EBV Real-TM Quant. El Kitabı. Kalitatif Tespiti için Real Time PCR kiti Epstein Barr Virüs (EBV) REF V9-50FRT REF V9-100FRT REF TV9-50FRT

Transkript

1 IVD Sadece in Vitro Diagnostic Kullanım için EBV Real-TM Quant El Kitabı Kalitatif Tespiti için Real Time PCR kiti Epstein Barr Virüs (EBV) REF V9-50FRT REF V9-100FRT REF TV9-50FRT REF TV9-100FRT

2 ADI EBV Real-TM Quant GİRİŞ EBV bir DNA virüsü, herpes ailesinin üyesi ve mononükleozun nedeni olarak bilinmektedir. Daha ciddi, nadir de olsa, EBV enfeksiyonu sonucu çeşitli şekillerde malign transformasyon ve kanser gelişir, Burkitt lenfoma ve nazofarenks karsinomu, Çin'in en yaygın kanseri de dahil. Burkitt lenfoma (BL) 'de 6-7 vaka yıllık oran ile ve 6 ya da 7 yaşta yılda bir en yüksek oranı ile Afrika ve Yeni Gine orta kesimlerinde endemik olan EBV ile ilişkili tümör malign şeklidir. Burkitt lenfoması EBV epidemiyolojik tutulumu EBV viral kapsid antijene karşı bir yükseltilmiş antikor titresi (VCA) ile ilişkili, tümör hücrelerinde EBV viral genomun tanınmasına dayanmaktadır. Epstein-Barr virüsü (EBV) enfeksiyonunun primer yeri orofaringeal boşluktur. Çocuklar ve gençler genellikle, genellikle oral temas ettikten sonra tutulmuş bulunmaktadır, bu nedenle adı "öpücük hastalığı". Serolojiye dayanarak, Dünya yetişkin nüfusunun yaklaşık% 95'i primer enfeksiyon sonrasında EBV ile enfekte edilmiş ve virüsün yaşam boyu taşıyıcısı kalır. EBV dinlenme insan B lenfositleri ve epitel hücreleri enfekte eder, ikincisinde çarpar ve bellek B- lenfositlerinde gizli bir enfeksiyon oluşturur. Son zamanlarda yapılan çalışmalar, aynı zamanda Hodgkin lenfoma (HL) ve lemfoproliferatif hastalık bağışıklığı bastırılmış hastalarda, hem de bazı T-hücre lenfoma ve gastrik kanser gibi diğer epitelyal tümörleri gibi B-hücresi habisliklerine ilişkili olduğunu EBV göstermiştir. Bu tümörler, tümör hücrelerinde viral genomun birden fazla kromozom dışı kopya varlığı ve EBV genomunun bir parçası ekspresyonu ile karakterize edilir. KULLANIM AMACI EBV Real-TM Quant kiti Epstein Barr Virüsün kalitatif ve kantitatif tespit için bir Real Time testidir. Epstein Barr Virus.

3 TAHLİL PRENSİBİ EBV Real-TM Quant kiti biyolojik materyallaerde Epstein Barr Virüsün kalitatif ve kantitatif tespit için bir Real Time testidir. DNA, numunelerden ekstre, amplifiye edilir ve EBV DNA Internal Kontrol IC ve endojen IC glob (globin gen) için belirli bir flüoresan raportör boya probları kullanılarak tespit edilir. Globin gen DNA insan genomunun DNA parçasıdır ve bu hücrelerden elde edilen DNA örneğinde yeterli miktarda mevcut olması gerekmektedir. En az genom numune başına ( hücre DNA) olmalıdır. Internal Kontrol (IC), plazma salgı, amniyotik sıvı, balgam, bronşiyal yıkama ve diğer hücre veya düşük DNA içeren materyaller örnek hazırlama sırasında ilave edilir. her biri tek tek işlenen numune için bir amplifikasyon kontrol olarak hizmet vermektedir ve endojen IC (globin gen) süresinde olası reaksiyon inhibisyonunu belirlemek için, sadece analiz adımların kontrollünü sağlamaz, elde edilen tüm hücre örneklerinde (tam kan, lökosit, biyopsi ve otopsi malzeme, tükürük, bezlerden) sunulmuştur, ama aynı zamanda örnek işleme saklama değerlendirilir. EBV LMP-gen DNA amplifikasyonu JOE(Sarı)/HEX/Cy3 kanalında, IC glob (- globin gen) DNA amplifikasyon FAM (Yeşil) kanal ve eksojen Internal Kontrol IC Rox (Turuncu)/TexasKırmızıkanalında algılandığında tespit edilir.

