Enzygnost Anti-HBc monoclonal

HBc MONO Revizyon çubuğu, önceki versiyonda yapılan güncellemeleri göstermektedir. Kullanım Amacı İnsan serumu ve plazmasındaki hepatit B (çekirdek)-antijen antikorlarının kalitatif tespiti için enzim immün testidir. Enzim immün testi BEP III Sistemi, BEP 2000 Sistemi veya BEP 2000 Advance Sistemi ELISA işlemcileriyle işlenebilir. Testin otomatik olmayan şekilde çalışılması da mümkündür. Özet ve Açıklama Hepatit B (çekirdek) antijeni antikorları (anti-hbc), akut hepatit B enfeksiyonunda görünen ilk antikorlardır. HBsAg ve HBeAg 1 antijenlerinden kısa süre sonra meydana gelirler ve genellikle ömür boyunca devam ederler 2. Sonuç olarak, serumdaki anti-hbc belirlemesi, hepatit B enfeksiyonunun seyrini izlemek için kullanılabilir 3. Ayrıca, anti-hbc hepatit A, hepatit B ve non A/non B hepatit ayrımsal tanısında marker olarak görev yapabilir. Anti-HBc testi tarama amacıyla kullanıldığında, pozitif bir bulgu, HBsAg ve anti-hbs için sera negatif durumlarında bile hepatit B ile geçmiş teması gösterir. Tüm enfeksiyonların yaklaşık %'u sadece anti HBc'nin serolojik belirlemesi tarafından saptanabilir 4. Hepatit B aşısı uygulamadan önce, anti-hbc testi aşılanacak kişinin bağışıklık durumu hakkında bilgi verir 5. Epidemiyolojik çalışmalarda, HBc antijeni antikoru, HBs antijeni antikoruna göre daha uzun sürede tespit edilebildiğinden değerli bir parametredir 2. Yöntem Prensibi Reaktifler Enzygnost Anti-HBc monoklonal, kompetitif tek aşamalı bir enzim immün testidir. Örnekte bulunan anti-hbc ve Anti-HBc/POD Konjugatı, mikrotitrasyon plakası kuyucuklarına kaplı HBcAg'ye bağlanmak için yarışır. Konjugatın enzim kısmı Kromojen Çalışma Solüsyonunu maviye dönüştürür. Bu reaksiyon Durdurma Solüsyonu POD ilave edilmesi yoluyla sonlandırılır ve rengin sarıya dönüşmesine sebep olur. Testin kompetetif ilkesine bağlı olarak, renk yoğunluğu örnekteki anti-hbc konsantrasyonuyla ters orantılıdır. Simgeler Sağlanan Materyaller HBc MONO Enzygnost Anti-HBc monoklonal MTP Enzygnost Anti-HBc monoklonal test plakası CONJUGATE Anti-HBc/POD Konjugat monoklonal REAGENT DILUENT Konjugat Tampon (anti-hbc monoklonal) 2 x 96 x 96 x 96 (Q) 2 prç prç prç 2 x 1,2 ml x 1,2 ml 2 x 3,2 ml 4 x 12,5 ml x 12,5 ml 2 x 75 ml OUWEG19C48 Rev. 09 TR 2015-04 1/11

Simgeler Sağlanan Materyaller CONTROL Anti-HBc Kontrol Serumu, negatif CONTROL + Anti-HBc Kontrol Serumu, pozitif 2 x 0,7 ml 4 x 0,7 ml 4 x 0,7 ml 2 x 0,5 ml 4 x 0,5 ml 4 x 0,5 ml WASH POD Yıkama Solüsyonu POD * 1 x 0 ml - - SUBSTRATE TMB Tampon/Substrat TMB * 1 x 30 ml - - CHROMOGEN TMB Kromojen TMB * 1 x 3 ml - - STOP POD Durdurma Solüsyonu POD * 1 x 0 ml - - EMPTY VIAL Kromojen Çalışma Solüsyonu 1 prç - - CHROM SOL için boş şişe Etiket " EMPTY VIAL Enzygnost - 1 prç - HBcMONO CONJUGATE " Yapışkan folyolar 6 prç - - Polietilen torba 1 prç 1 prç 1 prç Barkod değer tablosu 1 prç 1 prç 1 prç Kullanım Talimatları 1 prç 1 prç 1 prç * Bu bileşenler Enzygnost /TMB ( REF OUVP) için Yardımcı Reaktifler kitinde de mevcuttur. Test plağı, konjugat, konjugat tamponunun yanı sıra Anti-HBc Kontrol Serumu, negatif ile Anti HBc Kontrol serumu pozitif her ambalajın üzerinde basılı olan ve her