En Muhtemel Sayı (EMS) Yöntemi ( 3 lü EMS)

Transkript

1 En Muhtemel Sayı (EMS) Yöntemi ( 3 lü EMS) Yöntemin prensibi ardıık 3 seyreltiden sıvı besiyerlerine ekim yapıp inkübasyon sonunda gelime olanları pozitif olarak deerlendirmek ve istatistik yöntemlerle elde edilmi tablolardan yararlanılarak örnekteki sayıyı hesaplamaktır. Yöntemin "En Muhtemel Sayı (Most Probable Number ; MPN) olarak adlandırılma nedeni yukarıda da belirtildii gibi örnekteki mikroorganizma sayısının istatistik ekilde elde edilmi tablolardan yararlanılarak hesaplanmasıdır. EMS yöntemi tüp dilüsyon yönteminin bir modifikasyonudur. Özellikle az sayıda (1 gramda 10' dan daha az) mikroorganizma içeren gıdaların mikrobiyel analizinde kullanılır. Yüksek sayıda mikroorganizma içeren gıdalarda EMS yöntemi ile sayım (eer zorunluk yoksa) önerilmemektedir. Simetrik ve asimetrik olarak tanımlanan 2 ekim yönteminden genellikle kullanılanı simetrik ekimdir. Simetrik ekimde ardıık seyreltilerden aynı sayıda besiyerine (çounlukla 3 'er tüp) ekim yapılırken, asimetrik olanda farklı seyreltilerden farklı sayıda tüplere ekim yapılır. Asimetrik ekim çok özel çalımalarda ve nadiren kullanıldıından EMS yöntemi denildiinde dorudan simetrik ekim anlaılır. EMS yönteminde ardıık 3 seyreltiden 3 'er tüpe ekim yapılması gıda mikrobiyolojisinde en yaygın uygulamadır. Seyreltilerden 5 'er ya da 10 'ar tüpe ekim yapılması da söz konusudur. Her seyreltiden ekim yapılan besiyeri sayısı arttıkça daha doru sonuç alınacaı açık olmakla ve güvenlik sınırları daralmakla beraber 3 tüp yöntemi ile yeterince tatminkar alınmaktadır. Ardıık 3 seyrelti yerine 4 hatta 5 seyreltiden ekim yapılması sayımda esas alınacak seyrelti serisinin seçilmesi açısından önemlidir ve bu konuda aaıda ayrıntılı bilgi verilmektedir. Ardıık 4 ya da 5 seyreltiden ekim aynı tüplerin hem koliform grup mikroorganizma hem de E. coli sayımında kullanılmasında eer koliform grup bakteri sayısı E. coli 'den çok fazla ise bir anlamda zorunluktur. Yöntemin uygulanıı basit olarak ardıık 3 seyreltiden 3 'er adet 10 ml besiyerine 1 'er ml ekim yapılması olarak tanımlanabilir. Gıda örnei sıvı ise orijinal örnekten (10 o seyrelti) ekime balanılabilir, böylelikle yöntemin duyarlıı 10 kez artırılmı olur. Katı gıdada ise en düük olarak 10-1, 10 2, 10-3 seyreltilerden 1 'er ml ekim yapılabilir. Katı gıdada aranacak bakteri sayısı 10-1 ' den yapılan ekimde dahi negatif sonuç alınacak kadar az ise ve sayım yapılması mutlak gerekli ise ; - Eer gıda toz veya granüler yapıda ise veya zarar vermeden basit bir ekilde toz veya granüler hale getirebiliyor ise (örnein baharatlar, sade bisküvi, galeta vb.) aseptik olarak tartılan 1 'er g örnek dorudan 10 'ar ml besiyerlerine aktarılır. Bir dier deyi ile sıvı gıdalarda olduu gibi 10 o seyreltiden ekime balanır, 10-1 ve 10-2 seyreltilerden de ekim yapılır. - Eer gıda yukarıdaki ekilde rahatlıkla 1 g olarak tartılamıyor ise standart 10 g + 90 ml eklinde homojenize edilir, 10-1 seyreltiden 10 ml hacım alındıında orijinal örnekten 1 g alınmı gibi olur. Burada dikkat edilmesi gereken husus 10 ml besiyerine 10 ml örnek aktarıldıında besiyerinin konsantrasyonunun yarı yarıya azalacaı, bunun önüne geçmek için balangıçta bu besiyerlerinin çift kuvvette (2 misli konsantrasyonda) hazırlanmasıdır. Örnein, koliform grup analizinde kullanılan LST Broth besiyeri normal olarak 35,5 g/l konsantrasyonda hazırlanır, 10 ml tüp içinde 0,355 g madde vardır. Çift kuvvetle hazırlanması gerektiinde balangıçta 71 g/l (0,71 g/10 ml) olarak hazırlanır, bunun üzerine 10 ml örnek konulduunda LST konsantrasyonu 0,71 g/10 ml 'den = 0,355 g/10 ml standart deere iner.

