlik amaçlı tasarlanmıştır. Mümkün olan her durumda yerel aralıkların oluşturulması şiddetle önerilir Yetişkin serum aralıkları Bu aralıklar 282 normal yetişkin serumun hafif zincir konsantrasyonları ölçülerek elde edildi. Testler Mayo Klinikte yapıldı, Rochester, MN, USA (11). Normal yetişkin serum Ortalama kons. Medyan kons. 95 Yüzdelik aralık Free 8.36 (mg/l) 7.30 (mg/l) (mg/l) Free lambda (mg/l) (mg/l) (mg/l) Ortalama Medyan Toplam aralık Kappa/Lambda oranı Normal idrar aralıkları Bu aralıklar 29 sağlıklı yetişkin donörden sağlanan idrarların hafif zincir konsantrasyonları ölçülerek elde edildi. Normal yetişkin idrar Ortalama kons. Medyan kons. 95 Yüzdelik aralık Free 7.97 (mg/l) 4.27 (mg/l) (mg/l) Free lambda 1.66 (mg/l) 0.98 (mg/l) (mg/l) Ortalama Medyan 95 Yüzdelik aralık Kappa/Lambda oranı PERFORMANS ÖZELLİKLERİ 12.1 Çalışma içi hassasiyet Farklı seviyelerde free içeren üç serum hazırlığı test edildi. Verilen her değer aynı test çalışmasında yapılan 10 ölçümden hesaplandı. Tüm konsantrasyonlar mg/l dir. Serum 1 Serum 2 Serum 3 Ortalama CV% Çalışma arası hassasiyet Farklı seviyelerde free içeren üç serum hazırlığı tek bir gruptan kitler kullanılarak 10 ayrı test çalışmasında test edildi. Tüm konsantrasyonlar mg/l dir. Serum 1 Serum 2 Serum 3 Ortalama CV% Özgüllük Bu testin özgüllüğü saflaştırılmış tam immünoglobulinlerin ölçülmesiyle gösterilmiştir (IgG, IgA ve IgM). Her durumda çapraz reaktivite çok azdı (<0.4%) (6) Doğrusallık Bu testin doğrusallığı seri olarak seyreltilmiş serum örneği kullanılarak onaylandı, regresyon plot y = 0.98x (mg/l) verdi, r = 0.99 (y = ölçülen free konsantrasyonu, x = teorik konsantrasyon) Müdahale 200mg/L bilirubin (-6.2%), 5g/L hemoglobin (+7.8%) ve (1930 formazine turbidity birimler) chyle (-5.8%) ile minimal test müdahalesi 40mg/L free kontrol serumu kullanılarak gösterildi Kıyaslama Serum: 54 serum (10 normal, 44 bilinen multiple myeloma veya amyloid hastalarından) Freelite BN II ve lambda kitleriyle ve ticari olarak mevcut immunofixation elektroforez (IFE) kitlerinde test edildi. Klinik örnekler ABD de major bağımsız referans merkezinde test edildi. Free Normal serum (10) Freelite sonuçlar Free Free lambda κ/λ oranı 9 normal 1 borderline Özet IFE sonuçları Myeloma/ 12 normal 24 monoklonal amyloid serum düşük (24) Myeloma/ 10 normal amyloid serum 10 düşük (20) monoklonal 20 düşük 5 normal lambda 19-24* monoklonal. bant gösterir 12-14* monoklonal bant gösterir * Metod bağlı Tüm anormal serum hafif zincir konsantrasyonları daha az duyarlı IFE yöntemleri ile bazıları kaçırılmışken Freelite testleriyle tespit edildi. İdrarlar: 28 idrar (9 normal, 19 bilinen/şüpheli myeloma hastalarından) Freelite ve lambda kitleriyle ve ticari olarak mevcut immunofixation elektroforez (IFE) metodunda test edildi. Normal idrar (10) Kappa myeloma idrar (9) Lambda myeloma idrar(10) Free 8 normal 2 borderline 9 Freelite sonuçlar Free Free lambda κ/λ oranı 5 normal 9 normal 5 borderline 1 borderline 3 6 borderline 8 1 normal Özet IFE sonuçları 9 monoklonal 7 10 monoklonal düşük 3 normal lambda 9 monoklonal bant(lar) gösterir 10 monoklonal bant gösterir Tüm anormal idrar hafif