HPV High Risk Screen Real-TM Quant

in Vitro Diagnostik Kullanım için REF TV31-100/2FRT VER 10.11.2009 RotorGene 3000/6000 (Corbett Research), iq icycler ve iq5 (Biorad), MX3000P ve MX3005P (Stratagene) ile kullanılan Real Time Kit HPV High Risk Screen Real-TM Quant 100 Kullanılan Semboller Liste Numarası in Vitro Diagnostik Kullanım için Sıcaklık limiti Dikkat! Lot Numarası Son Kullanma Tarihi VER Versiyon Üretici Reaktif İçerir İSİM HPV High Risk Screen Real-TM Quant GİRİŞ HPV genital enfeksiyonu dünyada viral etyolojinin en sık cinsel yolla bulaşan hastalıklarından (STDs) biridir (farklı ülkelerde cinsel açıdan aktif genç kadınlarda 20% - % 46 oranında görülür). Servikal kanseri dünyada kadınlarda en sık görülen ikinci kanserdir ve klinik, moleküler, epidemiyolojik ve deneysel kanıt ile dünyada cinsel yolla iletilen bazı HPV genotip ve servikal neoplazi arasında etyolojik ilişki kuruldu. Servikal Intraepithelial Neoplasia (CIN Sınıf I III) in farklı sınıflarından HPV genotipin tespit frekansına dayalı olarak HPV genotip, High-risk HPV tip (16, 18, 31 ve 45), Intermediate-risk tip (33, 35, 39, 51, 52, 56, 58, 59, ve 68), ve Low-risk tip (6, 11, 42-44) olarak ayrılmıştır. Birkaç yöntem Pap yayılması, elektron mikroskobu, immunositokimya ile sitolojik tarama, klinik gözleme sahip HPV klinik veya subklinik enfeksiyon teşhisi için kullanılmıştır, fakat bu yöntemler standartdizasyon olmaması, subjektiflik, yetersiz duyarlılık ve tahmin edilebilir düşük değer gibi dezavantajlara sahiptir. HPV teşhisinin en perspektif yolu polimeraz zincir reaksiyonu tarafından yüksek kanserojen riskli Human Papilloma virüsünün DNA dan doğrudan tespitidir. Servikal displazisi için rutin taramada Pap yayılma değeri tam olarak bilinmez iken, servikal kanser vakalarının % 99 da Human Papilloma virüsü (HPV) on iki genotipli enfeksiyonundan kaynaklandığı şimdi bilinmektedir. Bu yüksek-riskli genotiplerin belirlenmesi servikal karsinom yönetiminde, hem bir prognostik gösterge olarak hem de Pap yayılma sonuçlarının kesin

olmadığı ikinci bir tarama testi olarak çok önemlidir. Pap yayılma ve HPV DNA testinin kombinasyon gelen sonuçlar tarama için aralıklarla belirlemeye yardımcı olabilir. PCR a dayalı yöntemler, servikal swablar veya skrapes, servikovajinal lavaj, dondurulmuş biyopsiler ve formaline sabitlenmiş parafin-gömülü doku gibi klinik örneklerden alınan genital HPV genotiplerinin tiplenmesi ve tespiti için başarılı şekilde kullanıldı. KULLANIM AMACI HPV High Risk Screen Real-TM Quant ürogenital swablarda Human Papillomavirus (16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59) in kantitatif tespiti için in vitro Real Time amplifikasyon testidir. Bunun anlamı, viral yük parametresi bir prognostik değere sahiptir ve swabta 10 5 HPV genomik eşdeğerinden daha az olan viral yük yada 10 5 hücreleri için 10 3 genomik eşdeğerleri önemsiz olarak kabul edilir ve geçici enfeksiyonun varlığını gösterir ancak yükün bu tür düzeyi tedavi izleme vakasında sadece bir değere sahip olabilir. 