ELEGANCE FT 4 ELİZA KİTİ

Transkript

1 KULLANIM AMACI ELEGANCE TSH ELISA, insan serum ve plazmasındaki Serbest tiroksin hormonunun değerini (FT4) in vitro diyagnostik kantitatif ölçümlerde kullanılmak için üretilmiştir. ELEGANCE ELİZA KİTİNİN PRENSİBİ ELEGANCE ELİZA kiti kuyucuklara, anti -T4 monoklonal antikor(antikor reaktifi) ve anti-murin IgG poliklonal antikorun birleşip bağlanması sağlanan enzim bağlı immuno testtir. İki basamak metotludur (arka titrasyon), T4 yaban turbu konjugatı peroksidaz konjugatı kullanılarak sinyal üretilir. İnkübasyon boyunca,antikor numune antijeni kompleksi oluşur.bağlanmayan maddeleri uzaklaştırmak için kuyucuklar yıkanır. T4-HRP (Konjugat buffer)eklenir ve monoklonal antikorun boşta olan antijen bağlama tarafına bağlanır. Yıkamadan sonra substrat solüsyonu, renk oluşturmak için peroksidaza bağlanan her şeyle reaksiyona girer. Oluşan renk numunedeki antijen miktarı ile doğru orantılıdır. Numunenin konsantarasyonu kalibrasyon eğrisinden hesaplanır. ELEGANCE SAĞLANAN REAKTİFLER, STABİLİTE VE SAKLAMA Kit ambalajı - 96 test. Kit ve tüm bileşenleri, açılmış ya da açılmamış olarak, miadı bitene kadar 2-8 C de saklanmalıdır.. FT 4 : Kaplı kuyucuklar 96 kuyucuk REF # T4A96 Anti murine IgG antikoru ile kaplı kuyucuklarla dolu pleyt.kullanıma hazırdır FT 4 : Antikor Reaktifi 1 şişe REF # T4B96 Hayvan serumu ve mavi boya içeren buffer solüsyonun içinde, 10 ml murin anti-t 4 antikor içerir.sodyum azid, 0.1% w/v içerir. Kullanıma hazırdır. FT 4 : Konjugat Reaktifi 1 şişe REF # T4C96 Leylak rengi boya içeren buffer solüsyonunun içinde T 4 -HRP ( 10mL). Bronidox L, 0.2% v/v ve tiomersal, 0.02% w/v içerir. Kullanıma hazırdır. Yıkama konsantresi 1 şişe REF # EWC96 50 ml 15 x konsantre yıkama solüsyonu.tiomersal, 0.09% w/v içerir. Kullanmadan önce dilüe edilmelidir. Substrat Bufer 1 şişe REF # ESB20 Sitrat fosfat bufer içinde, üre peroksidaz (20mL). Tiomersal, 0.01% w/v içerir. Substrat Tabletleri 1 şişe REF # EST4 İnaktifmaddelerle birlikte, 4 x 4 mg ortho-phenylenediamine (OPD) FT 4 : Kalibratörler 6 şişe REF # ET4S1-6 Her biri insan serumu 0.25 ml. Sodyum azid, 0.1% w/v içerir. Kullanıma hazırdır. KULLANICILAR İÇİN ÖNLEMLER VE UYARILAR Numunelerin ve kitlerin, kullanımlarının, saklanmasının ve berteraf edilmesinin yolu bölgesel ya da ulusal güvenlik prosedürlerine göre olmalıdır. Numuneler ve Kalibratörler Kontrol ve kalibratörler Hepatit C, Hepatit B, HIV -1/2 (AIDS) e karşı test edildi ve güvenilir metotla sonucun negatif olduğu ispatlandı. Yine de tüm numunelerde bulaşıcı hastalık potansiyeli gibi davranılması önerilir. Koruyucular Kit koruyucu olarak, sodyum azid, tiomersal ve Bronidox L içerir.reaktifler toksik koruyucular içerdiğinden, solumaktan, yutmaktan ve deri ile temasından kaçının. Sodyum azid, potansiyel patlayıcı oluşturmak için kurşun ve bakır ile reaksiyona girebilir. Substrat Deri ile temasından sakınınız.

