KULLANIM AMACI ELEGANCE Neonatal TSH ELISA, neonatal spot insan kanından tiroid stimule hormonunun değerini (TSH) in vitro diyagnostik kantitatif ölçümlerde kullanılmak için üretilmiştir. ELEGANCE ELİZA PRENSİBİ ELEGANCE ELİZA enzim bağlı bir immuno testtir. İlk olarak TSH spot kandan alınır ve aynı zamanda da TSH bağlı anti TSH antikoru kuyucuğa alınır.numune antijeni, arasına, antikor mikro kuyucuğa bağlı antikor ve biotinlenmiş antikor reaktifi arasında sandviç haline gelir. Kuyucuklar, bağlanmayan materyaller için yıkanır. Streptavidin peroksidaz (Amplifikasyon reaktifi)eklenir ve çok yerde biotinlenmiş antikora bağlanır. Yıkamadan sonra, substrat solüsyonu her bağlı peroksidazla, numunedeki antijen miktarına doğru orantılı olarak, renk oluşturmak için reaksiyona girer. Oluşan kalibrasyon eğrisinden konsantrasyon hesaplanır. ELEGANCE SAĞLANAN REAKTİFLER, STABİLİTE VE SAKLAMA Kit ambalajı - 480 test ve 2400 test (parantez içinde). Kit ve tüm bileşenleri, açılmış ya da açılmamış olarak, miadı bitene kadar 2-8 C de saklanmalıdır.. Neonatal TSH: Kaplı kuyucuklar 1 x 96 kuyucuk Kat # TNA96 5 x 96 kuyucuk Kat # TNA5 (25 x 96 kuyucuk Kat # TNA25) Anti TSH antikoru kaplı kuyucuklar kullanıma hazırdır. Neonatal TSH: Antikor Reaktifi 1 şişe Kat # TNB480 (1 şişe Kat # TNB25) 50 (250) ml biotinlenmiş anti-tsh antikoru bovin serum albümini içeren bufer solüsyonu içinde, non-immun hayvan numunesi ve mavi boya. Sodyum azid, 0.2% w/v ve tiomersal, 0.01% w/v içerir. Kullanıma hazırdır. Neonatal TSH: Amplifikasyon Reaktifi 1 şişe Kat # TNP480 (1 şişe Kat # TNP25) 50 (250) ml streptavidin-peroksidaz (streptavidin from S. avidinii) bovin serum albümini içeren bufer solüsyonu içinde ve leylak rengi boya. Bronidox L, 0.2% v/v ve tiomersal, 0.02% w/v içerir. Kullanıma hazırdır. Yıkama Konsantresi 1 şişe Kat # EWC5 (2 şişe Kat # EWC25) 250 (500) ml 15 x konsantre yıkama solüsyonu. Tthiomersal, 0.15% w/v içerir. Kullanılmadan önce dilüe edilmelidir. Elüsyon Buffer 1 şişe Kat # EEB5 (1 şişe Kat # EEB25) 50 (250) ml bovin serum albumin içeren buffer solüsyonu. Sodyum azid, 0.1% w/v içerir. Kullanıma hazırdır. Substrat Solüsyonu TMB H 1 şişe Kat # ETMB5 (1 şişe Kat # ETMB25) 50 (250) ml stabilizasyon solüsyonunun içinde 3,3,5,5 - tetramethylbenzidine ve hydrogen peroksidaz. Kullanıma hazırdır. Stop Solüsyonu 1 şişe Kat # ESS5 (1 şişe Kat # ESS25) 30 (124) ml 1M H 2 SO 4 Kullanıma hazırdır. Neonatal TSH: Blood Spot Kalibratör ve Kontroller 1 set Cat # ETNS6 (4 sets Cat # ETNS7) Filtre kağıdında kurumuş TSH insan kanı, kalibratör TSH olarak 6 kurumuş insan kanı (A-F) ve 2 kontrol (1-2). Kullanıma hazırdır.
