Referans Dışı Yöntemlerdeki Gelişmeler Neler Sunuyor? Dilek Yeşim METİN Ege Üniversitesi Tıp Fakültesi Tıbbi Mikrobiyoloji AD, Bornova-İZMİR

Transkript

1

2 Referans Dışı Yöntemlerdeki Gelişmeler Neler Sunuyor? Dilek Yeşim METİN Ege Üniversitesi Tıp Fakültesi Tıbbi Mikrobiyoloji AD, Bornova-İZMİR

3 Antifungal Duyarlılık testleri Antifungal tedavinin doğru yönlendirilebilmesi Klinik yanıtın tahmin edilebilmesi

4 CLSI (Clinical and Laboratory Standarts Institute) Kılavuzları Mayalar-sıvı dilüsyon Mayalar- disk difüzyon Küfler-sıvı dilüsyon Küfler-disk dfüzyon 1992 M27P 1995 M27T 1997 M27A 2002 M27A M27A3 M27S M44P 2004 M44A 2009 M44A2 M44S M38P 2002 M38A 2008 M38A M51P M51S M51A

5 The European Committee on Antimicrobial Susceptibility Testing Antifungal Susceptibility Testing (EUCAST-AFST) Dilüsyon temelli Mayalar Küfler EUCAST E.Def 7.2 EUCAST E.Def.9.2

6 Referans Dışı Yöntemler Dilüsyon Temelli Testler Kolorimetrik dilüsyon testleri Sensititre YeastOne (TREK Diagnostic Systems Inc.,Westlake, Ohio) ASYT Kalorimetrik Antifungal Panel (Kyokuto Pharmaceutical Industrial, Japan) Liofilchem SensiQuattro Candida EU ((Liofilchem Diagnostics, L Aquila, Italy) Candifast Es Twin (ELITech Microbiology Reagents; France) Integral Yeast Systems Yeasts (Liofilchem Diagnostics, L Aquila, Italy) Fungitest (Bio-Rad Laboratories, France) ATB Fungus 3 (API-bio-Mérieux, Marcy I Etoile; France) Mycostandard (Institut Pasteur, Paris, France) Mycototal (Behring Diagnostic, Rueil-Malmaison, France) Tam otomatize sistemler Vitek 2 (bio-mérieux, Marcy I Etoile; France)

7 Gradiyent Strip Test Referans Dışı Yöntemler Difüzyon Temelli Testler Etest (biomérieux, France) The Liofilchem MIC Test Strips (Roseto degli Abruzzi Italy) Disk Difüzyon /Tablet Difüzyon Test Neo-Sensitabs tablet (A/S Rosco Diagnostica, Denmark) Abtek Biological antifungal disks (Abtek Biologicals Ltd., Liverpool, UK) BBL Sensi-Disc (BD Diagnostics, New Jersey, US) Fungidisc (Mast Group Ltd., Merseyside, UK)

8 Referans Dışı Yöntemler "Araştırma amaçlı" Akan hücre ölçer "flow cytometry" MALDİ-TOF İzotermal mikrokalorimetre X-Plate tekniği XTT Ergosterol miktarının tayini Nükleik asit temelli yöntemler

9 Referans Dışı Yöntemler FDA onaylı-candida kökenleri için Etest (biomerieux, Marcy l Etoile, France Sensititre YeastOne (TREK Diagnostic Systems Inc.,Westlake, Ohio); VİTEK 2 (biomerieux; France) flukonazol itrakonazol vorikonazol flusitozin flukonazol itrakonazol vorikonazol flusitozin kaspofungin flukonazol flusitozin kaspofungin (!) Mikafungin (!)

10 13 Kullanılan ticari yöntemler Etest Vitek Sensititre DD Biorad API ATB Fungus 3

11 Gradiyent strip test Yüzeyinde tek bir antifungal ilacı, giderek artan oranlarda içeren plastik şeritlerin mantar inokule edilmiş agar plakları üzerine yerleştirilmesini temel alan duyarlılık testi yöntemidir.