4 SAĞLANAN MALZEMELER Module No.1: Real Time PCR kit İçindekiler Ref. V9-50FRT 50 reaksiyon Ref. V9-100FRT 100 reaksiyon EBV Real-TM Quant Real Time Amplifikasyon PCR-mix-1 0,6 ml 2 x 0,6 ml PCR-buffer FRT 0,3 ml 2 x 0,3 ml Hot Start DNA Polymerase 0,03 ml 2 x 0,03 ml TE-buffer 0,5 ml 0,5 ml Negative Control C-* 1,2 ml 1,2 ml EBV DNA&IC Glob C+** 0,1 ml 2 x 0,1 ml Internal Control IC*** 0,6 ml 2 x 0,6 ml Standard EBV DNA/IC glob o QSG1 0,1 ml 0,2 ml o QSG2 0,1 ml 0,2 ml * numune hazırlama prosedür sırasında kullanılmalı: etiketli Cneg için 100 µl C- (Negative Control), ekleyin; ** CPOs etiketli tüpe 90 µl C- (Negative Control) ve 10 µl EBV DNA&IC Glob C ekleyin *** 10 µl Internal (iç) Kontrol RNA'yı, RNA purifikasyon prosedürü esnasında doğrudan numune/lysis karışımına ekleyin.

5 Module No.2: DNA purification kiti ile Complete Real Time PCR testi İçindekiler Ref. TV9-50FRT 50 reaksiyon Ref. TV9-100FRT 100 reaksiyon DNA-Sorb-B: Klinik örneklerden DNA izolasyonu Lysis Solution 15 ml 2 x 15 ml Washing Solution 1 15 ml 2 x 15 ml Washing Solution 2 50 ml 2 x 50 ml Sorbent 1,25 ml 2 x 1,25 ml DNA-eluent 5 ml 2 x 5 ml EBV Real-TM Quant Real Time Amplifikasyon PCR-mix-1 0,6 ml 2 x 0,6 ml PCR-buffer FRT 0,3 ml 2 x 0,3 ml Hot Start DNA Polymerase 0,03 ml 2 x 0,03 ml TE-buffer 0,5 ml 0,5 ml Negative Control C-* 1,2 ml 1,2 ml EBV DNA&IC Glob C+** 0,1 ml 2 x 0,1 ml Internal Control IC*** 0,6 ml 2 x 0,6 ml Standard EBV DNA/IC glob o QSG1 0,1 ml 0,2 ml o QSG2 0,1 ml 0,2 ml * numune hazırlama prosedür sırasında kullanılmalı: etiketli Cneg için 100 µl C- (Negative Control), ekleyin; ** CPOs etiketli tüpe 90 µl C- (Negative Control) ve 10 µl EBV DNA&IC Glob C ekleyin *** 10 µl Internal (iç) Kontrol RNA'yı, RNA purifikasyon prosedürü esnasında doğrudan numune/lysis karışımına ekleyin.