biri sırayla ekteki barkod değerler tablosunda belirtilen 6 haneli lot numarası kombinasyonu ile birlikte kullanılmalıdır. Aynısı, pakete dahilse Kromojen TMB ve Tampon/Substrat TMB reaktifleri için de geçerlidir. Gerekli olan ancak sağlanmayan materyaller, x 96 ve x 96 (Q) kitler için Bileşim Enzygnost /TMB ( REF OUVP) için Ek Reaktifler Kromojen TMB ve Tampon/Substrat TMB reaktifleri ancak Yardımcı Reaktifler Kitinde belirtilen lot kombinasyonunda kullanılabilir. Geçerli lot numaraları ambalaj üzerinde verilen 6 haneli numaralardır. Enzygnost Anti-HBc monoklonal test plakası: Rekombinant hepatit B çekirdek antijeniyle kaplı mikrotitrasyon plakası Anti-HBc/POD Konjugat monoklonal: Monoklonal anti-hbc, peroksidaz (POD)-konjuge edilmiş Koruyucu: Fenol ( 1 g/l) Konjugat Tampon (anti-hbc monoklonal): Sığır serumu ve Tween 20 içeren TRIS/HCl tampon Koruyucu: Fenol ( 1 g/l) Anti-HBc Kontrol Serumu, negatif: HBc'ye özel antikorlar içermeyen insan serumu, stabilize Koruyucular: Amfoterisin (~ 5 mg/l) Gentamisin (~ 0 mg/l) Anti-HBc Kontrol Serumu, pozitif: HBc antikorlu insan serumu, stabilize Koruyucular: Amfoterisin (~ 5 mg/l) Gentamisin (~ 0 mg/l) Yıkama Solüsyonu POD: Tween içeren fosfat tamponu Koruyucu: Fenol ( 1 g/l) Tampon/Substrat TMB: Asetat tampon içinde hidrojen peroksit Koruyucu: N-butanol (%< 1) Kromojen TMB: Tetrametilbenzidin dihidroklorür Durdurma Solüsyonu POD: Sülfürik asit (0,25 mol/l) 2/11 2015-04 OUWEG19C48 Rev. 09 TR

Uyarılar ve Önlemler İn-vitro tanı amaçlı kullanım içindir. Test, toplu örnekler için değil ayrı ayrı örneklerin test edilmesi için geliştirilmiştir. Uyarı! STOP POD H290, H314: Metaller için korozif olabilir. Ciddi cilt yanıkları ve göz hasarına neden olur. P280, P3, P301, P330, P331, P303, P361, P353, P305, P351, P338, P390, P501: Koruyucu eldiven/koruyucu giysi/gözlük/maske kullanın. Hemen bir ZEHİR DANIŞMA MERKEZİ'ni veya doktoru arayın. YUTULMASI HALİNDE: Ağızınızı çalkalayınız. Kusmaya ZORLAMAYIN. CİLT ÜZERİNDEYSE (ya da saç): Kontamine olmuş tüm giysiler acil olarak çıkarılmalıdır. Cildinizi suyla durulayınız. GÖZLE TEMAS ETMESİ HALİNDE: Suyla bir kaç kere dikkatlice çalkalayınız. Kontakt lens kullanıyorsanız, mümkünse çıkarınız ve gözlerinizi yıkamaya devam ediniz. Malzeme hasarını önlemek için dökülen sıvıyı emdirin. İçeriği ve kabı tüm yerel, bölgesel ve ulusal düzenlemelere uygun şekilde bertaraf edin. DİKKAT! POTANSİYEL BİYOLOJİK TEHLİKE In Vitro Tanı Amaçlı Tıbbi Cihazlara İlişkin AB Direktifi ile uyumlu veya ABD Gıda ve İlaç Dairesi (FDA) tarafından onaylanmış testler kullanılarak, insan immün yetmezlik virüsü (HIV) 1 ve 2, hepatit B virüsü (HBV) ve hepatit C virüsü (HCV) bakımından, her bir donör ya da donör birimi test edilmiş ve negatif olduğu bulunmuştur. Bilinen hiçbir test bulaşıcı etkenlerin var olmadığı konusunda tam güvence sunamayacağı için, insanlardan elde edilen tüm örneklerin gerekli dikkat ve özen gösterilerek kullanılması gerekmektedir. Güvenlik bilgi formları (MSDS/SDS) www.siemens.com/diagnostics adresinden edinilebilir. Test prosedürünün tamamı boyunca koruyucu gözlüklerin takılması tavsiye edilir. Kullanılan eldivenlerin maruz kalınan materyallere