RIDASCREEN Clostridium perfringens Enterotoksin

RIDASCREEN Clostridium perfringens Enterotoksin Makale no.: C0601 R-Biopharm AG, An der neuen Bergstraße 17, D-64297 Darmstadt, Almanya Telefon: +49 (0) 61 51 81 02-0 / Fax: +49 (0) 61 51 81 02-20

1. Kullanım amacı İn vitro diagnostik kullanım içindir. Enzim immunoassay RIDASCREEN Clostridium perfringens Enterotoksin insan dışkı örneklerinde Clostridium perfringens enterotoksinlerin kalitatif tespitini sağlar. 2. Testin özet ve açıklaması Clostridium perfringens bakterileri, diğer tüm Clostridia gibi, her yerde bulunan, spor oluşturan, Gram-pozitif, insanlarda kalın bağırsak florasının arasında düzenli olarak bulunan anaerobik bakterilerdir. Bu diğer Clostridia farklıdır çünkü peritrichous flagella sahip değildirler. Clostridium perfringens beş soyu Tip A E olarak ayırt edilir. Beş tipin hepsi hayvanlarda görülürken, Tip A soyu Tip C ile birikte insanlar için büyük öneme sahiptir, belli koşullar altında (diyet, tripsin eksikliği) nekrotik enterite sebep olur. Bu gruplar dört ana toksinin üretimine (Alfa, Beta, Epsilon, Iota) göre sınıflandırılır, bunların tümü sitotoksik ve nekrotizan etkilere sahiptir. Bu dört ana toksinin yanında C. perfringens belli soyları bir dizi başka toksin üretir, enterotoksin arasında (35 kda boyutunda bir polipeptid) insanlar için patojenik öneme sahiptir. Yanlış saklanan gıdaların tüketimiyle ve özellikle önceden pişmiş gıdalarla, C. perfringens büyük miktarlarda alınabilir. Sırayla büyük miktarlarda C. perfringens enterotoksinleri (CPE) oluştururlar ve bu ishal ve mide krampları ile bağırsak hastalıklarının sebebidir. İşaretler ve belirtiler kontamine gıdanın alımından sonra yaklaşık 8 24 saat içine meydana gelir ve bir 24 saat sonra geriler. Kusma, ateş ve baş ağrısının hastalığa eşlik ettiği nadiren görülür. Gıda zehirlenmesine ek olarak, C. perfringens gıda zehirlenmesi nedeniyle olmayan, tüm antibiyotikle ilgili diarrhea (AAD) durumlarının yaklaşık %10u ve sporadic diarrhea (SPOR) durumlarının yaklaşık %5 20 sinin nedenidir. Bu sıklıkla dışkıda kan ve mukoza bulgularıyla daha ciddi ve daha uzun sürede (10 30 gün) hastalığın gidişatıyla pseudomembranous colitis (PMC) kadar ishal aralıkları oluşturur. Kalın bağırsak ve rektumun alt kısımlarından biyopsilerin histolojik incelemesinde CPE yol açtığı lezyonlardan kaynaklı ödemli alanlar bulunuyor. Yakın zamandaki araştırmalar enterotoksin kodunun kromozomal (gıda zehirlenmesi) ve episomal (AAD ve SPOR da) olabileceğini gösterdi. The RIDASCREEN Clostridium perfringens Enterotoksin Testi, RIDASCREEN Clostridium difficile Toksin A/B Testine paralel olarak mevcuttur, antibiyotikle ilgili ishal ve sporadik ishal sebeplerinin açıklaması için önemli tespit sistemi sağlar. Hızlı ve güvenilir tanıya imkan sağlayan bu araç tedavi kararı sürecinde değerli bir yardımcıdır. 3. Test prensibi RIDASCREEN Clostridium perfringens Enterotoksin Testi sandviç-tip yönteminde spesifik antikorlar kullanır. C. perfringens enterotoksin epitopları için monoklonal antikorlar mikrokuyu plağın kuyu yüzeyine bağlanır. RIDASCREEN Clostridium perfringens Enterotoksin 13-09-05 2

