D-dimer. Kullanım manueli REF 5250

Transkript

1 D-dimer Kullanım manueli REF 5250

2 Fibrin D-dimer için Lateks Aglütinasyon Testi. 80 tespit için reaktifler Sadece in-vitro diagnostik kullanım içindir. I. KULLANIM AMACI Helena D-dimer fibrin D-dimerin yarı kantitatif tayini için bir lateks aglütinasyon testidir. II. PRENSİBİ D-dimer kısımlar Factor XIIIa çapraz bağlı fibrinin plazmin bozulması sonucu oluşur. D-dimer in yükselmiş düzeyleri Derin Ven Trombozu (DVT), Pulmoner Emboli (PE) ve Dissemine İntravasküler Koagülasyon (DIC) gibi klinik koşullarda bulunurlar 1,2. D- dimer düzeyleri gebelik sırasında artar ve yüksek düzeyde komplikasyonlara neden olur 3. Helena D-dimer, fibrin D-dimer veya fibrinin fragment D ile reaksiyona giren bir monoklonal antikor kullanır ancak insan plazmasında D-dimer tespitini sağlayan intakt fibrinojen ile reaksiyona girmez. FDP analiz için uygun serum örnekleri de kullanılabilir. D-dimer için uluslararası standart şu anda yoktur. Sayısal değerler için Helena ticari olarak bulunan ELİSA testi ile Helena D-dimer testini uyumlu hale getirmiştir. III. REAKTİFLER A. Reaktif açıklaması 1. Helena D-dimer Lateks 1 şişe 1.7 ml süspansiyon lateks bilye içerir. Bilye anti D-dimer monoklonal antikor ile kaplıdır. 2. Tuz Solüsyonu 2 şişe 8 ml tamponlu tuz solüsyonu, ph 7.3 içerir. 0.2 g/l sodyum azit içerir. 3. Pozitif Kontrol Plazma 1 şişe 1.0 ml fibrin D-dimer ile zenginleştirilmiş liyofilize insan plazma içerir. 4. Negatif Kontrol Plazma 1 şişe 1.0 ml liyofilize insan plazması içerir. B. Reaktif hazırlama 1. Tüm şişeleri en az 10 dakika kullanmadan önce oda sıcaklığına gelene kadar bekletin. 2. Negatif ve pozitif kontrol plazma şişeleri her birine 1.0 ml (1000 ul) Tuz Solüsyonu ekleyin. Kontrol plazma C de bir ay saklanabilir. XIII bakın. Not 3. madde. 3. Kullanımdan hemen önce 5 saniye süreyle tekrar tekrar şişeyi tersine çevirerek lateksi karıştırın. Eğer lateks kitle şişe boynuna toplanmışsa veya lateks süspansiyonda görünürse, çöken malzemeyi yeniden süspanse etmek için 10 saniye şişeyi vorteksleyin. 1

3 IV. UYARILAR VE ÖNLEMLER POTANSİYEL BİYOLOJİK TEHLİKELİ MATERYAL.Negatif ve Pozitif Kontrol Plazma insan kökenlidir. Bu ürünlerde kullanılan kaynak plazmanın her bir donör ünitesi test edilmiş ve B Hepatit antijenler, HIV I ve II antikorları, Hepatit C antikorları, sifiliz antikorları ve H.T.L.V. I / II antikorları için FDA onaylı yöntemler tarafından negatif bulunmuştur. Hiç bir test yöntemi tam bir güvence veremediği için bu plazmalar "Mikrobiyolojik ve Biyomedikal Laboratuvarlarında Biyogüvenlik", 1984, Sağlık ulusal kurumları /Hastalık Kontrol manueli olan Merkezler de potansiyel olarak enfeksiyon olabilecek insan serum veya kan numunesinde önerilen Biyolojik Güvenlik Seviye 2 ye göre çalışılmalıdır. Öngörülen uluslararası, ulusal ve yerel yönetmeliklere göre tüm atıklar maddeleri atın. SODYUM AZİT. Hem Saline Solüsyonu hem de D-dimer Lateks kurşun ve bakır ile reaksiyona girerek son derece patlayıcı metal azitler oluşturabilen sodyum azit içerir. Lavaboya atılan malzemelerin azid birikimini önlemek için bolca su ile yıkanmalıdır. Test klinik gözlemler ve diğer laboratuvar testleri sonuçları ile birlikte kullanılmalıdır. V. SAKLAMA VE STABİLİTESİ Reaktifler C de saklanmalıdır ve kutu üzerine kaydedilen son kullanım tarihinden önce kullanılmalıdır. Kontrol plazması yeniden çözündürüldüğünde bir ay için C'de saklanabilir. VI. ÖRNEK ALMA Sitratlı antikoagüle plazma kullanılmalıdır. Örnek bir hacim 3.2% bufferlı sodyum sitrat (0.105 M) ve dokuz hacim kan şeklinde toplanır. 10 dakika boyunca 3000 x g de santrifuj edilir. Sitratlı plazma örneği 2 saat oda sıcaklığında yada 18 saat C de saklanmalıdır. Tek bir donma-çözülme döngüsü test yanıtını etkilemez. NCCLS H21 spesifik numune toplama kılavuzlar için NCCLS H21-A2 bakın. VII. PROSEDÜR A. Sağlanan materyaller 1 x Helena D-dimer Lateks 2 x Saline Solüsyonu 1 x Pozitif Kontrol Plazma 1 x Negatif Kontrol Plazma 50 Karıştırma çubukları 6 örnek için 16 Test kartı. B. Gerekli fakat sağlanmayan materyaller 20, 100 ve 1000 μl hacim için pipetler Pipet uçları 3 ml test tüpler Zamanlayıcı C. Kalitatif yöntem 1. Bir test kartına döngüde 20 μl örnek, pozitif ve negatif kontrol plazma yerleştirin. 2. Her bir döngünün yanındaki alana 20 μl lateks süspansiyon yerleştirin. 2