karşı koruma sağlama yeterliliği bilgisi için lütfen üretici talimatlarına uyun. Atıklar açısından, katı infeksiyöz materyalin en az bir saat süreyle 121 C'de otoklavlanması önerilir. Aspire edilen tüm sıvılar seri olarak bağlanmış iki kapta toplanmalıdır. Her iki kap içinde insan patojenlerini etkisizleştirebilecek dezenfektan bulunmalıdır. Üretici tarafından belirtilmiş olan konsantrasyonlara ve reaksiyon sürelerine uyulmalıdır. Tampon/Substrat TMB, Kromojen Çalışma Solüsyonu ve Durdurma Solüsyonu POD un ağır metal iyonları ya da oksidasyon maddeler ile temasından kaçınılmalıdır (sıvı ile doğrudan temasa geçen metal parçaları bulunan pipetler kullanmayın). Substrat reaksiyon aşamaları, hipoklorit içeren dezenfektanların yakınında gerçekleştirilmemelidir. Kromojen Çalışma Kromojen Solüsyonu test plağına aktarılmadan önce bir anda mavi renge dönerse solüsyon kontamine olmuş demektir; bu durumda temiz bir kap içerisinde yeni solüsyon hazırlanmalıdır. Yukarıda sözü edilen solüsyonların ciltle temas etmesinden kaçınılmalıdır. Reaktiflerin Hazırlanması Teste başlamadan önce tüm reaktiflerin ve test örneklerinin 18 ile 25 C ye gelmesini sağlayın. Bu adımda test plaklarından folyo torbayı çıkartmayın. Testi işlemeye başlamadan önce gerekmeyen stripleri yuvadan çıkartın ve bunları daha sonra kullanmak üzere ambalajdaki polietilen torbaya koyun (Bkz. Tablo 1). Reaktifler ile reaktif çalışma solüsyonlarının karıştırılması gerekiyorsa, köpük oluşmasını engelleyin. BEP III Sistem üzerinde çok sayıda örnek dizisiyle çalışırken sıklıkla şırınga değiştirmemek için x 96 (Q) ( REF OUWE 29) kiti tavsiye edilir. x 96 kitinin varyantını kullanırken ( REF OUWE 17), birkaç flakon konjugat daha büyük şişelere aktarılabilir (örneğin Ek Reaktif REF OUVP 17 kitindeki Kromojen Çalışma Solüsyonu OUWEG19C48 Rev. 09 TR 2015-04 3/11

için temin edilen kullanılmamış boş şişelere) ve Anti-HBc/POD-Konjugat için, reaktif koyma bölgesine üzerlerinde EMPTY VIAL etiketiyle yerleştirilebilir. Anti-HBc/POD Konjugat monoklonal 1+25'i Konjugat Tampon (Anti-HBc monoklonal) ile seyreltin, örneğin bir test plağı için 0,5 ml konjugatı 12,5 ml Konjugat Tamponlu (Anti-HBc monoklonal) bir flakon içine ekleyin. Nazikçe çalkalayarak karıştırın. Buna göre, x 96 (Q) kiti kullanırken 5 ila 7 test plağı için kullanılan analizördeki kullanılmayan hacme bağlı olarak 75 ml Konjugat Tamponu (anti-hbc monoklonal) bulunan bir şişeye 3 ml Anti-HBc/POD Konjugat monoklonal eklenir. Etiket üzerindeki onay kutusunu kullanarak bu adımı belgeleyin. İyice karıştırın, örneğin şişeyi tekrar tekrar alta üste çevirin. Her test plağı için 20 ml Yıkama Solüsyonu POD u distile ya da iyonsuzlaştırılmış suyla 400 ml ye seyreltin. Her test plağı için, 1 ml Kromojen TMB'yi, ml Tampon/Substrat TMB (Kromojen Çalışma Solüsyonu) ile, temin edilen boş plastik şişe içinde seyreltin. Işıktan koruyarak saklayın. Kullanılmasının ardından şişeyi distile ya da deiyonize su ile iyice durulayın. Ayrıca, Kromojen TMB viyalinin ve Tampon/Substrat TMB viyalinin tüm içeriğinin boş şişeye birlikte doldurulmasına izin verilir. Enzygnost /TMB, REF OUVP 29 için Ek reaktifleri kullanılırken, Kromojen TMB flakonu