2 Kukusuz bu tip ekimler için yeteri büyüklükte tüp kullanılmalıdır. Bu ilem için daha doru olarak 10 'ar ml hacımlar, içlerinde 100 ' er ml standart besiyeri olan erlenlere aktarılmalıdır. EMS yönteminde ardıık seyreltilerden 3 'er besiyeri tüpüne ekim yapıldıktan sonra tüpler aranacak mikroorganizma için optimum sıcaklıkta ve gereken sürede inkübe edilir, bu sürenin sonunda her seyreltide kaç tüpte pozitif sonuç alındıı kaydedilir. Örnein sırasıyla 3, 2, 0 pozitif sonuç alındı ise EMS tablosundan bu deerin karılıı olan 93 sayısı elde edilir ve seyreltme dikkate alınarak EMS hesaplanır. Aaıda bu konuda ayrıntılı örnekler verilmitir. Tüplerin pozitif ya da negatif olduunun deerlendirilmesi aranan mikroorganizma ve buna balı olarak kullanılan besiyerine göre çok deiir. Bu deerlendirme basit olarak besiyerinde bulanıklık olması, durham tüpünde gaz birikmesi, besiyerinde renk deiimi, pıhtılama, floresan oluumu, tüpe inkübasyon öncesi ilave edilen katı parafin tabakasının yukarı itilmesi gibi çok basit olarak yapılabilir. Buna karın klasik yöntemle E. coli aranmasında olduu gibi gaz görülen tüplerden bir baka besiyerine ekim ve tekrar inkübasyon, bunlarda gelien kültürlerin katı besiyerine sürülmesi, tipik kolonilere biyokimyasal testler uygulanması gibi uzun bir deerlendirme serisi ile de yapılabilir. Örnein balangıçta gaz oluumu 3 ; 2 ; 0 olarak deerlendirilip, daha sonra pozitif olan toplam 5 tüpten tekrar yapılan ekimlerde sırası ile 2, 1, 0 sonuç alındı ise, bu kez pozitif veren toplam 3 tüpten katı besiyerine yapılan ekimler ve biyokimyasal testler sonucu 1, 0, 0 gibi bir sonuç alındı ise EMS tablosundan 1, 0, 0 karılıı olarak 4 sayısı alınır. EMS yöntemi uygun besiyeri kullanmak koulu ile her mikroorganizmanın sayımı için kullanılabilir. Örnein nutrient broth kullanılarak EMS yöntemi ile toplam mezofil aerob bakteri sayılabilir. Bu yöntem ile salmonella da sayılabilir. Standart olarak hazırlanan seyreltilerden klasik E. coli sayımı mantıı ile ancak Salmonella aranması için kullanılan besiyerleri kullanılarak Salmonella sayısı belirlenebilir. Burada dikkat edilmesi gereken husus 25 g gıda örnei ile yapılan testin sadece var/yok testi olduu, oysa bu yöntemde standart olarak hazırlanan seyreltilerden ekimlerin yapılacaı eklindedir. EMS yönteminde deerlendirme amacı ile çok sayıda ve farklı yaklaımlar ile tablolar hazırlanmıtır. Bunlardan en yaygın kullanılanı çizelge 1' de verilmitir. Çizelgede normal olarak 3 4 = 72 adet olasılık verilmesi gerekirken bazı sayım ı verilmemitir. Normal olarak en az konsantre olan seyreltiden (örnein 10-3 ) 3 tüpten 3 pozitif sonuç elde edildi ise bundan 10 kez daha fazla örnek ve dolayısı ile 10 kez daha fazla sayıda mikroorganizma içermesi beklenen 10-2 seyreltiden yapılan 3 tüpün 3 'ünde de pozitif sonuç alınması beklenir. Benzer ekilde 10-1 seyreltiden 3 tüpe yapılan ekimde de 3 pozitif sonuç alınmalıdır. Ancak ya da gibi bir sonuç alınır ise böyle bir durumun istatistik olarak çok küçük bir olasılıkla gerçekleebilecei ve deney sırasında çok büyük bir olasılıkla hata yapılmı olduu açıktır. Örnein ; gibi ın laboratuvar analizleri sırasında hata