INFINITI CYP450 2D6I Testi Kullanım Talimatı

INFINITI CYP450 2D6I Testi Kullanım Talimatı In Vitro Diagnostik Kullanım İçin SADECE İHRACAT İÇİN Üretim Yeri: AutoGenomics, Inc., 2980 Scott Street, Vista, CA USA 92081 Yetkili AB Temsilcisi: BÜHLMANN Laboratories AG Baselstrasse 55 CH-4124, Schönenbuch, Switzerland 1 of 12

KULLANIM AMACI INFINITI CYP450 2D6I denemesi, tam kan örneklerinden elde edilen DNA da CYP450 2D6I hasta genotipinin belirlenmesinde kullanılan in vitro diagnostik bir testtir. INFINITI CYP450 denemesi, yetkili hekimin reçetesine bağlı olarak klinik laboratuvarlar tarafından kullanılmak üzere oluşturulan kalitatif bir testtir. INFINITI CYP450 2D6I denemesi,cyp450 2D6 gen ürünü tarafından metabolize edilen teröpatiklerin, türü ve tedavi dozunun belirlenmesinde, klinisyenlere yardımcı olarak gösterilmektedir. Bu testten sağlanan bilgi, kararın verilmesinde tamamlayıcı rol oynayabilir ve sadece hekim tarafından rutin izleme ile birlikte kullanılmalıdır. CYP450 2D6I tarafından metabolize edilen özgün ilaçların klinik yararları hakkındaki bilgiler değişkendir. Bu sebeple klinisyenler sonuçları profesyonel yargıları dolayında yorumlamalıdırlar. Hastaların, metabolize edilmesini sağlayan enzimin aktivitesinden sorumlu allel veya metabolik yolu tam olarak aydınlatılamamış ilaçlara olan cevabının öngörülmesinde bu tip testler kullanılmamalıdır. TEMEL BİLGİLER Sitokrom P450 (CYP) ilaç metabolize eden enzimlerin ana grubudur. 50 den fazla izoform içerir. CYP aktivitesinin büyük kısmı karaciğerde yer almaktadır. Genetik genotipcyp ler içerisinde en geniş fenotip çeşitlilik gösteren CYP2D6 dır. CYP2D6 shows the largest phenotypical variability amongst the CYPs, largely due to genetic genotype accounts for normal, reduced and non-existent CYP2D6 function in subjects. CYP2D6, DME genlerinin en önemlilerindendir. Reçeteli ilaçların % 25 30 unu metabolize eder. CYP2D6 tarafından metabolize edilen ilaç kategorileri; beta blokerler, anti aritmikler, morfin türevleri ve antidepresanlar. CYP2D6 nin belirli bir kişideki işlevi aşağıdaki gibi tarif edilebilir; Zayıf metabolizer formu zayıf CYP2D6 işlevi vardır veya hiç tur. Orta metabolizer formu Hızlı metabolizer formu normal CYP2D6 işlevi Ultra hızlı metabolizer formu - CYP2D6 gen ifadesinin çoklu kopyaları mevcut olduğundan normal CYP2D6 işlevinden yüksek işlevi vardır. Yüksek ve zayıf metabolizer formların değişkenliğinin genetik temeli 22. kromozomda yer alan CYP2D6 alleline dayanmaktadır. Kişilerde allele bağlı olarak normal veya artmış CYP2D6 işlevi veya işlevsizliği gözlenir. Etnik köken CYP2D6 değişkenliğinin oluşmasında bir etkendir. Tablo 1 de CYP2D6 allelleri ve ilgili enzilerin aktiviteleri görülmektedir; Tablo 2 de ırk / etnik kökene göre bazı CYP2D6 alleller dağılımını görülmektedi Tablo 1 CYP2D6 alleli ve enzim aktivitesi Allel CYP2D6 aktivitesi CYP2D6*1 Normal CYP2D6*2 artmış CYP2D6*3 CYP2D6*4 2 of 12

CYP2D6*5 CYP2D6*6 CYP2D6*7 CYP2D6*8 CYP2D6*9 CYP2D6*10 CYP2D6*11 CYP2D6*15 CYP2D6*17 CYP2D6*19 CYP2D6*20 CYP2D6*29 CYP2D6*35 CYP2D6*36 CYP2D6*40 azalmış azalmış aazalmış azalmış azalmış normal azalmış AutoGenomics Tablo 2 Varyant Fenotip (2D6 fonksiyonu) Allel Sıklığı (Percentage) Beyaz ırk Siyah / Afrikalı Asyalı CYP2D6*3 Zayıf Metabolizer 2 0 0 CYP2D6*4 Zayıf Metabolizer 12-21 2 1 CYP2D6*4XN Zayıf Metabolizer 2-7 4 6 CYP2D6*10 Orta Metabolizer 1-2 6 51 CYP2D6*17 Orta Metabolizer 34 0 0 CYP450 2D6 genetik testinden ileri ilaç reaksiyonu veren veya ilaçlara karşı zayıf metabolizer özellik gösteren kişilerin tanımlanmasında faydalanılabilir. 3 of 12

TEST PRENSİBİ /TESTE BAKIŞ INFINITI CYP450 2D6I Denemesi, insan kanından elde edilen DNA da CYP2D6 genotiplerini eş zamanlı olarak tespit etmek için tasarlanmıştır. INFINITI CYP450 2D6I Denemesi aşağıdaki allelik varyasyonları tespit etmek ve tanımlamak üzere tasarlanmıştır; Gen CYP450 2D6 Polimorfizm *2 (2850C>T) *9 (2615_2617delAAG) *3 (2549delA) *10 (100C>T) *4 (1846G>A) *12 (124G>A) *5 (CYP2D6 deleted) *17 (1023C>T) *6 (1707delT) *29 (1659G>A) *7 (2935A>C) *41 (2988G>A) *8 (1758G>T) *XN (multiple CYP2D6) *14 (1758G>A) *2A(-1584C>G) The INFINITI CYP450 2D6I denemesi protokolü 5 temel proses üzerine kuruludur: (a) İnsan kanından DNA izolasyonu (b) Saflaştırılmış DNA ın PCR amplifikasyonu (c) Analite özgü primer uzantı (ASPE) kullanarak Floresans işaretleme (d) Yıkamanın ardından bir microarray için ASPE primerlerinin hibridizasyonu (e) Mikroarray ın taranması (f) Sinyal tespit ve analizi (c) den (f) ye kadar basamaklar INFINITI Analizörü ile otomatik yapılmaktadır. Testin şematik özeti aşağıdadır; 4 of 12

METOD TANIMI AutoGenomics INFINITI CYP450 2D6I denemesi, insanda tam perifer kan örneğinden elde edilen DNA dan CYP2D6 allellik varyasyonlarının tespit edilmesi ve genotiplenmesinde kullanılan AutoGenomics tescilli, film- temelli microarray teknolojisini proses otomasyonu, reaktif yönetimi ve yazılım teknolojisi ile kombinleyen in vitro diagnostik bir yöntemdir INFINITI CYP450 2D6I denemesi BioFilmChip Microarray, Intellipac Reaktif Modülü, ve Qmatic İşletim Yazılımı içeren INFINITI Analizörden oluşmaktadır. BioFilmChip Microarray DNA analizleri için tasarlanmış tescilli çoklu tabaka komponent ile kaplı polyester filmlerden meydana gelmiştir. Tabakalar, test performansını arttırmak için çok amaçlı bir yüzey sağlamak üzere tasarlanmıştır. Microarrayler teste spesifik olarak tasarlanmıştır. INFINITI CYP450 2D6I kullanılmamış Yakalama Probları içeren, herhangi spesifik bir testin uygulanabileceği microarray çipleri (P-Chip) kullanmaktadır. Bu sebeple, aynı microarray kullanılarak çoklu testler geliştirilebilir. Intellipac Reaktif Modülü, test reaktiflerinin yerleştirildiği ve bütünleşmiş hafıza çipinin bulunduğu bir iletişim hattıdır. Lot numarası, son kullanma tarihi, miktar kullanımı gibi reaktif bilgileri hafıza çipinde arşivlenmekte ve çalışma raporunda görüntülenmektedir. INFINITI CYP450 2D6I testi, AutoGenomics INFINITI Analizörü kullanılarak çalıştırılmalıdır. INFINITI Analizörü klinik çoklu sistemlerinde, klinik bir örnekten gelen çoklu sinyalleri ölçmek ve ayrıştırmak amacıyla kullanılan bir cihazdır. INFINITI Analizatörü işaretlenmiş hedef DNA nın BioFilmChip microarraylerde hibritleşmesiyle oluşan florasansı ölçmek üzere tasarlanmıştır. INFINITI Analizör; CYP450 2D6I testini otomatikleştirmiş ve örneklerin(pcr ürünü) dağıtımı, reaktif yönetimi, hibridizasyon, tespit ve sonuç analizi gibi farklı proseslerin entegrasyonunu sağlamıştır. Test otomatik olarak tamamlanır ve noktalar aynı odaklı dahili bir mikroskop tarafından okunmaktadır. Sonuçlar genotip çağrıları olarak analiz edilmekte ve sunulmaktadır. INFINITI Analizörü nün kullanma talimatları, INFINITI Analizörü Kullanıcı El Kitabı nda bulunmaktadır. INFINITI Analizörü CE onaylıdır. UYARILAR VE ÖNLEMLER Gereksinimler In vitro diagnostik kullanım için. Eğitimli laboratuar personeli tarafından kullanılmalıdır. Bu test, EDTA içinde toplanan tam kan ile sadece kullanılmalıdır. Kan örneklerini dondurma/çözündürmekten kaçının. Örnekler en kısa sürede test edilmelidir. Tüm hasta numuneleri potansiyel tehlikelidir ve insan kaynaklı materyaller çok dikkatli alınmalıdır. Hiçbir test yöntemi HCV, HIV veya diğer bulaşıcı ajanların bulunmadığına dair tam bir güvence vermez. CLSI talimatlarını takip ediniz (Molecular Diagnostics Methods for Infectious Diseases; Approved Guidelines; MM3-A). Örneğin durumunu görsel olarak takip edin. Özellikle, yapısal bütünlüğünde bozulma olup olmadığına dair anormal işaretlere (buğulanma, hacimde azalma, çökelme, renk bozukluğu, sedimentasyon, ayrışma, bulanıklık) bakılmalıdır. Eğer örneklerde bir anormallik gözler veya bundan şüphelenirseniz hiçbir test çalışmayın. Kontaminasyonu, örneklerin karışmasını ve dökülmesini engellemek için çok dikkatli olunmalıdır. Örneklerin karışmasını önlemek için örnek tüpleri açık bir şekilde etiketlenmelidir. 5 of 12

Örnekler kendi spesifik koşullarında saklanmalıdır. Çapraz kontaminasyon riskini en aza indirmek için, numune hazırlama, PCR kurma ve PCR ürün analizi gibi işlemler CLSI de onaylanan talimatlara göre yapılmalıdır (Molecular Diagnostic Methods for Genetic Diseases: Approved Guideline). Reaktifleri karıştırmayın ve farklı lotlarda biriktirmeyin. Son kullanma tarihi geçmiş kit ve reaktifleri kullanmayın. Kit ve reaktifleri ürün etiketinde belirtilen koşullarda saklayın. Laboratuar İşlemleri Laboratuar kullanımı için normal önlemleri izleyin. Güvenli laboratuar prosedürlerini izleyin: ağız ile pipetleme yapmayın; koruyucu giysiler (örneğin, tek kullanımlık eldiven, laboratuar önlüğü gibi) ve koruyucu gözlük takın; laboratuarda çalışma alanlarında yemek yemeyin, içecek ve sigara içmeyin. Numunelere ve reaktiflere dokunduktan sonra ellerinizi iyice yıkayın. Atıkların İşlenmesi Kullanılmayan reaktif, örnek ve atıkları bulunduğu ülke, federal, eyalet ve yerel yönetmeliklere göre imha edin. Malzeme Güvenlik Bilgi Formları (MSDS) AutoGenomics Müşteri Hizmetleri tarafından istek üzerine gönderilebilir. Örnek Hazırlama Kullanılan DNA ekstraksiyon kiti ile birlikte verilen prospektüste güvenlik talimatlarına bakın. PCR ürünü mikroarray üzerine yüklemeden önce saklanamaz. Hemen kullanın. INFINITI Analizörü Cihazı kullanmadan önce INFINTI Analizör Kullanıcı El Kitabı nı okuyun. "Notlar" a özellikle dikkat edin. Operatör Manuelinde Güvenlik Uyarını ve Dikkat Edilmesi Gerekenler i izleyin. Cihazı kurarken Kurulum Gereksinimleri Bölümü ne bakın. Cihaz çalışırken hatalar karşılaşıldığında Hatalar Bölümü ne bakın. Sorunla karşılaşıldığında Yardım Bölümü ne bakın. SAKLAMA/STABILITE BioFilmChip Microarray: 12 ay Oda Sıcaklığında (15 C ila 30 C) Intellipac Reaktifi: 12 ay Buzdolabında (2 C ila 8 C) Not: Açıldıktan 30 gün sonra Intellipac kullanmayın. Amplifikasyon Mix: 18 ay Dondurucuda (-30 C ila -15 C) Not: Ürünlerin son kullanma tarihi ürün üzerindeki etiketlerde bulunmaktadır. 6 of 12

NUMUNE TOPLAMA VE STABILITE Periferik kan EDTA lı (Mor kapak) tüpte toplanmalıdır. Örnekler dondurulup - çözülmemelidir. Örnekler mümkün olan en kısa sürede çalışılmalıdır. SAĞLANAN MATERYALLER (Her paket 48 test içermektedir.) Ürün Kodu 03-1110-02 INFINITI CYP450 2D6I BioFilmChip Microarray Magazin Ürün Kodu 03-2110-02 INFINITI CYP450 2D6I Intellipac Reaktif Modülü Her modülde 24 test bulunmaktadır, içeriği; 1.1ml ASPE Master Mix, içeriği: dntps İşaretlenmiş-dCTP Allele Spesifik Primerler Ekstansiyon Tamponu 2.6ml Hibridizasyon Tamponu SSC Hibridizasyon Pozitif Kontrol Sodyum Azid koruyucu 0.08% Ürün Kodu 03-3110-02 CYP450 2D6I Amplifikasyon Mix 4 x 250μl vial PCR reaksiyonu master mix, içeriği: dntp ler PCR Primer Mix MgCl 2 PCR Reaksiyon Tamponu Ürün Kodu 12-0010-00: Yıkama Tampon GEREKEN VE AUTOGENOMICS TARAFINDAN SAĞLANMAYAN REAKTİFLER DNA Ektraksiyon Kiti - INFINITI CYP450 2D6I kandan başarıyla saflaştırılmış genomik DNA kullanarak CYP450 2D6 allellik mutasyonları tespit edebilmektedir. Absorbans aralığı: 260-280 nm, DNA saflığı 1.60 olmalıdır. Bu şartname ile uyumlu herhangi bir DNA ekstraksiyon yöntemi kullanılabilir INFINITI CYP450 2D6I ticari olarak mevcut çeşitli kitlerle test edilmiştir ve kullanıcılar daha fazla bilgi için AutoGenomics ile bağlantı kurulabilir. Distile su (DNAaz ve RNAaz sız) Yıkama Tamponu (Catalog # 12-001) Platin Taq DNA Polimeraz (Invitrogen, Katalog No:10966-018) Titanyum Taq DNA Polimeraz (Clontech Katalog No: 639209 ) Shrimp Alkalin Fosfataz (SAP, USB, product No: 70092Z) Eksonükleaz I (EXO I, USB, product No: 70073X) 7 of 12

EKİPMANLAR AutoGenomics Aşağıdaki ekipmanlar gereklidir fakat test ile beraber sağlanmamaktadır: AutoGenomics Ürün Kodu 11-0010-00: INFINITI Analizör AutoGenomics Ürün Kodu 11-0020-00: INFINITI Atık treyleri AutoGenomics Ürün Kodu 11-0030-00: INFINITI 24 kuyucuklu plate/lids AutoGenomics Ürün Kodu 11-0050-00: INFINITI Temp Cycle Plate AutoGenomics Ürün Kodu 11-0060-00: INFINITI Atık trey / Stir Bars AutoGenomics Ürün Kodu 11-0080-00: INFINITI Pipe uçları 8-kuyucuk Düz Strip Kap (Genesee Scientific, Catalog No. 22-623) Pipet uçları Mini santrifüj Mikrofüj tüp rakları Termocycler Vortex 1,5 ml mikro santrifüj tüpleri Tavsiye Edilen DNA Kontrolleri Pozitif kontrollerin (heterozigot ve / veya homozigot örnekleri) çalışılan her teste dahil edilmesi önerilir. Ayrıca, negatif kontrol ( vahşi tip numune) ve bir no template kontrol (moleküler derecede su) ayrıca her test çalışmasına dahil edilmelidir. Coriell DNA örnekleri (www.coriell.org) pek çok tesbit edilmiş genotip için uygun bir pozitif kontroldür. TEST PROSEDÜRÜ DNA Ekstraksiyonu Kullanılan DNA ekstraksiyon kiti ile birlikte verilen talimatları izleyin. PCR Reaksiyonu Not: Platin Taq DNA polimeraz buz üstünde tutunuz. Reaktifleri buzun içinde çözünüz. Amplifikasyon Mix tüpünü 2 5 sn santrifüj ediniz. Kontaminasyondan kaçınmak için taze hazırlanmış% 0.5 sodyum hipoklorit (deiyonize veya distile su ile seyreltilmiş çamaşır suyu) ile tüm çalışma yüzeyleri dezenfekte ediniz Örnekleri ve kontrolleri çalışırken değişik filtre ipuçları ve eldiven kullanılmalıdır. PCR ürünleri microarraylere yüklenmeden önce depolanamaz. Süratle kullanınız. 8 of 12

1. A Reaksiyonu için PCR Mix i hazırlayın. AutoGenomics Amplifikasyon mix 16.85 µl Platin Taq polimeraz 0.15 µl PCR Master mix in total hacmi 17.0 µl Not: Gereken reaktif miktarını uygulanan testin sayısına göre hesaplayınız. 2. PCR maste mixi hafifçe vorteksleyiniz, 17 μl PCR master mixi 24 kuyucuklu plate deki kuyucuklarına ekleyiniz 3. Kuyucuklara 3 μl örnek DNA (25 ng/μl ) ekleyiniz. PCR master mix 17.0 µl Örnek DNA 3.0 µl Amplifikasyon reaksiyonunun toplam hacmi 20.0 µl 4. B Reaksiyonu için PCR Mix i hazırlayın Amplifikasyon mix 16.85 µl Platin Taq Polimeraz 0.15 µl PCR Master mix in total hacmi 17.0 µl Not: Gereken reaktif miktarını uygulanan testin sayısına göre hesaplayınız. 5. PCR maste mixi hafifçe vorteksleyiniz, 17 μl PCR master mixi 24lük kuyucuklu plate deki kuyucuklarına ekleyiniz 6. 3 μl örnek DNA (25 ng/μl ) ekleyiniz. PCR master mix 17.0 µl Örnek DNA 3.0 µl PCR Master mix in total hacmi 20.0 µl 7. 24 kuyucuklu-plate i 8-kuyucuklu flat strip kapaklarıyla kapatın termocycler a yerleştirin ve aşağıdaki programı kullanarak amplifikasyon reaksiyonunu başlatınız. 9 of 12

Basamaklar Sıcaklık Süre Döngü Sayısı 1 94 2 min. N/A 94 15 sec. 2 66-60 (-0.3 o C/cycle) 30 sec. 20x 68 4 min. 3 94 58 68 4 68 4 15 sec. 30 sec. 4 min. 1 min. Hold 15x AutoGenomics Not: 2 basamağındaki her döngü sonrasında sıcaklık döngü başına 0.3 C iner. Eppendorf Mastercycler EP (aluminyum blok) kullanıldığında ramp rate kurulumu %100 olduğunda total döngü için geçen zaman 3 saat 10 dak. dır. (+10 dak) Diğer Termal Cycler lar kullanıldığında eş zamanı elde edecek şekilde ramp ayarı yapınız. N/A SAP ve Ekzonükleaz I Uygulaması PCR sonrası temizliği, geride kalan substratların taşınmaması ve sinyal amplifikasyonu ile interferans vermemesi için kritik önem taşımaktadır. Enzim karışımını master mix şeklinde hazırlayın. Örneğin; eğer 9 PCR reaksiyonu olacaksa 10 PCR a yetecek kadar master mix hazırlayın. Master mix i hazırlama; 30 µl SAP, 7.5 µl Exo ve 2.5 µl Titanyum Taq SAP 3.00 µl Ekzonükleaz I 0.75 µl Titanyum Taq 0.25 µl Total 4.00 µl Enzim mix den 4 er µl temiz 24 kuyucuklu platelere ekleyin. Tamamlanmış PCR A reaksiyonundan 10 µl ve tamamlanmış PCR B reaksiyonundan 10 µl ekleyin. INFINITI Analizör e yükleyin. Örnek Yükleme Lütfen INFINITI Analizör Kullanıcı El Kitabı na bakın (Kısım kodu: EM 34000). 20 μl PCR ürününü 3x8 kuyucuklu plate e ekleyin. Test spesifik magazin, Intellipack, pipet uçları ve yıkama solüsyonlarını cihaza yükleyin. INFINITI Analizör ün İşleyişi Lütfen INFINITI Analizör Kullanıcı El Kitabı na bakın (Kısım kodu: EM 34000) KALİTE KONTROL Her testte pozitif kontrol( heterozigot ve/veya homozigot örnek) çalışılması önerilmektedir. Ek olarak, bir negatif kontrol (vahşi tip serum) ve no template kontrol(moleküler düzeyde su) her teste dahil edilmelidir. Tespit edilmiş pek çok genotip 10 of 12

için Coriell DNA (www.coriell.org) örnekleri uygundur. Coriell DNA nın kullanımı hakkında tavsiye almak için lütfen AutoGenomics ile irtibata geçin. Not:Termal cyclerın düzenli aralıklarla AutoGenomics 'özelliklerine göre bakımı yapılmalı ve kalibre edilmelidir. Not: Kullanılan termal cyclerlar QC gereksinimlerine uygun olarak düzenli bakımı yapılmalı ve harici sıcaklık standartlarına göre ile kalibre edilmelidir. KISITLAMALAR INFINITI CYP450 2D6I denemesinden elde edilen sonuçlar sadece genel klinik tanı bağlamında yorumlanmalıdır. AutoGenomics alınan herhangi bir klinik karardan sorumlu değildir. SONUÇLARIN YORUMLANMASI INFINITI CYP450 2D6I denemesi CYP450 2D6 genotip mutasyonlarını tesbit etmek ve belirlemek için tasarlanmıştır. Denemeden elde edilen sonuçlar örnekte tesbit edilen örneği belirtecek şekilde genotip çağrılar olarak sunulur. W = Vahşi M = Mutant H = Heterozigot P = Pozitif N = Negatif Test tamamlanmaz ve hiçbir genotip belirlemesi yapılamaz ise (tip ), çalışma tekrarı gerekecektir. Hatalar test sırasında meydana gelirse rapor mesajında neden genotipleme yapılamadığını "Test Error" iletisi (örneğin, "düşük DNA")ile gösterilir. Bir Error Log dosyası sorunu tanımlamak için oluşturulur. Hatalar hakkında daha fazla bilgi için; INFINITI Analizatör Kullanıcı El Kitabı nın Arıza Teşhisi kısmına başvurunuz. Daha detaylı bilgilendirme ve yardım için lütfen teknik servise başvurunuz. PERFORMANS ÖZELLİKLERİ Analitik Spesifite Özgüllük ile ilgili çalışmalar analiz gelişimi sırasında yapılmıştır. Denemede üç seviye spesifiklik aranmaktadır; PCR primerleri ASP hedef bağlama bölgesi ASP çip bağlama bölgesi PCR primer spesifitesi bir jel üzerinde amplikon boyutuna göre belirlenmiş ve amplikon sıralaması yapılmışır. ASP primer spesifisitesi bilinen genomik örnekleri kullanılarak test tarafından gönderilen doğru genotipler ile tespit edilmiştir. Prob un yakalama spesifitesi farklı oligoların hibridizasyonu ile tespit edilmiştir ve bilinen noktaya doğru oligo hibridleşmesini göstermektedir. Tespit aralığı ( Analitik duyarlılık) INFINITI CYP450 2D6I denemesinin analitik duyarlılığı 150, 25, ve 10 ng DNA girişi 5 allel bulunduran iki kan örneğinin analizi ve 60 ng hedef DNA giriş düzeyinde yedi allel bulunduran sekiz örneğin tekrarlanabilirlik ve interferans çalışmalarından elde edilen veriler ile değerlendirilmiştir. DNA, Qiagen QIAMP DNA Kit, PSS Magtration System 12GC and Charge Switch kullanılarak ekstrakte edilmiştir. Her örnek 150, 25, ve 11 of 12

10 ng DNA konsantrasyonlarında sekiz tekrar çalışılmıştır. Hedef 60 ng giriş düzeyinde toplam 320 test için her örnek 40 kez çalışılmıştır. Tespit aralığı belirleme çalışmaları göstermiştir ki; INFINITI CYP450 2D6I denemesi tavsiye edilen 20 ng DNA/μl konsantrasyonundaki DNA girişi ile hedef mutasyonları saptayabilmektedir. Deneme her test başına 60 ng DNA girişi için 3 μl DNA gereksinmektedir. Hassasiyet ve Tekrarlanabilirlik Deneme hassasiyeti ve tekrarlanabilirliği çalışmaları sekiz tam kan örneği, üç kullanıcı, üç cihaz ve üç reaktif lotu içermektedir. Her kullanıcıda birbirinin eşi kan örnekleri setleri bulunmaktadır. Kullanıcılar örnek kimliklerinin bilmemektedirler. DNA, kan örnekleri ulaşır ulaşmaz ekstrakte edilmiştir. Her kullanıcı farklı bir ekstraksiyon metodu kullanmıştır. Örnekleri her operatör tarafından beş ardışık olmayan günde ölçülmüştür. Aşağıdaki tabloda hassasiyet ve tekrarlanabilirlik çalışmalarının bir özeti bulunmaktadır; Örnek Genotip Test Edilmiş Örnek Doğru Çağrı ile Sonuçlanan Örnekler Yanlış Çağrı ile Sonuçlanan Örnekler Çağrı Vermeyen Örnekler Doğru Çağrı Oranı % 1 *4/ *10 40 37 0 3 92.5 2 *5 Del 40 38 0 2 95.0 3 *2/ *41 40 39 0 1 97.5 4 *2/*2, *41/*41 40 37 0 3 92.5 5 *2/*2, *2A/ *41 40 39 0 1 97.5 6 *1/ *10 40 39 0 1 97.5 7 *1/ *10 40 37 0 3 92.5 8 *1/ *1 40 39 0 1 97.5 Totals 320 305 0 15 95.3 12 of 12

Örnek Taşınması Örnek taşınması çalışmaları göstermiştir ki; INFINITI CYP450 2D6I de örnek taşınması olmamaktadır. 3 Coriell DNA örneği kullanılmıştır no template kontrol olarak su kullanılmıştır. İlaç/ Kimyasallar dan Kaynaklanması Muhtemel İnterferans İnterferans vermesi muhtemel maddeler dört tam kan örneği kullanılarak incelenmiştir. Çalışmalar göstermiştir ki, INFINITI CYP450 2D6I aşağıdaki maddelerle interferans vermemektedir. Eklenen Maddeler Konjuge Bilirubin, Indirekt bilirubin, Trigliserid İnsan albümini Konsantrasyon 60 mg/dl 60 mg/dl 3000 mg/dl 6 g/dl Analitik Özgünlük Metot Kıyaslaması INFINITI CYP450 2D6I denemesi kıyas metodu olarak CE tescilli ile karşılaştırılmıştır. Hasta kimlikleri, çalışma boyunca korunmuştur. Toplamda 131 allel tesbit edilmiştir. İlk kıyas çalışması sonucunda CE tescilli Roche AmpliChip ile %94 uyum gözlenmiştir. Kıyas çalışmaları boyunca yanlı çağrı gözlenmemiştir. Sekiz örnek çağrı vermediği için tekrarlanmıştır. Tekrar testleri Roche AmpliChip sonuçları ile %100 uyumludur. 13 of 12