RIDASCREEN Campylobacter Makale no.: C2401 R-Biopharm AG, An der neuen Bergstraße 17, D-64297 Darmstadt, Almanya Telefon: +49 (0) 61 51 81 02-0 / Fax: +49 (0) 61 51 81 02-20
1. Kullanım amacı İn vitro diagnostik kullanım içindir. RIDASCREEN Campylobacter insan dışkı örnekleri ve kültürlerde Campylobacter jejuni and Campylobacter coli antijenlerinin kalitatif tespiti için enzim immunoassaydir. 2. Özet ve testin açıklaması Campylobacteriosis sadece dünya çapındaki insanlarda ishalin en sık sebebi olarak salmonellosis tarafından aşılır. Campylobacter bakteri tarafından kaynaklanan enterit durumlarındaki büyük artış, genişlikleri, vahşi hayvanlar arasındaki çapraz-tür yaygınlık ve iş ya da ev hayvanları için kullanılan evcil hayvanlar (kuşlar ve memeliler) tarafından arttırılır. Bu bakteriler özellikle kümes hayvanlarının bağırsak sistemlerinde kommensal bakteri gibi insan gıda zincirine girer. Patojenlerin taşınması için diğer araçlar süt, kıyma ve içme suyu gibi gıdalardır. Çok sayıda host tarafından çevreye salınan Campylobacter patojenlerinin büyük miktarları sonunda kontamine gıda yoluyla insanlara bulaşır. Campylobacter enterit aktarımının diğer olası yolları campylobacteriosis ve, özellikle çocuklarda, fekal-oral yolla enfekte evcil hayvanlarla direkt temastır. 500 mikroorganizma enfeksiyon dozu nispeten düşüktür. Campylobacter kabaca bilinen 15 türünden, C. jejuni ve C. coli insanlarda gastroenterite neden olanlardır. 2-10 günlük inkübasyon dönemi sonrası işlenmemiş bireyler dışkılarda 4 haftaya kadar bulaşıcı patojenleri boşaltır. Bağışıklık eksikliği olan bireyler belirsiz şekilde patojenleri boşaltmaya devam edebilir. Çoğu enfeksiyon asemptomatik gidişat izler ancak prodromal aşamadan sonra hasta olanlar ateş, baş ağrısı, kas ağrısı, eklem ağrısı, ishale ek olarak yorgunluk, karın krampları ve enteritin tipik belirtileri olarak karın ağrısından muzdariptir. İshalin kıvamı lapa gibiyle masif, sulu dışkı aralığındadır, bazen kanla karışıktır. Eklem enflamasyonu ve Guillain-Barré sendromunun nadir oluşumu hastalığın geç sekelleridir. Sıvı ve elektrolit değiştirme ile semptomatik tedavi en yaygın olanıdır; antibiyotik tedavisi sadece hastalığın ciddi vakalarında uygulanır. Bu duyarlı patojenlerin kültürlenmesindeki başarı taze mümkün dışkı örnekleri ve kısa mesafeler üzerinden soğutulmuş.ulaşım gerektirir. Antijenlerin tespiti için modern teknikler bu önkoşullara bağlı değildir, örneğin patojenlerden sonra bir dışkı örneğinde spesifik Campylobacter antijenini tespit eden RIDASCREEN Campylobacter ELISA artık kültürlenemez. 3. Test prensibi RIDASCREEN Campylobacter Testi sandviç-tip yöntemde monoklonal antikorlar kullanır. Mikrokuyu plağın kuyu yüzeyi Campylobacter antijenleri için monoklonal antikorlarla kaplıdır. RIDASCREEN Campylobacter 13-09-05 2