yapılmadan elde edilme olasılıı %0,1 kadardır ; gibi ın hatasız elde edilme olasılıı ise yoktur. Çizelgede pozitif tüpler ; 1-0,1-0,01 olarak verilen ekimler sırasıyla 10 o ;10-1 ;10-2 seyreltilerden sırasıyla 1 'er ml ekim yapılması anlamındadır. Yukarıda da belirtildii gibi katı gıdanın 10-1 seyreltisinden 10 ml ekim, 10 o seyreltiden 1 ml ekim anlamındadır. Bu ekilde yapılan ekim sonucunda örnein sonucu elde edildi ise gıdanın 1 ml' sinde (ya da 1 gramında) 1,50 adet mikroorganizma olduu, bu sayının %95 güvenlik sınırlarında 0,40 ile 3,80 arasında olabilecei, güvenlik sınırı olarak %99 seçilirse gıdadaki sayının 0,20 ile 5,20 arasında olabilecei anlaılır.

3 Çizelge 1. EMS Çizelgesi Adet/g ; Adet/ml (Partiden 1 örnek alınması) Pozitif Tüpler Sayı ve Kategori % 95 Güvenlik Sınırı %99 Güvenlik Sınırı 1 ml 0,1 ml 0,01 ml EMS Kategori Alt Üst Alt Üst < 0,30-0,00 0,94 0,00 1, ,30 2 0,01 1,00 0,00 1, ,62 3 0,12 1,70 0,05 2, ,36 1 0,02 1,70 0,01 2, ,74 1 0,13 2,00 0,06 2, ,10 3 0,40 3,50 0,20 4, ,10 2 0,40 3,50 0,20 4, ,50 3 0,50 3,80 0,20 5, ,60 3 0,50 3,80 0,2 5, ,92 1 0,15 3,50 0,07 4, ,40 2 0,40 3,50 0,20 4, ,50 1 0,40 3,80 0,20 5, ,00 2 0,50 3,80 0,20 5, ,10 1 0,50 4,00 0,20 5, ,80 3 0,90 9,40 0,50 14, ,90 3 0,90 9,40 0,50 14, ,30 1 0,50 9,40 0,30 14, ,80 2 0,90 10,40 0,50 15, ,40 3 1,60 18,10 1,00 25, ,30 1 0,90 18,10 0,50 25, ,50 1 1,70 19,90 1,10 27,00

4 ,00 3 3,00 36,00 2,00 44, ,30 1 1,80 36,00 1,20 43, ,00 1 3,00 38,00 2,00 52, ,00 2 3,00 40,00 2,00 56, ,00 3 9,00 99,00 5,00 152, ,00 1 4,00 99,00 3,00 152, ,00 1 9,00 198,00 5,00 283, , ,00 400,00 10,00 570, >110,00 Farklı literatürde EMS konusunda yine her seyreltiden 3 'er besiyerine ekilmesi halinde farklı EMS deerleri, farklı kategoriler ve farklı güvenlik sınırı deerlerine rastlanabilir. Sıvı bir gıdada sırasıyla ,1 ml ekim yapıldı ve yine sonucu elde edildi ise yukarıdaki örnekte verilen tüm deerler 10 ml için geçerlidir, bir dier deyile gıdanın 1 ml' sinde 1,50/10 = 0,15 adet mikroorganizma bulunmaktadır. Tersine olarak sırasıyla 10-2, 10-3 ve 10-4 seyreltilerden yapılan ekimlerde yine sonucu alındı ise 1 g (ya da 1 ml) örnekte 1,50/0,01 = 150 adet mikroorganizma bulunmaktadır. Güvenlik sınırları da bu örneklere paralel olarak alınmalıdır. Çizelge 1'deki kategoriler aaıdaki ekilde açıklanabilir. - Kategori 1 : Üründeki mikroorganizma sayısı hesaplanan sayıya eit olduunda bu kombinasyon ile elde edilen sonuç elde edilebilecek kombinasyonlar içinde en yüksek olasılıa sahip olanlardan birisidir. Bu kategoride en az olasılıkla (güvenlik sınırı deerleri) elde edilebilecek bir sayım sonucundan daha düük bir olasılıkla sonuç elde etme olasılıı en fazla %5 'dir. - Kategori 2 : Üründeki mikroorganizma sayısı hesaplanan sayıya eit olduunda bu kombinasyon ile elde edilen sonuç elde edilebilecek kombinasyonlar içinde kategori 1'den daha az bir olasılıkla elde edilebilir. Ancak bu kategoride en az olasılıkla (güvenlik sınırı deerleri) elde edilebilecek bir sayım sonucundan daha düük bir olasılıkla sonuç elde etme olasılıı en fazla %1 'dir. - Kategori 3 : Üründeki mikroorganizma sayısı hesaplanan sayıya eit olduunda bu kombinasyon ile elde edilen sonuç elde edilebilecek kombinasyonlar içinde kategori 2'den daha az bir olasılıkla elde edilebilir. Ancak bu kategoride en az olasılıkla (güvenlik sınırı deerleri) elde edilebilecek bir sayım sonucundan daha düük bir olasılıkla sonuç elde etme olasılıı en fazla %0,1 'dir. EMS yöntemi ile analize balanılmadan önce kabul edilebilir kategori seçilmelidir. Örnein kategori 2 balangıçta kabul edildi ise sonucun 1 ve 2 nolu kategoriye girmesi halinde sonuç

5 deerlendirmeye alınmalı, ancak örnein gibi 3. kategoriye giren bir sonuç alındı ise deerlendirme yapılmamalıdır. Kukusuz hedeflenen kategori 1 olmalıdır. Gıda mikrobiyolojisi laboratuvarında rutin analizlerde sıvı ya da katı örnek olsun 10-1, 10-2, 10-3 seyreltilerden ekim yapılması yeterlidir. Rutin analizde istenmeyen mikroorganizmaların sayımı için (koliform grup, E. coli, Staphylococcus, Listeria vb.) bu ekim sonucunun duyarlıı yeterlidir. letme daha duyarlı elde etmek istiyorsa 10 o, 10-1, 10-2, 10-3 olmak üzere ardıık 4 seyreltiden ekim yapıp a göre EMS tablosunda kullanılacak 3 ardıık seyreltiyi seçebilir. Bu seçimde izlenmesi gereken kural aaıda verilmitir. - Ardıık 4 seyreltiden yapılan ekimlerde 1' den fazla 3 pozitif sonuç varsa daha az konsantre olan seyrelti ile balayan seri dikkate alınmalıdır. Örnein gıda da 10 o, 10-1, 10-2, 10-3 olmak üzere ardıık 4 seyreltiden 3' er tüpe yapılan ekimlerde sırası ile eklinde sonuç alındı ise serisi dikkate alınmalıdır. - Ardıık 4 seyreltiden yapılan ekimlerde 1 adet 3 pozitif sonuç varsa 3 pozitif alınan seri ile balanılmalıdır. Örnein sırasıyla eklindeki bir seride deerlendirilecek olan 'dir. - Ardıık 4 seyreltiden yapılan ekimlerde 0 adet 3 pozitif sonuç varsa sondaki seri dikkate alınmalıdır. Örnein serisinde serisi kullanılmalıdır. Ancak birden çok 3 negatif sonuç varsa (örnein ) bu kez serisi kullanılmalıdır. EMS yöntemi ile tüm bakteri ve maya sayımları yapılabilir. Küfler ise sıvı besiyerlerinde rahat geliemedikleri için EMS yöntemi ile sayılamazlar. Aaıda farklı örnekler ile EMS yönteminin kullanılması anlatılmıtır. Örnek 1: MG yöntemi ile E. coli sayımı Seyreltmeler Her seyreltmeden 3' er tüpe ekim Koliform grup bakteriler için pozitif E. coli için pozitif MG, E. coli için spesifik bir enzim olup bu bakterinin belirlenmesinde kullanılır ve koliform grup bakteriler için kullanılan selektif besiyerlerine ilave edilerek bu besiyerlerine diferansiyel bir özellik kazandırır. Dolayısı ile bu katkının kullanıldıı tüm besiyerlerinde koliform bakteriler de E. coli yanında geliirler. Bir dier deyi ile E. coli sayımı amaçlanırken E. coli dıındaki koliform grup bakteriler de sayılmı olur. Yukarıda açıklanan seyreltme seçimine göre koliform grup bakteriler için serisinden olan 3 adedi (10-1 ; 10-2 ; 10-3 seyreltilerden yapılan ekimler) dikkate alınır. Bu deerin karılıı çizelge 1' e göre 15 'tir. Ancak, deerlendirmeye 10 0 deil 10-1 seyrelti ile balandıına göre analiz edilen

6 örnekte 10 misli daha fazla sayıda koliform grup bakteri vardır, sonuç buna göre 150 olarak verilir. Bu yöntemde koliform grup bakteriler sadece durham tüplerindeki gaz oluumuna göre belirlenmektedir. Koliform grup bakteri sayısı pozitif tüplerden baka besiyerine ekim yapılarak da dorulanabilir (bknz. örnek 3). MG reaksiyonu ise basit olarak koliform grup bakterilerin pozitif olarak deerlendirildii tüplerde floresan ııma ile belirlenir. Yukarıdaki örnee göre eklindeki pozitif dan eklinde olan seri (10 0 ; 10-1 ; 10-2 seyreltilerden yapılan ekimler) dikkate alınır ve çizelge 1 'den sonuç 1,5 olarak bulunur. Örnek 2 : Fekal koliform grup bakteri ve E. coli sayımı Seyreltmeler Her seyreltmeden 3' er tüpe ekim Koliform grup bakteriler için pozitif Fekal koliform bakteriler için pozitif E. coli için pozitif Fekal koliform grup bakteriler dıkı kökenli oldukları için E. coli 'de olduu gibi gıda maddelerinde istenmeyen bakteriler arasındadır. Fekal koliform olarak tanımlanan bakterilerin büyük çounluunu E. coli oluturduu için ve fekal koliform grup bakterilerin analizinde sahte negatif veya sahte pozitif sıklıkla alınabilirse de bazı laboratuvarlar bu testi istemektedirler. Yöntemin esası, koliform grup bakteri analizinde pozitif sonuç veren tüplerden (örnek 1 deki serisinden pozitif sonuç veren toplam 9 tüpten) fekal koliform grup tayini için EC besiyerine ekim yapılması ve 45 o C' daki su banyosunda 48 saat inkübasyona bırakılmasıdır. Bu ekilde elde edilen serisinden olanın karılıı olarak 15 sayısı hesaplanır. Analize yine 45 o C' da Tryptone Water besiyerinde E. coli analizi ile devam edilir ve ından için sonuç 1,5 olarak hesaplanır. Bu analiz yöntemi günümüzde IS/TSE tarafından gösterilen standart E. coli analiz yöntemidir.

7 Örnek 3 : E. coli 'nin IMViC testleri ile belirlenmesi Seyreltmeler Her seyreltmeden 3' er tüpe ekim Koliform grup bakteriler için muhtemel pozitif Koliform grup bakteriler için dorulanmı EMB Agar ve IMViC Testleri E. coli için pozitif Halen FDA tarafından kullanılmakta olan analiz yöntemine göre önce koliform grup bakterilerin muhtemel sayısı hesaplanır, buradan ikinci besiyerine ekim yapılarak koliformların kesin sayısı bulunur. Bu örnee göre koliformların muhtemel sayısı serisi için 150 iken dorulanmı sayı karılıı olarak 75 'dir. Dorulanmı koliform pozitif olan tüplerden önce EMB Agar besiyerine sürme yapılır. Burada metalik parlak yeil koloniler muhtemel E. coli olarak deerlendirilir ve her petriden en az 5 adet tipik E. coli izolatı alınır ve her izolata ayrı ayrı IMViC testleri uygulanır. zolatlardan bir tanesi dahi E. coli olarak dorulanırsa o izolatın alındıı petri kutusun ve dolayısıyla o petri kutusuna sürme yapılan tüp pozitif olarak deerlendirilir. Buradaki örnee göre kodu için 1,5 olarak bulunur. Burada verilen örnek ile Salmonella (bknz. örnek 5), Listeria vb. identifikasyon gerektiren patojenlerin de EMS yöntemi ile sayımı yapılabilir. Örnek 4 :Toplam mezofil aerob bakteri sayımı Seyreltmeler Her seyreltmeden 3' er tüpe ekim + + Toplam mezofil aerob bakteri sayımı Rutin gıda kontrollerinde toplam aerob mezofil bakteri Plate Count Agar gibi genel bir besiyerinde sayılır. Eer asitli alkolsüz merubatlar gibi bir örnekte bu grup bakteriler sayılacak ise en makul yöntem aaıda belirtildii gibi membran filitrasyon sistemidir. Bu olanak yoksa Nutrient Broth, Tryptic Soya Pepton Broth gibi bir genel besiyerine inokülasyon ve o C' da 48 saat inkübasyon sonunda gelime görülen tüpler pozitif olarak deerlendirilir. Buradaki örnekte eklinde pozitif sonuç veren seriden bir adet 0 sonuç

8 olması kuralına göre kodu alınır ve sonuç tablodan 0,74 olarak bulunur. Ancak örnekte görüldüü gibi bu sonuç ekimler ; 10 0 ; 10-1 eklinde bir ekimden elde edilmitir seyreltiden ekim bir seyreltme deil, tam tersine bir konsantre hale getirmedir ve buradaki örnekte 10 0 seyreltiden örnein kendisinden çift kuvvette hazırlanmı 10 ml besiyerine 10 ml ekim yapıldıı anlaılmaktadır. Dolayısı ile 0,74 deeri 10 ml örnekte bulunan deerdir. Buna göre sonuç 7,4 adet/100 ml EMS olarak verilir. noküle edilen tüplerin inkübasyon koulları deitirilerek toplam psikrofil aerob bakteriler, ya da toplam mezofil anaerob bakteriler sayılabilir. Örnek 5. Salmonella sayılması Seyreltmeler Her seyreltmeden 3' er tüpe ekim Tamponlanmı Peptonlu Suda pozitif sonuç (bakteri gelimesi) Selektif ekim besiyerlerine Biyokimyasal ve serolojik testler Salmonella için pozitif Örnek 3 'de verilen mantık altında Salmonella sayılabilir. Rutin gıda kontrollerinde Salmonella 25 g (ya da ml) gıdada sadece aranırken (bknz. bölüm 13) özel amaçlı çalımalarda bu sayım EMS yöntemi ile yapılabilir. Tamponlanmı peptonlu besiyerinde inkübasyon sonunda eklinde bakteri gelimesi olmutur. Bunların tümünden 2 farklı selektif zenginletirme besiyerine ekim yapılmı, inkübasyondan sonra bu 2 selektif besiyerinden 2' er adet olmak üzere toplam 11 X 4 = 44 adet selektif katı besiyerine ekim yapılmıtır. ki selektif zenginletirme besiyerinden ekim yapılan 4 agarlı besiyerinin her birinden en az 5 'er tipik koloni izole edilir ve bunlara ayrı ayrı biyokimyasal ve serolojik testler uygulanır. 4 petriden elde edilen 20 koloniden bir adedi dahi pozitif sonuç verirse sonuçta o izolatın geldii tamponlanmı peptonlu su tüpü pozitif olarak deerlendirilir. Buradaki örnee göre serisi için Salmonella sayısı 0,92 adet/ml EMS olarak bulunur. Eer kullanılan selektif zenginletirme besiyerlerinde bakteriyel gelime olup olmadıı rahatlıkla anlaılıyor ise gelime olmayan tüplerden selektif katı besiyerlerine ekim yapılması gereksiz olur idi. Bununla beraber aynı önzenginletirme tüpünden 2 ayrı selektif zenginletirme besiyerine ekim yapılıp bunlardan birinde bakteriyel gelime olmayıp dierinde gelime var ise ve bu gelime olan tüpten selektif katı besiyerlerine yapılan

9 ekimlerde oluan kolonilerden birisi dahi Salmonella olarak tanımlanır ise yine bu izolatın geldii önzenginletirme tüpü pozitif olarak deerlendirilir. Listeria sayılması da burada gösterilen aynı mantık altında yapılır. Bu yöntemde ön zenginletirmeden sonra tam ve yarı konsantre Fraser Broth tüplerinden 24 ve 48 saat inkübasyondan sonra selektif katı besiyerlerine ekim yapılır ve Salmonella 'da olduu gibi izole edilen koloniler tanımlanır. EMS yönteminin esasına göre ilk ekim yapılan önzenginletirme tüpünün pozitif ya da negatif olmasına ve seyreltilere göre Listeria da sayılabilir. HAZIRLAYAN Ör.Gör. Kaan AYANL Tekn.Prog.Böl.Bk Eitim Yılı Laboratuara Giri ders notları eki.