12 Gradiyent strip test Etest (biomérieux, France) The Liofilchem MIC Test Strips (MTS) (Via Scozia, Roseto degli Abruzzi (Te) Italy)

13 Gradiyent strip test (Etest) 15 dilüsyonluk skala Amphotericin B ( µg/ml) Anidulafungin ( µg/ml) Caspofungin ( µg/ml) Flukonazol ( µg/ml) Flucytosine ( µg/ml) İtrakonazol ( µg/ml) Ketokonazol ( µg/ml) Posakonazol ( µg/ml) Vorikonazol ( µg/ml)

14 Gradiyent strip test Besiyeri MOPS la tamponlanmış, %2 glikoz içeren RPMI 1640 besiyeri İnokulum Enkübasyon süresi Değerlendirme Candida ve Aspergillus türleri: 0,5 McFarland C. neoformans ve bazı küfler: 1 McFarland Aspergillus ve Rhizopus türleri: saat Candida türleri: saat C. neoformans: saat Mayalar; azoller için %80, amfoterisin B için %100 olan inhibisyon zonu Küfler; %100 inhibisyon zonu

15 Gradiyent Strip Test-Sinerji Pankey G et al. Antimicrob Agents Chemother 2014; 58: C. glabrata, Polimiksin B ve Flukonazol BMD Time kill, E test arasındaki uyumsuz sonuçlar kökenlere veya yöntem farklılıklarına bağlı olabilir. Etest sinerji yöntemi araştırma amaçlı kullanılan bir yöntem. Time kill yöntemi de standardize değil Etest yöntemi daha elverişli, kullanımı daha kolay ve tekrar edilebilir. Etest sinerji Etest etkisiz BMD time kill Sinerji BMD time kill Etkisiz

16 Gradiyent Strip Test-Sinerji Time-kill En iyi sinerji kaspofungin+vorikonazol Etest

17 Referans Yöntemlerle Uyum-Mayalar Dannaoui E ve ark. Clin Microbiol Infect Bourgeois N ve ark. J Clin Microbiol, 2010 Pfaller MA ve ark. L Clin Microbiol Espinel Ingrof A ve ark. Antimicrob Agents Chemother Cuenca-Estrella M ve ark. J Clin Microbiol Ranque S ve ark. J Clin Microbiol, 2012 Referans AMB FLU ITC VOR POS CAS ANF Yöntem EUCAST CLSI CLSI CLSI CLSI EUCAST CLSI Mahabeer Y ve ark. Diagn Microbiol Infect Dis CLSI C. neoformans Koehling HL ve ark. J Clin Microbiol, 2015 EUCAST-MTS

18 Referans Yöntemlerle Uyum-Küfler Araujo J ve ark. Antimicrobial Agents Chemother Martos AI ve ark. Med Mycol Referans Yöntem Cins/tür Antifungal Uyum CLSI A. fumigatus Posakonazol 92 (24 saat) 90 (48 saat) CLSI Aspergillus türleri (A. niger ve A. glaucus dışında) Ekinokandinler Fuller J ve ark J Clin Microbiol Pinto E ve ark. Mycopathologia, 2014 *MHA: Müller Hinton Agar besiyeri CLSI Aspergillus Kaspofungin 18 (MHA) 26 (RPMI) CLSI 71.9 (±1) *(MHA) 99.7 (±2) Aspergillus spp (48), Fusarium spp (7), Beauveria bassiana (1) Paecilomyces lilacinus (3) Kaspofungin, anidulafungin, vorikonazol, posakonazol, AmB

19 Amaç C. glabrata nın (n: 193) KF duyarlılığını 3 yöntemle değerlendirmek Etesti referans yöntemlerle karşılaştırmak MİK değerlerini farklı sınır değerleri ile değerlendirmek Üç yöntemden en az birinde yüksek MİK değerleri gösteren kökenlerde FKS1 ve FKS2 mutasyonu aranmış Sınır değerler S mg/l, I = 0.25 mg/l, R 0.5 mg/l (Pfaller ve ark) S 0.5 mg/l, R> 0.5 mg/l (Arendrup ve ark.) Etest: S 2 mg/l, R > 2 mg/l (üretici önerisi) Eur J Clin Microbiol Infect Dis. 2014; 33:

20 Eur J Clin Microbiol Infect Dis. 2014; 33:

21 0.25 mg/l olan köken Etest ile %98.4 CLSI ile %90.7 EUCAST ile % mg/l olan köken (EUCAST): % köken; CLSI (R), Etest (S)= ÇBH 18 kökende FKS1 mutasyonu yok. FKS2 mutasyonu 3 kökende (!) Etest; FKS mutasyonunu saptamada CLSI ve EUCAST kadar başarlılı C. glabrata için önerilen sınır değer; S 0.5 mg/l, R> 0.5 mg/l (Arendrup ve ark.) 24 saatlik değerlendirmeler başarılı bulunsa da, C. glabrata yavaş ürediği için 48 saatlik değerlendirmeler önerilmektedir. Eur J Clin Microbiol Infect Dis. 2014; 33:

22 "dip-effect" Düşük konsantrasyonlarda, stribe paralel görülen dar inhibisyon zonu Amaç: Candida türleri (n: 60), ekinokandinler, MTS (Liofilchem-Roseto degli Abruzzi Italy) X SYO ve CLSI yöntemi değrelendirmek "dip-effect" görüldüğünde, MİK değerlendirmesi için yeni bir formül geliştirmek Yöntem: Ekinokandin duyarlılık testleri SYO ve MTS ile yapıldı "dip-effect" varlığında, Etest ve CLSI J Clin Microbiol. 2015; doi: /JCM

23 Dip-effect varlığında MİK değerlendirme inhibisyon zonunun, stribi kestiği dipeffect in tabanı (üretici firma önerisi) Eliptik inhibisyon zonunun tahmini olarak stripi keseceği yer, dip-effect in üstü Yeni geliştirilen formülle bulunan değer J Clin Microbiol. 2015; doi: /JCM

24 İlaca ve MİK e bağlı gelişen bir fenomen Yalnızca kaspofunginde gözleniyor "Plastik striplerden difüzyon sorunu, daha düşük moleküler ağırlığı nedeniyle olabilir" CLSI MİK 0.5mg/L ise; "dip-effect" yok Etest ile değerlendirildiğinde, "dip-effect" net değil Eliptik zon daha uzun, fenomen daha kısa ve stribi kesen açı dar "dip-effect" anlaşılır değilse, duyarlı kökenler yanlışlıkla, dirençli olarak yorumlanabilir. Gradient konsantrasyonları mg/l; ise değerlendirme hatalarını önlemek için bu yeni formülasyonla MİK değerlerini hesaplama öneriliyor

25 Gradiyent Strip Test Uygulaması kolay Kontaminasyon kolay farkedilir İnokulum değişikenliklerine tolerans gösterir AmB içim MİK aralığı daha geniş MİK, mantarın üreme hızından etkilenmez Antifungaller arası sinerji çalışılabilir CLSI sınır değerleri kullanıyor. Yönteme uygun KSD/ECV leri yok Pahalı Okuma-değerlendirme ile ilgili teknik sorunlarla karşılaşılabiliyor Referans yöntemlerle uyumu tür-ilaç kombinasyonuna göre farklılık gösteriyor Küf mantarları için onay yok

26 Sensititre YeastONE Antifungal Duyarlılık Kolorimetrik mikrodilüsyon yöntemi Paneli CLSI sınır değerleri kullanılır Dehidrate formda, çift kat dilüsyonlu, 9 antifungal içerir Kolorimetrik son nokta okuması için alamar mavisi indikatörü içerir. Antifungal İlaçlar Dilüsyon Aralıkları µg/ml Amphotericin B Flucytosine Anidulafungin Caspofungin Micafungin Fluconazole Itraconazole Variconazole Pasaconazole