içerisindeki miktarın tamamı Buffer/Substrate TMB barkod etiketli flakonun içerisine aktarılmalıdır. Saklama ve Stabilite Enzygnost Anti-HBc monoklonal kitin bileşenleri açılmadan ve belirtilen sıcaklıkta saklandığı takdirde etiketlerin üzerinde belirtilen tarihe kadar kullanılabilir. Açılmış ve ardından seyreltilmiş reaktiflerle ilgili stabilite ve saklama verilerinin tamamı için, bkz. Tablo 1. Gerekli Olan Donanım Örnekler BEP III: Örneklerin dağıtılmasından sonra testin otomatik olarak gerçekleştirilmesi ve yanı sıra değerlendirilmesi için BEP 2000/BEP 2000 Advance : Testin tam otomatik olarak gerçekleştirilmesi ve değerlendirilmesi için Pipetler: Sabit veya değişken hacimli piston tipi pipetler veya hacmi ayarlanabilir hacimli tek veya çok kanallı pipetler Testin otomatik olarak işlenmemesi durumunda ek olarak aşağıdakiler de gereklidir: İnkübatör: Kaplanan termostatik su banyosu (37 ±1 C) veya benzer inkübasyon yöntemi Yıkama cihazı: Mikrotitrasyon plak yıkayıcı Fotometre: Mikrotitrasyon plakları için uygun fotometre, ölçüm dalga boyu 450 nm, referans dalga boyu 650 nm (uygun olduğunda 615 nm ile 690 nm arası) Testte kullanılan tüm ekipman onaylanmış olmalıdır. Uygun olan örnekler standart laboratuvar teknikleriyle elde edilmiş olan ayrı ayrı örneklerdir (insan serumları veya sitratlı/edta'lı/heparinize edilmiş plazma). Heparinize ve sitratlı plazma numuneleri en fazla 3 gün 2 ile 8 C sıcaklıkta saklanmalıdır; serum ve EDTA plazma bu saklama koşulları altında maksimum 8 güne kadar kullanılabilir. Numuneler bu süre içerisinde dondurulmuşsa, tekrarlanan dondurma çözdürme döngülerinden kaçınılırsa 20 C sıcaklığın altında en az 1 yıl ve 7 ay saklanabilir. 4/11 2015-04 OUWEG19C48 Rev. 09 TR

Prosedür Otomatik Çalışılmayan Test Prosedürü 1. Test şeması: Gereken test plağı hazne sayısı, örnek sayısına Anti-HBc Kontrol Serumu, negatif ve pozitif tayini sayısı (n = 6) eklenerek belirlenir. 2. Örnekleri dağıtın: İlk 4 kuyucuğun (A1 - D1) her birine 25 µl Anti-HBc Kontrol Serumu, negatif, sonraki kuyucuğa (E1) 25 µl Anti-HBc Kontrol Serumu, pozitif ve sonraki kuyucukların her birine 25 µl seyreltilmemiş örnek dağıtın. Serinin sonunda, test plağı sırasına göre, son kuyucuğu 25 µl anti-hbc Kontrol, pozitif ile doldurun. Yukarıdaki pipetleme şemasına alternatif olarak, Anti-HBc Kontrol Serumu, negatifi pipetledikten sonra anti-hbc Kontrol, pozitifi iki kez pipetlemek de mümkündür. Alternatif pipetleme şeması: 4 kuyucuğun (A1-D1) her birine 25 µl Anti-HBc Kontrol Serumu, negatif, sonraki 2 kuyucuğa (E1-F1) 25 µl anti-hbc Kontrol Serumu, pozitif ve sonraki kuyucukların her birine 25 µl seyreltilmemiş örnek dağıtın. 3. Konjugatı dağıtın: 15 dakika içinde örnek dağıtma adımını tamamladıktan sonra, seyreltilen Anti-HBc/POD Konjugat monoklonalın 0 µl kadarını her kuyucuğa pipetle aktarın. Ardından test plağını kullanılmamış bir folyo ile kapatın ve derhal inkübatöre yerleştirin. 4. İnkübasyon: İnkübasyonu 60 ±5 dakika süreyle 37 ±1 C'de yapın, ardından derhal yıkama adımına geçin. 5. Yıkama: Folyoyu çıkartın ve tüm hazneleri emdirin. Her hazneye yaklaşık 300 µl seyreltilmiş Yıkama Solüsyonu POD doldurun, plakayı emdirin ve yıkamayı üç kez tekrarlayın. Yıkama işlemi tamamlandıktan sonra, bir sonraki reaktifin dağıtılması adımına geçin (aksi takdirde kuyucuklar kuruyabilir). 