İÇERİK LİSTESİ PROJENİN AMACI

Transkript

1 0

2 İÇERİK LİSTESİ PROJENİN AMACI... 2 GİRİŞ.. 3 YÖNTEM. 5 Reaktif ve çözeltiler... 5 Kullanılan aletler... 6 Biyosensörün Hazırlanışı Ölçüm Prensibi SONUÇLAR VE TARTIŞMA... 8 Biyosensörün analitik karakteristiği 8 Örnek uygulama Biyoaktif tabakanın optimizasyonu. 11 Çalışma koşullarının optimizasyonu.. 14 DEĞERLENDİRME.. 17 TEŞEKKÜR 17 KAYNAKLAR 18 1

3 PROJENİN AMACI Canlıların vücut sıvılarında bulunan maddelerin ve bu maddelerin derişimlerindeki değişimlerin, bazı hastalıkların sonucu olarak ortaya çıkan ya da hastalık nedeniyle derişim düzeylerindeki değişmelerin doğru ve hızlı bir biçimde ölçülmesi teşhis ve tedavi sürecini etkileyeceğinden sağlık açısından büyük önem taşımaktadır. Biyosensörler, analitik cihazların hassasiyetini biyomoleküllerin (enzim, hücre, doku, antikor, mikroorganizma vb.) yüksek spesifikliği ile birleştirerek kısa sürede ve hızlı, tekrarlanabilir, ekonomik ölçüm sistemleri olarak geliştirilen biyoteknolojik ürünlerdir. Tüm bu özelliklerinden dolayı biyosensörler gıda, savunma ve çevre endüstrisi ile özellikle hastalıkların erken teşhisi ve tedavisi açısından klinik sektörde çok önemli bir yere ve uygulama alanlarına sahiptir[1,2]. Adrenalin veya diğer bilinen adıyla epinefrin [1-(3,4-dihidroksifenol)-2-metilaminoetanol] büyük organik katyonlar formunda vücut sıvısı ve sinir dokularında bulunan memeli merkezi sinir sistemindeki önemli bir nörötransmitterdir[3,4]. Biyosentezi adrenal medulla ve sempatik sinir terminallerinde gerçekleşen bu bileşik, biyolojik reaksiyonlar serisi için merkezi sinir sisteminin performansı ve sinirlerin kimyasal prosesleri için merkezi sinir sistemini kontrol eder. Bu maddenin derişim değişimi birçok hastalıkla sonuçlanabilir. Ayrıca sağlık açısından epinefrin acil sağlık ilacı olarak yaygın olarak kullanılmaktadır. Bu nedenle epinefrinin hızlı ve spesifik bir şekilde tayini araştırmacıların ilgisini çekmiştir [5,6,7]. Günümüzde adrenalin tayinine yönelik çeşitli yöntemler geliştirilmiştir; fakat bunların çoğu pahalı, zaman alıcı, her laboratuvar şartlarına uydurulamayan ve pratik olmayan uygulamalardır. Bu projenin amacı; özellikle bazı hastalıkların teşhis ve tedavisinde tayini büyük önem taşıyan adrenalinin hızlı, spesifik, hassas ve tekrarlanabilir düzeyde tayinine yönelik olarak 2