Bir pipet oda sıcaklığında (20 25 C) inkübasyon için biyotinli anti-enterotoksin antikorlarıyla (Konjugat 1) ile birlikte mikrokuyu plağın kuyusuna incelenecek kontrol numuneleri ve dışkı örneğinin bir süspansiyonunu yerleştirmek için kullanılır. Yıkama aşaması sonrası, streptavidin poly-peroksidaz konjugat (Konjugat 2) eklenir ve tekrar oda sıcaklığında (20 25 C) inkübe edilir. Numunedeki enterotoksin varlığıyla hareketsiz antikorlar, enterotoksin ve konjuge antikorlar sandviç kompleksi oluşturur. Başka yıkama aşaması bağlanmamış streptavidin poly-peroksidaz konjugatı kaldırır. Substrat eklenmesinden sonra bağlanan enzim mikrokuyu plağın kuyularındaki önceden renksiz olan solüsyonun rengini eğer test pozitifse maviye dönüştürür. Durdurma reaktifinin eklenmesi rengi mavidne sarıya dönüştürür. Ekstinksiyon numunede bulunan CPE konsantrasyonuyla orantılıdır. 4. Sağlanan reaktifler Kit içindeki reaktifler 96 tespit için yeterlidir. Plak Seyreltici 1 Yıkama 96 Mikrokuyu plak, strip tutucuda 12 mikrokuyu strip (bölünebilen); Clostridium perfringens enterotoksine karşı spesifik monoklonal antikorlarla kaplı 100 ml Örnek dilüsyon buffer, protein-buffered NaCl solüsyonu; kullanıma hazır, mavi renk 100 ml Yıkama buffer, fosfat buffered NaCl solüsyonu (konsantre 10-kat); 0.1% thimerosal içerir Kontrol + Kontrol - Konjugat 1 Konjugat 2 2 ml 2 ml 13 ml 13 ml Pozitif kontrol; inaktif enterotoksin, kullanıma hazır Negatif kontrol (örnek dilüsyon buffer); kullanıma hazır Stabilize protein solüsyonunda enterotoksin karşı biyotin-konjuge antikorlar; kullanıma hazır, mavi renkli Stabilize protein solüsyonunda streptavidin poly-peroksidaz konjugat kullanıma hazır, turuncu renkli Substrat Durdurma 13 ml Hidrojen peroksit/tmb; kullanıma hazır 8 ml Durdurma reaktifi; 1 N sülfürik asit; kullanıma hazır RIDASCREEN Clostridium perfringens Enterotoksin 13-09-05 3

5. Reaktifler ve onların saklanması Tüm reaktifler 2 8 C de saklanmalıdır ve etikette basılı tarihe kadar kullanılabilir. 2 8 C de saklanan seyreltilmiş yıkama buffer maksimum 4 hafta kullanılabilir. Mikrobiyel kontaminasyon önlenmelidir. Son kullanma tarihinden sonra kalite garantisi artık geçerli değildir. Alüminyum çanta kilit parçalanmayacak şekilde makasla açılmalıdır. Gerekmeyen herhangi mikrokuyu strip hemen alüminyum çantaya konulmalı ve 2 8 C de saklanmalıdır. Renksiz substratın ayrışmasını veya oto-oksidasyon nedeniyle maviye dönmesini önlemek için direkt ışıktan korunmalıdır. Birkez substrat maviye dönmüşse kullanılmamalıdır. 6. Ek gerekli reaktifler ve gerekli ekipman 6.1. Reaktifler - Distile veya deiyonize su 6.2. Ekipman - Test tüpleri - Tek kullanımlık pipetler (Makale no.: Z0001) - Vorteks karıştırıcı (isteğe bağlı, 9.3. bakın) - 50 100 µl ve 1 ml hacimleri için mikropipet - Ölçüm silindiri (1,000 ml) - Kronometre - Mikrokuyu plaklar veya çok kanallı pipetler için yıkama cihazı (300 µl) - Mikrokuyu plaklar için fotometre (450 nm ve referans filtre 620 650 nm) - Filtre kağıdı (laboratuvar havlusu) - Atık kabı 7. Kullanıcılar için önlemler Sadece in vitro diagnostik kullanım içindir. Bu test sadece eğitimli laboratuvar personeli tarafından yapılmalıdır. Medikal laboratuvarlardaki çalışma kuralları takip edilmelidir. Her zaman bu test için kullanıcı talimatlarına sıkıca bağlı kalın. Numuneler veya reaktifler ağızla pipetlenmemeli ve yaralı cilt veya mukoz membranlarıyla temas önlenmelidir. Numuneleri kullanırken kişisel koruyucu donanım (Uygun eldivenler, laboratuvar ceketi, koruyucu gözlük) giyin ve test bittikten sonra ellerinizi yıkayın. Örneklerin işlendiği alanlarda sigara içmeyin veya birşey yiyip içmeyin. Daha fazla detay için www.r-biopharm.com. da Malzeme Güvenlik Bilgi Formuna (MSDS) bakın. Bu kit inaktif enterotoksin içeren pozitif kontrol içerir. Sadece dışkı örnekleri gibi, olası bulaşıcı materyal gibi işlenmeli ve ilgili güvenlik düzenlemeleri ile uyumlu kullanılmalıdır. RIDASCREEN Clostridium perfringens Enterotoksin 13-09-05 4