27 Sensititre YeastONE Antifungal Duyarlılık Paneli Mayalar İnokulum: 1.5-8X 10 3 cfu/ml [0.5 Mc Farland maya süspansiyonu + yeast One buyyon (RPMI1640+%1.5 glikoz)] Enkübasyon süresi: Candida türleri: 24 saat, C. neoformans: 48 saat Değerlendirme: Renk değişikliğinin olduğu en düşük konsantrasyon: MİK Küfler İnokulum: X 10 4 cfu/ml [0.5 Mc Farland maya süspansiyonu+yeast One buyyon (RPMI1640+%1.5 glikoz)] Enkübasyon süresi: saat Değerlendirme: Renk değişikliğinin olduğu en düşük konsantrasyon: MİK

28 Sensititre YeastONE Antifungal Duyarlılık Paneli En yaygın kullanılan ticari yöntemlerden biri! Kullanıma hazır, tek kullanımlık ambalajlarda, uygulaması kolay, güvenilir Hızlı ve zamanında sonuç verebilen, tekrarlanabilirliği yüksek

29 Sensititre YeastONE Antifungal Duyarlılık Paneli %99.3 %100 %100 Ekinokandinler, Candida türleri için valide edilmiştir. Yüksek düzeyde tekrarlanabilirlik: %99

30 Sensititre YeastONE Antifungal Duyarlılık Paneli Alexander BD ve ark.. J Clin Microbiol Cuenca-Estrella M ve ark. J Clin Microbiol Cins/tür Candida spp (212) Referans AMB FLC FLU ITC VOR CAS POS Yöntem CLSI Maya CLSI CLSI EUCAST Castro C ve ark. J Clin Microbiol Guinea J ve ark. Diagnos Microbiol Infect Dis Patel R ve ark. J Clin Microbiol Aspergillus spp (63) A.fumigatus CLSI 24 CLSI 48 CLSI72 Aspergillus spp (179) Fusarium spp (41) Zygomycetes (29) CLSI

31 Sensititre YeastONE Antifungal Duyarlılık Paneli Dirençli kökenleri saptamada başarılı ve CLSI ile güçlü korelasyon göstermekte Klinik sınır değerler, CLSI ya dayanır CLSI klinik sınır değerleri, kazanılmış yada mutasyonel direnç kazanan mantarı duyarlı olarak tanımlayabilir

32 J Clin Microbiol. 2012; 50: SYO için belirlenmiş KSD ler yok, CLSI önerileri ile Ekinokandin, AmB ve FC / azoller için Candida türlerinde WT MİK dağılımını göstermek Her bir tür-ilaç kombinasyonu için ECV değerleri önermek Beş farklı yöntemle ve CLSI yöntemi ile elde edilen ECV leri karşılaştırmak J Clin Microbiol. 2013; 51: köken (1 merkez) C. albicans (334) C. parapsilosis (315) C. glabrata (56) C. tropicalis (62) C. orthopsilosis (63) C. krusei (27) 1262 köken (43 merkez) C. albicans (610) C. parapsilosis (327) C. glabrata (156) C. tropicalis (113) C. orthopsilosis (30) C. krusei (26)

33 J Clin Microbiol. 2012; 50: J Clin Microbiol. 2013; 51: CLSI ile SYO MİK/ECV dağılımları uyumlu Avantajı tedavi öncesi elde edilen kökenlerle çalışılmış Kısıtlılıkları. tek ülke verisi, C. krusei ve C. orthopsilosis in sayıca az olması direnç mekanizması bilinen köken sayısı az Kalıcı ECV ler belirlenerek, duyarlılıkları azalmış ya da direnç kazanmış kökenler daha kolay tanımlanır

34 Antimicrob Agents Chemother, 2015; 59: Amaç:, 9 ülke, 38 bağımsız laboratuvardan, 8 farklı Candida türleri için elde edilen verilerle tür-ekinokandin kombinasyonu için SYO ECV değerleri önermek 81 non-wt, 14 WT (6 laboratuvardan) SYO ECV ler, modal MİK dağılımlarına göre hesaplandı.

