BD Chocolate Agar (GC II Agar with IsoVitaleX) BD Chocolate Agar (Blood Agar No. 2 Base)

Transkript

1 KULLANIM TALİMATLARI KULLANIMA HAZIR KAPLI ARAÇLAR PA Rev.: Nov 2012 KULLANIM AMACI (Çikolata Agarı (IsoVitaleX içeren GC II Agarı)) ve (Çikolata Agarı (Kan Agarı No. 2 Bazı)), çeşitli klinik örneklerden elde edilen güç üreyen mikroorganizmaların, özellikle Neisseria ve Haemophilus türlerinin, izolasyonu ve kültivasyonuna yönelik seçici olmayan besiyerleridir. PROSEDÜR İLKELERİ VE AÇIKLAMASI Mikrobiyolojik yöntem. Carpenter ve Morton 24 saatte gonokok izolasyonu için geliştirilmiş bir besiyeri açıklamıştır. 1 Bu besiyerinin etkinliği (hemoglobin ve maya konsantrasyonuyla desteklenen GC Agar), bu organizmanın izolasyonu için kullanılan on iki besiyeri çalışmasında kanıtlanmıştır. 2 Sonrasında, besiyeri hususunda birçok iyileştirme yapılmıştır. 3-5 BD Chocolate Agar (GC II Agar with IsoVitaleX) besinleri ph ve mısır nişastasını korumak, agarda bulunabilecek toksik yağ asitlerini nötralize etmek için nitrojen kaynakları, fosfatlar olarak kazein ve seçili et peptonları içeren GC II bazından sağlanmıştır. Hemoglobin X faktörü (hemin) sağlar. BD IsoVitaleX Enrichment (BD IsoVitaleX Zenginleştirici) Haemophilus türleri için gerekli olan V faktörünü (nikotinamid adenin dinükleotid, NAD) ve patojen Neisseria nın gelişimini artıran vitaminler, amino asitler, koenzimler, glukoz, demir iyonu ve diğer faktörleri ve diğer güç üreyen organizmaları sağlar. Gram pozitif bakterilerin gelişimini artırmak için piridoksal ve spesifik gelişim faktörleri eklenmiş ve Granulicatella ve Abiotrophia türlerinin (=besin yönünden farklı streptokoklar) gelişimini desteklemek için piridoksal eklenmiştir. 6-9 Chocolate Agar (Blood Agar No. 2 Base), klinik örneklerden elde edilen güç üreyen organizmaların izolasyonu için alternatif bir besiyeridir. 7 BD Chocolate Agar (Blood Agar No. 2 Base), nitrojen ve vitamin kaynağı olarak Proteoz peptonu, karaciğer dijesti ve maya ekstraktı içerir. Sodyum klorür ozmotik stabiliteyi korur. Isıtılmış (ısı ile doğallığı bozulmuş) at kanı, ilave besinleri ve Haemophilus influenzae gelişimi için gerekli olan X faktörünü (hem) ve, NADaz içermediğinden, V faktörünü (nikotinamid adenin dinükleotit, NAD) sağlar. REAKTİFLER 1 Litre Saf Su için Formüller* BD Chocolate Agar BD Chocolate Agar (Blood Agar No. 2 Base) (GC II Agar with IsoVitaleX) Kazeinin Pankreatik Dijesti 7,5 g Proteose Peptone No.3 15,0 g Seçilen Et Peptonu 7,5 Karaciğer Dijesti 2,5 Mısır Nişastası 1,0 Maya Ekstraktı 5,0 Dipotasyum Fosfat 4,0 Sodyum Klorür 5,0 Monopotasyum Fosfat 1,0 At Kanı (ısıtılmış) %7 Sodyum Klorür 5,0 ph 7,4 +/- 0,2 Agar 12,0 Hemoglobin 10,0 IsoVitaleX Enrichment 12,0 ml Piridoksal 0,01 g Gelişim Faktörleri 0,5 ph 7,2 ± 0,2 *Performans kriterlerini karşılamak üzere gereken şekilde ayarlanmış ve/veya desteklenmiştir. PA