Yıkama buffer koruyucu olarak 0.1% thimerosal içerir. Bu maddenin cilt veya mukoz membranlarıyla teması önlenmelidir. Kullanımdan sonra tüm reaktiflerin ve materyallerin uygun ve sorumlu şekilde atımını sağlayın. Atım için lütfen ulusal düzenlemelere bağlı kalın. 8. Numune toplama ve saklama Kullanılıncaya kadar test materyalini 2 8 C de saklayın. Eğer materyal üç gün içinde test için kullanılamıyorsa -20 C veya daha soğukta saklanmasını öneririz. Numunenin tekrar tekrar dondurulup çözdürülmesinden kaçının Örnek dilüsyon buffer içinde dışkı örneğini seyrelttikten sonra 1:11, yedi gün içinde kullanım için 4 C de saklanabilir. Dışkı örnekleri ve rektal lekeler koruyucular, hayvan serumları, metal iyonlar, oksitleyici maddeler veya deterjanlar içeren taşıma ortamıyla taşıma kaplarında toplanmamalıdır, bunlar RIDASCREEN Clostridium perfringens Enterotoksin Testine müdahale edebilir. Yaygın olarak pazarlanan taşıma ortamında paketlenmiş dışkı örnekleri (Cary Blair, Amies) RIDASCREEN Clostridium perfringens Enterotoksin Testinde kullanılabilir. Ancak burada örneğin gereken öndilüsyonu dikkate alınmalıdır. Mümkün olduğunca Seyreltici 1 içinde dışkı örneğinin son dilüsyonu tam olarak 1:11 olmalıdır. Rektal lekeler kullanılacaksa dışkı materyali hacminin test için yeterli olduğundan emin olun (yaklaşık 100 mg). Kontakt izleme asemptomatik taşıyıcıları belirlemek amacıyla klinik semptomlar göstermeyen kontakt kişilerden alınan dışkı örneklerini içermelidir. 9. Test prosedürleri 9.1. Genel bilgi Tüm reaktifler ve mikrokuyu Plak kullanımdan önce oda sıcaklığına (20 25 C) getirilmelidir. Bu mikrokuyu stripler oda sıcaklığına erişene kadar alüminyum çantadan çıkartılmamalıdır. Bu reaktifler kullanımdan hemen önce iyice karıştırılmalıdır. Kullandıktan sonra mikrokuyu stripler (kapalı çantalarda yerleşik) ve reaktifler tekrar 2 8 C de saklanmalıdır. Birkez kullanıldığında mikrokuyu stripler tekrar kullanılmamalıdır. Bu reaktifler ve mikrokuyu stripler paketleme zarar görmüşse veya şişelerden sızıntı varsa kullanılmamalıdır. Çapraz kontaminasyonu önlemek için örneklerin kit bileşenleriyle direkt teması önlenmelidir. Bu test direkt güneş ışığında yapılmamalıdır. Buharlaşma kayıplarını önlemek için mikrokuyu plağın kaplanmasını veya üstüne plastik wrap yerleştirilmesini öneririz. 9.2. Yıkama buffer hazırlama 9 kısım distile suyla 1 kısım yıkama buffer konsantreyi Yıkama karıştırın. Konsantre içinde bulunan herhangi kristal 37 C de su banyosunda ısıtmayla önceden çözülmüş olmalıdır. RIDASCREEN Clostridium perfringens Enterotoksin 13-09-05 5