6 SAĞLANMAYAN GEREKLİ MALZEMELER Alan 1 : Numune Hazırlama DNA ekstraksiyon kiti (Modül No. 1) Biyolojik kabin "eppendorf" tip tüpler için masaüstü mikrosantrifüj 60 C ± 5 C kuru ısı bloğu Vorteks mikser Pipetler (ayarlanabilir) 1,5 ml'lik polipropilen steril tüpler, Tek kullanımlık eldiven, pudrasız Biyolojik tehlike atık bidonu, Buzdolabı, Dondurucu Alan 2: RT ve amplifikasyon "eppendorf" tip tüpler için masaüstü mikrosantrifüj Vorteks mikser Tek kullanımlık eldiven, pudrasız Biyolojik tehlike atık bidonu, Buzdolabı, Dondurucu Real Time Thermal cycler Çalışma İstasyonu Pipetler (ayarlanabilir) Filtreli steril pipet uçları MUHAFAZA KOŞULLARI EBV Real-TM Quant -20 C de saklanmal. EBV Real-TM Quant kiti sevkedilebilir 2-8 C de ama hemen alınması üzerine, -20 C'de saklanmalıdır. DNA-Sorb-B 2-25 C de saklayın. STABİLİTE EBV Real-TM Quant etiketinde belirtilen son kullanım tarihine kadar stabildir. Ürün etiketinde basılı kontrol tarihine kadar performansını koruyacaktır. Işık, ısı veya neme maruz kalma kitin bazı bileşenlerinin raf ömrünü etkileyebilir, bunlardan kaçınılmalıdır. Hassasiyet azalabileceğinden, reaktiflerin tekrarlanan çözülme ve dondurma işlemlerinden kaçınılmalıdır. KALİTE KONTROL Her lot, tutarlı ürün kalitesini sağlamak için; Sacace ISO Sertifikalı Kalite Yönetim Sistemine uygun olarak, önceden belirlenmiş özelliklere karşı test edilmektedir.

7 UYARILAR VE ÖNLEMLER In Vitro Diagnostic Medikal Cihaz Sadece In Vitro Diagnostic Kullanım için Kullanıcı her zaman aşağıdakilere dikkat etmelidir: Lysis Solution,guanidine thiocyanate* içerir. Guanidin tiyosiyanat solunduğunda veya yutulduğunda veya deri ile temas halinde zararlıdır. Asit ile temasında toksik gaz oluşturur. (Xn; R: 20/21/22-36/37/38; S: 36/37/39). Aeresol bariyerli steril pipet ucuları kullanın ve her prosedür için yeni pipet ucu kulanın. Ekstrakte pozitif malzemeleri (numuneler, controller ve amplikonlar) diğer reaktiflerden uzak tutun/mufaza edin ve bunları reaksiyon karışımına ayrı bir alanda ekleyin. Bütün bileşenleri tahilile başlamadan önce oda sıcaklığında iyice çözün. Bileşenler çözündüğünde karıştırın ve kısa bir süre santrifüjleyin. Reaktif ve örnekler ile çalışırken, atılabilir eldiven, laboratuar önlüğü ve göz koruyucu kullanın. İşlem sonrası ellerinizi iyice yıkayın. Laboratuar çalışma alanlarında, sigara içmeyin, herhangi birşey yemeyin- içmeyin, kozmetik uygulamayın veya kontakt lenslere elle dokunmayın. Son kullanım tarihlerinden sonra kitleri kullanmayın. Tüm numuneleri ve kullanılmayan reaktifleri,yerel yönetim kurallarına uygun olarak imha edin.. Örnekler potansiyel enfeksiyöz olabilir, işlemleri uygun biyogüvenlik uygulamaları ile bir güvenlik kabini içerisinde gerçekleştirin. Dökülen/ saçılan tüm numune veya reaktifleri temizleyin ve %0.5 lik sodyum hipoklorit veya diğer uygun dezenfektanlarla dezenfekte edin. Numune veya reaktiflerin deri, göz veya mukoza zarları ile temasından kaçının. Deri, göz veya mukoza zarları ile temas olması halinde, hemen su ile yıkayın ve acilen tıbbi yardım alın. Malzeme Güvenlik Bilgi Formları (MSDS) istek üzerine verilebilir. Bu ürünün kullanımı, DNA amplifikasyonu teknikleri konusunda eğitimli personel ile sınırlı olmalıdır. Laboratuvar süreci tek yönlü olmalı; Ekstraksiyon Alanında başlamalı ve sonra Amplifikasyon ve Tespit alanlarına gidilmeli/ yönlenmelidir. Örnekleri, ekipmanları ve reaktifleri önceki adımın yapıldığı bölgeye/alana geri döndürmeyin. Bu kitteki bazı bileşenler koruyucu olarak sodyum azid içerir. Reaktif transferi için metal tüp kullanmayın. * Sadece Modül No.2