10 5 hücre için 10 5 genomik eşdeğerden fazla viral yük yüksek öneme sahiptir ve displastik değişiklikler veya yüksek risk varlığını gösterir. Viral yükün kantitatif tespiti enfeksiyonun karakterini değerlendirmeyi ve hastalık aşamasında bununla ilgili tahmin yapmayı sağlar. HPV High Risk Screen Quant, Human Papilloma virüsün onkogenik 12 genotipini tespit eder. Human Papilloma virüsü bir hücre içi faktör olduğundan yanlış negatif sonuçları önlemek için örnekte hücresel materyalin varlığını izlemesine ihtiyacı vardır. HPV High Risk Screen Quant kiti örnekte hücresel materyalin varlığının kontrolünü sağlayan internal kontrol (insan beta-globine gen) içerir. Bu kit RotorGene 3000/6000 (Corbett Research), iq icycler ve iq5 (Biorad), MX300P ve MX3005P (Stratagene) ile kullanılmak için optimize edilmiştir. TEST PRENSİBİ Kit HPV High Risk Screen Real-TM Quant iki temel aşamaya dayanır: örneklerden DNA izolasyonu ve Real Time amplifikasyon. PCR-mix-1 tüp, internal Kontrol olarak kullanılan β-globine gen, HPV A7, A9 grup (HPV tip 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 52, 58, 59), HPV A5 grup (HPV tip 51) ve HPV A6 grup (HPV type 56) in alanına direk olarak karşı primerler içerir. Eğer swab tam olarak hazırlanmazsa (yüksek miktarda mukoz ya da yetersiz miktarda epitel hücre), İnternal kontrol tespit edilemez. Bu kit, viral yük belirlenmesi sağlayan HPV DNA ın bilinen konsantrasyonlu kantitatif standardını içerir. Viral yükün hesaplanması için, örnek hazırlama sırasında olası hataları elimine etmeyi sağlayan genomik DNA'ın miktarı ve elde edilen HPV DNA konsantrasyonu arasındaki ilişki kullanılır. KİT İÇERİĞİ Part N 1 DNA-Sorb-A/100 : örnek hazırlama; Part N 2 HPV High Risk Screen Real-TM Quant : Real Time amplifikasyon. Part N 3 Sonuç yorumlamak için Microsoft Excel format da programlama Part N 1 DNA-sorb-A/100 : Lizis Solüsyonu, 2 x 15 ml; Yıkama Solüsyonu, 2 x 50 ml; Sorbent, 2 x 1,0 ml; DNA-elüent, 2 x 5 ml; Transport medium, 2x30 ml. 100 test için gerekli reaktifler içerir. Part N 2 HPV High Risk Screen Real-TM Quant : PCR-mix-1-FRT, 3 x 0,28 ml; PCR-mix-2 buffer, 3 x 0,30 ml TaqF DNA Polimeraz, 3 x 0,02 ml Negatif Kontrol, 1,2 ml; DNA-buffer (C-), 0,5 ml QS HPV K1, 3 x 0,04 ml (mix HPV DNA C+ 16, 18, 51 ve insan DNA); QS HPV K2, 3 x 0,04 ml (mix HPV DNA C+ 16, 18, 51 ve insan DNA); QS HPV K3, 3 x 0,04 ml (mix HPV DNA C+ 16, 18, 51 ve insan DNA);