4 3. Her bir örnek için temiz bir karıştırıcı kullanarak örnek ve lateksi hızlıca karıştırın. Zamanı başlatın. 4. Test kartını yavaşça sarsın ve 180 ve 200 saniye arasında aglütinasyonu okuyun. Pozitif (+) veya negatif (-) aglütinasyon kontrollerini kullanarak elde edilen sonuçlar karşılaştırılır. Pozitif kontrol sadece kalitatiftir ve daha fazla sulandırılmış olmamalıdır. Aglütine olmayan lateks yani örnek normaldir ve başka testlerin yapılmasına gerek yoktur. D. Yarı-kantitatif yöntem Test edilen pozitif örneklerde sadece yapılan: 1. Küçük test tüpleri kullanarak 100 μl Tuzlu Solüsyon ile 100 μl örneği 1:2, 1:4 ve 1:8 şeklinde seri dilüsyon yapın. 2. Test kartına numune dilüsyon konumlarını işaretleyin ve VII.C için lateks süspansiyon ile karıştırın. D-dimer konsantrasyonu IX tablodan belirlenebilir. BEKLENEN DEĞERLER. VIII. KALİTE KONTROL Sağlanan pozitif ve negatif kontroller her kitin kalite kontrolü için kullanılmalıdır. Önerilen kit çalışılırken her zaman hem pozitif hem de negatif kontrollerin çalışılmasıdır. Eğer pozitif ya da negatif kontrol uygun yanıt ortaya koymak için başarısız olursa, hasta sonuçları kullanılmamalı ve kit atılmalı ya da Helena gönderilmelidir. IX. BEKLENEN DEĞERLER Aglütinasyon 250 ng/ml D-dimer daha fazla içeren örnekler için 180 ile 200 saniye içinde gerçekleşir. Seri olarak dilüe edilmiş plazmaları test ederek, yarı-kantitatif sonuçlar elde edilebilir. D-dimer Düzeyi (ng/ml) Aglütinasyon daha belirgin olabilir ve daha yüksek D-dimer de daha hızlı görünür. Eğer fibrinojen eşdeğer birimler de (FEU) sonuçları ifade etmek isterseniz, 2 ile yukarıdaki tabloda, <250 ng / ml örneğin <500 FEU olur, D-dimer düzeyleri çarpın. Çeşitli raporlarda bahsedildiği gibi 4, ticari ELISA ile kıyaslandığında bazı ticari lateks test iddia edilen duyarlılığa sahip değildir. X. SONUÇLARIN YORUMLANMASI Aglütinasyon 250 ng/ml D-dimer daha fazla içeren örnekler için 180 ile 200 saniye içinde gerçekleşir. Sağlıklı bir toplumda D-dimerin ortalama seviyesi yaklaşık 8 ve135 ng/ml arasındadır ve normal, sağlıklı bireylerden alınan dilüsyonsuz plazma aglutine olmamalıdır. Tromboz için Helena D-dimer in negatif prediktif değeri yüksektir 5. D- 3