8 ÜRÜN KULLANIM SINIRLARI Tüm reaktifler sadece in vitro diagnostic kullanılabilir. Bu ürünün kullanımı, DNA amplifikasyonu (UNI EN ISO :2012).teknikleri konusunda eğitimli personel ile sınırlı olmalıdır. Kullanım kılavuzu ile sıkı uyum optimum PCR sonuçları için gereklidir. Kutu ve tüm bileşenlerin etiketleri üzerinde yazılı olan son kullanım tarihlerine dikkat edilmelidir. Son kullanım tarihlerinden sonra kitleri kullanmayın. NUMUNE TOPLAMA, MUHAFAZA VE TAŞIMA EBV Real-TM aşağıdakilerden ekstrakte DNA analizi yapabilir: Tam kan, buffy coat; doku; İdrar (sedimenti); Swablar ; tükürük; plazma; salgı Örnekler 12 saatten fazla olmamak koşulu ile +2-8 C 'de muhafaza edilir ya da -20 C to - 80 C'de donduurulur. Klinik örneklerin taşınması, etiyolojik ajanların taşınmasına yönelik ülke, federal, eyalet ya da yerel yönetmeliklere, uymak zorundadır. DNA İZOLASYON Herhangi bir ticari RNA / DNA izolasyon kiti, burada belirtilen IVD-CE "NUMUNE TOPLAMA, MUHAFAZA VE TAŞIMA" paragrafındaki örnek türleri için valide ise, kullanılabilir. Sacace Biotechnologies aşağıdaki kitleri kullanmanızı önerir: DNA-Sorb-B (Sacace, REF K-1-1/B); Ribo Virus 50 spin column extraction kit (Sacace, REF K-2-C); SaMag Viral Nucleic Acids Extraction kit (Sacace, REF SM003) plazma,salgı için; SaMag STD DNA Extraction kit (Sacace, REF SM007) idrar sedimenti, swablar için. Lütfen, RNA ekstraksiyonunu, üreticinin talimatlarına uygun olarak gerçekleştirin.

9 NUMUNE VE REAKTİF HAZIRLAMA (modül No.2 ile sağlanan reaktifler) 1. Lysis Solution ve Washing Solution (+2-8 C de muhafaza edildikleri için) buz kristalleri yok olana kadar 6056 C' ye kadar ısıtılmalıdır ml polipropilen tüplere gereken miktarda hazırlayın. 3. Her tüpe direkt 10 µl Internal Control ve 300 µl Lysis Solüsyon ekleyin. 4. Uygun tüpe 100 µl numunelerden ekleyin. 5. Kontrolleri aşağıdaki gibi hazırlayın : Cneg etiketli tüpe 100 µl of C (Negative Control) ekleyin. CPOs etiketli tüpe 90 µl C- ve 10 µl EBV DNA&IC Glob C ekleyin 6. Tüpleri vorteksleyin ve 7-10 saniye santrifüjleyin. 7. Sorbenti kuvvetlice vorteksleyin ve her tüpe 25 µl ekleyin sn. vorteksleyin ve bütün tüpleri, oda sıcaklığında 5 dk. inkübe edin. 9. Bütün tüpleri 1 dak g'de santrifüjleyin ve tıkaçlı aerosol bariyer uçlu mikropipet kullanarak, her tüpten pıhtıyı dağıtmadan, süpernatantı dikkatlice ayırın ve kaldırın. Tüpler arasında pipet uçlarını değiştirin. 10. Her tüpe 300 µl Washing Solution ekleyin. Sorbent tamamen tekrar süspanse edilene kadar kuvvetlice vorteksleyin, 1 dak g de santrifüjleyin dikkatlice çıkarın ve pıhtıyı bozmadan her tüpten atın. Tüpler arasında pipet uçlarını değiştirin. 11. Her tüpe 500 µl Washing Solution ekleyin. Kuvvetlice vorteksleyin ve 1 dak g'de santrifüjleyin ve tıkaçlı aerosol bariyer uçlu mikropipet kullanarak, her tüpten pelleti dağıtmadan, süpernatantı dikkatlice ayırın ve kaldırın. Tüpler arasında pipet uçlarını değiştirin. 12. Adım 11 i tekrarlayın. 13. Bütün tüpleri kapakları açık halde 65 C'de 10 dak. inkübe edin. 16. Pıhtıyı 100 µl DNA-eluent ile resüspanse edin. 65 C 'de 10 dak. inkübe edin ve periyodik olarak vorteksleyin. 17. Maksimum hızda ( g) 2 dakika boyunca tüpleri santrifüjleyin. Süpernatant, amplifikasyon için hazır DNA içerir.