35 SYO-ECV 5 Candida türüne ait, 81 fks mutant kökenleri SYO ECV Anidulafungin: üç ekinokandin 72 (%88.9) non-wt Kaspofungin: kökenleri 74 belirlemede (%91.4) Mikafungin: katkı sağlayabilir. 76 (%93.8)

36 VITEK 2 Dilüsyon temelli tam otomatik antifungal duyarlılık sistemi Eş zamanlı tanımlama Spektrofotometrik değerlendirme Daha objektif ve daha kısa sürede Candida türleri için saat (ortalama saat) Cryptococcus türleri 12.1 saat FDA, 2006 yılında flukonazol direncini saptamada klinik kullanımını onayladı

37 VITEK 2 Antifungal Duyarlılık Kartları Vitek 2 AST- YS01 Amfoterisin B, Flusitozin, Flukonazol, Vorikonazol Vitek 2 AST- YS02 Flukonazol Vitek 2 AST- YS06 Amfoterisin B, Flusitozin, Flukonazol, Vorikonazol, Kaspofungin Vitek 2 AST- YS07 Amfoterisin B Flusitozin, Flukonazol, Vorikonazol, Kaspofungin, Mikafungin Vitek 2 AF03 IUO yeast Flukonazol

38 Cuenca-Estrella M ve ark. J clin Microbiol, 2010 Bourgeois N ve ark. J Clin Microbiol Peterson JF ve ark. J Clin Microbiol Melhem MSC ve ark. Brazil J Microbiol Mahaber Y ve ark. Diagnost Microbiol Infect Dis Figueiredo-Carvalho MHG ve ark. Mycopathologia, 2014 Referans Yöntem Cins/tür AmB Flu Vori KF MF CLSI Candida, C EUCAST neoformans CLSI Candida CLSI Candida CLSI ve EUCAST Candida CLSI C. neoformans CLSI C. Parapsilosis komplex

39 205 Candida türü, AmB, flukonazol, vorikonazol Çok büyük hata C. glabrata kökenlerinde C. krusei ve C. glabrata gibi azollere dirençli olabilen kökenler için Vitek sınır değerleri yeniden düzenlenmeli Türe özgü sınır değerler? Ya da EUCAST sınır değerlerinin kullanımı

40 3 farklı lab, 425 Candida türü Diag Microbiol Infect Dis 2013; 77: Vorikonazol ECV wt 0.5, 1 non wt

41 Flukonazol dilüsyonları düzenlenmiş, Vitek 2 AF03 IUO yeast (0,5-64 µg/ml) 86 sı dirençli olan 746 köken Yeni belirlenmiş türe özgü klinik sınır değerleri Esas uyum: Candida türleri %94, C. neoformans %86.4 C. glabrata %88.4, C. kefyr %66.7 J Clin Microbiol 2014; 52: Kategori uyumu Candida türleri %92, C. neoformans %84.1

42 C. glabrata Vitek: CLSI: (S) 0.25 (I) 4 (R) FKS geni "altın standart" Candida spp (n: 98) [fks mutant (n: 31)] Vitek 2 CLSI EUCAST CLSI & Vitek Esas uyum: %92.6 fks : %78.6 WT: %98.5 (KF) Kategori uyumu: %93.9 ÇBH: %19.4 (KF) Kategori uyumu: %88.4 ÇBH: %3.5 (AF) Kategori uyumu: %98.7 ÇBH: %3.3 AAC. 2013; 57:

43 VITEK 2 Kolay uygulanabilir Erken sonuç verebilen Eş zamanlı tanımlama yapabilen Referans yöntemlerle esas uyumu yüksek Tam otomatize CLSI /EUCAST sınır değerleri ile sonuç Kategori uyumu özellikle yeni sınır değerlerin kullanılması ile düşük Dilüsyon aralıklarının alt sınırı, bazı türler için tanımlanan ECV sınırının üzerinde C. glabrata türleri için tanımlanan sınır değerler dirençli kökenleri tanımlamada yetersiz

44 Akım sitometrisi "flow cytometry" Test edilecek antifungal ilacın çift kat seri dilüsyonları ile işlem görmüş mantar hücrelerinin florokrom boyalarla boyanması ve akım sitometrisinde okutulması ve analiz edilmesi Floresan boyalarla boyanıp boyanmama durumuna göre hasara uğramış veya ölü mantar hücrelerinin hızlı saptanmasına olanak verir.