2 BD IsoVitaleX Enrichment aşağıdaki gelişim faktörlerini içerir (1 litre saf su için formül*): Vitamin B 12 0,01 g L-Glutamin 10,0 Adenin 1,0 Guanin Hidroklorür 0,03 p-aminobenzoik Asit 0,013 Nikotinamid Adenin Dinükleotid (NAD) 0,25 Tiyamin Pirofosfat 0,1 Ferrik Nitrat 0,02 Tiyamin Hidroklorür 0,003 Sistein Hidroklorür 25,9 L-Sistin 1,1 Glikoz 100,0 *Performans kriterlerini karşılamak üzere gereken şekilde ayarlanmış ve/veya desteklenmiştir. ÖNLEMLER. Yalnızca profesyonel kullanım içindir. Mikrobiyal kontaminasyon belirtileri, renk değişimi, kuruma, çatlama veya diğer bozulma belirtileri görülen plakları kullanmayın. Aseptik kullanım prosedürleri, biyolojik tehlikeler ve kullanılmış ürünün atılmasıyla ilgili olarak GENEL KULLANIM TALİMATLARI belgesine bakın. SAKLAMA VE RAF ÖMRÜ Alındıktan sonra plakları kullanana kadar orijinal kaplı ambalajında karanlıkta 2 ila 8 C de saklayın. Dondurmaktan ve aşırı ısıtmaktan kaçının. Plaklar son kullanma tarihine kadar (ambalaj etiketine bakın) ve önerilen inkübasyon sürelerinde inkübe edilebilir. 10 plaklık açılmış yığınlardan alınan plaklar temiz bir alanda, 2 ila 8 C de saklandığında bir hafta kullanılabilir. KULLANICI TARAFINDAN KALİTE KONTROLÜ Temsili örnekleri aşağıdaki suşlar ile inoküle edin (detaylar için, bkz. GENEL KULLANIM TALİMATLARI belgesi). Plakları 35 ± 2 C de karbondioksitçe zenginleştirilmiş aerobik atmosferde inkübe edin. Plakaları 18 ila 24 ve 42 ila 48 saatlik inkübasyondan sonra okuyun. Suşlar* Haemophilus influenzae ATCC Neisseria gonorrhoeae ATCC Neisseria meningitidis ATCC Streptococcus pneumoniae ATCC 6305 İnoküle edilmemiş ve Orta ila mükemmel gelişim Çikolata rengi, opak, hafif homojen olmayabilir * Ayrıca,, besin olarak farklı streptokokların gelişimini ortaya çıkarmak üzere Granulicatella (Abiotrophia) adiacens DSM 9848 ile test edilebilir. 8,9 PROSEDÜR Sağlanan malzemeler Her ikisi de 90 mm Stacker plaklar içinde olan BD Chocolate Agar (GC II Agar with IsoVitaleX) veya. Mikrobiyolojik açıdan kontrol edilmiştir. Sağlanmayan Malzemeler Yardımcı kültür ortamı, reaktifler ve gerekli laboratuvar ekipmanı. PA

3 Örnek Türleri Bu besiyeri prensip olarak, güç üreyen organizmalar içerdiğinden şüphe edilen enfeksiyonlardan elde edilen tüm örnek türleri için, yalnızca bu bölgeler için olmasa da özellikle vücudun başlıca steril bölgeleri (örn., serebrospinal sıvı, abseler) için kullanılabilir. Esas kullanımları, Columbia Agar with 5% Sheep Blood gibi rutin olarak kullanılan kan agar besiyerinde gelişemeyen Neisseria, Haemophilus ve diğer bakterilerin seçici olmayan izolasyonuna yöneliktir. Ayrıca, BD Chocolate Agar (GC II Agar with IsoVitaleX) Abiotrophia ve Globicatella türlerinin (=besin olarak farklı streptokoklar) izolasyonu için kullanılabilir. 8,9 Besiyerleri kan kültürlerinden elde edilen bir alt kültür olarak da kullanılabilir. (aynı zamanda bkz PERFORMANS ÖZELLİKLERİ VE PROSEDÜRÜN KISITLI OLDUĞU ALANLAR). Örnek Toplama ve Nakil Neisseria gonorrhoeae, N. meningitidis, Haemophilus ve diğer güç üreyen organizmalar advers çevresel koşullara oldukça duyarlıdır. Bu sebeple, bütün örnekler için uygun aktarım besiyeri kullanılmalıdır. Örnekler olabildiğince kısa sürede laboratuvara gönderilmelidir ve aktarım besiyeri kullanılsa bile 24 saatten eski olmamalıdır. Optimum aktarım sıcaklığı 20 ila 25 C dir. Buzdolabına koymayın! 10,11 Test Prosedürü Örnek laboratuvara ulaştığında olabildiğince kısa sürede örneği sürme yöntemi ile BD Chocolate Agar (GC II Agar with IsoVitaleX) veya BD Chocolate Agar (Blood Agar No. 2 Base) üzerine ekin. Sürme plak, temel olarak karışık flora içeren örneklerden saf kültürleri izole etmek için kullanılır. Alternatif olarak, eğer materyal doğrudan swabdan geliştirilecekse, swabı kenarın yüzeyinde küçük bir alanın üzerinde döndürün; ardından bu inoküle edilmiş alandan sürme yöntemi ile ekim yapın. Örnek vücudun normal flora içeren bir bölgesinden toplanmışsa, izole edilecek patojen maddeye bağlı olarak uygun seçici bir besiyerine de inoküle edilmelidir. Neisseria gonorrhoeae için, BD Martin-Lewis Agar, modified ya da BD GC-Lect Agar plakası, ve Haemophilus için, BD Chocolate Agar with IsoVitaleX and Bacitracin plakası dahil edilmelidir. Plakları 35 ± 2 C de karbondioksitçe zenginleştirilmiş aerobik atmosferde inkübe edin. Plakaları 18 ila 24 ve 42 ila 48 saatlik inkübasyondan sonra okuyun. Sonuçlar Tipik koloni morfolojisi aşağıdaki gibidir: Organizmalar ve Haemophilus influenzae Küçük (1 mm), nemli, inci gibi, karakteristik "fare" kokusuna sahip Neisseria gonorrhoeae Küçük, grimsi beyaz ila renksiz, mükoid. Neisseria meningitidis Orta ila geniş, mavimsi gri, mükoid. Streptococcus pneumoniae Küçük, düz veya daha büyük mükoid yeşilimsi koloniler, besiyerini çevreleyen koloniler yeşilimsi olabilir Granulicatella (Abiotrophia) Küçük gri-yeşilimsi koloniler, besiyerini çevreleyen koloniler adiacens* yeşilimsi olabilir PERFORMANS ÖZELLİKLERİ VE PROSEDÜRÜN KISITLI OLDUĞU ALANLAR ve BD Chocolate Agar (Blood Agar No. 2 Base), normal flora dahil güç üreyen ve güç üremeyen bakterilerin geliştiği zenginleştirilmiş, seçici olmayan besiyerleridir. Bu sebeple, vücudun normal flora içeren bölgelerinden elde edilen örneklerin aynı zamanda uygun seçici besiyerlerinde inoküle edilmesi önerilir. Güç üreyen bakteri terimi, normalde kullanılan koyun kanı içeren birincil izolasyon besiyerlerinde gelişmeyen veya iyi gelişmeyen bakteriler ile ilişkilidir, örn. Haemophilus, patojen Neisseria ve diğer birkaç organizma. Bu besiyerlerine inoküle edilmesi gereken örnek türlerinin ve bu besiyerlerinin izolasyonları için kullanıldığı organizma türlerinin ayrıntılı tanımı için referanslara bakın. 8,9,11,12 PA

4 Bulaşıcı ajanlar olarak oluşan bakteri türlerinin sayısı ve türü oldukça fazladır. Bu sebeple, nadir olarak izole edilen veya yeni tanımlanan mikroorganizmalar için bu besiyerlerini rutin olarak kullanmadan önce, ilk olarak uygunlukları söz konusu organizmanın saf kültürleri kültive edilerek kullanıcı tarafından test edilmelidir. Abiotrophia türleri ve besin olarak farklı diğer streptokokların gelişimini desteklemek üzere test edilmemiştir. Besin olarak farklı streptokoklara ait tartışma için referanslara bakın. 6,8,9,13 REFERANSLAR 1. Carpenter, C.M., and H.E. Morton An improved medium for isolation of the gonococcus in 24 hours. Proc. N.Y. State Assoc. Public Health Labs. 27: Carpenter, C.M., M.A. Bucca, T.C. Buck, E.P. Casman, C.W. Christensen, E. Crowe, R. Drew, J. Hill, C.E. Lankford, H.E. Morton, L.R. Peizer, C.I. Shaw, and J.D. Thayer Evaluation of twelve media for the isolation of the gonococcus. Am. J. Syphil. Gonorrh. Venereal Diseases 33: Power, D.A. (ed.), and P.J. McCuen Manual of BBL products and laboratory procedures, 6th ed. Becton Dickinson Microbiology Systems, Cockeys ville, Md. 4. Martin, J.E., T.E. Billings, J.F. Hackney, and J.D. Thayer Primary isolation of N. gonorrhoeae with a new commercial medium. Public Health Rep. 82: Vastine, D.W., C.R. Dawson, I. Hoshiwara, C. Yonega, T. Daghfous, and M. Messadi Comparison of media for the isolation of Haemophilus species from cases of seasonal conjunctivitis associated with severe endemic trachoma. Appl. Microbiol. 28: Ruoff, L.R Aerococcus, Abiotrophia, and other infrequently isolated aerobic catalasenegative, gram-positive cocci. In: Murray, P. R., E. J. Baron, J.H. Jorgensen, M. A. Pfaller, and R. H. Yolken (ed.). Manual of clinical microbiology, 8 th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 7. Anonymous DIFCO Manual, 11 th edition. DIFCO Laboratories, Division of Becton Dickinson and Co. Sparks, MD, USA. 8. Reimer, L.G., and L.B. Reller Growth of nutritionally variant streptococci on common laboratory and 10 commercial blood culture media. J. Clin. Microbiol. 14: Collins, M.D., and P.A. Lawson The genus Abiotrophia (Kawamura et al.) is not monophyletic: proposal of Granulicatella gen. nov., Granulicatella adiacens comb. nov., Granulicatella elegans comb. nov. and Granulicatella balaenopterae comb. nov. Int. J. Syst. Evol. Microbiol. 50: Thomson, R.B., and J.M. Miller Specimen collection, transport, and processing: bacteriology. In: Murray, P. R., E. J. Baron, J.H. Jorgensen, M. A. Pfaller, and R. H. Yolken (ed.). Manual of clinical microbiology, 8th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 11. Forbes, B.A., and P.A. Granato Processing specimens for bacteria. In P.R. Murray, E.J. Baron, M.A. Pfaller, F.C. Tenover, and R.H. Yolken (ed.), Manual of clinical microbiology, 6th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 12. Murray, P. R., E. J. Baron, J.H. Jorgensen, M. A. Pfaller, and R. H. Yolken (ed.) Manual of clinical microbiology, 8 th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 13. Ruoff, K.L Aerococcus, Abiotrophia, and other infrequently isolated aerobic catalasenegative, gram-positive cocci. In: Murray, P. R., E. J. Baron, J.H. Jorgensen, M. A. Pfaller, and R. H. Yolken (ed.). Manual of clinical microbiology, 8th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. AMBALAJ/TİCARİ TAKDİM ŞEKLİ Kat. No Kullanıma Hazır Plak Besiyeri, cpu 20 Kat. No Kullanıma Hazır Plak Besiyeri, cpu 120 Kat. No Kullanıma Hazır Plak Besiyeri, cpu 20 Kat. No Kullanıma Hazır Plak Besiyeri, cpu 120 PA

5 EK BİLGİ Daha fazla bilgi için lütfen yerel BD temsilcinizle temasa geçin. Becton Dickinson GmbH Tullastrasse 8 12 D Heidelberg/Germany Phone: Fax: Reception_Germany@europe.bd.com ATCC is a trademark of the American Type Culture Collection BD, BD Logo and all other trademarks are property of Becton, Dickinson and Company BD PA