10 PROTOKOL 1. Gereken miktardaki tüpleri veya PCR plate'leri hazırlayın. 2. Yeni steril tüp içerisinde her numune için 10*N µl PCR-mix-1, 5*N µl PCR-mix-2 buffer ve 0,5*N µl Hot Start DNA Polymerase hazırayın. 3. Her tüpe 15 µl Reaction Mix ekleyin. 4. Reaksiyon karışım ile uygun tüplere 10 µl ekstrakte DNA örneği ekleyin. 5. Kalitatif çalışma için 1 pozitif kontrol ve 1 negatif kontrol hazırlayın. Cpos etiketli tüpe 10 µl QS2 ekleyin; Cneg etiketli tüpe 10 µl TE-buffer ekleyin; 6. Kantitatif analiz için 4 tüp hazırlayın ve QS1 ve QS2 standardları çift uygulayın. Tüpleri kapatın ve onları bu sıraya göre cihaza aktarın: numune, negatif kontroller, pozitif kontrol, Standartlar Real time cihaza aşağıdaki gibi bir sıcaklık profili oluşturun: Evre Beklem e Cycling Cycling 2 Sıcaklı k, С Rotor-tip Enstrümanlar 1 Süre Floresan Tespiti Cycle tekrarla rı Sıcaklı k, С Plaka türü veya modüler cihazlar2 Süre Floresan Tespiti Cycle tekrarla rı dk dk sn. sn sn. sn sn sn sn. - sn. FAM (Yeşil) FAM sn. JOE(Sarı), sn. JOE/HEX/Cy3, Rox Rox/TexasKırm sn. (Turuncu) sn. _ 1 Örneğin; Rotor-Gene 3000/6000/Q (Corbett Research, Qiagen) 2 örneğin, SaCycler-96 (Sacace), CFX96 TM /iq5 (BioRad); Mx3005P / Mx3000P (Agilent), ABI 7300/7500/StepOne Real Time PCR (Applied Biosystems), SmartCycler (Cepheid) 5 40

11 SONUÇLARIN YORUMLANMASI Sonuçlar, eşik hattı ile floresan eğrinin geçiş varlığı sayesinde yorumlanır. Eşik çizgisini ayarlamak için, floresan eğrilerinin linear olduğu seviyede çizgiyi yerleştirin. EBV LMP-gen DNA amplifikasyonu JOE(Sarı)/HEX/Cy3 kanalında tespit edilir; DNA amplifikasyonu ( -globin gen) IC glob FAM (Yeşil) kanalda algılanır (sadece hücre süspansiyonun toplam DNA ekstraksiyonunda (tam kan, lökositler, biyopsi ve otopsi materyal, swablar) Eksojen Internal Kontrol IC Rox (Turuncu)/TexasKırmız kanalda algılanır. Kalitatif analiz Sonuçlar, amplifikasyon ve ekstraksiyon pozitif ve negatif kontrolleri geçmişse, ilgilisi olan için geçerli kabul edilir. Kontrol Sonuçları Kontrol C- EBV C+ Evresi Kontrol DNA izolasyon DNA İzolasyon, PCR Ct FAM Ct Ct Rox (Yeşil) JOE (Yellow)/HEX/Cy3 (Turuncu)/TexasKır Yorumlama mızı Pos (< 30) OK Pos (< 25) Pos (< 30) Pos (< 30) OK TE-buffer PCR _ OK QS2 PCR Pos (< 31) Pos (< 31) Pos (< 31) OK JOE(Sarı)/HEX/Cy3 kanaldaki Ct değeri sıfırdan farklı ise (Ct<35), numune EBV için pozitif olarak dikkate alınır. Numunesi Ct değeri JOE(Sarı)/HEX/Cy3 kanalında birden fazla 35 ise, EBV için kesin olarak kabul edilmektedir. Bu örnek için Ek çift çalışma yapılmalıdır; (Sadece hücre süspansiyonu için) kanal FAM içinde Ct <33 (Yeşil) ile numuneler, Kanal Rox (Turuncu)/TeksasKırmızısında Ct <33 ve kanal JOE (Sarı)/HEX/Cy3 içinde floresan sinyali olmayanlarda negatif olarak yorumlanır. Sinyali olmayan numuneler (Sadece hücre süspansiyonu için) FAM (Yeşil) ve Rox (Turuncu /Texas Red geçersiz olarak yorumlanır. (Orange)/TexasRed are interpreted as invalid.

