REF 441638 100 Test P0071(03) _TR Tarih: 2014-09
İÇİNDEKİLER KULLANIM AMACI... 3 İŞLEMİN ÖZETİ VE AÇIKLAMASI... 3 AYIRAÇLAR... 3 ÖNLEMLER... 3 SAĞLANAN MATERYALLER... 4 SAKLAMA, MUAMELE VE STABİLİTE... 4 Toplanan Numuneler... 4 Elüsyon Yapılmış Örneği İçeren Örnek Tamponu... 4 Numuneler ve Kontrol Lizatları... 4 Ayıraçlar... 4 GEREKEN AMA SAĞLANMAYAN MATERYALLER... 5 KULLANIM TALİMATI... 6 Yığın Lizis Ayıraç Hazırlama veya Saklama... 6 Numune Toplama... 6 Numune Hazırlama... 6 Numune Lizisi... 7 KALİTE KONTROLÜ... 7 Test (Pozitif ve Negatif) Kontrolleri... 7 Numune İşleme (Pozitif ve Negatif) Kontrolleri... 7 KLİNİK NUMUNELERDEN KÜLTÜR ALINMASI... 8 Streak-Plate Yöntemi... 8 Zenginleştirme için Broth... 8 İŞLEMİN SINIRLAMALARI... 8 LİZİS ETKİNLİĞİ... 9 REFERANSLAR... 9 SEMBOLLER İNDEKSİ... 10 P0071(03) _TR - 2 -
Kullanım Amacı, BD GeneOhm MRSA ACP Testiyle analiz öncesinde nazal sürüntü numunelerinde Staphylococcus aureus hücrelerinin lizisi için basitleştirilmiş bir yöntem sağlar. İşlemin Özeti ve Açıklaması BD GeneOhm MRSA ACP Testiyle kullanılan nazal sürüntü numunelerinden örnek hazırlama için enzimatik Akromopeptidaz (ACP) lizis teknolojisi kullanır. Lizis Ayıracının rekonstitüsyonu Lizis Seyreltici ile yapılır ve tek kullanımlık lizis tüplerine bölüntülenir. Bir nazal sürüntü numunesi alınıp laboratuvara önerilen eküvyon taşıma cihazı ( Gereken ama Sağlanmayan Materyaller kısmına bakın) kullanılarak gönderilir. Nazal eküvyon bir Örnek Tamponu tüpüne kırılarak konur. Sıvı örnek süspansiyonunun bir bölüntüsü lizis ayıracını içeren tüpe aktarılıp bakteriyel hücre duvarını parçalayıp hücrenin genetik materyalini ortaya çıkarmak üzere inkübe edilir. Lizis yapılmış örneğin bir bölüntüsü sonra BD GeneOhm MRSA ACP Testiyle çalışılır. Ayıraçlar BD GeneOhm MRSA ACP Lizis Kiti Lizis Seyreltici Enzim rekonstitüsyonu için Tris-EDTA tamponu Lizis Ayıracı Kurumuş lizis yığın ACP enzimi (15,1 KU) Miktar 1 x 3,7 ml 1 şişe Örnek Tamponu 162 x 600 µl Örnek ve negatif kontrol hazırlama ve pozitif kontrol DNA ve rekonstitüsyonu için Tris-EDTA tamponu Önlemler İn vitro diagnostik kullanım içindir. Dış karton güvenlik mührü bozulmuşsa kiti kullanmayın. Koruyucu poşetler geldiklerinde açık veya yırtıksa ayıraçları kullanmayın. Örnek Tamponu koruyucu poşetleri her kullanımdan sonra fermuar şeklinde kapanan mühürle hemen kapatın. Lizis Ayıracını poşetler içinde kurutucu yoksa veya açılmışsa kullanmayın. Ayıraçları birleştirmeyin veya ayıraç lotlarını birbiri yerine kullanmayın. Ayıraçları son kullanma tarihinden sonra kullanmayın. Tüplerden bölüntüleri çıkarırken ayıraçların mikrobiyel ve deoksiribonükleaz (DNase) kontaminasyonundan kaçının. Steril, DNase içermeyen tek kullanımlık filtre bloklu veya pozitif displasman pipetör uçlarının kullanılması önerilir. Ana teknik işlem pipetleme olsa da bu işlemin uygun şekilde yapılması için iyi laboratuar tekniği şarttır. BD GeneOhm MRSA ACP Testinin yüksek analitik hassasiyeti nedeniyle özellikle çok sayıda bölüntünün tüpten alındığı durumlarda tüm ayıraçların saflığını korumak için büyük dikkat gösterilmelidir. Her numune veya ayıraç tüpünün altındaki sıvıya erişecek kadar küçük çapa sahip bir pipetör ucu kullanın. Lizis adımlarının önerilen süre aralığının dışında yapılması DNA amplifikasyonunu etkileyebilir ve geçersiz sonuçlar verebilir. Belirtilen zaman aralıkları içinde yapılmayan lizis tekrarlanmalıdır. Yerel, bölgesel ve/veya ulusal yönetmelikler veya sertifikasyon sağlayan kurumların gereklilikleri veya kılavuz ilkelere göre ek kontroller test edilebilir. P0071(03) _TR - 3 -