KULLANICILAR İÇİN ÖNLEMLER VE UYARILAR Numunelerin ve kitlerin, kullanımlarının, saklanmasının ve berteraf edilmesinin yolu bölgesel ya da ulusal güvenlik prosedürlerine göre olmalıdır. Numuneler ve Kalibratörler Kan spotları Hepatit C, Hepatit B, HIV -1/2 (AIDS) e karşı test edildi ve güvenilir metotla sonucun negatif olduğu ispatlandı. Yine de tüm numunelerde bulaşıcı hastalık bulaşabilirmiş gibi davranılması önerilir. Koruyucular Kit koruyucu olarak, sodyum azide, tiomersal ve Bronidox L içerir.reaktifler toksik koruyucular içerdiğinden, solumaktan, yutmaktan ve deri ile temasından kaçının. Sodyum azid, potansiyel patlayıcı oluşturmak için kurşun ve bakır ile reaksiyona girebilir. Substrat Solüsyonu ve Stop Solüsyonu and Stopping Solution Deri ile temasından sakınınız. NUMUNE TOPLAMA VE SAKLAMA ELEGANCE Neonatal TSH ELİZA kitini kullanım amacı bebeklerin topuğundan filtre kağıdına kan alıp, NCCLS LA4A rehberine göre kurutup TSH çalışmaktır.filtre kağıdı, Schleicher ve Schuell Grade 903 olmalıdır, böylece numunelerin kağıdı da kontroller ve kalibratörlerle aynı özellikte olur.neonatal topuk kanı doğumdan 3-5 gün sonra alınır. Kan içeren filtre kağıdı, bebeğin topuğundan alınan kanın filtre kağıdına emdirilmesi ile elde edilir.filtre kağıdı numune alanı tam olarak kan ile doldurulmalıdır. Test numunelerinin alınmasından sonra, filtre kağıtları kurutulmak üzere( 2 ya da daha fazla saat) yatay bir şekilde bırakılır. Kuruyan numuneler 2-8 C de saklanabilir. Sadece filtre kağıdına emdirilmiş kanlar yukarıdaki amaç için test edilir.kullanılmayan filtre kağıtları oda sıcaklığında tutulmalıdır. (20-25 C). GEREKLİ OLAN AMA SAĞLANMAYAN MATERYALLER VE EKİPMANLAR * Distile su veya deiyonize su * Disk zımbası (3mm) * pens * Çoklu pipet * 1L lik mezür * Emici doku (pamuksuz) * Saat * Mikrotitre pleyt çalkalayıcı * Mikrotitre pleyt yıkayıcı * Mikropleyt okuyucu. PROSEDÜR NOTLARI Tüm reaktifleri oda ısısına( 20-25 C)getiriniz ve kullanmadan önce karıştırınız.çift çalışma önerilir.kontaminasyon testin performansının düşmesine sebep olur. Kalibrasyon eğrisi her çalışmadan önce çizilmelidir. İlk yıkamadan sonra, diskler alınmalıdır. Tüm test basamakları eksiksiz yapılmalıdır, eğer kuyucuklar amplifikasyon reaktifiyle doldurulmazsa ya da subtrat solüsyonu yıkamadan hemen sonra koyulmazsa, amplifikasyon reaktifi için 15 dk, substrat için 60 dk emici biz havlunun üzerine, kuyucuklar ters çevrilerek bırakılabilir. Kit kutusunun içindeki reaktifler bu kutuya özel lota sahiptir, diğer kutularla karışık kullanılmamalıdır. Fotometre ve tüm pipetler kullanılmadan önce kalibre edilmelidir. Yıkama Etkili yıkama Presizyon için çok gereklidir.kuyucuklar otomatik yıkayıcı kullanarak yıkanır. Bir kuyucuktan diğerine taşmasından sakınınız. Kalite kontrol Kontrol numuneleri çalışmayı doğrulamak için her seferinde çalışılmalıdır.test sonuçları onaylanmadan önce sınırların içinde bulunduğu görülmelidir.