2 NUMUNE TOPLAMA VE SAKLAMA Numune hazırlamak için özel bir itina gerekmez. Test için uygun bir şekilde serum ya da plazma alınır. Serum tercih edilir, EDTA ya heparin kesin sonucu bozmaz.hemolitik, lipemik ve bulanık numunelerle çalışmayınız. Numuneler 2-8 C de 48 saat stabil kalır. -20 C de ya da altında daha uzun süre saklanır. Numuneler tekrar tekrar çözülüp saklanmamalıdır.çözülen numunelerde dibinde çökme olmuş mu diye kontrol edilip testten önce alt üst edilerek karıştırmalıdır.bulanık olan numuneler çalışmadan önce santrifüj edilmelidir. GEREKLİ OLAN AMA SAĞLANMAYAN MATERYALLER VE EKİPMANLAR * Distile su veya deiyonize su * 1M H 2 SO 4 * Presizyon pipetleri * Çoklu pipet * 1L mezür * emici bez (pamuksuz) * Saat * Vorteks mikser * Mikrotitre pleyt karıştırıcı * Mikrotitre pleyt yıkayıcı * Mikropleyt okuyucu sistem. PROSEDÜR NOTLARI Tüm reaktifleri oda ısısına( C)getiriniz ve kullanmadan önce karıştırınız.çift çalışma önerilir.kontaminasyon testin performansının düşmesine sebep olur. Kalibrasyon eğrisi her çalışmadan önce çizilmelidir En yüksek kalibratörün konsantrasyonundan yüksek olduğu sanılan numuneler sıfırlık kalibratör ile dilüe edilip o şekilde test edilir. Testin tüm basamakları sırasıyla yapılmalıdır. Eğer kuyucuklar amplifikasyon reaktifiyle doldurulmazsa, amplifikasyon reaktifi için 15 dk, emici biz havlunun üzerine, kuyucuklar ters çevrilerek bırakılabilir. Kit kutusunun içindeki reaktifler bu kutuya özel lota sahiptir, diğer kutularla karışık kullanılmamalıdır. Fotometre ve tüm pipetler kullanılmadan önce kalibre edilmelidir. Yıkama Etkili yıkama Presizyon için çok gereklidir.kuyucuklar otomatik yıkayıcı kullanarak yıkanır. Bir kuyucuktan diğerine taşmasından sakınınız. Kalite kontrol Kontrol numuneleri çalışmayı doğrulamak için her seferinde çalışılmalıdır.test sonuçları onaylanmadan önce, kontrolün sınırların içinde bulunduğu görülmelidir. Reaktiflerin Hazırlanması Yıkama solüsyonu Yıkama konsantresini 1/ 15 oranında dilüe ediniz. Yıkama solüsyonu oda sıcaklığında (20-25 C) 12 hafta stabil kalır. Substrat Solüsyonu Bu solüsyonun kullanım sırası geldiğinde hazırlanması tavsiye edilir.lütfen doğru sayıdaki OPD tableti substrat bufer içine atınız. 5 ml substrat bufer + 1 tablet.tabletler tamamen çözüldüğünde (1-2 dakika) ve hava kabarcığı olmadığından emin olarak şişenin üzerine plastik tıpayı takıp alt üst ederek karıştırın. Güçlü ışıktan sakının.substrat solüsyonu hazırlandıktan 30 dk içinde kullanılmalıdır. Kalibratörler Yavaşça alt üst ederek karıştırınız.tam konsantrasyonlar lot lota değişir içindeki etikette belirtilir.kalibratörler -20 C de 4 hafta stabil kalır.

3 Protokol: 1. Test sayısı kadar gerekli kuyucuğu çerçeveye yerleştiriniz.kullanılmayan kuyucukları çantasına koyun ve 2-8 C de saklayınız µl numune (kalibratör, kontrol, numune) çift olarak uygun kuyucuğa yerleştiriniz. Numuneleme zamanı 40 dk yı geçmemelidir. 3. Her kuyucuğa 100 µl FT 4 Antikor reaktifi (mavi) eklenmelidir. 4. Üzerini kapatıp karıştırıcı üzerinde oda sıcaklığında (20-25 C) 60 dk boyunca inkübasyona bırakınız 5. inkübasyondan sonra, 250 µl yıkama solüsyonu ile her kuyucuğu 4 defa yıkayınız.son yıkamadan sonra, emici bir bezin üzerine pleyti ters çeviriniz, kuyucularda hiç yıkama solüsyonu kalmamasına dikkat ediniz.kuyucuklarda hiçbir hava kabarcığı olmamasına dikkat ediniz. 6. Her kuyucuğa 100 µl FT 4 Konjugat Reaktifi (leylak rengi) pipetleyiniz. 7. Üzerini kapatıp karıştırıcı üzerinde oda sıcaklığında (20-25 C) 10 dk boyunca inkübasyona bırakınız 8. İnkübasyondan sonra, yıkama adımını tekrar ediniz. 9. Her kuyucuğa 100 µl substrat solüsyonu pipetleyiniz. İnkübasyon adımını substrat eklediğiniz ilk kuyucuğa göre yapınız. 10. Üzerini kapatıp sabit olarak, oda sıcaklığında (20-25 C) 5dk boyunca inkübasyona bırakınız µL Stop Solüsyonunun (1M H 2 SO 4 )tüm kuyucuklara, substrat eklediğiniz ilk kuyucuktan başlayarak ilave ediniz. 12. Son nokta okumayı 490 nm de eliza okuyucunun kullanım kılavuzunda tarif edildiği gibi yapınız.bu okuma adımı stop reaktifi eklendikten sonraki 30 dakika içinde yapılmalıdır SONUÇLARIN HESAPLANMASI Hesaplamalar, otomatik data hesaplayıcı yoksa manuel olarak hesaplanır. Her kuyucuğun OD si tespit edilir.log-log grafik kağıdı kullanılarak kalibratör konsantrasyonlarıyla birlikte x ekseni OD lerden y ekseni oluşturularak grafik çizilir.eğri noktadan noktaya ya da, eğri oluşturma modellerinde birisi (örneğin: spline interpolasyonu )kullanılabilir. Numunelerin konsantrasyonları, OD değerleri eğriye girilerek bulunur. Her numunenin değeri pmol/l FT 4 olarak raporlanır.elegance FT 4 ELIZA pmol/l aralığında okunur.ama maksimum konsantrasyon kullanılan okuyucunun performans karakterine bağlı olarak rapor edilir. Eğer en yüksek kalibratörün OD değeri fotometre OD değerini aşıyorsa bu kalibratör değeri kalibrasyon eğrisinden çıkarılır. MODEL HESAPLAMALARI Son nokta Data ID Ort OD FT Numune Numune Numune KALİBRASYON Bu kit ile sağlanan kalibratörler, pmol/l olarak ifade edilir. Kalibratörün birimi aşağıdaki formülle değiştirlebilir. ng/dl FT 4 = pmol/l FT 4 x 0.078