108 örnek için gerekli reaktif içerir. *Ekstraksiyon Negatif Kontrol olarak izolasyon prosedüründe kullanılmalı ** Standardların konsantrasyonu her lot için spesifiktir (HPV High Risk Screen Real-TM Quant Data Card da bildirildi) GEREKLİ FAKAT SAĞLANMAYAN MATERYALLER Zone 1: Örnek hazırlama: Biyolojik kabin eppendorf tipi tüpler için masa mikrosantrifüj (RCF max. 16,000 x g); Eppendorf 5415D ya da benzeri 60 C ± 2 C kuru ısı bloğu Vorteks mikser Aerosol bariyerli pipetörler (5-40 μl; 40-200 μl; 200-1000 μl) 1,5 ml polipropilen steril tüpler (Sarstedt, QSP, Eppendorf) Tek kullanımlık eldivenler, pudrasız Tüpe racks Zone 2: Real Time amplifikasyonu: Real Time Thermalcycler Tüpler Workstation Aerosol bariyerli pipetörler ( 0,5-10 µl; 5-40 µl kapsiteli) Tüp rackları UYARILAR VE ÖNLEMLER 1. Lizis Solusyonu, guanidine thiocyanate içerir. Guanidine thiocyanate, solunursa, deri ile temas ederse ya da yutulursa zararlıdır. Asitler ile teması toksik gaz oluşumuna neden olur. (Xn; R: 20/21/22-36/37/38; S: 36/37/39). 2. Örnekler ve reaktifler ile çalışırken tek kullanımlık eldivenler, laboratuar giysileri ve göz koruyucuları kullanın. 3. Laboratuar çalışma alanında yemek yemeyin, bir şey içmeyin, kozmetik uygulamayın ya da kontak lenslerini ellemeyin. 4. Son kullanma tarihi geçmiş kitleri kullanmayın. 5. Tüm örnekleri ve kullanılmayan reaktifleri yasal düzenlemelere göre yok edin. 6. Örnekler potansiyel enfeksiyon ajanı olarak kabul edilmeli ve biyolojik kabinlerde Biyogüvenlik Seviye 2 ya da diğer uygun biyogüvenlik pratiklerine göre çalışılmalıdır. 7. Dökülen tüm örnekler ya da reaktifleri 0,5% sodyum hipoklorit ya da uygun diğer dezenfektanlar ile temizleyin. 8. Örnekler ve reaktiflerin deri, gözler ve mukoz membranlar ile temasından kaçının. Eğer bu solüsyonlar ile temas ederse bol su ile yıkayın ve doktorunuza başvurun. 9. Material Safety Data Sheets (MSDS) istenildiğinde verilebilir. 10. Bu kit DNA-Sorb ekstraksiyon kit ile kullanılmak için tasarlanmıştır. Eğer DNA-Sorb dan başka bir kit ile DNA ekstraksiyonu yapılıyorsa, bu kullanıcı sorumludur. 11. Bu kiti ancak PCR tekniği bilgisi olan kişiler kullanmalıdır. 12. Laboratuardaki iş akışı Ekstraksiyon alandan başlayıp Amplifikasyon ve Tespit alanlarına doğru tek bir kişinin yönetiminde olmalıdır. Örnekleri, ekipmanları ve reaktifleri bir önceki çalışma alanına geri götürmeyin. SAKLAMA KOŞULLARI DNA-sorb-A/100 +2-8 C de saklanabilir. HPV High Risk Screen Real-TM Quant -20 C de saklanabilir. Kit 3-4 boyunca 2-8 C de taşınabilir fakat 2-8 C de ve -20 C de saklanmalıdır.