TEST PROSEDÜRÜ Reaktifleri Hazırlama Yıkama solüsyonu Yıkama konsantresini 1/ 15 oranında dilüe ediniz. Yıkama solüsyonu oda sıcaklığında (20-25 C) 12 hafta stabil kalır. Kalibratörler ve kontroller Filtre kağıdına emdirilmiş kalibratörler ve kontrollerin konsantrasyonu lot lota değişir, değerleri etikette yazılıdır. Nemlenmesinden sakının,paketi oda ısısına gelmeden açmayınız.kullanılmamış kontrol ve kalibratör kağıtlarını paketleyip tekrar plastik kutusunun içine 2-8 C de saklanmak üzere bırakınız.. Protokol 1. Test için gerekli olan kuyucukları çerçeve içine yerleştiriniz. Kit kutusunu ve kullanılmayan materyalleri 2-8 C de saklayınız.. 2. Uygun kuyucukların için 3 mm lik diskleri (kalibratör, kontrol, numune) çift çalışılacak şekilde bırakınız.numune kağıtlarını delerken kenardan alınmamasına özen gösteriniz. 3. Tüm kuyucuklara 100 µl Elüsyon Bufer ekleyiniz. 4. Tüm kuyucukların üzerini kapatıp karıştırıcı üzerinde 60 dakika oda ısısında (20-25 C)inkübe ediniz. 5. 100 µl Neonatal TSH Antikor Reaktifi (mavi) tüm kuyucuklara ekleyiniz.. 6. Tekrar kuyucukları kapatınız ve üzerinde 60 dakika oda ısısında (20-25 C)inkübe ediniz. 7. İnkübasyondan sonra diskleri kuyucukların içinden alınız. 8. Kuyucukları yıkayınız.içindeki sıvıyı aspire edip 4 defa 250µL yıkama solüsyonu ile yıkayınız. Son yıkamadan sonra, kuyucukları ters çevirip kalan yıkama solüsyonunun emici bir beze akmasını sağlayın.kuyucularda hiçbir hava kabarcığının kalmadığından emin olunuz. 9. 100 µl Neonatal TSH Amplifikasyon Reaktifi (leylak rengi) her kuyucuğa pipetleyiniz. 10. Üzerini kapatıp 10 dakika karıştırıcı üzerinde oda sıcaklığında (20-25 C) bekletiniz. 11. İnkübasyondan sonra, yıkama adımını tekrar ediniz. 12. 100 µl Substrat Solüsyonu tüm kuyucuklara ekleyiniz. 13. Üzerini kapatınız ve 10 dakika oda sıcaklığında üzerinde inkübe ediniz. (20-25 C). 14. 50 µl Stop Solüsyonunu ilk substrat eklediğiniz kuyudan başlayarak ekleyiniz. 15. Son nokta okumayı 450 nm de eliza okuyucunun kullanım kılavuzunda tarif edildiği gibi yapınız.bu okuma adımı stop reaktifi eklendikten sonraki 5 dakika içinde yapılmalıdır. SONUÇLARIN HESAPLANMASI Hesaplamalar, otomatik data hesaplayıcı yoksa manuel olarak hesaplanır. Her kuyucuğun OD si tespit edilir.log-log grafik kağıdı kullanılarak kalibratör konsantrasyonlarıyla birlikte x ekseni OD lerden y ekseni oluşturularak grafik çizilir.eğri noktadan noktaya ya da, eğri oluşturma modellerinde birisi (örneğin: spline interpolasyonu )kullanılabilir. Numunelerin konsantrasyonları, OD değerleri eğriye girilerek bulunur. Her numunenin değeri miu/l tam kan TSH olarak raporlanır.elegance Neonatal TSH tam kanda 0-250 miu/l aralığında okunur.ama maksimum konsantrasyon kullanılan okuyucunun performans karakterine bağlı olarak rapor edilir. Eğer en yüksek kalibratörün OD değeri fotometre OD değerini aşıyorsa bu kalibratör değeri kalibrasyon eğrisinden çıkarılır. Benzer olarak, numune OD fotometrenin okuyabileceği OD değerini aşıyorsa, sonuç en yüksek kalibratörden büyüktür diye raporlanır.