4 elma (malus domestıca) doku homojenatı temelli ve amperometrik esaslı bir biyosensör geliştirmektir. GİRİŞ Sinir doku ve biyolojik vücut sıvılarında organik katyon formunda bulunan dopamin ve epinefrin gibi katekolaminler memeli merkezi sinir sisteminde mesaj transferi için önemli bileşiklerdendir. Bunlar canlı sistemlerde fizyolojik proseslerin düzenlenmesinde önemli rol oynarlar. Katekolaminlerin ve bunların metabolitlerinin plazma derişimleri psikiyatrik, nörolojik ve kardiyovasküler hastalıkların değerlendirilmesi ve tedavisi için çok önemlidir. Birçok hastalık bunların derişim değişimiyle ilişkilidir. Vücut sıvılarındaki katekolamin düzeylerindeki büyük değişimler parkinson gibi birçok hastalığın belirtisidir [8,9]. Ayrıca katekolamin ilaçları anafilaktik şok, bronşiyal astım ve organik kalp hastalıklarının tedavisinde kullanılmaktadır. Dolayısıyla bunların kontrollü tayini sinir fizyolojisinin gelişimi, teşhisi ve ilaçların kontrolünde önemlidir [10]. Genel anlamda biyosensörler, biyoloji, fizik, kimya, biyokimya, mühendislik gibi pek çok bilim alanının bilgi birikiminden yararlanarak, biyolojik moleküllerin veya sistemlerin seçimlilik özellikleri ile modern elektronik tekniklerin işlem yeteneğinin birleştirilmesiyle geliştirilen biyoanalitik cihazlar olarak tanımlanabilir. Biyosensörler, genel olarak analizlenecek madde ile seçimli bir şekilde etkileşime giren biyoaktif bir bileşenin, bu etkileşim sonucu ortaya çıkan sinyali ileten bir iletici sistemle birleştirilmesi ve bunların bir ölçüm sistemiyle kombinasyonuyla (şekil:1) oluşturulurlar. Sistemin özelliğine bağlı olarak yükseltici, mikroişlemci, dijital görüntüleyici gibi kısımlar sistem içinde yer alabilir [11]. 3

5 Şekil 1: Bir biyosensörün genel şematik gösterimi Epinefrin tayini için HPLC [2,12 ], kapiller elektroforezi[13] akış enjeksiyon[5,14,15], floresans [16], optik fiber biyosensörü [17] gibi çeşitli yöntemler geliştirilmiştir. Ayrıca epinefrin tayini için kimyasal modifiye elektrotlar da geliştirilmiştir. (Bunlara örnek olarak politaurin modifiyeli camsı karbon elektrot [4], 2,3-dimerkaptosüksinik asit kendiliğinden oluşan tek tabakalı altın elektrot [18], demir fitalosiyanin modifiyeli karbon pasta elektrot [6], triazo-sam modifiyeli altın elektrot [9], ozmiyum kompleks ve nafyon çift tabakalı membran modifiye elektrot [8], nano-au-kendiliğinden oluşan camsı karbon elektrot [4], cafeik asit modifiyeli camsı karbon elektrot [7] verilebilir.) Ancak bunlar ya pahalı ya da pratik olmayan uygulamalardır. Herhangi bir maddenin tayini amacıyla geliştirilen yöntemlerin yüksek duyarlılıkta, ekonomik ve kolay elde edilebilir olması tercih nedenidir. Bu projede farmakolojik örneklerdeki adrenalin tayini için yeni bir biyosensör önerilmiştir. Geliştirilen biyosensörde elmada bulunan polifenol oksidaz enzimi primer ürün olarak epinefrinin epinefrinokinona oksidasyonunu katalizlemektedir. Bu ürün daha sonra elektrokimyasal olarak elektrot yüzeyinde indirgenerek adrenalin tayininde kullanılan akım farkı oluşturmaktadır. 4

6 Epinefrinin oksidasyonu Çalışmamızda adrenalinin daha duyarlı tayini için geliştirilen biyosensörün çalışma koşullarının optimizasyonu belirlenmiş ve karakterizasyonu yapılmıştır. Ucuz, kolay elde edilebilir bu biyosensörle düşük epinefrin derişimlerine duyarlı başarılı bir tayin gerçekleştirilmiştir. YÖNTEM Reaktif ve çözeltiler Enzim kaynağı olarak (polifenol oksidaz) kullanılan elmalar marketten temin edilmiştir. Epinefrin, p-benzokinon, jelatin, glutaraldehit, potasyum fosfat monobazik, L-dopa, dopamin, askorbik asit, fenol, D-glukoz, L-tirozin Sigma firmasından temin edilmiştir. hazırlanmıştır: Denemelerde kullanılan çözeltilerin hepsi denemelerden hemen önce taze olarak - Kalibrasyon grafiği oluşturmak için başlangıçta 5 mm 50 ml epinefrin stok çözeltisi hazırlanmıştır. Daha sonra kalibrasyon çözeltileri bu stok çözeltiden ph:7 fosfat tamponuyla seyreltilerek hazırlanmıştır mm p-benzokinon içeren ph:7 fosfat tamponu.(5 dak. azot gazından geçirilmiş). 5