zincir konsantrasyonları Freelite ve IFE testlerinin ikisiyle tespit edildi Klinik çalışmalar Bu kit ve Binding Site s Freelite IMMAGE kitleriyle klinik çalışmalar artan free hafif zincir konsantrasyonlarının mevcut IFE testleriyle elde edilebilir çok daha büyük bir duyarlılıkla multiple myeloma and SLE de güvenilir biçimde ölçülebildiğini gösterdi (5). Diğer çalışmalar nonsecretory myeloma tanısında ve izlenmesinde Freelite testinin yararlılığını göstermiştir (4). *IMMAGE Beckman Instruments Inc. tescilli markasıdır, Brea, California, USA. Insert Code: SIN055, Version: 14 th June 2013, Page 4 of 17

5 13 BİBLİYOGRAFİ 1. Cole PW, Durie BGM, Salmon SE. (1978) Immunoquantitation of free light chain immunoglobulins: Application in multiple myeloma. J. Immunol. Meth. 19: Pescali E, Pezozoli A, (1988) The clinical spectrum of pure Bence-Jones proteinuria. Cancer 61: Solling K, Solling J, Romer FK. (1981) Free light chains of immunoglobulins in serum from patients with rheumatoid arthritis, sarcoidosis, chronic infections and pulmonary cancer. Acta. Med. Scand. 209: Drayson MT, Tang LX, Drew R, Mead GP, Carr-Smith HD and Bradwell AR. (2001). Serum free light chain measurements for identifying and monitoring patients with non-secretory multiple myeloma. Blood 97: Bradwell AR, Carr-Smith HD, Mead GP, Tang LX, Showell PJ, Drayson MT and Drew RJ (2001). Highly sensitive, automated immunoassay for immunoglobulin free light chains in serum and urine. Clin. Chem. 47:4, Tang LX, Showell P, Carr-Smith HD, Mead GP, Drew R and Bradwell AR (2000). Evaluation of F(ab )2-based, latex-enhanced nephelometric reagents for free immunoglobulin light chains on the Behring Nephelometer TM II. Clin. Chem 46:6, Suppl. 2000, 705, pa Bradwell AR, Carr-Smith HD, Mead GP, Harvey TC and Drayson MT. (2003) Serum test for assessment of patients with Bence Jones myeloma. Lancet 361: Abraham RS, Katzman JA, Clark RJ, Bradwell AR, Kyle RA and Gertz MA (2003). Quantitative Analysis of Serum Free Light Chains: A new marker for the diagnostic evaluation of primary systemic amyloidosis. Am. J. Clin. Pathol. 119: (2): Lachmann HJ, Gallimore JR, Gillmore JD, Carr-Smith HD, Bradwell AR, Pepys MB and Hawkins PN (2003). Outcome in systemic AL amyloidosis in relation to changes in concentration of circulating immunoglobulin free light chains following chemotherapy. Brit. J.Haem. 122: Bradwell AR, Carr-Smith HD, Mead GP and Drayson MT (2002) Serum free light chain immunoassays and their clinical application. Clinical and Applied Immunology Reviews 3: Katzmann JA, Clark RJ, Abraham RS, Bryant S, Lymp JF, Bradwell, AR and Kyle RA. (2002) Serum reference intervals and diagnostic ranges for free and free lambda immunoglobulin light chains: relative sensitivity for detection of monoclonal light chains. Clin. Chem. 48: Bradwell AR (2009). Serum Free Light Chain Analysis, 5 th Edition. Publ. The Binding Site Ltd, Birmingham, UK. 13. Mead GP, Carr-Smith HD, Drayson MT, Morgan GJ, Child JA and Bradwell AR (2004). Serum free light chains for monitoring multiple myeloma. Brit. J. Heamatol. 126, Insert Code: SIN055, Version: 14 th June 2013, Page 5 of 17