4 SINIRLAMALAR Serum numunelerinde eğer yüksek hemoliz,lipemi ya da bulanıklık görüntüsü varsa yanlış sonuçlara sebep olabilir. Yüksek sıcaklıktan sakınınız, çünkü bağlı proteinlerin bozulmaması, serbest ve bağlı T4 dengesinin dengede kalması için bu gereklidir.anti-fare antikorları sirkülasyonuna sahip hastalardan alınan numuneler, fare monoklonal antikorların sonucu olarak yüksek ya da düşük seviye sonuçlarına sebep olabilir.bu numunelere bu kit ile test edilmemelidir. REFERANS DEĞERLERİ Her laboratuvarın kendi toplumuna uygun referans değerleri belirlemesi önerilir. Aşağıdaki referans değerleri %95güvenirlilik aralığında,sağlıklı insan serumlarından alınan numunelerle çalışılarak elde edilmiştir.sadece rehberlik amacıyla bilgilendiriyor: Ötiroid numuneler n = 159 Orta Değer 6.2 pmol/l Elde edilen değer aralığı pmol/l Referans Aralığı pmol/l PERFORMANS KARAKTERLERİ Intra-test Presizyon Numune n Ort ± 2SD %CV ± ± ± Inter-test Presziyon Numune n * Ort ± 2SD %CV ± ± ± * çift çalışma Özgüllük Analit %çapraz reaksiyonlar D-thyroxine 0.50 L-3,3,5-triiodothyronine (T 3 ) <0.01 L-3,3,5-triiodothyronine (rt 3 ) <0.01 L-3,5-diiodotyrosine (DIT) <0.01 Sodyum salisilat <0.01 O-asetilsalisilik asit <0.01 Methimazole <0.01 Phenylbutazone <0.01 5,5-diphenylhydantion <0.01 Hassasiyeti Testin hassasiyeti 2 pmol/l den daha azdır.. Hassasiyet, üç farklı testte 20 replikasyon ile sıfır kalibratörün ortalama doz cevabı belirlenmesinden bulunan OD ile 2 SD doz cevabının belirlenmesi ile ilgili analitin konsantrasyonu olarak tanımlanmıştır. Etkileşimler Test sonucu, 250 mg/dl hemoglobine, 4 mmol/l. esterlenmemiş yağ asitine, 10 mg/dl bilirubineve 970 mg/dl trigliserite kadar etkilenmez.

5 SİPARİŞ BİLGİSİ ELEGANCE FT 4 ELİZA Railway Parade, Marrickville NSW 2204, AUSTRALIA. Telefon +61 (0) Ücretsiz Arama Fax +61 (0) sales@bioclone.com.au Web TEKNİK SERVİS Tam teknik servise Bioclone on +61 (0) ya da ücretsiz arama hattından ulaşabilirsiniz. GARANTİ Üretici, diyagnostik kitin, kullanım prosedürü dışındaki kullanımlar için hiçbir garanti vermez. Diyagnostik kitin amacı dışındaki kullanımlarda, kullanıcı kendi riskini kendisi alır. Üretici, kitin amacı dışında kullanıldığı durumunda da tüm ticari garantiyi reddeder.kitin kullanımında direktiflere göre çalışıldığında oluşan her türlü başarısızlık durumunda kit değişimi sınırlıdır. Bioclone Australia Pty Limited ve onun distribütörleri kitin değişimini ya da alınan kitin para iadesini sınırlandırır. Bioclone Australia Pty Limited, malın zarar görmesinden, üründen kaynaklana kişisel kaza ya da ekonomik kayıptan sorumlu değildir. BÖLÜM No.: EKBT4 Ed. 6 Revizyon tarihi: 26 Ocak 2006