12 Hücre süspansiyonundan elde edilen örneklerin kantitatif analizi (tam kan, lökositlerin, biyopsi ve otopsi materyali, bezlerden) Her kontrol ve hasta örneği için, 105 hücrede bulunan EBV DNA konsantrasyonunu asağıdaki formülü kullanarak hesaplayın: using the following formula: EBV DNA kopya/reaksiyon (JOE(Sarı)/HEX/Cy3 kanal) IC Glob DNA kopya/reaksiyon (FAM/(Yeşil) kanal) x 2*10 5 = kopya EBV DNA/10 5 hücre Her kontrol ve hasta örneği için, 105 hücrede bulunan EBV DNA konsantrasyonunu asağıdaki formülü kullanarak hesaplayın: 10 5 cells using the following formula: log [EBV DNA kopya/ IC Glob DNA kopya x 2*10 5 ] = log (kopya EBV DNA/10 5 hücre) Sonuçlar elle hesaplanabilir veya Excel tabloları kullanarak. Bu kopya örneklerinin isimlerini yapın ve ve ilk sütununa ekleyin (Sütun A). Kanal Joe(Sarı)/HEX/Cy3 ye EBV DNA konsantrasyonlarını kopyalayın ve Excel tablosunun (Sütun B) ikinci sütununa yapıştırın. Kanal Fam (Yeşil) e IC Glob konsantrasyonlarını kopyalayın ve Excel tablosu (Sütun C) üçüncü sütununa yapıştırın. Sütun D formül D = LOG (B / C * ) yerleştirin: log değerleri görünecektir. E sütununa formül E=B/C* koyun: kopya değerler/105 hücre görünecektir. Adı Kal. Konsantra syon (kopya/reaksiyon) Kal. Konsantra syon (kopya/reaksiyon Log EBV/10 5 kopya EBV/10 5 A B C D E , , , QS QS QS QS Neg PCR

13 Plazma, likör, amniyotik sıvı, bronş lavajı, bezlerden ekstraksiyon örneklerin kantitatif analizi Her kontrol ve hasta örneği için EBV DNA/ml deki konsantrasyonunu asağıdaki formülü kullanarak hesaplayın: EBV DNA kopya/reaksiyon (JOE(Sarı)/HEX/Cy3 kanal) IC DNA kopya/reaksiyon (Rox(Turuncu)/TexasKırmızı-kanal) x IC katsayısı* = kopya EBV/ml *katsayısı her parti için özel ve kit içindeki EBV TM Quant Veri Kart raporlandığı gibi. Sonuçlar elle hesaplanabilir veya Excel tabloları kullanarak. Bu kopya örneklerinin isimlerini yapın ve ve ilk sütununa ekleyin (Sütun A). Kanal Joe(Sarı)/HEX/Cy3 ye EBV DNA konsantrasyonlarını kopyalayın ve Excel tablosunun (Sütun B) ikinci sütununa yapıştırın. Kanalı Rox(Turuncu)/TexasRed IC DNA konsantrasyonlarını kopyalayın ve Excel tablosu (Sütun C) üçüncü sütunnuna yapıştırın. Sütun D ye EBV Veri Kartının (değer her parti için özeldir) IC katsayısının değerini raporunu yerleştirin. Sütun E ye formülü yerleştirin. =B3/C3*D3: kopya değerleri /ml görünücektir. Adı Kal. Konsantra syon (kopya/reaksiyon) Kal. Konsantra syon (kopya/reaksiyon) Rox(Turuncu)/Texa IC katsayısı Kopya EBV DNA/ml A B C D E QS QS QS QS Neg PCR