9.3 Örnekleri hazırlama 1 ml RIDASCREEN örnek dilüsyon buffer Seyreltici 1 ile etiketli bir test tüpünü doldurun. Sadece ikinci işaretin üstüne ince dışkı örneğini aspire etmek için (yaklaşık 100 µl) ve süspansiyon yapmak için test tüpünde buffera eklenmesi için tek kullanımlık bir pipet kullanın (makale no. Z0001). Katı dışkı örneğiyle süspansiyon yapmak için spatula veya tek kullanımlık aşılama döngüsü ile eşit miktarda (100 mg) ekleyin. İçine aspirasyon ve tek kullanımlık pipetten ejeksiyon ile dışkı süspansiyonunu homojenize edin veya alternatif olarak Vorteks karıştırıcıda karıştırın. İri dışkı partiküllerinin çökelmesi için kısa süre süspansiyonu beklemeye bırakın ve dışkı süspansiyonunun bu netleşmiş supernatantı testte direkt olarak kullanılabilir Eğer test prosedürü otomatik ELISA sisteminde yapılıyorsa supernatant partikülsüz olmalıdır. Bu durumda 5 dakika 2,500 G da örneğin santrifüj edilmesi önerilir. Not: Seyreltici 1 içinde seyreltilen dışkı örnekleri Seyreltici 1 kullanılması şartıyla herhangi başka RIDASCREEN ELISA içinde kullanılabilir. 9.4. İlk inkübasyon Strip tutucuda yeterli sayıda kuyunun yerleştirilmesinden sonra 100 µl pozitif kontrol Kontrol +, negatif kontrol Kontrol -, veya dışkı örneği süspansiyonunu kuyulara ekleyin. Daha sonra 100 μl biyotin-konjugatlı antikor Konjugat 1 ekleyin ve karıştırın (plağın kenarına hafifçe vurarak); sonra oda sıcaklığında (20 25 C) 60 dk inkübe edin. 9.5. Yıkama Dikkatli yıkama doğru sonuçların elde edilmesi için önemlidir ve bu nedenle talimatlara göre ilerleyin. Kuyularda inkübe edilen madde resmi şartlara uygun olarak atım için atık kabı içine boşaltılmalıdır. Daha sonra emici kağıt üstüne plağı döndürün ve kalan nemi uzaklaştırmak için vurun. Sonra her defasında 300 µl yıkama buffer kullanılarak 5 kez plağı yıkayın. Emici kağıdın hala kuru ve kullanılmamış olan kısmında her yıkama sonrası vurup çıkartarak tamamen kuyuların boşaldığından emin olun. Mikroplak yıkayıcı veya tam otomatik ELISA kullanıyorsanız makinenin doğru şekilde ayarlandığından emin olun; gerekirse üreticiden ayarları isteyin. R-Biopharm tarafından verilen aletler valide ayarlar ve iş protokolleri ile zaten programlanmıştır. Yıkama iğnelerinin tıkanmasını önlemek için, sadece partikülsüz dışkı süspansiyonları dağıtılmaldır (bakın 9.3.,Önekleri hazırlama). Ayrıca tüm sıvının her yıkama aşamasında aspire edildiğinden emin olun. 9.6. İkinci inkübasyon Kuyulara 100 µl poly-streptavidin peroksidaz konjugat Konjugat 2 doldurmak için bir pipet kullanın sonra oda sıcaklığında (20 25 C) 30 dk inkübe edin. RIDASCREEN Clostridium perfringens Enterotoksin 13-09-05 6