KARARLILIK HPV High Risk Screen Real-TM Quant Test kit etiketi üzerinde belirtilen son kullanma tarihine kadar stabil kalır. Ürünün performansı etiket üzerinde yazılı kontrol tarihi ile sağlanacaktır. Işık, ısı ya da neme maruz kalmak bazı kit bileşenlerin raf ömrünü etkileyebilir. Tekrarlanan çözdürme ve bu reaktiflerin dondurulması duyarlılığı azaltabildiği için bu durumdan kaçınılmalıdır. ÖRNEK SAKLAMA, TOPLAMA VE TRANSPORT Aşağıdaki numunelerden HPV High Risk Screen Real-TM Quant, DNA-Sorb-A (REF K-1-1/A) ile ekstre edilmiş DNA analiz edebilir: Servikal swablar: Bir pamuk veya polyester swab kullanarak servikal ağzından ve ektoserviksin çevresinden fazla mukusu alın. Bu swabı atın. En büyük kıl ektoservikse dokunana kadar servikal ağız içine 1.0-1.5 cm Örnekleme Servikal Fırça yerleştirin. Servikal kanal içine tamamen fırça takmayın. Kanaldan uzaklaştırarak saat yönünün tersi yönünde, 3 kere tam çevirerek fırçayı döndürün. 0,5 ml Transport ortamı (Sacace) ile nükleaz-free 2,0 ml tüp içine fırçayı yerleştirin. 15-20 saniye boyunca ortamda fırçayı şiddetlice sallayın. Tüp içinde fırçayı sonda bırakarak skorlanmış çizgide sapını koparın. Sıvı-bazlı sitoloji numuneler (Cytoscreen, PreservCyt) (bu kitte önerilen DNA-Sorb-D REF K-1-8/100 dahil değildir ama ayrı ayrı sipariş edilebilir) Toplamadan hemen sonra örneklerin çalışılması önerilir. 24 saatten daha uzun olmamak kaydıyla örnekleri 2 8 C de ya da daha uzun saklamak için 20/80 C de saklayın. Klinik örneklerin transportu, etiyolojik faktörlerin transportu için ülkesel, federal, lokal ve yasal düzenlemelere göre yapılmalıdır. ÖRNEK VE REAKTİF HAZIRLAMA 1. Lizis Solusyonu ve Yıkama Solusyonu (diğerleri +2-8 C de saklanmasına rağmen) buz kristalleri çözülene kadar 60 65 C ye kadar ısıtılır. Bir tüpte Ekstraksiyonun Negatif Kontrolü olacak şekilde gerekli miktarda 1,5 ml polipropilen tüpler hazırlayın. 2. Herbir tüpe 300 μl Lizis Solusyonu ekleyin. 3. Uygun tüplere 100 μl Örneklerden ekleyin. 4. Aşağıdaki gibi Kontrolleri ekleyin: Cneg işaretli tüpe 100 μl C (Negatif Kontrol amplifikasyon kiti ile sağlanır) ekleyin. 5. Tüpleri vorteksleyin ve 65 C de 5 dakika inkübe edin. 5-7 saniye santrifüj edin. Eğer numune tamamen çözülmemişse, maksimum hızda (12000-16000) 5 dakika yenicen santrifüj etmenizi ve supernatantı DNA ekstraksiyonu için yeni bir tüpe aktarmanızı öneririz. 6. Sorbenti şiddetlice vorteksleyin ve her bir tüpe 20 μl ekleyin. 7. 5-7 saniye vorteksleyin ve tüm tüpleri oda ısısında 3 dakika inkübe edin. Bu adımı tekrar edin. 8. Tüm tüpleri 5000g de 30 saniye santrifüj edin ve aerosol bariyerli mikropipet kullanarak pellete zarar vermeden her bir tüpten dikkatlice supernatantı atın. Yeni bir tüpe geçerken pipet ucunu değiştirin. 9. Her bir tüpe 500 μl Yıkama Solusyonu ekleyin. Şiddetlice vorteksleyin ve 10000g de 30 saniye vorteksleyin. Her bir tüpten supernatantı atın. 10. Aşama 9 u tekrar edin ve tüm tüpleri kapakları açık şekilde 65 C de 5-10 dakika inkübe edin. 11. Pelleti 100 μl DNA-eluent içinde yeniden süspense edin. 65 C de 5 dakika inkübe edin ve periyodik olarak vorteksleyin. 12. Tüpleri 12000g de 1 dakika santrifüj edin. 13. Supernatant amplifikasyon için hazır DNA içerir. Eğer amplifikasyon, ekstraksiyon ile aynı günde yapılmayacaksa hazırlanan örnekler maksimum 5 gün için 2-8 C de saklanabilir ya da 20 /-80 C de dondurulabilir. PROTOKOL: 1.Yeterli miktarda reaksiyon tüpü hazırlayın (N + 3( standart) ve 1(negatif kontrol). (RotorGene 6000 içeren 0,2 ml tüpler için her tüpe 1 damla mineral yağ ekleyin)