Laboratuar tarafından açık tüplü PCR testlerinin de aynı genel alanda yapıldığı durumlarda numune hazırlama ve amplifikasyon/saptama aktiviteleri için ayrılmış çalışma alanları kullanılmalıdır. Malzeme ve ekipman her alan için ayrı olmalı ve bir alandan ötekine götürülmemelidir. Daima eldiven kullanılmalı ve bir alandan ötekine giderken değiştirilmelidir. Örnekleri daima bulaşıcı olabilirlermiş gibi Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories 1 ve CLSI Belgesi M29 2 içinde tanımlandığı gibi güvenli laboratuar işlemlerine göre kullanın. Kit ayıraçlarını kullanırken koruyucu giysiler ve tek kullanımlık eldivenler kullanın. Testi yaptıktan sonra ellerinizi iyice yıkayın. Ağzınızla pipetlemeyin. Örneklerin veya kit ayıraçlarının kullanıldığı yerlerde sigara içmeyin ve bir şey yemeyin ve içmeyin. Kullanılmamış ayıraçları ve atıkları ulusal, bölgesel ve yerel yönetmeliklere göre atın. Sağlanan Materyaller Lizis Seyreltici Lizis Ayıracı Örnek Tamponu tüpleri Vidalı kapaklar Septum kapakları Saklama tüpleri Saklama, Muamele ve Stabilite Toplanan Numuneler Örnekler taşıma sırasında 2 C ile 25 C arasında tutulmalıdır. Donmaya veya aşırı sıcağa maruz kalmaya karşı koruyun. Numuneler test yapılmasından önce 15-25 C'de 48 saat veya 2-8 C'de 5 gün saklanabilir. Elüsyon Yapılmış Örneği İçeren Örnek Tamponu Örnek Tamponu tüpündeki elüsyon yapılmış örnek 2-8 C'de 72 saate kadar stabildir (örn. tekrar test için). Numuneler ve Kontrol Lizatları Numuneler ve kontrol lizatları septum veya vidalı kapakla 2-8 C'de 4 saat veya vidalı kapakla -20 C'de 8 güne kadar stabildir. Ayıraçlar Not: Saklama koşulları her poşette yazılı spesifikasyonlara uymalıdır. Örnek Tamponu (mavi kapak) Saklama Koşulları Mühürlü poşet Sıcaklık Stabilite 2-25 C Son kullanma tarihi Açılmış poşet Sıcaklık 1 Stabilite 2 2-25 C 1 ay 1 Bu ayıraçlar oda sıcaklığında saklanabilse de aynı lottan birlikte gelen lizis ayıracıyla birlikte 2-8 C'de tutulmaları gerekir. 2 Poşetin her kullanımdan sonra fermuar şeklinde kapanan mühürle uygun şekilde kapatılması şartıyla. P0071(03) _TR - 4 -
Lizis Ayıracı Saklama Koşulları Lizis Ayıracı (Şişe içinde, Rekonstitüsyon yapılmamış) 15,1 KU Sıcaklık Stabilite 2-25 C Son kullanma tarihi Rekonstitüsyon yapılmış ve septum kapağıyla kapatılmış bir lizis tüpüne bölüntülenmiş 20 µl Sıcaklık Stabilite 2-8 C 1 hafta Rekonstitüsyon yapılmış ve vidalı kapakla kapatılmış bir lizis tüpüne bölüntülenmiş 20 µl Sıcaklık Stabilite 2-8 C 1 ay Gereken ama Sağlanmayan Materyaller BBL CultureSwab Sıvı Stuart tekli veya çiftli eküvyon (Becton Dickinson katalog no. 220099 veya 220109), Copan (Venturi) Transystem Sıvı Stuart tekli veya çiftli eküvyon (Copan, katalog no. 141C veya 139C), veya BBL CultureSwab Sıvı Amies tekli veya çiftli eküvyon (Becton Dickinson katalog no. 220093 veya 220105), Copan (Venturi) Transystem Sıvı Amies tekli veya çiftli eküvyon (Copan, katalog no. 140C veya 138C), veya BBL CultureSwab Plus Amies Jel, Kömürsüz tekli veya çiftli eküvyon (Becton Dickinson katalog no. 220116 veya 220117), Copan (Venturi) Transystem Amies Agar Gel Kömürsüz tekli veya çiftli eküvyon (Copan, katalog no. 108C veya 134C) BD GeneOhm MRSA ACP Testi (BD katalog no. 441637 veya 441639) Vortex Genie 2 (VWR katalog no. 58815-234) 1,5 ml mikrotüp tutucu veya eşdeğeriyle; çok sayıda numuneyi işlemek için çok sayıda tüp için tasarlanmış adaptör kullanılabilir (VWR katalog no. 58816-146) VEYA VWR Signature Çoklu Tüp Vorteksleyici (VWR 58516-115). Kuru ısıtma bloğu, 37+/-2 C'de 1,5 ml tüplere özel Kuru ısıtma bloğu, 99+/-2 C'de 1,5 ml tüplere özel Buz veya soğutma bloğu 1,5 ml tüpler için Kalibre Edilmiş Mikropipetörler (hassas aralık 10-100 µl ile 100-1000 µl arasında) Steril, DNase içermeyen filtre bloklu veya pozitif displasman profilli mikropipetör uçları (10-100 µl ve 100-1000 µl) Gram boyama ayıracı (isteğe bağlı) BBL CHROMagar Staph aureus (BD Diagnostic Systems katalog no. 214982), BBL CHROMagar MRSA (BD Diagnostic Systems katalog no. 215084), Mannitol Tuz Agarı (MSA) (BD Diagnostic Systems katalog no. 221173 veya 221271 veya eşdeğer vasat) (isteğe bağlı) %6,5 NaCl eklenmiş TSB (triptikaz soya broth) (BD Diagnostic Systems katalog no. 221351) (isteğe bağlı) %5 koyun kanlı agar plakası (örn. BBL Triptikaz Soya Agarı (TSA II) %5 Koyun Kanı ile, BD Diagnostic Systems katalog no. 221239 veya 221261) (isteğe bağlı) Tek kullanımlık eldivenler, pudrasız Makas (isteğe bağlı) Gazlı bez Kronometre veya süre ölçer P0071(03) _TR - 5 -
Kullanım Talimatı Yığın Lizis Ayıraç Hazırlama veya Saklama 1. Lizis Seyreltici tüpünün tüm içeriğini Lizis Ayıracı şişesine dökün. 2. Şişenin kapağını sıkıca kapatın ve yüksek hızda 30 saniye vorteksleyin. 3. Rekonstitüsyon yapılmış yığın Lizis Ayıracının oda sıcaklığında 20 dakika durmasını bekleyin. 4. Lizis Ayıracı şişesini yüksek hızda 30 saniye vorteksleyin. Not: Rekonstitüsyon yapıldıktan sonra Yığın Lizis Ayıracı şişesinin tüm içeriği ayrı tek kullanımlık lizis tüplerine bölüntülenmelidir. 5. Bir tekrarlayan pipetör kullanarak rekonstitüsyon yapılmış lizis ayıracından 20 µl'yi tek kullanımlık lizis tüplerine aktarın. (1 şişe yığın Lizis Ayıracı 160 reaksiyona kadar yeterlidir) 6. Tüpleri bir septum kapağı veya bir vidalı kapak ile kapatın ve uygun son kullanma tarihiyle etiketleyin. 7. Lizis tüplerini 2-8 C'de saklayın. Not: Lizis Ayıracı bir septum kapağıyla saklandığında 7 güne kadar ve bir vidalı kapakla saklandığında 30 güne kadar stabildir (Bakınız Saklama, Muamele ve Stabilite - Ayıraçlar bölümü). Numune Toplama Önerilen bir eküvyon taşıma cihazı kullanılarak (bkz. Gereken ama Sağlanmayan Materyaller ), nazal numuneler hastanenin standart işletim prosedürlerine ve aşağıdakilere göre alınmalıdır: 1. Eküvyonu steril fizyoloijk salinle nemlendirin veya kuru olarak kullanın. 