6. Substratın dağıtılması: Her kuyucuğa 0 µl Kromojen Çalışma Solüsyonu pipetleyin ve mikrotitrasyon plağını yeni folyo ile kapatın. 7. Substratın inkübasyonu: Substrat ekleme adımından hemen sonra 18 ile 25 C'de ışıktan koruyarak 30 ±2 dakika inkübe edin. 8. Reaksiyonun durdurulması: Folyoyu çıkartın. Substratın dağıtılması adımındaki ile aynı zamanlamayla kuyucukların her birine 0 µl Durdurma Solüsyonu POD ilave edin. 9. Ölçüm: Test plağını bir saat içerisinde 450 nm de okuyun. Önerilen referans dalga boyu 650 nm'dir veya gerekli durumlarda 615 ve 690 nm arasıdır. BEP III Sistemi için prosedür BEP III Sistemi kullanılırken test plakları örnek dağıtma adımına kadar hazırlanmalıdır (Otomatik Çalışılmayan Test Prosedürü bölümünde adım 1 ve 2). Kısmen yüklü test plaklarının en az yarı plağa kadar suyla doldurulmuş stripler (6 test stripi) ile desteklenmesini sağlayın. Hemen ardından açık test plaklarını, yani folyo ile kapatılmamış olanları BEP III içine yerleştirin. Takip eden tüm işlem adımları analiz cihazı tarafından otomatik olarak gerçekleştirilir (bkz. BEP III Kullanım Kılavuzu). BEP III yazılımındaki inkübasyon süresi ayarları, Otomatik Çalışılmayan Test Prosedürü nde tarif edilen sürelerden teknik nedenlerden farklı olabilir (sistem hızı), ancak bunlar BEP III üzerinde Enzygnost için doğrulanmıştır. BEP 2000 Sistemi için prosedür Örnek dağıtma adımları ve bunu takip eden işlemler analiz cihazı tarafından tamamen otomatik olarak yapılır (bkz. BEP 2000 Kullanım Kılavuzu). Bunu yaparken, kısmen yüklü test plaklarının en az yarı plağa kadar suyla doldurulmuş stripler (6 test stripi) ile desteklenmesini sağlayın. Örneklerin BEP 2000 System ile çalışılması Otomatik Çalışılmayan Test Prosedürü altında verilen bilgiden farklı olsa da Enzygnost 2000 Sistemi üzerinde BEP için doğrulanmıştır. İç Kalite Kontrol Doğrulama Kriterleri OUWEG19C48 Rev. 09 TR 2015-04 5/11

Sonuçlar Testin değerlendirilmesi için aşağıdaki kriterler karşılanmış olmalıdır: 1. Anti-HBc Kontrol Serumu, negatif: 0,700 A 2,500 2. Anti-HBc Kontrol Serumu, pozitif: -0,0 A 0,0 Eğer Anti-HBc Kontrol Serumu, negatif absorbans değerlerinden biri tanımlamaların dışındaysa bu değer yok sayılabilir. Anti-HBc Kontrol Serumu, pozitifin absorbans değerlerinin tümü ilgili tanımlamalarla uyumlu olmalıdır. Bu şartlar karşılanmadığı takdirde test değerlendirme için geçerli değildir. Bu durumda BEP III ve BEP 2000 yazılımı Geçersiz Test sonucu uyarısı verir. Geçersiz işleme yol açan nedenler araştırıldıktan sonra test tekrar edilmelidir. Değerlendirmeler BEP III ve BEP 2000 Sistemleri için otomatik olarak yapılır. Lütfen ilgili Kullanım Kılavuzuna başvurun. Yazılım desteği olmadan değerlendirme işlemi yapılmaktaysa, aşağıda belirtilen noktalar dikkate alınmalıdır. Cut off değerini hesaplamak için, Anti-HBc Kontrol Serumunun (negatif) geçerli absorbans değerlerinin ortalamasını kullanın ve 0,2 ile çarpın: Ā neg. x 0,2 = cut-off değeri Test kriterlerine dayanarak örnekler aşağıda belirtildiği gibi sınıflandırılmıştır: 