14 PERFORMANS KARAKTERİSTİKLERİ Analitik Özgünlük Primerler ve probların analitik özgünlüğü negatif numuneler ile valide edilmiştir. Spesifik EBV primerler ve problar ile herhangi bir sinyal oluşturmamışlardır. EBV Real TM Quant özgüllüğü 100% idi. EBV Real TM Quant kiti potansiyel çapraz reaktivite - TM Quant grup kontrolüne karşı test edildi (CMV, HSV 1 & 2, HHV 6, HHV 8, VZV, Parvovirüs ve diğerleri). Diğer ptojenler ile herhangi bir çapraz reaktivite gözlemlenmemiştir. Analitik Hassasiyet EBV Real TM Quant kiti 200 kopya dan az olmayan/ml hassasiyet ile testlerin% 100 EBV DNA algılamasını sağlar veya105 hücre başına EBV DNA 5 kopya. EBV Real TM Quant PCR kitin doğrusal aralığı EBV DNA kopya/ml dir. Eğer sonuç 500 kopya ml az ise, sonuç "en az 500 EBV kopya / ml" olarak belirtilmelidir. Hedef bölge LMP-gen

15 SORUN GİDERME 1. IC (Rox (Turunuc)/TexasRed kanal) zayıf veya hiç bir sinyal. PCR inhibe edilmiştir. Önerilen DNA ekstraksiyon metodunu kullandığınızdan ve üreticinin talimatlarını izlediğinizden emin olun. Bütün tüpleri ekstrakte DNA pipetlenmesinden önce 2 dk. maksimum ( g) hızda yeniden santrifüjleyin ve süpernatatntı dikkatlice alın. Pelleti dağıtmayın, sorbent reaksiyonu inhibe eder. Reaktif muhafaza koşulları talimatlara uygun değil. Muhafaza koşullarını kontrol edin. PCR koşulları talimatlara uygun değil. Protokolde belirtilen IC tespit floresan kanalını seçin ve PCR koşullarını kontrol edin. 2. Zayıf ya da olmayan Pozitif Kontrol sinyali. PCR koşulları talimatlara uygun değil. Manuelde belirtilen floresan kanalını seçin ve aplifikasyon prosedürünü kontrol edin. 3. Ekstraksiyon Negatif Kontrol ile JOE(Yellow)/HEX/Cy3 sinyal. DNA ekstraksiyon prosedürü esnasında kontaminasyon. Tüm sonuçlar geçersizdir. Bütün yüzeyleri ve enstrümanları sodyum hipoklorid ve etanol ile dekontamine edin. Ekstraksiyon prosedürü esnasında sadece filtre pipet uçlarını kullanın. Tüpler arası pipet uçlarını değiştirin.. Yeni reaktif setleriyle DNA ekstraksiyonunu tekrarlayın. 4. PCR Negatif Kontrol (DNA-buffer) ile herhangi bir sinyal yok. PCR hazırlama prosedürü esnasında kontaminasyon. Tüm sonuçlar geçersizdir. Bütün yüzeyleri ve enstrümanları sodyum hipoklorid ve etanol veya özel DNA dekontaminasyon reaktifleri ile dekontamine edin.. Yeni reaktif setleriyle PCR hazırlamayı tekrarlayın.

16 KULLANILAN SEMBOLLERİN ANLAMLARI Liste Numarası Dikkat! Lot Numarası <n> test için yeterli içerik. in Vitro Diagnostic Kullanım için. Versiyon Store at NCA Negative Control of Amplifikasyon Üretici NCE Ekstraksiyon Negatif Kontrol Kullanım için talimatlara bakınız C+ Pozitif Kontrol Amplifikasyon Son Kullanım Tarihi IC Internal (iç) kontrol * SaCycler Sacace Biotechnologiestescilli markasıdır. * CFX96 and iq5 Bio-Rad Laboratories tescilli markasıdır. * Rotor-Gene Qiagen tescilli markasıdır. * MX3005P Agilent Technologies tescilli markasıdır. * ABI Applied Biosystems tescilli markasıdır. * SmartCycler Cepheid tescilli markasıdır. Sacace Biotechnologies Srl via Scalabrini, Como Italy Tel Fax mail:

17 web: mail: web: