PROSEDÜR İLKELERİ VE AÇIKLAMASI

Transkript

1 PA KULLANIM TALİMATLARI KULLANIMA HAZIR PLAK BESİYERİ PA Rev.: April 2013 Glucose Agar Gentamicin and Penicillin and Streptomycin KULLANIM AMACI Glucose Agar (Sabouraud Glikoz Agar), klinik maddelerden mantarların (mayalar, küfler ve dermatofitler) izolasyonu ve kültivasyonu için kullanılmaktadır. BD Sabouraud (Kloramfenikol İçeren Sabouraud Agar), BD Sabouraud Gentamicin and (Gentamisin ve Kloramfenikol İçeren Sabouraud Agar) ve Penicillin and Streptomycin (Penisilin ve Streptomisin İçeren Sabouraud Agar) klinik örneklerden alınan mantar izolasyonu için seçici besiyerleridir. PROSEDÜR İLKELERİ VE AÇIKLAMASI Mikrobiyolojik yöntem. Sabouraud Glucose Agar, orijinal olarak dermatofitlerin kültivasyonu için tasarlanmış genel amaçlı bir besiyeridir. 1,2 Bugün bütün mantarların izolasyonu ve kültivasyonu için kullanılmaktadır. 3-5 Sabouraud Glucose Agar daki peptonlar, azotlu gelişme faktörü kaynaklarıdır. Glikoz, mikroorganizmaların gelişmesi için bir enerji kaynağı sağlar. Yüksek glikoz konsantrasyonu, birçok bakteri yüksek şeker konsantrasyonunu tolere edemediğinden mantarların gelişmesi için avantaj (ozmotik açıdan sabittir) sağlar. Ayrıca düşük ph, mantarlar için optimumdur fakat birçok bakteri için değildir. 3 Sabouraud Glucose Agar bakterilere karşı yalnızca biraz seçicidir., Gentamicin and ve Penicillin and Streptomycin Sabouraud Glucose Agar bazlı seçici besiyerleridir. Bakterileri inhibe etmek için seçici ajanlar eklenmiştir. Kloramfenikol çok çeşitli gram-negatif ve gram-pozitif bakteriler için inhibe edici olan fakat yalnızca birkaç patojenik mantar üzerinde inhibitör etkiye sahip geniş spektrumlu bir antibiyotiktir. 4 Penisilin, gentamisin ve streptomisin benzeri antimikrobiyaller veya bunların kombinasyonlarının mantar ini etkilemeksizin bakterileri inhibe etmekte etkili olduğu görülmüştür. 2-5 Bu besiyerleri, klinik örnekler veya bakteriyel kontaminantlar içerdiğinden şüphelenilen maddelerden mantarların izolasyonu için kullanılmaktadır. Sabouraud Glucose Agar, USP ve EP Mikrobiyal Sınır Testlerinde kullanılan besiyerlerinden biridir. 6,12 REAKTİFLER Formüller: Tablo 1'e bakın. ÖNLEMLER. Yalnızca profesyonel kullanım içindir. Mikrobiyal kontaminasyon belirtileri, renk değişimi, kuruma, çatlama veya diğer bozulma belirtileri görülen plakları kullanmayın. Aseptik kullanma prosedürleri, biyolojik tehlikeler ve kullanılmış ürünün atılmasıyla ilgili olarak GENEL KULLANIM TALİMATLARI na bakın. SAKLAMA VE RAF ÖMRÜ Alındıktan sonra plakları kullanana kadar orijinal kaplı ambalajında karanlıkta 2 ila 8 C de saklayın. Dondurmaktan ve aşırı ısıtmaktan kaçının. Plaklar son kullanma tarihine kadar (ambalaj etiketine bakın) ve önerilen inkübasyon sürelerinde inkübe edilebilir.

2 10 plaklık açılmış yığınlardan alınan plaklar temiz bir alanda, 2 ila 8 C de saklandığında bir hafta kullanılabilir. Tablo 1: REAKTİFLER 1 Litre Saf Su için Formüller* Ürün Adı Glucose Agar PA Penicillin and Streptomycin Gentamicin and Agar with İçerik Kazeinin Pankreatik 5,0 g 5,0 g 5,0 g 5,0 g Dijesti Hayvan Dokularının 5,0 5,0 5,0 5,0 Peptik Dijesti Glikoz 40,0 40,0 40,0 40,0 Agar 15,0 15,0 15,0 15,0 Penisilin G IU - - Streptomisin - 0,06 g - - Gentamisin - - 0,04 - Kloramfenikol - - 0,4 0,4 ph ph 5,6 +/- 0,2 5,6 +/- 0,2 5,6 +/- 0,2 5,6 +/- 0,2 *Performans kriterlerini karşılamak üzere gereken şekilde ayarlanmış ve/veya desteklenmiştir. KULLANICI TARAFINDAN KALİTE KONTROLÜ Temsili örnekleri aşağıdaki suşlar ile inoküle edin (detaylar için, bkz. GENEL KULLANIM TALİMATLARI belgesi). İnkübasyon için dipnota bakın. Ürün Adı Glucose Agar Penicillin and Gentamicin and Test Suşları Streptomycin **Candida albicans ATCC **Saccharomyces cerevisiae DSM 1333 ** Aspergillus brasiliensis ATCC16404 ** Penicillium roquefortii ATCC 9295 ***Trichophyton mentagrophytes ATCC 9533 *Staphylococcus İnhibisyon yok aureus ATCC İnhibisyon tam *Escherichia coli İnhibisyon yok ATCC İnhibisyon tam İnoküle Açık kehribar rengi edilmemiş İnkübasyon: *48 h C / **</= 5 days, C, aerobik olarak PROSEDÜR Sağlanan Malzemeler Glucose Agar,, Gentamicin and veya

3 Penicillin and Streptomycin, hepsi 90 mm Stacker plaklarda sağlanmıştır. Mikrobiyolojik açıdan kontrol edilmiştir. Sağlanmayan Malzemeler Yardımcı kültür ortamı, reaktifler ve gerekli laboratuvar ekipmanı. Örnek Türleri Bu belgede tanımlanan ürünler mantarlar için izolasyon ortamıdır ve bütün klinik örnekler için (alternatif olarak veya bu besiyerlerinden ikisinin kombinasyonu olarak) kullanılabilir (aynı zamanda bkz. PERFORMANS ÖZELLİKLERİ VE PROSEDÜRÜN KISITLI OLDUĞU ALANLAR). Ortamlar aynı zamanda endüstriyel mikrobiyolojinin birçok alanında ve hijyen izlemede kullanılmaktadır. Test Prosedürü Örnek laboratuvara ulaştığında olabildiğince kısa sürede örneği sürme yöntemi ile ekin. Sürme plak, temel olarak karışık flora içeren örneklerden saf kültürleri izole etmek için kullanılır. Alternatif olarak, eğer materyal doğrudan swabdan geliştirilecekse, swabı kenarın yüzeyinde küçük bir alanın üzerinde döndürün; ardından bu inoküle edilmiş alandan sürme yöntemi ile ekim yapın. Eğer örnek deri kazıntıları, saç veya tırnaklardan oluşuyorsa, maddeyi besiyeri yüzeyinin merkezine yerleştirin. Mümkünse, daha geniş partiküller besiyeri ile temas sağlaması için steril forseps kullanılarak yüzeye hafifçe bastırılmalıdır. Dermatofitlerin saptanması için aynı zamanda, BD Dermatophyte Agar veya BD Mycosel Agar ı da dahil edin., Gentamicin and veya Penicillin and Streptomycin kullanılır, aynı zamanda bir Glucose Agar plağı da ekleyin. Son olarak, örnekte bakteriyel patojenlerin de bulunduğunu göstermek için BD Columbia 5% Sheep Blood gibi seçici olmayan bir besiyeri de inoküle edilmelidir. Klinik örneklerde mayaların (örn., Candida türleri) saptanması için kullanılacaksa, 30 ila 35 C de 48 saat inkübe edin. Dermatofitler de dahil olmak üzere filamentöz mantarlardan şüpheleniliyorsa, 25 ila 30 C de bir haftaya kadar inkübe edin. Dermatofitler bazen göstermek için 3 hafta veya daha fazlasına ihtiyaç duyarlar. Hijyen izlenmesi için kullanılacaksa, 7 güne kadar 20 ila 25 C de inkübe edin. 3 günden uzun süre inkübe edilirse, yeterli nem sağlayın. Kurumayı önlemek için plaklar yapışkan plastik bantla kapatılabilir. Gelişim sıcaklığı ve inkübasyon hakkında detaylı bilgi için, referanslara bakın. 5,7-10 Sonuçlar Yeterli inkübasyondan sonra, plaklar sürme yöntemi ile ekim yapılmış alanlarda izole koloniler ve ağır inokülasyon yapılan alanlarda birleşik göstermelidir. Plakları tipik renk ve morfoloji gösteren fungal koloniler açısından inceleyin. Bulguları doğrulamak için biyokimyasal testler ve mikroskobik ve serolojik prosedürler gerçekleştirilmelidir. 6-9 Patojenik mantar sayısı fazla olduğundan, görünüşleri hakkında bilgi burada verilmemiştir. 2,3, 5-9 Referanslara bakın. PERFORMANS ÖZELLİKLERİ VE PROSEDÜRÜN KISITLI OLDUĞU ALANLAR Bu belgede sunulan besiyerleri bütün klinik ve klinik olmayan örnek tiplerinden mantarların izolasyonu ve kültivasyonu için standart besiyerleridir Mantarların geniş gelişme sıcaklığı aralığına bağlı olarak, aynı besiyerinin çeşitli plaklarını inoküle etmek ve farklı sıcaklıklarda inkübe etmek gerekebilir. Test Prosedürü bölümü ve uygun 5, 7-10 referanslara bakın. Glucose Agar yalnızca zayıf seçici olduğundan, özellikle uzayan inkübasyon döneminden sonra besiyeri üzerinde bakteriler gelişecektir. Örnekler, maddeler veya incelenen alanların bakteriyel kontaminasyonundan şüpheleniliyorsa, örnek veya numune kültürü için daha yüksek seçiciliğe sahip besiyerleri örn.,, BD PA