Bir pipet, incelenecek dışkı örneğinin bir süspansiyonunu ve oda sıcaklığında (20 25 C) inkübasyon için biyotinli anti-campylobacter antikorlarıyla (Conjugate1) beraber mikrokuyu plağın kuyusuna kontrol numunelerini yerleştirmek için kullanılır. Bir yıkama aşamasından sonra streptavidin poly-peroksidaz konjugat (Conjugate 2) eklenir ve oda sıcaklığında (20 25 C) tekrar inkübe edilir. Numunedeki Campylobacter antijenlerinin varlığıyla, immobilize antikorlar, antijenler ve konjuge antikorlar bir sandviç kompleksi oluşturur. Başka yıkama aşaması bağlanmamış streptavidin poly-peroksidaz konjugatı uzaklaştırır. Substrat eklendikten sonra est pozitifse bağlanan enzim mikrokuyu plağın kuyularındaki önceden renksiz olan solüsyonun rengini maviye dönüştürür. Durdurma reaktifi eklenmesiyle renk maviden sarıya değişir. Ekstinksiyon numunede bulunan Campylobacter antijen konsantrasyonuyla orantılıdır. 4. Sağlanan reaktifler Kit içindeki reaktifler 96 tespit için yeterlidir. Plate Diluent 1 Wash 96 Microwell plate, 12 microwell strips (which can be divided) in the strip holder; coated with specific monoclonal antibodies to the antigens of Campylobacter jejuni and Campylobacter coli 100 ml Sample dilution buffer, protein-buffered NaCl solution; ready to use, blue color 100 ml Wash buffer, phosphate buffered NaCl solution (concentrated 10-fold); contains 0.1% thimerosal Control + Control - Conjugate 1 2 ml 2 ml 13 ml Positive control (inactivated Campylobacter antigen; ready for use Negative control (sample dilution buffer); ready for use Biotin-conjugated antibodies to Campylobacter jejuni and Campylobacter coli in stabilized protein solution; ready for use; blue color Conjugate 2 Substrate Stop 13 ml Streptavidin poly-peroxidase conjugate in stabilized protein solution; ready for use; orange colored 13 ml Hydrogen peroxide/tmb; ready for use 8 ml Stop reagent; 1 N sulphuric acid; ready for use 5. Reaktifler ve saklanması Tüm reaktifler 2 8 C de saklanmalıdır ve etikette basılı tarihe kadar kullanılabilir. Sağlanan seyreltilmiş yıkama buffer 2 8 C de saklanır, maksimum 4 hafta kullanılabilir. Mikrobiyel kontaminasyon önlenmelidir. Son kullanma tarihinden sonra kalite garantisi artık geçerli değildir. Alüminyum çanta kilit parçalanmayacak şekilde makasla açılmalıdır. Gerekmeyen herhangi mikrokuyu strip alüminyum çantaya geri konulmalı ve hemen 2 8 C de RIDASCREEN Campylobacter 13-09-05 3
saklanmalıdır. Renksiz substratın ayrışması veya oto-oksidasyon nedeniyle maviye dönmesinden korunması için direkt ışıktan korunmalıdır. Substrat maviye dönmüşse kullanılmamalıdır. 6. Gerekli ek reaktifler ve gerekli ekipman 6.1. Reaktifler - Distile veya deiyonize su 6.2. Ekipman - Test tüpleri - Tek kullanımlık pipetler (Makale no.: Z0001) - Vorteks karıştırıcı (isteğe bağlı, 9.3. bakın) - 50 100 µl ve 1 ml hacimleri için mikropipet - Ölçüm silindiri (1000 ml) - Zamanlayıcı - Mikrokuyu plaklar veya çok kanallı pipetler için yıkama cihazı (300 µl) - Mikrokuyu plaklar için fotometre (450 nm ve referans filtre 620 650 nm) - Filtre kağıdı (laboratuvar havluları) - 0.5% hipoklorit solüsyonu ile atık kabı 7. Kullanıcılar için önlemler Sadece in vitro diagnostik kullanım içindir. Bu test sadece eğitimli laboratuvar personeli tarafından yapılmalıdır. Medikal laboratuvarlardaki iş kılavuzu gözlenmelidir. Bu test için kullanıcı talimatlarına her zaman sıkıca bağlı kalın. Numuneler veya reaktifler ağızla pipetlenmemeli ve yaralı cilt veya mukoza membranlarıyla temas etmemelidir. Numuneleri kullanırken kişisel koruyucu donanım (uygun eldivenler, laboratuvar giysisi, emniyet gözlükleri) giyin ve testin tamamlanmasından sonra ellerinizi yıkayın. Örneklerin işlendiği alanlarda sigara içmeyin veya birşey yiyip içmeyin. Daha fazla detay için www.r-biopharm.com. da Malzeme Güvenlik Bilgi Formlarına bakın (MSDS). Bu kit inaktive Campylobacter antijeni içeren bir pozitif kontrol içerir. Dolayısıyla hasta örnekleri gibi olası bulaşıcı materyal gibi işlenmeli ve ulusal güvenlik düzenlemeleri ile uyumlu kullanın. RIDASCREEN Campylobacter 13-09-05 4
Yıkama buffer koruyucu olarak 0.1% Thimerosal içerir. Bu madde cilt veya mukoza membranlarıyla temas etmemelidir. Kullanımdan sonra tüm reaktifler ve materyallerin uygun ve sorumlu atılımını sağlayın. Atım için lütfen ulusal düzenlemelere bağlı kalın. 8. Numune toplama ve saklama Kullanılana kadar test materyalini 2 8 C de saklayın. Eğer materyal test için 3 gün içinde kullanılamayacaksa -20 C veya daha soğukta saklanmayı öneririz. Numunenin tekrar tekrar dondurulup çözdürülmesinden kaçının. Örnek dilüsyon seyrelttikten sonra 1:11, yedi gün içinde kullanım için 4 C de saklanabilir. buffer içinde bir dışkı örneğini Dışkı örnekleri ve rektal lekeler RIDASCREEN Campylobacter Testine müdahele edebildiğinden koruyucular, hayvan serumları, metal iyonları, oksitleme maddeleri ya da deterjanlar ile taşıma ortamı içeren taşıma kaplarında toplanmamalıdır. Genelde pazarlanan taşıma ortamında paketlenen dışkı örnekleri (Cary Blair, Amies) RIDASCREEN Campylobacter ELISA içinde kullanılabilir. Ancak burada gereken örneğin ön dilüsyonu dikkate alınmalıdır. Mümkün olduğunca, Diluent 1 içinde dışkı örneğinin son dilüsyonu tam 1:11 olmalıdır. Rektal lekeler kullanılıyorsa test için dışkı materyali hacminin yeterli olduğundan emin olunmalıdır (yaklaşık 100 mg). Kontakt izleme asemptomatik taşıyıcaları tanımlamak için klinik belirtiler göstermeyen kontakt kişilerden alınan dışkı örnekleri içermelidir. 9. Test prosedürleri 9.1. Genel bilgi Tüm reaktifler ve mikrokuyu plak kullanımdan önce oda sıcaklığına(20-25 C) getirilmelidir. Mikrokuyu stripler oda sıcaklığına erişene kadar alüminyum çantadan çıkartılmamalıdır. Bu reaktifler kullanımdan hemen önce iyice karıştırılmalıdır. Kullanımdan sonra mikrokuyu stripler (kapalı çantalarda) ve reaktifler tekrar 2 8 C de saklanmalıdır. Birkez kullanıldığında mikrokuyu stripler tekrar kullanılmamalıdır. Bu reakifler ve mikrokuyu stripler paketleme zarar görmüşse veya şişelerde sızıntı varsa kullanılmamalıdır. Çapraz kontaminasyonu önlemek için örneklerin kit bileşenleriyle direkt teması önlenmelidir. Bu test direkt güneş ışığında yapılmamalıdır. Buharlaşma kayıplarını önlemek için mikrokuyu plağın kaplanmasını veya plastik sargıyla sızdırmazlık sağlanmasını öneririz. 9.2. Yıkama buffer hazırlama 1 kısım yıkama buffer konsantreyi Wash 9 kısım distile suyla karıştırın. Konsantre içinde bulunan herhangi kristal 37 C de su banyosunda ısıtılarak önceden çözülmüş olmalıdır. RIDASCREEN Campylobacter 13-09-05 5
9.3 Örnekleri hazırlama 1 ml RIDASCREEN örnek dilüsyon buffer Diluent 1 ile etiketli test tüpünü doldurun. Sadece ikinci çıktı üzerine ince dışkı (yaklaşık 100 µl) örneğini aspire etmek için tek kullanımlık pipet (makale no. Z0001) kullanın ve bir süspansiyon yapmak için test tüpü içinde buffera ekleyin. Katı dışkı örneğiyle bir süspansiyon yapmak için, spatula veya tek kullanımlık aşılama döngüsüyle eşit miktarda (yaklaşık 50100 mg) ekleyin. Aspirasyon ve tek kullanımlık pipetten ejeksiyon ile veya alternatif olarak vorteks karıştırıcı içinde karıştırarak dışkı süspansiyonunu homojenize edin. Kalın dışkı partiküllerinin yerleşmesi için kısa bir süre süpansiyonu beklemeye bırakın; dışkı süspansiyonunun bu net supernatantı testte direkt olarak kullanılabilir. Test prosedürü ELISA sisteminde yapılıyorsa, supernatant partikülsüz olmalıdır. Bu durumda örneğin 5 dakika 2,500 G da santrifüj edilmesi önerilir. Not: Diluent 1 içinde seyreltilmiş dışkı örnekleri kullanılması şartıyla herhangi başka RIDASCREEN ELISA içinde kullanılabilir. 9.4. İlk inkübasyon Strip tutucuda yeterli sayıda kuyuyu doldurduktan sonra 100 µl pozitif Control +, negatif Control - veya dışkı örneği süspansiyonu (veya, mevcutsa koloni süspansiyonu supernatantı) kuyulara ekleyin. Daha sonra 100 µl biyotin- konjuge antikor Conjugate 1 ekleyin ve karıştırın (plağın kenarına hafifçe vurarak); sonra oda sıcaklığında (20 25 C) 60 dakika inkübe edin. 9.5. Yıkama Doğru sonuçlar elde etmek için dikkatli yıkama önemlidir ve bu nedenle talimatlara sıkı şekilde uyarak yapılmalıdır. Kuyularda inkübe edilen madde yerel düzenlemelere uygun olarak atım için atık kabına boşaltılmalıdır. Bundan sonra kalan nemi uzaklaştırmak için emici kağıt üstünde plağa vurun. Sonra her defasında 300 µl yıkama buffer kullanarak plağı 5 kez yıkayın. Emici kağıdın hala kuru ve kullanılmamış kısmında her yıkamadan sonra kuyulara vurarak onların tamamen boşaltıldığından emin olun. Mikroplak yıkayıcı veya tam otomatik ELISA kullanıyorsanız, makinenin doğru şekilde ayarlandığından emin olun; gerekirse üreticiden ayarları isteyin. R-Biopharm tarafından teslim edilen araçlar zaten onaylanmış ayarlar ve çalışma protokolleri ile programlıdır. Yıkama iğnelerinin tıkanmasını önlemek için, sadece partikülsüz dışkı süspansiyonları dağıtılmalıdır (Kısım 9.3. bakın, Örnekleri hazırlama). Ayrıca tüm sıvının her yıkama aşaması esnasında aspire edildiğinden emin olun. RIDASCREEN Campylobacter 13-09-05 6
9.6. İkinci inkübasyon Kıyulara 100 µl streptavidin poly-hrp konjugat Conjugate 2 doldurmak için bir pipet kullanın, sonra oda sıcaklığında (20 25 C) 30 dakika inkübe edin. 9.7. Yıkama Kısım 9.5. de belirtildiği gibi yıkayın 9.8. Üçüncü inkübasyon Tüm kuyuları 100 µl substrat Substrate ile doldurun. Sonra oda sıcaklığında (20 25 C) karanlıkta 15 dakika plağı inübe edin. Daha sonra reaksiyonu durdurmak için 50 µl durdurma reaktifi Stop ile tüm kuyuları doldurun. Plağın kenarına hafifçe vurarak dikkatlice karıştırdıktan sonra 450 nm de ekstinksiyon ölçün (isteğe bağlı: 450/620 nm). Havada sıfır noktasını ayarlayın, yani mikrokuyu plak olmadan. Not: Yüksek-pozitif hasta örnekleri substratın siyah renkli çökeltilerine neden olabilir. 9.9 Kısaltılmış test protokolü Kısım 9.4 ve 9.6 da belirtilen inkübasyon süreleri önemli ölçüde kısaltılabilir, plak 37 C de inkübe ediliyorsa ve titreşim frekansı 20 25 Hz (DSX, Fa. Dynex). İnkübasyon süreleri aşağıdaki gibi değişir: İnkübasyon 1: 30 dk İnkübasyon 2: 15 dk İnkübasyon 3: 15 dk Ayrı mikrokuyu plak çalkalayıcıları uygundur, Eppendorf tarafından Thermomixer gibi (frekans ayarı: 850 rpm) veya ayrıca LTF Labortechnik tarafından DTS2 (frekans ayarı: 800 rpm) gibi. 10. Kalite kontrol reaktif süresi bitiminin belirtileri Kalite kontrol amaçları için, pozitif ve negatif kontroller testin doğru şekilde yapıldığından ve reaktiflerin stabil olduğundan emin olmak için her test yapıldığında kullanılmalıdır. Negatif kontrol için ekstinksiyon oranı (O.D.) 450 nm de 0.2 den azsa (450/620 nm de 0.160 dan az) ve pozitif kontrol için ölçülen değer 450 nm veya 450/620 nm de 0.8 den büyükse test doğru yapılmıştır. Değer negatif kontrol için 0.2 (0.160) den fazlaysa bu yetersiz yıkama olduğunu gösterebilir. Olması gereken değerlerden sapma, bulanık veya kuyulara doldurulmadan önce renksiz substratın maviye dönmesi reaktiflerin süresinin dolmuş olduğunu gösterebilir. Öngörülen değerler karşılanmazsa aşağıdaki noktalar testi tekrarlanmadan önce kontrol edilmelidir: - Kullanılan reaktiflerin son kullanma tarihleri - Kullanılan ekipmanın işlevselliği (ör. kalibrasyon) RIDASCREEN Campylobacter 13-09-05 7
- Doğru test prosedürü - Kontaminasyon veya sızıntılar için kit bileşenlerinin görsel kontrolü maviye dönen substrat solüsyonu kullanılmamalıdır. Test tekrarlandıktan sonra şartlar hala yerine gelmediyse lütfen üretici veya yerel R-Biopharm distribütörünüzle temasa geçin. 11. Değerlendirme ve yorumlama 11.1. Cut-off hesaplama Cut-off belirlemek için, 0.15 ekstinksiyon birimleri negatif kontrol için ölçülen ekstinksiyona eklenir. Cut-off = negatif kontrol için ekstinksiyon + 0.15 11.2. Test sonuçları Ekstinksiyon oranı hesaplanan cut-off değerinin 10% dan fazla üstündeyse numunenin değerlendirilmesi pozitifdir. Ekstinksiyon oranı cut-off değerinin 10% düşüğü ve 10% yükseği arasında değişiyorsa numunenin değerlendirilmesi marjinaldir. Taze dışkı örneğiyle tekrar inceleme yine gri bölge içine düşüyorsa örneğin değerlendirilmesi negatifdir. Hesaplanan cut-off değerinin 10% dan fazla altında ekstinksiyonlara sahip örnekler negatif düşünülmelidir. 12. Metod sınırlamaları RIDASCREEN Campylobacter Testi dışkı örneklerinde Campylobacter jejuni ve Campylobacter coli spesifik antijenlerini belirler. Klinik belirtilerin ortaya çıkması veya şiddeti için ekstinksiyonun belirlenen seviyesiyle ilişkilendirmek mümkün değildir. Elde edilen sonuçlar her zaman klinik işaretler ve belirtiler ile birlikte yorumlanmalıdır. Pozitif sonuç başka bulaşıcı patojen varlığını ekarte etmez. Negatif sonuç C. jejuni veya C. coli enfeksiyon olasılığını ekarte etmez. Böyle bir sonuç patojenin aralıklı atılımı, veya örnekteki antijen miktarının çok az olmasından kaynaklanabilir. Hasta geçmişi C. jejuni veya C. coli ile enfeksiyon şüphesini destekliyorsa inceleme başka dışkı örneğiyle tekrarlanmalıdır. Marjinal bir sonuç dışkı örneğindeki antijenlerin homojen olmayan dağılımından kaynaklanabilir. Bu durumda inceleme aynı örnekten ikinci bir süspansiyonla tekrarlanmalı veya başka dışkı örneği istenmelidir. RIDASCREEN Campylobacter 13-09-05 8
13. Performans özellikleri 13.1. Test kalitesi RIDASCREEN Campylobacter ELISA performansı altın standartla kıyaslama çalışmasında değerlendirildi, ör. mikroaerofilik koşullar altında CCD agar üstünde patojen yetiştirme. RIDASCREEN Campylobacter ELISA bir katılımcı, laboratuarın rutin diagnostik pratiğinden toplam 574 dışkı örneğini test etmek için kullanıldı. Çalışmanın sonuçları Tablo 1.de özetlenmektedir. Tablo 1: CCDA plaklarında yetiştirmeye karşı RIDASCREEN Campylobacter kıyaslaması Kültür (CCDA) Pozitif Negatif RIDASCREEN Campylobacter Pozitif 61 4 Negatif 2 507 Duyarlılık: 96.8 % Özgüllük: 99.2 % Pozitif prediktif değeri (PPV): 93.8 % Negatif prediktif değeri (NPV): 99.6 % 13.2. Analitik duyarlılık C. jejuni ve C. coli tespitinin analitik sınırları ayrı ayrı belirlendi. Bu, RIDASCREEN Campylobacter ELISA içinde hala pozitif tanımlanabilen en düşük patojen konsantrasyonunu açıklar (hesaplanan cut-off >10% yukarısı). 90 deneme temelinde hesaplanan (CI 95%) Campylobacter jejuni için cut-off 1.9 x 10 4 CFU/ml dir ve Campylobacter coli için 1.1 x 10 6 CFU/ml dir. 13.3. Çapraz reaktivite Bağırsak kanalından çeşitli patojenik mikroorganizmalar RIDASCREEN Campylobacter ELISA ile incelendi ve çapraz reaktivite gözlenmedi. Bu testler bakteriyel süspansiyonlar (10 6-10 9 CFU/ml), parazit kültürleri (10 7-10 9 organizma/ml) ve virüs enfekte hücrelerden hücre kültür supernatantları ile yapıldı. Çalışmanın sonuçları Tablo 2 de listelenmektedir. İki Campylobacter türü Campylobacter jejuni ve Campylobacter coli hariç testteki organizmaların hiçbiri RIDASCREEN Campylobacter ELISA içinde tepkimedi. Tablo 2: Bağırsak kanalından patojenik mikroorganizmalarla çapraz reaktivite Organizma Köken/kaynak [OD 450] Adenovirus Bulaşıcı kültür supernatantı 0.086 RIDASCREEN Campylobacter 13-09-05 9
Aeromonas hydrophila Kültür 0.081 Astrovirus Bulaşıcı kültür supernatantı 0.068 Bacillus cereus Kültür 0.070 Bacteroides fragilis Kültür 0.067 Campylobacter coli Kültür 2.007 Campylobacter fetus Kültür 0.066 Campylobacter jejuni Kültür 3.622 Campylobacter lari Kültür 0.074 Campylobacter upsaliensis Kültür 0.073 Candida albicans Kültür 0.062 Citrobacter freundii Kültür 0.063 Clostridium difficile Kültür 0.055 Clostridium perfringens Kültür 0.055 Clostridium sordellii Kültür 0.060 Cryptosporidium muris Kültür 0.062 Cryptosporidium parvum Kültür 0.060 E. coli (O26:H-) Kültür 0.058 E. coli (O6) Kültür 0.054 E. coli (O157:H7) Kültür 0.054 Enterobacter cloacae Kültür 0.053 Enterococcus faecalis Kültür 0.059 Giardia lamblia sample Dışkı numunesi 0.078 Klebsiella oxytoca Kültür 0.057 Proteus vulgaris Kültür 0.054 Pseudomonas aeruginosa Kültür 0.056 Rotavirus Bulaşıcı kültür supernatantı 0.066 Salmonella enteritidis Kültür 0.046 Salmonella typhimurium Kültür 0.050 Serratia liquefaciens Kültür 0.047 Shigella flexneri Kültür 0.048 Staphylococcus aureus Kültür 0.051 Staphylococcus epidermidis Kültür 0.052 Vibrio parahaemolyticus Kültür 0.053 Yersinia enterocolitica Kültür 0.046 RIDASCREEN Campylobacter 13-09-05 10
13.4. Kesinlik Testin kesinliğini belirlemek için, altı örnek kullanıldı, her biri testin tüm ölçüm aralığı kaplamış tanımlı ekstinksiyon seviyesiyle (OD). Tablo 3 örneklerin OD spektrumlarını verir. Tablo 3: Örneklerin ekstinksiyon spektrumları Örnekler OD spektrum Örnek 1 1.387-2.575 Örnek 2 0.946-1.758 Örnek 3 0.693-1.287 Örnek 4 0.470-0.874 Örnek 5 0.370-0.686 Örnek 6 0.281-0.523 RIDASCREEN Campylobacter ELISA tekrarlanabilirliği zayıf-yüksek pozitif aralığında tam ölçümü temsil eden listelenmiş altı referansla test edildi. İntra-test tekrarlanabilirliğini belirlemek için bu referansların 39 tekrarı test edildi. Ortalama değerler ve varyasyon katsayıları (VC) kitlerin 3 lotu için belirlendi. İnter-test tekrarlanabilirliği için on ardışık iş gününden örnekler gün başına iki çalışmayla 2 kez test edildi. Ölçümler 3 teknisyen tarafından 3 lotta belirlendi. İnter-lot tekrarlanabilirliği üç kit lotunun hepsi için belirlendi. Çalışmanın sonuçları Tablo 4 de özetlenmektedir. Tablo 4: Altı referansın ortalama değerleri ve varyasyon katsayıları Örnekler Ortalama değer / VC Örnek 1 Örnek 2 Örnek 3 Örnek 4 Örnek 5 Örnek 6 Intra-test