9.7. Yıkama Kısım 9.5 de belirtildiği gibi yıkayın. 9.8. Üçüncü inkübasyon Tüm kuyuları100 µl substrat Substrat ile doldurun. Sonra oda sıcaklığında karanlıkta (20 25 C) 15 dk plağı inkübe edin. Daha sonra reaksiyonu durdurmak için 50 µl durdurma reaktifi Durdurma ile tüm kuyuları doldurun. Plağın kenarına hafifçe vurarak dikkatlice karıştırdıktan sonra 450 nm de ekstinksiyon (isteğe bağlı: 450/620 nm) ölçün. Havada yani mikrokuyu plak olmadan sıfır noktasını ayarlayın. Not: Yüksek-pozitif hasta örnekleri substratın siyah renkli çökeltilerine sebep olabilir. 10. Kalite kontrol reaktif süresi bitiminin belirtileri Kalite kontrol amaçları için, testin doğru şekilde yapılmış olması ve reaktiflerin stabil olmasını sağlamak için pozitif ve negatif kontroller her test yapıldığında kullanılmalıdır. Negatif kontrol için ekstinksiyon oranı (OD) 450 nmde 0.2 den küçükse (450/620 nm de 0.160 dan küçük) ve pozitif kontrol için ölçülen değer 450 nm veya 450/620 nm de 0.8 den büyükse test doğru yapılmıştır. Negatif kontrol için 0.2 den (0.160) büyük değer yıkamanın yetersiz olmuş olabileceğini gösterir. Olması gereken değerlerden sapma, bir bulanıklık veya kuyulara doldurulmadan önce renksiz substratın mavi renklenmesi reaktiflerin süresinin bittiğini gösterebilir. Öngörülen değerler karşılanmazsa, aşağıdaki noktalar testi tekrarlamadan önce kontrol edilmelidir: - Kullanılan reaktiflerin son kullanma tarihi - Kullanılan ekipmanın işlevselliği (ör. kalibrasyon) - Doğru test prosedürü - Kontaminasyon veya sızıntılar için kit bileşenlerinin görsel kontrolü maviye dönen substrat solüsyonu kullanılmamalıdır. Testi tekrarladıktan sonra hala şartlar yerine getirilmediyse, lütfen üretici veya yerel R-Biopharm distribütörünüzle temasa geçin. 11. Değerlendirme ve yorumlama 11.1. Cut-off hesaplama Cut-off oluşturmak için 0.15 ekstinksiyon birimleri negatif kontrol için ölçülen ekstinksiyona eklenir. Cut-off = negatif kontrol için ekstinksiyon + 0.15 RIDASCREEN Clostridium perfringens Enterotoksin 13-09-05 7

11.2. Test sonuçları Ekstinksiyon oranı hesaplanan cut-off değerinden %10 daha fazlaysa numunenin değerlendirilmesi pozitiftir. Ekstinksiyon oranı cut-off değerinden %10 az ve %10 fazlası aralığındaysa numunenin değerlendirilmesi marjinaldir. Tekrar taze dışkı örneğiyle yeniden inceleme giri bölge içine düşüyorsa örneğin değerlendirilmesi negatifdir. Hesaplanan cut-off altında %10 dan fazla ekstinksiyonlara sahip örnekler negatif düşünülmelidir. 12. Yöntem sınırlamaları RIDASCREEN Clostridium perfringens Enterotoksin Testi dışkı örneklerinde Clostridium perfringens enterotoksini tanımlar. Klinik belirtilerin ortaya çıkması ya da şiddeti için ekstinksiyonun belirlenen seviyesiyle ilişkilendirmek mümkün değildir. Elde edilen sonuçlar her zaman klinik belirtiler ve semptomlar ile birlikte yorumlanmalıdır. Pozitif sonuç başka bulaşıcı patojenlerin varlığını ekarte etmez. Negatif sonuç Clostridium perfringens enfeksiyon olasılığını ekarte etmez. Sonuç yetersiz saklama koşulları nedeniyle numunedeki enterotoksinlerin proteolitik yıkımından kaynaklanabilir. Hasta geçmişi Clostridium perfringens enfeksiyon şüphesini destekliyorsa inceleme başka dışkı örneğiyle tekrarlanmalıdır. Marjinal sonuç dışkı örneğindeki toksinlerin homojen olmayan dağılımından kaynaklanabilir. Bu durumda inceleme aynı örnekten ikinci bir süspansiyonla veya incelenmesi gereken başka dışkı örneğiyle tekrarlanmalıdır. 13. Performans özellikleri 13.1. Tespit sınırı için yöntemlerin karşılaştırılması Tespit sınırını belirlemek için enterotoksin stok solüsyonu (10 µg/ml) her ilgili örnek solüsyon buffer içinde titre edildi ve sonra RIDASCREEN Clostridium perfringens Enterotoksin Testi ve piyasada mevcut rakip ELISA içinde uygulandı. Her iki ELISA sonuçlarındaki toksin konsantrasyonları Tablo 1 de gösterilmektedir. Tablo 1: Clostridium perfringens enterotoksin tespiti için iki ELISA nın kıyaslanması CPE (ng/ml) 10 5 2,5 1,25 0,625 0,312 0,156 0,078 0,039 0,019 RIDASCREEN + + + + + + + + + - diğer ELISA + + + - - - - - - - RIDASCREEN Clostridium perfringens Enterotoksin ELISA 0.04 ng/ml saf Enterotoksin tespit edebilir ve bu nedenle piyasada mevcut rakip ELISA dan 60 kez daha duyarlıdır. RIDASCREEN Clostridium perfringens Enterotoksin 13-09-05 8