4 Sabouraud Gentamicin and, veya Penicillin and Streptomycin kullanılmalıdır. Nocardia ve Actinomyces filamentöz bakterilerdir (mantar değil!) ve bu sebeple, bakteriyel inhibitörler içeren bütün Sabouraud besiyerlerinde gelişmezler. REFERANSLAR 1. Sabouraud, R Contribution a l'etude de la trichophytie humaine. Etude clinique, microscopique et bacterioloqique sur la pluralité des trichophytons de l'homme. Ann. Dermatol. Syphil. 3: Haley, L.D., J. Trandel, and M.B. Coyle Cumitech 11, Practical methods for culture and identification of fungi in the clinical microbiology laboratory. Coordinating ed., J.C. Sherris. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 3. Ajello, L., L.K. Georg, W. Kaplan, and L. Kaufman CDC laboratory manual for medical mycology. PHS Publication No. 994, U.S. Government Printing Office, Washington, D.C. 4. MacFaddin, J.F Media for isolation-cultivation- identification-maintenance of medical bacteria. vol. I. Williams & Wilkins, Baltimore. 5. Sutton, D.A Specimen Collection, transport, and processing: mycology. In: Murray, P. R., E. J. Baron, J.H. Jorgensen, M. A. Pfaller, and R. H. Yolken (ed.). Manual of clinical microbiology, 8th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 6. U.S. Pharmacopeial Convention, Inc The U.S. Pharmacopeia 32/The national formulary U.S. Pharmacopeial Convention, Inc., Rockville, Md. USA 7. Larone, D.H Medically important fungi: a guide to identification. 4 th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 8. Summerbell, R.C Trichophyton, Microsporum, Epidermophyton, and agents of superficial mycoses. In: Murray, P. R., E. J. Baron, J.H. Jorgensen, M. A. Pfaller, and R. H. Yolken (ed.). Manual of clinical microbiology, 8th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 9. Kwon-Chung, K.J., and J.E. Bennett Medical mycology. Lea & Febiger, Philadelphia. 10. Pfaller, M.A., and R.A. Fromtling (section ed.) Mycology. In: Murray, P. R., E. J. Baron, J.H. Jorgensen, M. A. Pfaller, and R. H. Yolken (ed.). Manual of clinical microbiology, 8th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 11. Brun, S., et al Evaluation of five commercial Sabouraud gentamicin-chloramphenicol agar media. Eur. J. Clin. Microbiol. Infect. Dis. 20: Council of Europe, European Pharmacopoeia, 6.1. European Pharmacopoeia Secretariat. Strasbourg/France. AMBALAJ/TİCARİ TAKDİM ŞEKLİ Glucose Agar Kat. No Kat. No Kullanıma hazır plak besiyeri, 120 plak Kat. No Gentamicin and Kat. No Kat. No Kullanıma hazır plak besiyeri, 120 plak Penicillin and Streptomycin Kat. No EK BİLGİ Daha fazla bilgi için lütfen yerel BD temsilcinizle temasa geçin: PA

5 Becton Dickinson GmbH Tullastrasse 8 12 D Heidelberg/Germany Phone: Fax: Reception_Germany@europe.bd.com ATCC is a trademark of the American Type Culture Collection BD, BD Logo and all other trademarks are the property of Becton, Dickinson and Company BD PA