2. 40 örnek için Miks hazırlayın: PCR-mix-2 buffer içeren tüp içine 20 µl TaqF DNA Polymerase ekleyin. Pipetleyerek karıştırın. Bu miks +2-8 C de 3 ay stabildir. 3. Her bir örnek için tüpe 7,0 µl PCR-mix-1-FRT ve 8,0 µl Mix (PCR-mix-2 buffer ve TaqF DNA Polimeraz) ekleyin. 6. Reaksiyon karışımlı uygun tüplere 10 μl ekstrakte DNA örneği ekleyin. (Ekstrat DNA içeren bütün tüpleri 1dakika boyunca maksimum hızda (12000-16000 g) tekrar santrifüj edin ve supernatantı dikkatlice alın. Reaksiyonla inhibe olan sorbent pellete dokunmayın). 7. Her bir panel için 3 standart ve 1 negatif Kontrol hazırlayın: Negatif PCR Kontrol için 10 µl DNA-buffer ekleyin; Etiketli K1 tüpüne 10 µl QS HPV K1 ekleyin; Etiketli K2 tüpüne 10 µl QS HPV K2 ekleyin; Etiketli K3 tüpüne 10 µl QS HPV K3 ekleyin. 8.Tüpleri kapatın ve Real Time PCR içine yerleştirin. 9. Örnek pozisyonlarını programlayın ve standart eğriyi oluşturmak için Joe (Yellow)/HEX, Fam (Green), Rox(Orange) ve Cy5 (Red) kanalında Kantitatif Standart ( Quant Data Card de rapor edildi) in konsantrasyonunu girin. Negatif kontrol için - ve Standards için K1, K2, K3 ve örnek içeren kuyulara Unknown ismini kullanın. Veri Analizleri: 1.Deney geçerli olabilir eğer: Negatif Kontrol pozitif flüoresans sinyale sahip değilse; Standartlar bütün kanallarda (Fam, Joe/Hex, Rox, Cy5) pozitif sinyale sahipse. 2. Örneğin sonucu kabul edilir: Geçersiz: Flüoresans sinyal (pozitif veya internal) yoksa; Negatif: eğer sinyal sadece genomik DNA > 5 x 10 3 konsantrasyona sahip Fam (Green) kanalında varsa; Pozitif: HPV А9 grup (16, 31, 33, 35, 52, 58) için eğer Ct 33 değerli Joe (Yellow)/Hex kanalda pozitif sinyal varsa; HPV А7 grup (18, 39, 45, 59) için eğer Ct 33 değerli Rox (Orange) kanalda pozitif sinyal varsa; HPV А5-A6 grup (51, 56) için eğer Ct 33 değerli Cy5 (Red) kanalda pozitif sinyal varsa. Aşağıdaki formülü kullanarak HPV DNA konsantrasyonunu hesaplayın: HPV DNA copies/specimen lg[ x genomic DNA copies/specimen 200000] = lg (HPV DNA in 100.000 cells) SONUÇLARIN YORUMLANMASI: Sonuç lg (100.000 hücre içinde HPV ) Yorum < 3 Klinik olarak önemsiz 3-5 Klinik olarak önemli. Servikal displazin bulunma riski > 5 Klinik olarak çok önemli. Servikal displazin yüksek riski Sonuçlar, kit ile birlikte Microsoft Excel formatında program kullanılarak otomatik olarak hesaplanabilir. 1. HPV High Risk Screen Quant 4x programını açın ve Security Warning (Güvenlik Uyarısı) penceresinde Enable Macros (Makroları Etkinleştir) butonuna tıklayın (Microsoft Excel in güvenlik düzeyi Medium olarak seçilmelidir) (Araçlar Makro Güvenlik Ortam). 2. Name sütunundan örnek isimleri mousun sağ düğmesi ile kopyalayın ve HPV High Risk Screen Quant 4x programının Name sütununa isimleri yapıştırın. 3. FAM (Yeşil) kanalından Ct değerlerini aynı yolla kopyalayın ve programın uygun sütununa yapıştırın. Bütün kanallar için aynı prosedürü tekrar edin. Standartlar K1, K2, K3 ve Negatif Kontrol olarak isimlendirilmeli ve - olarak işaretlenmelidir. 4. Quantitative analysis seçin ve Internal Calibration tercih edin.

5. Pencerenin sağ üstünde Quant Data Card da bildirilen Kantitatif Standartın konsantrasyonu Standards tablosunda ayarlanır. 6. Sign unnamed ve Results butonunu tıklayın. 7. Yeni bir isim ile dosyayı kaydedin. Rotor-Gene 3000/6000 ile Real Time Amplifikasyon 1. Tüpleri kapatın ve Rotor-Gene 2000/3000/6000 içine yerleştirin. 2. Reaksiyon hacmi, 25 µl. RG6000 penceresi için 15 μl oil layer volume seçildiğinden emin olun. Önemli:Rotor-Gene 6000 için 1.7 Build 67 software ya da updated versiyon kullanılmalıdır (software bilgi için info@sacace.com ). 3. Rotor-Gene 3000/6000 aşağıdaki gibi programlayın: t, C Zaman Flüoresans tespit Döngü Bekleme 95 15 dk 1 Bekleme 2 65 2 dk 1 95 20 sn Döngü 64 İniş: 25 sn 5 Döngü başına 1 derece 65 55 sn 95 15 sn Döngü 2 60 25 sn 65 25 sn Fam (Green), Joe (Yellow), Rox (Orange), Cy5 (Red) 40 4. Flüoresans, Fam (Green), Joe (Yellow), Rox (Orange), Cy5 (Red) kanallarında 65 C de tespit edilir. Not: Cihazı yerleştirmek için kit ile verilen HPV high Risk Screen Real-TM Quant.rex dosyasının kullanılması önerilir. 5. 1ci devralmadan önce Perform Kalibrasyon seçin ve bütün kanallar için 4FI 8FI ayarlayın (Auto gain calibration channel settings). Sonuç Analizleri: 1. Analize bastıktan sonra Quantitation (Kantitasyon) butonunu seçin. Fam (Green), Joe (Yellow), Rox (Orange), Cy5 (Red) kanaları için işlemi gerçekleştirin. 2. Threshold: 0,03 ayarlayın. 3. Dynamic Tube, Slope Correct seçin. 4. More settings (Outlier Removal For RG6000) seçin ve 20% a NTC Threshold ayarlayın. 5. Eliminate cycles before: 5 ayarlayın. Fam kanal Internal Kontrol (β-globine gen) Cy5 kanal - HPV А5-A6 grup

Joe kanal HPV А9 grup Rox kanal HPV А7 grup iq icycler ve iq5 (Bio-Rad) ile Real Time Amplifikasyonu Not: Cihazı deneye başlamadan önce en az 15 dakika önce açın. 1. Aşağıdaki amplifikasyon protokolünü kaydedin ve Workshop içine ekleyin: Döngü Sıcaklık, C Zaman Flüoresans tespit Tekrar Döngü 1 95 15 min 1 95 15 s Döngü 3 65 İniş: 55 s 6 Döngü başına 1 derece 65 25 s 95 15 s Döngü 4 60 55 s Real-time 41 65 25 s 2. FAM, HEX, ROX, Cy5 kanallarında flüoresans tespiti seçin. I. Orjinal Dosya (Background subtracted) Err Im.1. Fam II. Dates after setting (PCR Base Line Subtracted Curve Fit) Imm.2. Samples Err: not homogeneous mix of the reagents in the tube before the amplification Imm.3.Fam Kanal Internal Kontrol (β-globine gen) Imm. 4. Cy5 kanal