HESAPLAMA MODELLERİ Son Nokta Data ID Ort OD TSH (miu/l) 0 0.038 6.11 0.088 11.3 0.163 26.0 0.359 96.0 1.345 231 3.009 Numune 1 0.244 17.30 Numune 2 0.955 66.90 Numune 3 0.104 7.42 LİMİTLER Test hipotroidi tespit etmek için 24 saatlikten daha küçük bebeklerde, tranfüzyon yapılanlarda, antikor terapi tedavilerinde ya da prematüre doğanlarda kullanılmaz. KALİBRASYON Kalibratörler ve kontroller hematokrit değeri 55% (v/v) üzerinde olan insanlarda elde edilmiştir ve tam kanda miu/l olarak rapor edilir(who 1. IRP 68/38 htsh için). Çevirim faktörü: miu/l serum = miu/l tam kan x 2.2 BEKLENEN DEĞERLER Her laboratuar ilgili numune popülasyonuna göre kendi referans değerini oluşturmalıdır. Tipik olarak, 3-5 günlük bebeklerde tam kanda cut-off 20 miu/l dir. Pozitif cut off dan düşük( < 20 miu/l ) olan değerler normal kabul edilir. Gerçek, konjenital hipotiroidizm durumu genelde tam kanda en az 40 miu/l olarak bildirilir, ama tam kanda 25 miu/l düşüğü de bulundu. PERFORMANS KARAKTERLERİ Intra-test presizyon Numune n Ortalama ± 2SD %CV (miu/l tam kan) 1 20 4.9 ± 0.57 5.8 2 20 14.5 ± 2.00 6.9 3 20 41.7 ± 3.20 3.8 Inter-test presizyon Numene n * Ortalama ± 2SD %CV (miu/l tam kan) 1 11 6.1 ± 0.85 7.0 2 11 16.6 ± 2.10 6.3 3 11 37.8 ± 2.80 3.7 * 4 tekrarlı Özgüllüğü Maddeler Konsantrasyon Görünen TSH Çapraz reaksiyonlar sonucu (miu/l W.B) LH 450 IU/L <1 N.D FSH 450 IU/L <1 N.D hcg 45,000 IU/L <1 N.D TSH 57.4 miu/l 56.8 99%
Kesinlik İyileşme test çalışılmadan önce ve eksogenus madde eklendikten hesaplanıldı. Numune Gözlemlenen TSH Beklenen TSH % Sapma (miu/l) (miu/l) 1 16.4 16.9 97.0 2 21.8 23.0 94.8 3 64.7 63.1 102.5 Dilüsyon Bir numune sıfıra kadar dilüe edildi NumuneGözlemlenen TSH Beklenen TSH % Sapma (miu/l W.B) (miu/l W.B) direk 33.2 1/2 16.7 16.6 100.6 1/4 8.8 8.3 106.0 1/8 4.5 4.2 107.1 Yüksek doz- Hook Etkisi Hook etkisi görülmez, testin karakterinde,tsh test limitinin tam kanda 4700 miu/l e kadar olduğu görüldü. Hassasiyet Hassasiyet tipik olarak tam kanda 1 miu/l den daha düşüktür. Hassasiyet, üç farklı testte 28 replikasyon ile sıfır kalibratörün ortalama doz cevabı belirlenmesinden bulunan OD ile 2 SD doz cevabının belirlenmesi ile ilgili analitin konsantrasyonu olarak tanımlanmıştır. SİPARİŞ BİLGİSİ VE TEKNİK SERVİS ELEGANCE NEONATAL TSH ELISA 71-73 Railway Parade, Marrickville NSW 2204, AVUSTURALYA Telefon +61 (0) 2 9517 1966 ücretsiz arama hattı 1800 251 138 Fax +61 (0) 2 9517 2990 Email sales@bioclone.com.au Web www.bioclone.com.au TEKNİK SERVİS Tam teknik servise Bioclone on +61 (0) 2 9517 1966 ya da ücretsiz arama hattından 1800 251 138 ulaşabilirsiniz. GARANTİ GARANTİ Üretici, diyagnostik kitin, kullanım prosedürü dışındaki kullanımlar için hiçbir garanti vermez. Diyagnostik kitin amacı dışındaki kullanımlarda, kullanıcı kendi riskini kendisi alır. Üretici, kitin amacı dışında kullanıldığı durumunda da tüm ticari garantiyi reddeder.kitin kullanımında direktiflere göre çalışıldığında oluşan her türlü başarısızlık durumunda kit değişimi sınırlıdır. Bioclone Australia Pty Limited ve onun distribütörleri kitin değişimini ya da alınan kitin para iadesini sınırlandırır. Bioclone Australia Pty Limited, malın zarar görmesinden, üründen kaynaklana kişisel kaza ya da ekonomik kayıptan sorumlu değildir.. BÖLÜM No.: EKBTN Ed. 7 Revizyon tarihi: 25 Mayıs 2004