1. Anti-HBc negatif A örnek > cut-off + % 2. Anti-HBc pozitif A örnek cut-off 3. Anti-HBc şüpheli cut-off < A örnek cut-off + % Şüpheli sonuçlar elde edilirse, örnek çifte tayin yapmak üzere yeniden test edilmelidir. Yeniden yapılan testte, her iki absorbans değeri şüpheli aralığın üzerinde veya altındaysa, ilk şüpheli sonuç dikkate alınmayabilir ve örnek sırasıyla negatif veya pozitif olarak kabul edilebilir. Ancak örnek yeniden yapılan testin birinde veya ikisinde de şüpheli sonuç veriyorsa, ilk örnekten 2 ile 4 hafta sonra alınan yeni bir örneğin test edilmesi tavsiye edilir. Prosedürün Sınırlamaları 1. Sodyum azit içeren örnekler kullanılmamalıdır! 2. Antikoagülanlar (heparin, EDTA, sitrat) test sonuçlarını etkilemez. 3. Isıl işlem yapılmış örneklerde (60 dakika, 56 C) hiçbir enterferans gözlenmemiştir. 4. Yetersiz şekilde koagüle olmuş serumlar ve mikrobiyolojik olarak kontamine olmuş örnekler kullanılmamalıdır. Partikül niteliğindeki tüm bileşenler (örneğin fibrin pıhtıları, eritrositler) test öncesinde örnekten çıkarılmalıdır. 5. Hemolitik veya romatoid faktörler içeren örnekler test sonuçlarını olumsuz etkilemez. 6. CMV antikorları içeren örnekler ve anti-hbs pozitif örnekler test sonucunu etkilemez. 7. Sirküle eden immün kompleksli hastalardan alınan örneklerin yanı sıra anti-fare IgG içeren örneklerin test sonucunu etkilediği gözlenmemiştir. 8. HAV, EBV, HIV, HCV antikorları içeren örneklerin yanı sıra, lipemik ve ikterik örnekler yükselmiş reaktivite gösterebilir. 9. Hemodiyaliz hastalarından, transplant hastalarından çoklu kan transfüzyonu olan hastalardan ve artmış transaminaz değerleri olan hastalardan alınan örnekler yüksek reaktivite gösterebilir.. Eritilmiş örnekler kullanılırken materyalin iyice homojen hale geldiğinden emin olun. 11. Test plağı inkübasyon sırasında sabit kalmalıdır (örn. sabitlenmiş bir yüzdürme yardımcısı üzerine ya da sirkülasyon halinde olmayan bir su banyosuna yerleştirilmelidir); plağın kuyucukları sıcaklığı kontrol edilen suya temas etmelidir. Suyun mikrobiyal kontaminasyonunu önlemek için stabilizörler kullanıldığı takdirde, bu gibi bir kontaminasyon spesifik olmayan reaksiyonlara neden olabileceğinden, test plağının yüzeyinin ya da yuvaların sıvıyla temas etmemesi için dikkat edilmelidir. 6/11 2015-04 OUWEG19C48 Rev. 09 TR

12. Reaksiyonun durdurulması sırasında, yüksek düzeyde reaktif örneklerde boya çökelebilir. Bu durum fotometrik değerlendirmeyi etkilemez. 13. Kontrol serumları, doğal insan serumundan hazırlanmıştır. Bu nedenle bulanıklık meydana gelebilir, ancak bunun test sonucu üzerinde hiçbir etkisi yoktur. 14. Ürün performansını optimize etmek ve ürün özelliklerini karşılamak amacıyla Siemens Healthcare Diagnostics çeşitli analizörlerde bu reaktiflerin kullanımını onaylamıştır. Kullanıcı tarafından belirlenen değişiklikler sistem performansını ve test sonuçlarını etkileyebileceği için Siemens tarafından desteklenmemektedir. Reaktiflerin Siemens Uygulama Kitapçıklarında veya prospektüslerde belirtilenler dışındaki analizörlerde kullanımı veya kullanım talimatlarında yapılan değişikliklerin geçerliliği kullanıcı tarafından onaylanmalıdır. 