5 dimer dolaşım yarılanma ömrü yaklaşık 12 saattir. Aktif işlem bittikten sonra yüksek D-dimer düzeyleri bu nedenle bir süre devam edebilir. Normal konularda klinik çalışmalar, phlebo grafiksel doğrulanan DVT sahip hastalarda, DIC sahip hastalarda ve pre-eklampsi (Pre-EC) sahip hastalarda aşağıdaki sonuçlar elde edildi: Helena D-dimer sonuçları Semboller η ve - sırasıyla, hasta sayısı ve negatif bir Helena D-dimer sonucu gösterir. Titreler örnek aglütinasyon gösteren en yüksek seyreltme göstermektedir. *Aglütinasyon D-dimer spesifik antikor (0.2 mg / ml) ilgili olmayan antikor PAM-1 ile değil MA- 8D3 ilavesiyle inhibe edilmiştir. XI. PERFORMANS ÖZELLİKLERİ A. Özgünlük Bu cihazda, MA 8D3, kullanılan monoklonal antikor hibridoma seçimi için kullanılan tarama yöntemi sayesinde D-dimer için spesifiktir 3. Bütün fibrinojen veya fibrinojenin fragment D ile reaksiyon vermeyen ancak saflaştırılmış D-dimer ile pozitif olarak reaksiyon veren antikorlar salgılayan bir hibridoma seçildi. Her iki analit bu testte plazma için yer değiştirmediğinde fibrinojen veya des-aa-fibrinojen ile hiç bir çapraz reaksiyon göstermez. Romatoid artriti olan 16 hastadan alınan plazma test edildi ve bunların 14 ü Helena D-dimer testi ile non-aglütinasyon bulundu. İki aglütinasyonlar D-dimer spesifik monoklonal antikorun, MA-8D3, ilavesiyle inhibe olabilir ancak aynı alt grubun, IgG1k (PAM 1), monoklonal eklenmesi ile inhibe olmaz. Bu Helena D- dimerin romatoid faktör bozuklukları karşı duyarsız olduğunu göstermektedir. B. Tekrarlanabilirlik Üç plazma örnekleri testin tekrarlanabilirliğini test etmek için seçilmiştir. Her numune üç farklı günde her birinde 10 kez test edildi. Her durumda, pozitif sonuç elde edildiğinde, örnek titre edildi. D-dimer (ng / ml) sonuçları: 4

6 C. Kesinlik Helena D-dimer kiti başka piyasada bulunan D-dimer lateks ile karşılaştırıldı. 25 normal örnekte test edildiğinde her iki ürün de negatif reaksiyon verdi. 30 hasta plazma örnekleri ELISA ve Helena D-dimer ile test edildiğinde, 225ng/ml yukarısındaki ELISA değerleri ile tüm örnekler Helena D-dimer ile aglütinasyon gösterdi. XII. TEST SINIRLARI 1. Negatif D-dimer testi tamamen trombozu ekarte etmez. Şüpheli DVT ye sahip hastalar için negatif bir prediktif değer Helena D-dimer kit ile 94% olarak bulunmuştur 5. D-dimer in yükselmiş düzeylerinin tespiti bir tanı oluşturan diğer klinik bilgilerle birlikte kullanılmalıdır. 2. Normal D-dimer düzeyleri içeren örneklerle aglütinasyon bazen spesifitesi olmadığından dolayı ortaya çıkabilir. 3. Lateks ile karıştırıldığında örneklerin küçük bir kısmı aglütinasyon ile karıştırılmayan beyaz parçalar gösterebilir. XIII. NOTLAR 1. Sonuçlar ne D-dimer birimlerinde ne de fibrinojen eşdeğer birimlerinde bildirilebilir; 1 ng/ml D-dimer yaklaşık 2 ng/ml FEU ile eşdeğerdir. 2. Aglütinasyon daha belirgin olacaktır ve daha yüksek D-dimer konsantrasyonunda daha hızlı görünür. 3. Kontrol şişelerde lastik tıpa şişe açıldıktan sonra atılabilir. XIV. REFERANSLAR 1. Elms, M.J. et al.: Rapid detection of cross-linked fibrin degradation products in plasma using monoclonal antibody-coated latex particles. J. Clin. Path. 85, , Ballegeer, V.et al.: Fibrinolytic response to venous occlusion and fibrin fragment D-dimer levels in normal and complicated pregnancy. Thromb. Haemostas. 58, , Declerck, P.V. et al.: Fibrinolytic response and fibrin fragment D dimer in patients with deep vein thrombosis. Thromb. Haemostas. 58, , Bounameaux, H. et al.: Measurement of plasma D-dimer for diagnosis of deep venous thrombosis. Am. J Clin. Path. 91, 82-85, Hansson P.O. et al.: Can laboratory testing improve screening strategies for deep vein thrombosis at an emergency unit? J. Intern. Med.235, , Holovet P et al.: Binding properties of monoclonal antibodies against human fragment D dimer of cross-linked fibrin to human plasma clots in an in vivo model in rabbits. Thrombosis and Haemostasis 61(2), ,