13.2. Çapraz reaktivite Bağırsak kanalından patojenik mikroorganizmaların çeşitliliği RIDASCREEN Clostridium perfringens Enterotoksin ELISA ile incelendi ve çapraz reaktivite göstermedi. Bu testler bakteriyel süspansiyonlar (10 6-10 9 cfu/ml), parazit kültürleri (10 7-10 9 organizma/ml) ve virüs ile enfekte olmuş hücrelerden hücre kültür supernatantları ile yapıldı. Çalışmanın sonuçları Tablo 2 de özetlenmektedir. Tablo 2: Bağırsak kanalından patojenik mikroorganizmalarla çapraz reaktivite Organizma Sonuç [OD 450 nm] Adenovirus 0.050 Aeromonas hydrophila 0.046 Bacillus cereus 0.054 Bacteroides fragilis 0.053 Campylobacter coli 0.060 Campylobacter fetus 0.055 Campylobacter jejuni 0.053 Campylobacter lari 0.060 Campylobacter upsaliensis 0.051 Candida albicans 0.052 Citrobacter freundii 0.052 Clostridium bifermentans 0.044 Clostridium difficile 0.044 Clostridium novyi 0.049 Clostridium perfringens 0.046 Clostridium septicum 0.050 Clostridium sordellii 0.049 Clostridium sporogenes 0.060 Cryptosporidium parvum 0.053 E. coli (O26:H-) 0.049 E. coli (O6) 0.045 E. coli (O157:H7) 0.044 Enterobacter cloacae 0.051 Enterococcus faecalis 0.050 Giardia lamblia 0.052 Klebsiella oxytoca 0.046 Proteus vulgaris 0.046 Pseudomonas aeruginosa 0.051 Rotavirus 0.080 Salmonella enteritidis 0.044 Salmonella typhimurium 0.045 RIDASCREEN Clostridium perfringens Enterotoksin 13-09-05 9

Serratia liquefaciens 0.044 Shigella flexneri 0.043 Staphylococcus aureus 0.054 Staphylococcus epidermidis 0.043 Vibrio parahaemolyticus 0.044 Yersinia enterocolitica 0.046 13.3. Kesinlik RIDASCREEN Clostridium perfringens Enterotoksin Testinin tekrarlanabilirliği zayıf-yüksek pozitif aralığında tam ölçümü gösteren altı referans ile incelendi. İntra-test tekrarlanabilirliğini bellirlemek için bu referansların 40 tekrarı test edildi. Ortalama değerler ve varyasyon katsayıları (VC) üç kit lotu için belirlendi. İnter- test tekrarlanabilirliği için 10 farklı çalışma gününden elde edilen referanslar gün başına iki çalışmayla iki kez test edildi. Ölçümler üç kit lotunda iki teknisyen tarafından belirlendi. İnter-lot tekrarlanabilirliği kitlerin tüm üç lotu için belirlendi. Referans Ortalama değer / VC Intra-test Inter-test Inter-lot Kit lot 1 Kit lot 2 Kit lot 3 Kit lot 1 Kit lot 2 Kit lot 3 Kit lotları 1 3 1 1.966 / 7.55% 1.941 / 5.38% 1.882 / 6.66% 2.199 / 13.16% 1.917 / 12.10% 1.735 / 12.11% 1.951 / 17.21% 2 0.948 / 5.40% 0.927 / 7.37% 0.813 / 7.77% 1.114 / 14.72% 0.966 / 11.98% 0.843 / 14.31% 0.974 / 19.46% 3 0.494 / 9.34% 0.484 / 7.56% 0.459 / 6.20% 0.551 / 13.55% 0.495 / 11.04% 0.416 / 15.15% 0.487 / 19.09% 4 0.361 / 9.94% 0.405 / 8.33% 0.320 / 6.43% 0.423 / 23.05% 0.382 / 13.94% 0.322 / 15.50% 0.376 / 22.79% RIDASCREEN Clostridium perfringens Enterotoksin 13-09-05 10