45 Akım sitometrisi "flow cytometry" Besiyeri RPMI1640 İnokulum Enkübasyon süresi ve ısı Değerlendirme 1X10 6 cfu/ml (en hızlı ve kaliteli okuma için) Maya hücreleri ve Aspergillus türleri için konidyumlar 30 dk-24 saat (genellikle 4 saatten kısa), 35 0 C FC de özel Software ile MFEC (Minumum Fluorescence-Enhancing Concentration)

46 MFEC (Minumum Fluorescence-Enhancing Concentration): Yüksek bir floresan düzeyi ile karşılaştırıldığında, hücrelerin belirli bir yüzdesinde floresan artışı gösteren en düşük ilaç konsantrasyonu C. glabrata ve C. krusei için %50, C. parapsilosis için %40 Vale-Silva LA, Pinto P, Lopes V, Ramos H, Pinto E. Eur J Clin Microbiol Infect Dis 2012; 31:

47 Akan hücre ölçer "flow cytometry"

48

49 Akan hücre ölçer "flow cytometry" Sıvı dilüsyon temelli bir yöntem Araştırma amaçlı kullanılıyor Avantaj: >10000 hücrenin ayrı analizi yapılır: Test sonuçlarının doğruluğu ve duyarlılığını artırır Sonuç kısa sürede Dezavantaj: Maliyeti yüksek, özel ekipman gerektirir Uygun sonuç elde etmek için, deneyimli personel gerekir Standardize edilmeli Tekrar edilebilirlik ve test sonuçlarının klinik ile uyumunun araştırıldığı çalışmalara ihtiyaç var.

50 İzotermal Mikrokalorimetre Mikroorganizmaların üreme ve metabolizmalarına bağlı olarak üretilen ısının ölçülmesi temeline dayanır. Duyarlı, kesin ve gerçek zamanlı bir ölçüm sağlar

51 İzotermal Mikrokalorimetre Besiyeri İnokulum Enkübasyon süresi Değerlendirme Sıvı Sabouraud (farklı besiyerleri içinde daha kısa sürede ve daha fazla ısı üretimi) 2.5 x 10 4 conidya/ml (hemasitometre ile) Saat-gün MHIC (Minimal Heat Inhibitory Concentration) Analiz: Özel bir software

52 İzotermal Mikrokalorimetre MHIC AmB ve azoller için: Üreme kontrolünün oluşturduğu toplam ısının %50 sini 48 saatte inhibe eden en düşük ilaç konsantrasyonu Ekinokandinler için: Üreme kontrolüne göre 48 saatte ısı akış tepesini %50 azaltan en düşük ilaç konsantrasyonu

53 İzotermal Mikrokalorimetre Kalorimetre modülü

54 İzotermal Mikrokalorimetre Aspergillus türlerinin gerçek zamanlı antifungal duyarlılıklarının belirlenmesinde referans yöntemlerle uyumlu CLSI MEK ve MHIC ±2 dilüsyonda uyum oranı AmB, vorikonazol ve posakonaol için %90 Kaspofungin için %70 Mucorales, Fusarium ve Scedosporium türleri ile yapılan çalışmada CLSI MEK ve MHIC ±2 dilüsyonda uyum oranı AmB, posakonazol ve kaspofungin için <%90, posakonazol >%90 Tafin UF et al. Clin Microbiol Infect 2012; 18: Tafin UF et al. Diagnost Microbiol Infect Dis. 2012; 73:

55 Diag Microbiol Infect Dis 2013; 77: A. fumigatus ATCC AmB X Ekinokandin (anidulafungin ve kaspofungin) A. terreus ATCC Vorikonazol X ekinokandin (anidulafungin ve kaspofungin) Eşit fraksiyonel konsantrasyonlar (0.125X, 0.25X, 0.50 ve 1) AmB ve vorikonazol, ekinokandinlerle kombine edildiğinde etkinliklerinde artış gözlenmiş Aspergillus türlerinde gerçek zamanlı sinerjinin değerlendirilmesini sağlıyor Yöntem Aspergillus türleri ve diğer küf cinslerinin antifungal kombinasyonlarında sinerji için valide edilmesi, hayvan çalışmaları ve klinik çalışmalarla desteklenmesi gerekmektedir.

56 MALDI-TOF-MS Matriks ile desteklenmiş lazer dezorpsiyon/iyonizasyon uçuş zaman kütle spektrometrisi Mikroorganizmaları, protein yüklerinin ayrımına bağlı olarak tanımlayan bir yöntemdir Kullanılan iyonizasyon tekniğidir

57 Örnek matriks ile kristalize edilir (iyonizasyonu kolaylaştırmak ve biyomolekülü direkt lazer atışının tahribinden korumak için) Lazer ışını, örnek+matriksin buharlaşmasına neden olur Oluşan iyonlar yüklerine göre ayrılacakları tüp içerisinde hareket ederler Uçuş hızlarına göre ayrılan biyoanalitler bir kütle spektromu oluşturur Proteinler, peptid kütle parmak izi ile tanımlanır

58 MALDI-TOF AFDT 15 saat, seri ilaç konsantrasyonlarına maruz kalan mantarın proteom değişikliklerine dayanan bir yöntemdir. Tüm konsantrasyonlar / üç nokta testi (en yüksek, sınır değer, sıfır değeri) kullanılabilir Composite Correlation Index (CCI) değerleri kullanılıyor Minimal Profile Change Concentration (MPCC): Sıfır konsantrasyona göre maksimum konsantrasyonda izlenene daha yakın spektrumdaki en düşük ilaç konsantrasyonu (CCI değeri) Vella A ve ark. J Clin Microbiol 2013; 51: Saraçlı MA ve ark. Med Mycol 2015; 53:

59 MALDI-TOF AFDT Antifungal duyarlılıkların belirlenmesinde güvenilir ve tekrar edilebilir bir yöntem Daha hızlı sonuç (15 saat) İdentifikasyon amacıyla bu teknolojiyi kullanan ve rutin yükü fazla olan laboratuvarlarda kullanılabilecek objektif bir yöntem Aynı anda ve tüm Candida türlerinin farklı ilaç duyarlılıklarını test etmek mümkün CCI tabanlı eşleştirme gibi yazılım algoritmaları üzerinde personel eğitimi gerektirir. Gray- zone tanımı eksik: [CCI: 0.99 (R), CCI: 1.01 (S); arsındaki oran??? Kalite kontrol prosedürü yok Direnç, proteomik değişiklerle belirlenebiliyor. Proteomik değişiklikler yeteri kadar yüksek değilse saptayamayabilir Vella A ve ark. J Clin Microbiol 2013; 51: Saraçlı MA ve ark. Med Mycol 2015; 53:

60 Ticari yöntemler Gelişmekte olan yöntemler Etest SYO Vitek 2 FC IMC Maldi-Tof MS Mantar maya ve küf maya ve küf mayalar Candida ve Aspergillus türleri Aspergillus türleri Candida ve Aspergillus türleri Yöntem agar difüzyon sıvı MD sıvı MD sıvı dilüsyon sıvı dilüsyon sıvı dilüsyon Enkübasyon zamanı (saat) Son nokta okuması görsel görsel otomatik floresan mikroskobi Trailing üreme var var yok var yok yok Uygulanabilirlik SONUÇ IMC Direnci saptamada hiçbir yöntem birbirine üstün değil kütle spektrometre Maliyet pahalı pahalı pahalı ekonomik ekonomik ekonomik Kullanım alanı Rutin rutin rutin antifungal direnç saptamada, yalnızca araştırma amaçlı antifungal direnç saptamada, yalnızca araştırma amaçlı antifungal direnç saptamada, yalnızca araştırma amaçlı

61 SONUÇ Ticari yöntemlerle elde edilen sonuçlar CLSI/EUCAST sınır değerleri ile olmakta Referans yöntemlerin sınır değerlerine dayanarak klinik köken, dirençli olarak tanımlanmamalı Yönteme özgü standardizasyon ve klinik sınır değerler belirlenmeli SYO da başladığı gibi Yeni yöntemler umut verici, standardize edilmeli, çeşitli tür ve ilaçlarla çalışmalar yapılmalı

62 Teşekkür ederim