Imm.5 Hex channel Imm.6 Rox channel MX3000P, MX3005P TM (Stratagene) ile Real Time Amplifikasyonu 1. Stratagene programını başlatın. 2. New Experiment Options Quantitative PCR (Multiple Standards) pencerelerini seçin ve Turn lamp on for warm-up koyun. Not: Cihazı deneye başlamadan önce en az 15 dakika önce açın. 3. Termalcyclera tüpleri (plaka) ekleyin ve cihazı kapatın. 4. Options menüsünden Optics Configuration seçin ve FAM filter set içine Fam ve HEX/JOE filter set içine Joe ekleyin. 5. Instrument menüsünden Filter Set Gain Setting seçin ve yeni pencerede aşağıdaki parametreleri ayarlayın: Cy5 x4 ROX x1 HEX/JOE x4 FAM x4 6. Well type penceresinde örnekler için Unknown ayarlayın ve Collect fluorescence data alanında Fam, Hex, Rox, Cy5 kanalları bütün örnekler için seçin. 7. Bütün hücreleri çift tıklayın ve örnek bilgisinde bütün pozitif örnekleri + olarak ve negatif örnekleri - olarak girin. Standard Quantity kutusunda Quantitative Standards (reported on the HPV Quant Data Kartta bildirildi) konsantrasyonunu girin. 8. Pencerenin sol üst kısımında Thermal Profile Setup düğmesine basın. t, C Zaman Flüoresans tespit Döngü Segment 1 95 15 dk 1 Segment 2 65 2 dk 1 95 20 sn Segment 3 (Döngü) Segment 4 (Döngü) Sonuç Analizleri: 64 İniş: Döngü başına 1 derece 25 sn 65 55 sn 95 20 sn 60 25 sn 65 55 sn Fam, Joe, Rox, Cy5 1. Pencerenin sol üst kısmında Analysis düğmesine ve sonra Results basın. 2. Dyes shown menüsünde Threshold fluorescence alanına aşağıdaki eşikleri koyun: 5 40

Cy5 150 ROX 150 HEX/JOE 150 FAM 150 3. Dört olan flüoresans kanallarının aktif olduğundan emin olun ( Dyes Shown alanında Cy5, Rox, Hex, Fam düğmelerini seçin) Örnek Fam kanal Internal Kontrol (β-globine gen) Cy5 kanal - HPV А5-A6 grup Joe kanal HPV А9 grup Rox kanal HPV А7 grup PERFORMANS ÖZELLİKLERİ Analitik özgüllük Primerler ve probların analitik özgüllüğünü negatif numuneler ile doğrulanmıştır. Bu numuneler spesifik Human Papillomavirus primerler ve probları ile sinyal vermezler. HPV High Risk Screen Real-TM Quant kitin özgüllüğü 100% dir. Kit HPV High Risk Screen Real-TM Quant ın potansiyel çapraz-reaktivitesi kontrol grubuna karşı test edilmiştir. Diğer patojenler ile herhangi bir çapraz-reaktivite gözlenmez. Analitik hassasiyet Kit HPV High Risk Screen Real-TM Quant, 1000 kopya/ ml den az olmayan % 100 duyarlılıkla testlerin Human Papillomavirus DNA tespitini sağlar. Tespit, negatif numuneler tarafından kontrol standardını ve dilüsyonlarını gerçekleştirir. Hedef bölge: E1, E2 *icycler and iq5 are trademarks of Bio-Rad Laboratories * The Rotor-Gene Technology is a registered trademark of Corbett Research * MX3000P a registered trademark of Stratagene Sacace Biotechnologies Srl 44 Scalabrini, str. 22100 Caserta, Italy *PCR: The Polymerase Chain Reaction (PCR) process is covered by patents owned by Hoffmann-La Roche and applicable in certain countries. Sacace does not encourage or support the unauthorized or unlicensed use of the PCR process. Use of this kit is recommended for persons that either have a license to perform PCR or are not required to obtain a license