5 0.184 / 11.44% 0.197 / 5.88% 0.143 / 11.60% 0.199 / 16.92% 0.183 / 14.92% 0.143 / 15.20% 0.175 / 22.55% 6 0.046 / 8.79% 0.054 / 6.69% 0.048/ 17.25% 0.054 / 20.07% 0.053 / 16.00% 0.050 / 7.88% 0.052 / 15.68% 14 Müdahale edici maddeler Aşağıdaki maddelerin belirlenen konsantrasyonlarda Clostridium perfringens enterotoksin-pozitif ve Clostridium perfringens enterotoksin-negatif dışkı örneklerine karıştırıldığında test sonuçlarına etkisi görülmedi: baryum sülfat (5% w/w), loperamid (antidiarrheal ilaç, 5% w/w), Pepto-Bismol (antidiarrheal ilaç, 5% v/w), mukinler (5% w/w), siklamat (yapay tatlandırıcı, 5% v/w), insan kanı (5% v/w), stearik asit ve palmitinik asit (karışım 1:1, 40% w/w), metronidazol (0.5) (antibiyotik ilaç 5% v/w), diklofenak (0.00263% v/w). RIDASCREEN Clostridium perfringens Enterotoksin 13-09-05 11

Ek Teste özgü semboller: Plak Seyreltici 1 Yıkama Kontrol + Kontrol - Mikrokuyu plak Örnek dilüsyon buffer Yıkama buffer Pozitif kontrol Negatif kontrol Konjugat 1 Konjugat 1 Konjugat 2 Konjugat 2 Substrat Durdurma Substrat Durdurma reaktifi RIDASCREEN Clostridium perfringens Enterotoksin 13-09-05 12

Bibliyografi 1. Collie, Renee E. McClane, Bruce A.: Evidence That the zincir Gene Can Be Episomal in Clostridium perfringens Isolates Associated with Non-Food-Borne Human Gastrointestinal Diseases. J. Clin. Microbiol. 36 No. 1, 30-36 (1998) 2. Collie, Renee E. et al. Phenotypic Characterization of Enterotoxigenic Clostridium perfringens Isolates from Non-foodborne Human Gastrointestinal Diseases. Anaerobe, No. 4, 69-79 (1998) 3. Borriello, S.P. Newly described clostridial diseases of the gastrointestinal tract: Clostridium perfringens enterotoxin-associated diarrhea and neutropenic due to Clostridium septicum. In Borriello S.P. (eds.) Clostridia in Gastrointestinal Disease, pp 223-228, CRC Press, Inc., Boca Raton (1985) 4. Borriello, S.P. et al.:enterotoxigenic Clostridium perfringens: a possible cause of antibiotic-associated diarrhea. Lancet 1, 305-307 (1984) 5. Brett, M.M. et al. Detection of Clostridium perfringens and its enterotoxin in cases of sporadic diarrhea. J. Clin. Pathol. 45, 609-611 (1992) 6. Jackson, S. et al.: Diagnostic importance of Clostridium perfringens enterotoxin analysis in recurring enteritis among the elderly, chronic care psychiatric patients. J. Clin. Microbiol 23, 748-751 (1986) 7. Mpamugo, O. et al. Enterotoxigenic Clostridium perfringens, as a cause of sporadic cases of diarrhoea. J. Med. Microbiol. 43, 442-445 (1995) 8. Borriello, S.P. Clostridial Disease of the Gut. Clin. Infect. Dis., Suppl 2; 242-250 (1995) 9. Rood, Julian I. Virulence Genes of Clostridium perfringens. Annu. Rev. Microbiol. 52, 333-360 (1998) 10. Sakurai, Jun et al. Major Toxins of Clostridium perfringens. J. Toxicol. Toxin Reviews. 16(4), 195-214 (1997) 11. Titball, Richard W. et al. The Clostridium perfringens α-toxin. Anaerobe 5, 51-64 (1999) 12. Wnek, Andrew P. et al. Production an Characterization of Monoclonal Antibodies against Clostridium perfringens Type A Enterotoxin. Infection and Immunity. Vol. 50, No. 2., 442-448 (1985) 13. Hanna, Philip C. et al. Mapping of Functional Regions of Clostridium perfringens Type A Enterotoxin. Infection and Immunity. Vol. 60, No. 5, 2110-2114 (1992) 14. Brockmann, S. Gastroenteritis-Ausbruch verursacht durch Clostridium perfringens. Epidemiologisches Bulletin Nr. 18, 145-146 (2000) 15. Graf, P. Gastroenteritis-Ausbruch verursacht durch Clostridium perfringens; Robert Koch- Institut; Epidemiologisches Bulletin Nr. 41, 327-329 (2000) RIDASCREEN Clostridium perfringens Enterotoksin 13-09-05 13