15. Bu testin sonucu her zaman hastanın tıbbi geçmişi, klinik durumu ve diğer bulgularla birlikte yorumlanmalıdır. Spesifik Performans Özellikleri Hassasiyet ve Özgüllük Hassasiyet Not Duyarlılık ve kesinlik çalışmasının sonuçları Tablo 2 ve 3'te özetlenmektedir. Testin duyarlılığı toplam 413 anti-hbc pozitif örnek kullanılarak çalışılmıştır ve elde edilen sonuç %99,0 olmuştur. Test büyük bir ölçekte kullanıldığında bazı örneklerin saptanmadan kaçamayacağına dair bir kural oluşturulamaz. Analitik hassasiyet cut-off değerinde 6 < 1,2 IU/L olarak WHO referans preparatının bir dizi dilüsyonu kullanılarak belirlenmiştir. Testin özgüllüğü, toplam 31.813 anti-hbc negatif kan bağışı örneği kullanılarak çalışılmış ve elde edilen özgüllük sonuçları %99,6 (ilk testler) ve %99,7 (yeniden yapılan test sonucu) olmuştur. Örnek popülasyonu, test prosedürü ve diğer faktörler ile ilgili Ortak Teknik Tanımlamalar (CTS) ile uyumlu olması gereken farklı değerler elde edilebilir. Eldeki mevcut bilgiler anti-hbc testindeki pozitif bir sonucun HBV enfeksiyonuna dair kesin bir işaret olmadığı gibi, negatif test sonucunun da HBV enfeksiyonunu güvenilir biçimde kapsam dışı bırakmadığını göstermektedir. Enzygnost Anti-HBc monoclonal kesinlik çalışmaları %3,9 ile 13,6 varyasyon test içi katsayılarını ve testler arası %5,6 ile 15,3 varyasyon katsayılarını göstermiştir. Hesaplama varyans analizi kullanılarak gerçekleştirilmiştir. Ayrıntılar için tablo 4'e bakın. Testin belirli performans özellikleri için belirtilen değerler tipik sonuçları gösterir ve Enzygnost Anti-HBc monoclonal özellikleri olarak düşünülmemelidir. Bibliyografya 1. Frösner GG. Die Aussagekraft serologischer Untersuchungsmethoden bei Virushepatitiden. Med Klin 1982;77:236-45. 2. Niermeijer P, Gips CH, Huizenga JR, et al. IgM Anti-HBc as a marker of persistent and IgG anti-hbc as a marker of past hepatitis B infection. A longitudinal study over 5 years. Acta Hepato-Gastroenterol 1978;25:360-4. 3. McCollum RW, Zuckerman AJ. Viral hepatitis: Report on a WHO informal consultation. J Med Virol 1981;8:1-29. 4. Grady GF. Hepatitis B immunity in hospital staff targeted for vaccination. Role of screening tests in immunisation programs. JAMA 1982;248:2266-9. OUWEG19C48 Rev. 09 TR 2015-04 7/11

5. Deinhardt F, Weise HJ. Aktive Immunoprophylaxe der Hepatitis B: Kolloquium über den heutigen Stand und die zukünftige Entwicklung der Hepatitis B-Impfung in der Bundesrepublik Deutschland. Bundesgesundheitsbl 1982;25:272-3. 6. Scheiblauer H, Ferguson M, Volkers P, et al. Report of the WHO collaborative study to establish the First International Standard for detection of antibodies to Hepatitis B core antigen (anti-hbs), human plasma. Geneva: World Health Organization. 2008;WHO/BS/ 08.2098:1-30. Simgelerin Tanımı Tekrar kullanmayınız YYYY-MM-DD Son kullanma tarihi LOT Lot Numarası REF Katalog Numarası Dikkat, ekteki dokümanlara başvurunuz Üretici EC REP Avrupa Birliği Yetkili Temsilcisi <n> sayıda test için yeterlidir Biyolojik Tehlikeler IVD In Vitro Diyagnostik Tıbbi Cihaz Saklama derecesi Kullanım talimatlarına başvurunuz Steril değil CE İşareti CONTENTS İçindekiler Sulandırma hacmi LEVEL Seviye Isı ve güneş ışığından uzak tutun BEP, BEP 2000 Advance ve Enzygnost, Siemens Healthcare Diagnostics firmasının ticari markalarıdır. 20 Siemens Healthcare Diagnostics Products GmbH. Tüm hakları saklıdır. 2015-04 Siemens Healthcare Diagnostics Products GmbH Emil-von-Behring-Str. 76 35041 Marburg/Germany www.siemens.com/diagnostics 8/11 2015-04 OUWEG19C48 Rev. 09 TR

Tablo 1 Stabilite ve Saklama Enzygnost Anti-HBc monoclonal Materyal/reaktif Durum Saklama Stabilite Enzygnost Anti-HBc monoklonal test plakası, kalan şeritler açıldıktan sonra 2 8 C torbada kurutucu madde ile 4 hafta Anti-HBc/POD Konjugat monoklonal açıldıktan sonra 1+25 seyreltilmiş 2 8 C 20 C 2 8 C 18 25 C 4 hafta 3 ay 4 hafta 1 hafta Konjugat Tamponu açıldıktan sonra 2 8 C 4 hafta Anti-HBc Kontrol Serumu, pozitif Anti-HBc Kontrol Serumu, negatif açıldıktan sonra 2 8 C 20 C 4 hafta 3 ay Kromojen TMB açıldıktan sonra 2 8 C son kullanma tarihi Tampon/Substrat TMB açıldıktan sonra 2 8 C son kullanma tarihi Kromojen Çalışma Solüsyonu 1+ seyreltilmiş 2 8 C 15 25 C ışıktan korunan, kapalı kutu 5 gün 8 saat Yıkama Solüsyonu POD açıldıktan sonra 1+19 seyreltilmiş 2 8 C 2 8 C 18 25 C son kullanma tarihi 1 hafta 1 gün Durdurma Solüsyonu POD açıldıktan sonra 2 8 C son kullanma tarihi her komponenti en geç son kullanma tarihine kadar kullanın Tablo 2 Duyarlılık Hassasiyet çalışmaları iki bağımsız merkezde gerçekleştirilmiş (E, M) ve aşağıdaki verileri vermiştir: Örnek paneli Örnek sayısı pozitif (E) Akut HBV enfeksiyonu Kronik HBV enfeksiyonu Farklı evrelerde HBV enfeksiyonu 26 0 31 26 0 28 (M) Akut HBV enfeksiyonu Farklı evrelerde HBV enfeksiyonu Takip örnekleri 194 52 194 51 Tablo 3 Özgüllük Özgüllük çalışmaları üç bağımsız merkezde gerçekleştirilmiş (B, L, S) ve aşağıdaki verileri vermiştir: Örnek paneli Örnek sayısı İlk reaktif Yeniden test reaktifi (B) negatif sera 17.872 65 57 (L) negatif sera 3.949 13 (S) negatif sera 9.992 34 29 OUWEG19C48 Rev. 09 TR 2015-04 9/11

Tablo 4 Hassasiyet İki bağımsız merkezde (T, Tr) yürütülen çalışmalar aşağıdaki test içi varyasyon katsayılarını (CV) vermiştir: Örnek Tekrarlar Oran Test içi CV (%) (T) 1 2 3 20 20 20 3,06 2,02 1,38 8,7 13,6 8,0 (Tr) 1 2 3 15 15 15 3,12 2,16 1,90 5,9 3,9 5,4 Üç bağımsız merkezde (T, J, Tr) yürütülen çalışmalar aşağıdaki testler arası varyasyon katsayılarını (CV) vermiştir: Örnek Tekrarlar Oran Testler arası CV (%) (T) 1 2 3 3,38 2,18 1,69 8,5,7 11,2 (J) 1 2 3 3,76 2,66 2,22 4,7 11,5 15,3 (Tr) 1 2 3 7 7 7 2,75 1,88 1,41 5,6 12,0,8 Oran = absorbans / cut-off /11 2015-04 OUWEG19C48 Rev. 09 TR

Tablo 5 Test Prosedürü Reaktiflerin hazırlanması 4 x 25 μl Anti-HBc Kontrol Serumu, negatif 2 x 25 μl Anti-HBc Kontrol Serumu, pozitif 25 μl her seyreltilmemiş örnekten 0 μl Kromojen Çalışma Solüsyonu İnkübasyon: 60 dakika ±5 dakika (37 ±1 C) Plakların tamamı dolmamışsa, plağın yarısı dolu olacak şekilde su ile doldurulmuş stripler ekleyin 4x yıkama 0 μl Kromojen Çalışma Solüsyonu BEP 2000 Tam otomatik test işlemi İnkübasyon (ışıktan korunarak) 30 dakika ±2 dakika (18-25 C) BEP III Otomatik test işlemi 0 μl Durdurma Solüsyonu (maksimum 60 dak. sonra) Ölçüm: 450 nm ye karşı 650 nm Test sonucu OUWEG19C48 Rev. 09 TR 2015-04 11/11