2. Eküvyonu dikkatle hastanın burun deliğine yerleştirin (eküvyon ucu burun kanadının kenarından 2,5 cm mesafeye kadar yerleştirilmelidir). 3. Eküzyonu burun deliği içindeki mukozada 5 kez yuvarlayın. 4. Aynı eküvyonu ikinci burun deliğine yerleştirin ve 2. ve 3. adımları tekrarlayın. 5. Eküvyonu taşıma tüpüne yerleştirin. 6. Taşıma tüpünü etiketleyin. 7. Eküvyonu laboratuara hastanenin standart işletim prosedürlerine göre gönderin ( Saklama, Muamele ve Stabilite - Toplanan Örnekler kısmına bakınız). Numune Hazırlama Not: Bir (1) Örnek Tamponu tüpü (mavi kapak) işlenecek her numune için gereklidir. Çalışma başına iki (2) ek Örnek Tamponu tüpü (mavi kapak) gerekirse numune işleme kontrolleri (SPC) için gereklidir (hazırlama ayrıntıları için aşağıda Kalite Kontrol kısmına başvurun). Gerekli sayıda tüpü koruyucu poşetten çıkarın, fazla havayı giderin ve poşetleri fermuar şeklinde kapanan mühürle hemen kapatın. Koruyucu poşetin kapatmadan sonra uygun şekilde mühürlenmesini sağlayın. Önemli: Klinik numunelerden kültür yapılması için aşağıdaki Klinik Numunelerden Kültür Alınması kısmına başvurun. 1. Her Örnek Tamponu (mavi kapak) tüpünü uygun tanımlamayla etiketleyin. 2. Eküvyonu örnek taşıma tüpünden çıkarın ve eküvyonu karşılık gelen Örnek Tamponu tüpüne (mavi kapak) yerleştirin. 3. Eküvyon sapını kırın ve tüpü vidalı kapakla sıkıca kapatın. Eküvyonu tüp kenarına yakın olarak ucundan tutun (kontaminasyon riskini en aza indirmek için gazlı bez kullanın). Eküvyonu en dipten yaklaşık bir (1) cm (sıvı seviyesine yakın) kaldırın ve kırmak için sapı tüpün kenarı üzerinde bükün. Alternatif yöntem: sapı kesmek için temiz makas kullanın. 4. Örnek Tamponu tüplerini yüksek hızda 60 saniye vorteksleyin. Çok sayıda örneği işleme koymak için çok sayıda tüp için tasarlanmış bir adaptör kullanılabilir. P0071(03) _TR - 6 -
Numune Lizisi Not: Kontrol DNA (Pozitif Kontrol) rekonstitüsyonu ve her çalışmada Negatif Kontrol olarak kullanım için bir (1) Örnek Tamponu tüpü (mavi kapak) gereklidir. Her numune için 20 L bölüntülenmiş lizis ayıracı içeren bir (1) lizis tüpü gereklidir. PCR kontrolleri için çalışma başına iki (2) ek lizis tüpü gereklidir. Her BD GeneOhm MRSA ACP Testine bir (1) Pozitif ve bir (1) Negatif PCR Kontrol dahil edilmelidir. Her çalışma için BD GeneOhm MRSA ACP Testinden bir Kontrol DNA tüpü (kırmızı strip etiket) gereklidir. Gerekli sayıda tüpü koruyucu poşetten çıkarın, fazla havayı giderin ve poşetleri fermuar şeklinde kapanan mühürle hemen kapatın. Koruyucu poşetin kapatmadan sonra uygun şekilde mühürlenmesini sağlayın. 1. Her Lizis tüpünü (20µL bölüntü) uygun tanımlamayla etiketleyin. 2. Kontrol DNA tüpüne 225 µl Örnek Tamponu (mavi kapak) ekleyin. Kontrol DNA peletinin tüpün en altında olmasını sağlayın. Mikropipetör ucunu kontrol DNA kapağının septumu içinden yerleştirin. Ucu kapak içine fazla derin yerleştirmeyin. Tüpe Örnek Tamponu verin. Kalan Örnek Tamponunu negatif kontrol için saklayın. 3. Rekonstitüsyon yapılmış Kontrol DNA tüpünü 5-10 saniye vorteksleyin. İşlemeye hazır olana kadar tüpü 1,5 ml tüplere özel soğutma bloğuna veya buza koyun. 4. Her örnek ve kontrol için yeni tek kullanımlık pipet uçlu bir mikropipetör kullanarak kapaksız tüpe veya septum içinden, uygun şekilde etiketlenmiş lizis tüpüne doğrudan 90 µl elüsyon yapılmış örnek süspansiyonu ekleyin. 5. Bir lizis tüpüne 90 µl Pozitif (Rekonstitüsyon yapılmış DNA) kontrolü ekleyin. Pozitif Kontrollü lizis tüpüne pipetlemeden önce Pozitif Kontrol tüpünden septum kapağını dikkatle çıkarın. Pipetlemeden sonra Pozitif Kontrol tüpünü orijinal Pozitif Kontrol septum kapağıyla tekrar mühürleyin. Pozitif Kontrol tüpünü gerekiyorsa tekrar testlerde kullanım için tutun. 6. Bir lizis tüpüne 90 µl Negatif (Örnek Tamponu) kontrolü ekleyin. Örnek Tamponu tüpleri (numune, kontroller ve varsa SPC'ler) takip testleri için 72 saate kadar 2-8 C'de saklanabilir. 7. Numuneleri ve kontrolleri içeren Lizis tüplerini bir 37+/-2 C ısıtma bloğunda 20 dakika inkübe edin (lizis adımı). Not: Tüpleri belirtilen sıcaklık aralığı içinde inkübe etmek önemlidir. 8. Lizis tüplerini bir 99+/-2 C ısıtma bloğuna aktarın ve 5 dakika inkübe edin (inaktivasyon adımı). Not: Tüpleri belirtilen sıcaklık aralığı içinde inkübe etmek önemlidir. 9. Lizis tüplerini bir soğutma bloğuna (2-8 C) aktarın ve 10 dakika bekleyin. Eğer lizatlar 4 saat içinde kullanılmazsa septum kapağını (kullanıldıysa) vidalı kapakla değiştirin ve tüpleri -20 C'de saklayın. 10. Teste devam etmek için BD GeneOhm MRSA ACP Testi prospektüsüne başvurun. Kalite Kontrolü Test (Pozitif ve Negatif) Kontrolleri Kalite kontrol işlemleri BD GeneOhm MRSA ACP Testi performansını izlemek üzere tasarlanmıştır. Pozitif Kontrol, önemli ayıraç hatalarını izlemek üzere tasarlanmıştır. Negatif Kontrol MRSA DNA veya MRSA amplikonlarıyla ayıraç veya çevresel kontaminasyonu (veya taşımayı) saptamak üzere tasarlanmıştır. Her test çalışmasına bir Pozitif ve bir Negatif Kontrol dahil edilmelidir. Kontrolleri bu belgenin Numune Lizisi bölümünde sağlanan talimata göre hazırlayın. Numune İşleme (Pozitif ve Negatif) Kontrolleri Numune İşleme Kontrolleri (SPC'ler) önemli çapraz kontaminasyonun oluşmadığı konusunda güvence sağlamak ve test işlemi sırasında önemli ayıraç veya metodoloji hatalarını izlemek açısından önerilir. Yerel, bölgesel ve/veya ulusal yönetmelikler veya akreditasyon organizasyonlarının kılavuz ilkeleri veya gereklilikleri uyarınca ek kontrol suşları SPC'ler olarak test edilebilir. Bir referans MRSA suşu (ön. ATCC 43300) veya iyi karakterize edilmiş bir MRSA klinik izolatı pozitif SPC olarak kullanılabilir; varsa MRSA MREJ tip iii ve vii suşları, ek pozitif SPC olarak test içinde doğrudan kontrol edilmeyen test probları ve primerlerini izlemek üzere kullanılabilir. Bir metisiline duyarlı Staphylococcus aureus suşu (örn. ATCC 25923) veya başka herhangi bir non-aureus Staphylococci (örn. Staphylococcus epidermidis ATCC 14990) negatif SPC olarak kullanılabilir. SPC'ler şu şekilde hazırlanır: Kolonileri 18-24 saat boyunca %5 koyun kanlı agarda inkübe edin. İzole kolonileri 0,5 McFarland türbidite elde edece şekilde salin içinde tekrar süspansiyon haline getirin. P0071(03) _TR - 7 -
~10 6 CFU/mL süspansiyon elde edecek şekilde salin ile seyreltin. Önerilen eküvyonu ( Gereken ama Sağlanmayan Materyaller kısmına bakınız) bakteriyel süspansiyona batırın ve fazla sıvıyı bastırarak giderin ve uygun şekilde tanımlanmış Örnek Tamponu tüpüne yerleştirin. Uygun PCR kontrolleriyle birlikte bir numune olarak işleyin ve test edin. Ek bilgi yukarıdaki Numune Hazırlama kısmında BD GeneOhm MRSA ACP Testi prospektüsünde bulunabilir. Genel kalite kontrolü rehberliği için, CLSI MM3 3 ve C24 4 kısımlarına bakabilirsiniz. Klinik Numunelerden Kültür Alınması Antimikrobiyel hassasiyet testi veya epidemiyolojik tiplendirme yapmak için klinik numuneler örnek hazırlama işlemini yapmadan (Streak-Plate yöntemi kullanılarak) veya Örnek Hazırlama işleminden sonra (Zenginleştirme için Broth yöntemi kullanılarak) toplama cihazına (eküvyon) kültür yapılabilir. Eküvyonlar kültür yapılmasından önce kapalı Örnek Tamponu tüplerinde 2-8 C'de 24 saate kadar saklanabilir. Streak-Plate Yöntemi Bu kültür yöntemi numune lizis işleminden önce numune eküvyonlarıyla yapılabilir. 1. Toplama cihazını (eküvyon) taşıma tüpünden çıkarın. 2. Uygun bir katı vasatı (örn. bir Mannitol tuzlu agar (MSA) veya bir BBL CHROMagar MRSA plakası) önce plakanın birinci kadranını çizerek inoküle edin. 3. Eküvyonu taşıma tüpüne geri koyun veya bir nin numune tampon tüpünde (mavi kapak) kırıp Numune Hazırlama kısmındaki talimata göre devam edin. 4. Steril bir öze veya iğne kullanarak inokulumu kalan kadranlara çizin. 5. Plakayı 35 ± 2ºC'de 24-48 saat inkübe edin. 6. Plaka üreticisinin Kullanma Talimatına göre göre S. aureus kolonilerini tanımlayın ve doğrulayın ve metisilin direnci testi yapın. Zenginleştirme için Broth Bu kültür yöntemi elüsyon yapılmış hücre süspansiyonunun numune lizis adımı için çıkarılmasından önce tüplerde kalan eküvyon ile yapılabilir. Eküvyonlar kültür yapılmasından önce kapalı Örnek Tamponu tüplerinde 2-8 C'de 24 saate kadar saklanabilir. 1. Gerekirse kalan hücre süspansiyonunu gelecekte kullanım için bir mikrotüpe aktarın. 2. Eküvyonu içeren Örnek Tampon tüplerine 1,0 ml zenginleştirme için broth ekleyin. %6,5 NaCl eklenmiş TSB (Triptikaz Soya Broth) önerilir. 3. İnoküle edilmiş zenginleştirme için broth'u 2-5 saniye vorteksleyin. 4. 35 ± 2ºC'de 18-24 saat inkübe edin. Büyüme görülmezse 24 saat daha inkübe edin. 5. Uygun bir katı vasata alt kültür yapın ve 35 ± 2ºC'de 24-48 saat inkübe edin (örn. %5 koyun kanlı agar, MSA veya BBL CHROMagar MRSA plakası). 6. Plaka üreticisinin Kullanma Talimatına göre göre S. aureus kolonilerini tanımlayın ve doğrulayın ve metisilin direnci testi yapın. İşlemin Sınırlamaları Bu ürünün sadece BD GeneOhm MRSA ACP Testi ile kullanılması tasarlanmıştır. Bu ürünün Gereken ama Sağlanmayan Materyal kısmında liste halinde verilen numune toplama ve taşıma sistemlerinde toplanan nazal sürüntü numunelerinde kullanılması tasarlanmıştır. Liste halinde verilenler dışındaki numune toplama ve taşıma sistemleriyle performans değerlendirilmemiştir. P0071(03) _TR - 8 -
Lizis Etkinliği Lizis etkinliği Gereken ama Sağlanmayan Materyaller kısmında liste halinde verilen her toplama cihazı tipi için değerlendirilmiştir. Numune toplama cihazları bilinen konsantrasyonlu üç (3) MRSA suşu ile inoküle edilmiştir. Elüsyon yapılmış sürüntü süspansiyonunun bir bölüntüsü alınıp Numune Lizisi talimatına göre işlenmiştir. Lizatlar kanlı agar plakalarına inoküle edilmiş 18-24 saat inkübe edilmiş ve CFU'lar sayılmıştır. Koloni sayımları 0 ile 1900 CFU/plaka arasında değişmiştir. Üç (3) suşun her biri için kullanılan tüm toplama cihazlarından elde edilen CFU sayımlarının bir özeti aşağıdaki tabloda sunulmuştur. Gözlenen en düşük ve en yüksek lizis etkinlikleri sırasıyla %99,7 ve %100 olmuştur. MRSA Suşu 1 A B C Toplama Cihazı Tipi (n = 18) Başlangıç CFU Sayımı (alt sınır) Başlangıç CFU Sayımı (üst sınır) Lizis Sonrası Son CFU Sayımı (alt sınır) Lizis Sonrası Son CFU Sayımı (üst sınır) En Düşük Lizis Etkinliği 3 (%) En Yüksek Lizis Etkinliği 4 (%) Sıvı Amies 0 700 99,9 100 Jel Amies 7,26 x 10 5 1,02 x 10 6 0 500 99,9 100 Sıvı Stuart 0 800 99,9 100 Sıvı Amies 5 1900 99,7 100 Jel Amies 5,47 x 10 5 7,92 x 10 5 0 660 99,9 100 Sıvı Stuart 17 600 99,9 100 Sıvı Amies 2 9,25 x 10 5 1,19 x 10 6 23 400 100 100 Jel Amies 0 351 100 100 Sıvı Stuart 2 22 600 99,9 100 1 A (ATCC 43300, MREJ Tip ii), B (MREJ Tip vii) ve C (MREJ Tip ii, PFGE USA 300), önceden karakterize edilmiş MRSA suşları 2 İki durumda bir (1) plakada birleşik büyüme gözlenmiştir (n = 18 yerine 17); bu nedenle koloni sayımları yapılamamıştır. 3 En düşük lizis etkinliği şöyle hesaplanmıştır: [(lizisten önce gözlenen en düşük başlangıç CFU sayımı - lizisten sonraki en yüksek sayım)/lizisten önce gözlenen en düşük başlangıç CFU sayımı] x 100. 4 En düşük lizis etkinliği şöyle hesaplanmıştır: [(lizisten önce gözlenen en düşük başlangıç CFU sayımı - lizisten sonraki en yüksek sayım)/lizisten önce gözlenen en düşük başlangıç CFU sayımı] x 100. Referanslar 1) Centers for Disease Control and Prevention. Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories. Richmond JY and McKinney RW (eds) (1993). HHS Publication number (CDC) 93-8395. 2) Clinical and Laboratory Standards Institute. Protection of Laboratory Workers from Instrument Biohazards and Infectious Disease Transmitted by Blood, Body Fluids and Tissue; Approved Guideline, Document M29 (Son edisyona başvurun). 3) Clinical and Laboratory Standards Institute. Molecular Diagnostic Methods for Infectious Diseases; Approved Guideline, Document MM3 (Son edisyona başvurun). 4) Clinical and Laboratory Standards Institute. Statistical Quality Control for Quantitative Measurements: Principles and Definitions; Approved Guideline, Document C24 (Son edisyona başvurun). P0071(03) _TR - 9 -
Semboller İndeksi SEMBOL ANLAMI Üretici Katalog numarası In Vitro Diagnostik Kullanım Yetkili Avrupa Temsilcisi Son kullanma tarihi İçindekiler "n" test için yeterlidir Parti kodu Sıcaklık sınırlaması Işık ve nemden koruyun Kullandıktan sonra poşeti tekrar mühürleyin Kullanım talimatına bakınız GeneOhm Sciences Canada, Inc. 2555 boul. du Parc-Technologique Québec, QC, Canada, G1P 4S5 Müşteri Servisi: 1.888.436.3646 www.bd.com/ds Benex Limited Pottery Road Dun Laoghaire, Co. Dublin, Ireland BD, BD logosu ve tüm diğer ticari markalar Becton, Dickinson and Company'nin malıdır. 2014 BD. P0071(03)_TR - 10-