7 Kullanılan aletler PalmSens Potansiyostat: Denemeler PalmSens potansiyostat kullanılarak üçlü elektrot sistemiyle (a CHI 104 model Camsı Karbon çalışma elektrotu, a CHI 111 model Ag/AgCl doygun referans elektrot, a CHI 115 platin tel çalışma elektrotu) gerçekleştirilmiştir. Termostat: Denemelerde sıcaklığı dengede tutmak için Lauda model termostat kullanılmıştır. Karıştırıcı: Karıştırma işlemleri IKA marka karıştırıcıda 150 rpm hızla gerçekleştirilmiştir. Biyosensörün Hazırlanışı Çalışma Elektrotunun Temizlik İşlemi: Kaplama öncesi çalışma elektrotunun yüzeyi alümina tozu ile mikrofiber bez üzerinde temizlenmiştir. Daha sonra elektrot adsorbe partiküllerin uzaklaştırılması için sırası ile etanol ve distile suda 10 dakika sonikasyona tabi tutulmuştur. Daha sonra elektrot 0,1M HCl de 0,05 Vs -1 tarama hızında -1 V ve +1 V arasında 10 döngüsel voltamogramlar alınarak elektrokimyasal olarak temizlenmiştir. Biyoaktif Tabakanın Hazırlanışı: Öncelikle kabuğu ince olarak soyulan elmadan 12,5 mg lık bir parça tartılarak 0,4 ml ph:7 fosfat tamponuyla ependorf tüpü içerisinde cam çubuk ile homojenize edilmiştir. Homojenizatın 0,3 ml si içerisinde 10 mg jelatin bulunan ependorf tüpüne aktarılarak 38 0 C de 15 dakika sıcak su banyosuna konulmuştur. Sonra tüp karıştırılarak mikropipet ile 50μl si elektrot yüzeyine yayılıp +4 0 C de 30 dakika bekletilmiştir. Daha sonra elektrot %2,5 luk glutaraldehit çözeltisine 4 dakika boyunca daldırılıp çıkartılarak çapraz bağlama gerçekleştirilmiştir ve glutaraldehitin fazlasını uzaklaştırmak için elektrot saf su ile yıkanarak ölçüme hazır hale getirilmiştir. Ölçüm Prensibi Amperometri genel anlamda belli bir potansiyeldeki akım şiddetinin ölçümünü esas alır. Söz konusu akım yoğunluğu çalışma elektrotunda yükseltgenen ya da indirgenen elektroaktif 6

8 türlerin derişiminin bir fonksiyonu olarak tanımlanır. İkinci elektrot referans elektrot olarak iş görür. Kalibrasyondan sonra, akım yoğunluklarından ilgili türlerin derişimlerinin belirlenmesinde yararlanılır. Ölçümün prensibi döngüsel voltametri metodu kullanılarak p-benzokinonun +430 mv ta indirgenme potansiyelindeki akım artışının izlenmesine dayanmaktadır. Döngüsel voltamogramlar 50 mv/s hızla 0,1 V ile 0,9 V arasında alınmıştır ve biyosensör cevabındaki akım artışı ile polifenol oksidaz enzim aktivitesi arasındaki ilişki gözlenmiştir.(şekil 2) Ölçüm prensibinin dayandığı reaksiyonun şematik gösterimi Mavi:yalın elektrot Kırmızı:immobilizasyon sonrası Yeşil:immobilizasyon sonrası mediyatörlü Sarı:150µM EP Mor:150µM EP mediyatörlü Mavi: Yalın elektrot Sarı:150 μm EP Kırmızı: İmmobilizasyon sonrası Mor:150 μm EP mediyatörlü Yeşil: İmmobilizasyon sonrası mediyatörlü Şekil 2: 50 mm ph:7 fosfat tamponunda elde edilen yalın elektrot, immobilizasyon sonrası ve 150 μm epinefrin için elde edilen döngüsel voltamogramlar. 7

9 SONUÇLAR VE TARTIŞMA BİYOSENSÖRÜN ANALİTİK KARAKTERİSTİĞİ Biyosensörün Doğrusal Tayin Aralığı Geliştirilen biyosensör ile 25 ile 200 μ M derişim aralığında epinefrin için doğrusal cevaplar alınmıştır. CV ve DP ölçümleri sonucu elde edilen standart grafikler Şekil 3 ve Şekil 5 de gösterilmiştir. ΔI(µA) ΔI(µA) Epinefrin(µM) Epinefrin(µM) Şekil 3: Siklik voltametri ile elde edilen standart grafiği (denemeler 0.5 mm benzokinon içeren 50 mm ph 7 fosfat tamponunda 35 o C de gerçekleştirilmiştir). Şekil 5: Diferansiyelpuls ile elde edilen standart grafiği (denemeler 0,5mM benzokinon içeren 50 mm ph 7 fosfat tamponunda 35 o C de gerçekleştirilmiştir). Şekil 4: Standart grafiği denemesinde elde edilen döngüsel voltamogramlar. Aşağıdan yukarı sırasıyla 25, 50, 75, 100, 125, 150, 175, 200 μm epinefrin. 8

10 Şekil 6: Standart grafiği denemesinde elde edilen diferansiyel pulse eğrileri. Aşağıdan yukarı sırasıyla 25, 50, 75, 100, 125, 150, 175, 200 μm epinefrin. Tekrarlanabilirlik Biyosensörün tekrarlanabilirlik denemeleri 100μM epinefrin çözeltisi için (n=10) gerçekleştirilmiştir. Denemeler sonucu elde edilen ortalama değer, standart sapma ve yüzde varyasyon katsayısı değerleri tabloda gösterilmiştir. Ortalama değer (μm) Standart Sapma Yüzde Varyasyon Katsayısı EPİNEFRİN 99,89 ±2,186 2,189 Tablo 1: Ortalama değer (x), standart sapma (S.D), ve varyasyon katsayısı (C.V %). Substrat Spesifikliği ve Girişim Etkisi Elma doku homojenatı temelli biyosensörün substrat seçimliliğinin belirlenmesi için askorbik asit, L-dopa, dopamin, fenol, D-glukoz, L-tirozin gibi çeşitli bileşiklerin 100 μm lık standartları incelenmiştir. Adrenalin için elde edilen cevabı %100 olarak kabul edilip diğer maddeler için elde edilen biyosensör cevabıyla karşılaştırılmıştır. Denemeler sonucunda 9

11 geliştirilen biyosensör bu maddeler için farklı cevaplar verilmiştir; ancak en iyi ve en yüksek cevap adrenalin için elde edilmiştir. (Şekil:7) Biyosensörün substrat spesifikliği belirlendikten sonra bu maddelerin epinefrin tayini üzerine girişim etkileri incelenmiştir. Bu amaçla epinefrinle eşit derişimdeki bu maddeler epinefrin varlığında test edilmiştir. Bu denemenin ana amacı söz konusu maddelerin epinefrinle birlikteyken biyosensör cevabına girişim etkisi gösterseler de tayin yapılabileceğini göstermektir.(şekil 8) Şekil 7: Biyosensörün substrat spesifikliği. (Denemeler 100 μm lık örnekler için 0,5 mm benzokinon içeren 50 mm ph=7 fosfat tamponunda 35 o C de gerçekleştirilmiştir). Şekil 8: Biyosensörün epinefrin cevabına girişim etkisi (Denemeler 100 μm l ık örnekler için 0,5 mm benzokinon içeren 50 mm ph 7 fosfat tamponunda 35 o C de gerçekleştirilmiştir). ÖRNEK UYGULAMA Geliştirilen biyosensör Drogsan ilaç sanayi ve Biofarma ilaç sanayiden temin edilen adrenalin ampullerindeki epinefrin konsantrasyonunun belirlenmesinde kullanıldı. Bu sebeple seyreltilen örneklerdeki epinefrin miktarı geliştirilen biyosensörle tayin edildi. Biyosensörle elde edilen sonuçların karşılaştırılması için aynı örneklerdeki epinefrin konsantrasyonu spektrofotometrik metot kullanılarak tayin edildi. Denemelerden elde edilen sonuçlar Tablo 2 de gösterilmiştir. Tablo da görüldüğü gibi geliştirilen biyosensörle elde edilen sonuçlar örneklerin orijinal içeriklerinden 5,87-3,68 % küçük çıkmıştır. Bu sonuçlar doğrultusunda 10

12 geliştirilen biyosensörün hiçbir ön işlem, ayırma yada türevlendirme gerektirmeden farmakolojik örneklerdeki epinefrin konsantrasyonunun direkt tayini için uygun bir sistem olduğunu söyleyebiliriz. Örnek konsantrasyonu Spektrofotometrik metot (mm) Biyosensör (mm) Dönüşüm oranı Drogsan İlaç San. 1,4 1,36 1,31 94,13% Biofarma İlaç San. 2,8 2,73 2,57 96,32% Tablo 2: Farmakolojik örneklerdeki epinefrin konsantrasyonunun belirlenmesi Resim 1: Örnek uygulama işlemi BİYOAKTİF TABAKANIN OPTİMİZASYONU Elma miktarının biyosensör cevabına etkisi Elma miktarının biyosensör cevabı üzerine etkisinin belirlenmesi için jelatin (10 mg) ve glutaraldehit (%2,5) miktarı sabit tutulup farklı miktarlarda elma dokusu kullanılarak (7.5, 12.5, 25 mg) biyosensörler hazırlanmıştır. Denemelerden elde edilen sonuçlar Şekil 9 da gösterilmiştir. 11

13 Sonuçlar doğrultusunda biyosensör cevabı ile homojenat miktarı arasındaki en iyi ilişki ve aynı zamanda en uygun doğrusal grafik biyosensör yapımında 12,5 mg elma homojenatı kullanıldığında elde edilmiştir. Şekil 9: Elma miktarının biyosensör cevabı üzerine etkisi (Denemeler 0,5 mm benzokinon içeren 50 mm ph 7 fosfat tamponunda 35 o C de gerçekleştirilmiştir). Jelatin ve Glutaraldehit Miktarının Biyosensör Cevabı Üzerine Etkisi Homojenat miktarının biyosensör cevabı üzerine etkisi belirlendikten sonra, jelatin ve glutaraldehit miktarının biyosensör cevabı üzerine etkisi incelendi. Bu amaçla homojenat ve glutaraldehit miktarı sırasıyla 12,5 mg ve %2,5 ta sabit tutulup biyosensör yapımında farklı miktarlarda jelatin (5, 10, 15 mg) kullanıldı. Denemeler sonucunda en iyi biyosensör cevabı biyosensör yapımında 10 mg jelatin kullanıldığında elde edilmiştir. Denemelerden elde edilen sonuçlar Şekil 10 da gösterilmiştir. 10 mg jelatinin üzerinde ve altında biyosensör cevabında azalma gözlendi. Bu miktarın altında biyoaktif tabakada deformasyonlar oluşmuş ve üzerinde ise biyoaktif tabakada sterik engeller oluşmuştur. Söz konusu deformasyonlar sonucu biyoaktif tabakadan enzim kaçışları sebebiyle biyosensör cevabında azalma gözlenmiştir. Yine sterik engeller 12

14 sonucu substratın reaksiyon ortamından elektrot yüzeyine difüzyonu engellenmiş bunun sonucunda biyosensör cevabında düşme gözlenmiştir. Biosensör yapımında en iyi elma homojenat ve jelatin miktarının sırasıyla 12.5 mg ve 10 mg olduğu belirlendikten sonra glutaraldehit miktarının biyosensör cevabı üzerine etkisi belirlenmiştir. Bunun için elma homojenat miktarı ve jelatin miktarı sırasıyla 12.5 mg ve 10 mg da sabit tutulup yeni hazırlanan biyosensörler farklı glutaraldehit konsantrasyonlarıyla (%1, %2.5, %5) muamele edilmiştir. Denemelerden elde edilen sonuçlar Şekil 11 de gösterilmiştir. Şekilden en uygun biyosensör cevabının ve en iyi doğrusal grafiğin %2.5 lik glutaraldehit kullanıldığında elde edildiğini söyleyebiliriz. Glutaraldehit yüzdesi %1 e düşürüldüğünde biyosensör cevabında belirgin bir azalma gözlenmiştir. Jelatin ve bifonksiyonel reaktif glutaraldehit arasında çapraz bağların azalması biyoaktif tabakadan homojenat kaçışına neden olabilir. Biosensör yapımında %5 lik glutaraldehit kullanılması durumunda ise sık çapraz bağlanmalar sonucu difüzyon engelinin oluşması muhtemeldir. Şekil 10: Jelatin miktarının biyosensör cevabı üzerine etkisi (Denemeler 0,5 mm benzokinon içeren 50 mm ph 7 fosfat tamponunda 35 o C de gerçekleştirilmiştir). 13

15 Şekil 11: Glutaraldehit miktarının biyosensör cevabı üzerine etkisi. (Denemeler 0,5 mm benzokinon içeren 50 mm ph 7 fosfat tamponunda 35 o C de gerçekleştirilmiştir). ÇALIŞMA KOŞULLARININ OPTİMİZASYONU p-benzokinon Konsantrasyonunun Biyosensör Cevabı Üzerine Etkisi p-benzokinon konsantrasyonunun biyosensör cevabı üzerine etkisin incelenmesi için farklı konsantrasyonlarda p-benzokinon içeren (0,5-1-2 mm) tampon çözeltileri kullanıldı. Denemelerden elde edilen sonuçlar Şekil 12 de gösterilmiştir. Şekil 12: p-benzokinon derişiminin biyosensör cevabı üzerine etkisi (Denemeler 50 mm ph 7 fosfat tamponunda 35 o C de gerçekleştirilmiştir). 14

16 Tarama Hızının Biyosensör Cevabı Üzerine Etkisi Tarama hızının biyosensör cevabı üzerine etkisinin incelenmesi için V/s arasında ölçümler alındı. Denemelerden elde edilen sonuçlar Şekil 13 de gösterilmektedir. Şekil 13: Tarama hızının biyosensör cevabı üzerine etkisi. (Denemeler 0,5 mm benzokinon içeren 50 mm ph 7 fosfat tamponunda 35 o C de gerçekleştirilmiştir). Şekil 14: Biyosensör cevabı üzerine tarama hızı etkisi denemesinde elde edilen döngüsel voltamogramlar. Aşağıdan yukarı sırasıyla 10, 25, 50, 75, 100, 125, 150, 200 mv/s. 15

17 Biyosensör Cevabı Üzerine Sıcaklık Etkisi Biyosensör cevabı üzerine sıcaklık etkisinin incelenmesi için optimizasyon çalışmalarında elde edilen en iyi çalışma koşullarında 20,25,30,35,40,45 o C de 150 μm epinefrin için denemeler gerçekleştirildi. Denemelerden elde edilen sonuçlar Şekil 15 de gösterilmektedir. Sonuçlara göre en iyi biyosensör cevabı 35 o C de gözlenmiştir. Bu sıcaklığın altında ve üstünde biyosensör cevabında azalma gözlenmiştir. Biyosensör Cevabı Üzerine ph Etkisi Biyosensör çalışmalarında en iyi cevabın eldesinde ph en önemli parametrelerden biridir bu nedenle ph değerinin biyosensör cevabı üzerine etkisinin incelenmesi için farklı tampon sistemleri incelendi. Bu amaçla denemelerde 50 mm (ph 4,5-5-5,5) asetat, (ph 6-6,5) sitrat ve (ph 7-7,5-8) fosfat tamponu kullanıldı. Denemelerden elde edilen sonuçlar şekil 16 da gösterilmektedir. En yüksek biyosensör cevabının elde edildiği ph 7 optimum ph olarak seçildi. Şekil 15: Biyosensör cevabı üzerine sıcaklık etkisi(denemeler 150 mm epinefrin ile 0,5 mm benzokinon içeren 50 mm ph 7 fosfat tamponunda gerçekleştirilmiştir). DEĞERLENDİRME Şekil 16: Biyosensör cevabı üzerine ph etkisi(denemeler 150 mm epinefrin ile 0,5 mm benzokinon içeren 50 mm lık farklı tampon sistemlerinde 35 o C de gerçekleştirilmiştir). 16

18 DEĞERLENDİRME Adrenalin tayin edebilme yeteneğine sahip biyosensör metodu geliştirilmesi farmakolojik ürünlerdeki bu maddenin toplam miktarının belirlenmesinin çalışılmasında çok kullanışlı olacaktır. Bu çalışmada sunulan sonuçlar biyosensör oluşturulmasında bitki doku homojenatının camsı karbon elektrot üzerine başarılı bir biçimde uygulanabileceğini ve epinefrinin tayin edilebileceğini göstermiştir. Biyosensör pahalı olmayan ve ticari olarak uygun maddeler kullanılarak hazırlanmıştır ve çalışma sonucunda epinefrin tayininde başarılı bir performans göstermiştir. Elma doku homojenatı temelli bu biyosensör basitlik, hızlı kullanım gibi avantajlara sahiptir. Ölçümün toplam analiz süresi 30 saniye gibi kısa bir sürede gerçekleşmektedir. Metodu avantajlı kılan diğer bir parametre kullanılan immobilizasyon prosedürünün basit olmasıdır. Sonuç olarak biyoaktif materyalin immobilizasyonundaki kolaylık rutin analizlerde arzu edilen düşük maliyeti sebebiyle ekonomik avantaja sahiptir. Bu bakımdan tanımlanan sistem farmakolojik örneklerdeki epinefrinin tayininde basit ve düşük maliyetli bir metottur. TEŞEKKÜR Proje çalışmamız boyunca bilgi ve tecrübelerini esirgemediği ve bize inanıp destek verdiği için başta Ege Üniversitesi Fen Fakültesi Biyokimya Bölümü Öğretim Üyesi Doç. Dr. Erol AKYILMAZ a, deneysel çalışmalarda her konuda yardımlarını ve desteklerini esirgemeyen yüksek lisans öğrencisi Mehmet TÜREMİŞ ve kimya öğretmenlerimiz Rüçhan ÖZDAMAR ile Funda AKDOĞAN a, tüm eğitim hayatımız boyunca maddi ve manevi desteklerini hiç bir zaman esirgemeyen ailelerimize teşekkürü bir borç biliriz. 17

19 KAYNAKLAR 1.Akyılmaz E.,Dinçkaya E.;Talanta (2000) 2.Thevenot D.R.,Toth K.,Durst R.A.,Wılson G.S.;Pure Appl.Chem (1999). 3.An Ni J.,Xian ju H.,Yuan Chen H.,Leech D.;Analytica Chimica Acta (1999) 4.Yang Z.,Hu G.,Chen X.,Zhao J.,Zhao G.;Colloids and Surfaces (2007) 5.Felix F.S.,Yamashita M.,Angnes L.;Biosensors and Bioelectronics (2006) 6.Shakrokhian S.,Ghalkhani M.,Amini M.K.;Sensors and Actuators (2009) 7.Ren W.,Luo H.Q.,Li N.B.;Biosensors and Bioelectronics (2006) 8.Wang Y.,S.Fice D.,K.F. Yeung P.;Pharmmaceutical and Biomedical Analysis Xin Sun Y.,Fu Wang S.,Hua Zhang X.,Fang Huang Y.;Sensors and Actuators B 113, , Wang Y.,zhen Chen Z.;Colloids and Surfaces B:Biointerfaces 74, , Smart Biosensör Technology (Edited by George K. Knopf.,Amarjeet S. Bassı). 12.Carrera V.,Sabater E.,Vilanova E.,Sogorb M.A.;Journal of Chromatography B 847, 88-94, Chicharro M.,Sanchez A.,Zapardiel A.,Rubianes M.D.,Rivas G.;Analytica Chimica Acta 523, , Michalowski J.,Halaburda P.;Talanta 55, , Solich P.,Polydorou Ch. K.,Koupparis M.A.,Efstathiou C.E.;Pharmaceutical and Biomedical Analysis 22, , Fotopoulou M. A.,Ioannou P.C.;Analytica Chimica Acta 462, , Silva. L.I.B.,Ferreira F.D.P.,Freitas A.C.,Santos T. A. P. R.,Duarte A. C.;Talanta 80, , Kang W. J.,Niu L. M.,Ma L.;Chinese Chemical Letters 20, ,