Inter-test Inter-lot Kit lot 1 Kit lot 2 Kit lot 3 Kit lot 1 Kit lot 2 Kit lot 3 Kit lotları 1 3 1.625 / 7.18% 1.085 / 7,79% 0.779/ 6.71% 0.539/ 6.18% 0.397 / 9.27% 0.272 / 11.76% 2.487 / 4.33% 1.588 / 5.78% 1.149 / 6.90% 0.710 / 6.27% 0.543/ 4.95% 0.391/ 5.89% 2.269 / 5.94% 1.444 / 5.33% 1.171 / 5.51% 0.707 / 6.91% 0.710 / 5.45% 0.478 / 10.03% 1.993/ 12.17% 1.389 / 15.88% 0.977 / 11.02% 0.638 / 12.46% 0.483/ 15.50% 0.381 / 19.99% 2.188 / 13.46% 1.551/ 13.84% 1.095 / 13.28% 0.689/ 15.74% 0.541 / 17.52% 0.417 / 16.87% 2.273 / 12.80% 1.619 / 13.93% 1.166 / 16.34% 0.804 / 17.27% 0.624/ 17.96% 0.469 / 21.18% 2.151/ 14.24% 1.519 / 16.17% 1.079 / 16.32% 0.710 / 19.50% 0.549 / 21.24% 0.422 / 21.87% RIDASCREEN Campylobacter 13-09-05 11
14. Müdahele edici maddeler Maddelerin aşağıdaki listesi tanımlı konsantrasyonlarda Campylobacter pozitif ve Campylobacter negatif dışkı örneklerine karıştırıldıklarında test sonuçları üstünde önemli ölçüde etkiler görülmedi: baryum sülfat (5% w/w), loperamid (antidiyare ilaç; 5% w/w), Pepto-Bismol (antidiyare ilaç, 5% v/w), mukinler (5% w/w), siklamat (yapay tatlandırıcı, 5% v/w), insan kanı (5% v/w), stearik asit ve palmitinik asit (karışım 1:1, 20% w/w), metronidazol (0.5) (antibiyotik 5% v/w), diklofenak (0.00263% v/w). Ek Teste özgü semboller: Plate Diluent 1 Wash Control + Control - Mikrokuyu plak Örnek dilüsyon buffer Yıkama buffer Pozitif kontrol Negatif kontrol Conjugate 1 Konjugat 1 Conjugate 2 Konjugat 2 Substrate Stop Substrat Durdurma reaktifi RIDASCREEN Campylobacter 13-09-05 12
Bibliyografi 1. Skirrow MB, Blaser MJ (1995): Campylobacter jejuni. In: Blaser MJ,Smith PD, Ravdin JI, Greenberg HB, Guerrant RL (eds) Infections of the Gastrointestinal Tract. Raven Press, New York, 825-248. 2. Kist M, Bereswill S (2001) Campylobacter jejuni. In: Mühldorfer I, Schäfer KP (eds) Emerging bacterial pathogens. Contrib Microbiol Vol.8. Karger, Basel, 150-165. 3. Skirrow MB (1977) Campylobacter enteritis: a new disease. Br Med J 2: 9-11. 4. Rees JH, Soudain SE, Gregson NA, Highes RA (1995) Campylobacter jejuni infection and Guillain-Barré syndrome. N Engl J Med 333: 1374-1379. 5. Beumer RR, Cruysen JJ, Birtantie IR (1988) The occurrence of Campylobacter jejuni in raw cow milk. J Appl Bacteriol 65: 93-96. 6. Jones K (2001) Campylobacters in water, sewage and the environment. J Appl Microbiol 90: 68 S-79 S 7. Skirrow MB, Turnbull GL, Walker RE, Young SEJ (1980) Campylobacter jejuni enteritis transmitted from cat to man. Lancet 1: 1188. 8. Steinbrückner B, Härter G, Pelz K, Kist M (1999) Routine identification of Campylobacter jejuni and Campylobacter coli from human stool samples. FEMS Microbiol Lett 179: 227 232. 9. Kist M (2002) Lebensmittelbedingte Infektionen durch Campylobacter. Bundesgesundheitsbl-Gesundheitsforsch- Gesundheitsschutz 45: 497-506. RIDASCREEN Campylobacter 13-09-05 13