MAX Extended Enteric Bacterial Panel

Transkript

1 MAX Extended Enteric Bacterial Panel In Vitro Diyagnostik Kullanım İçindir P0221(02) BD MAX System ile kullanım içindir Türkçe 4 I KULLANIM AMACI BD MAX System'da gerçekleştirilen BD MAX Extended Enteric Bacterial Panel (BD MAX Genişletilmiş Enterik Bakteriyel Panel), enterik bakteri patojenlerinin doğrudan kalitatif tespiti ve ayrıştırılması için otomatik in vitro tanı testidir. 4 ek Ünitize Reaktif Stribine opsiyonel Master Mix ilavesi olarak BD MAX Enteric Bacterial Panel ile birlikte kullanılır. BD MAX Extended Enteric Bacterial Panel nükleik asitleri aşağıdakilerden tespit eder: Plesiomonas shigelloides Vibrio (V. vulnificus, V. parahaemolyticus, ve V. cholerae) Enterotoksijenik Escherichia coli (ETEC) ısıya duyarlı enteretoksin (LT)/ ısıya dayanıklı enterotoksin (ST) genler Yersinia enterocolitica Test, şüpheli akut gastroenteritisi, enteritisi veya koliti olan semptomatik hastalardan alınmış korunmayan yumuşak ila diyarel veya Cary-Blair korunmuş dışkı örnekleri üzerinde gerçekleştirilir. Doğrudan örnek üzerinde yapılan bu testte ilgili gen hedef DNA'sı amplifikasyonu için gerçek zamanlı polimeraz zincir reaksiyonu (PCR) kullanılır. Testte amplifiye DNA'nın saptanması için florojenik gene özgü hibridizasyon probları kullanılır. Bu testin, Plesiomonas shigelloides, Vibrio (V. vulnificus, V. parahaemolyticus, ve V. cholerae) Enterotoxigenic Escherichia coli (ETEC) LT/ST ve Yersinia enterocolitica enfeksiyonlarının ayırıcı tanısında yardımcı olarak klinik sunum, laboratuvar bulguları ve epidemiyolojik bilgiler ile birlikte kullanılması amaçlanmıştır. Bu testin sonuçları, tanıda, tedavide veya diğer hastaların yönetimiyle ilgili kararlarda tek dayanak olarak ele alınmamalıdır. Pozitif test sonuçları, bu testle saptanmamış diğer organizmaların varlığında gelişen koenfeksiyon olasılığını ortadan kaldırmaz ve hastalığın tek veya ayırıcı nedeni olmayabilir. Gastroenterit ile uyumlu klinik hastalık varlığında elde edilen negatif test sonuçları, bu testle saptanmamış patojenlerin oluşturduğu bir enfeksiyondan veya ülseratif kolit, irritabl bağırsak sendromu veya Crohn hastalığı gibi bulaşıcı olmayan nedenlerden kaynaklanabilir. PROSEDÜRÜN ÖZETİ VE AÇIKLAMASI Enterik hastalıklara neden olan organizmalar dünya genelinde morbidite ve mortalitenin önemli bir nedenini oluşturmaktadır. Enterik patojenler vücuda gastrointestinal yolla girer veya genellikle kontamine gıda ve su aracılığıyla ya da kusmuk veya dışkı ile temas yoluyla yayılır. Centers for Disease Control and Prevention (CDC - Hastalık Kontrol ve Önleme Merkezleri), Birleşik Devletler de her yıl i hastaneye yatma ve i ölümle sonuçlanan 48 milyon gıda kaynaklı hastalık vakası otaya çıktığını tahmin etmektedir. 1 Gelişmekte olan dünyada, bu hastalıklar yıllık yaklaşık 2 milyon küçük çocuğuna neden olmaktadır. 2 Sebep olan ajanların her biri karın krampları veya karın ağrısı, iştah kaybı, bulantı veya kusma da dahil olmak üzere kısmen farklı semptomlara sebep olabilir; ancak tümü diyareye neden olur. 3 Tekrarlanan diyare nöbetleri ve dirençli diyare hastalığı bağırsak işlevini ve emilimi bozabilir, potansiyel olarak çocukluk zafiyeti ve büyümenin gecikmesine yol açabilir. 4 Her ne kadar en yaygın gram negatif enterik bakteriyel ajanlar antikorla taşınan lateral akışla toksin tespiti ile standart selektif ve diferansiyel besiyerinde kolaylıkla kültive edilebilse de izolasyonu ve tanımlanması zaman almaktadır. Tanı birkaç gün sürebilir ve bu da tedavi edilmeyen enfeksiyon nedeniyle hastaları tehlikeye sokar ve enfeksiyonun başkalarına yayılması riski taşır. Alternatif olarak empirik antibakteriyel tedavi, hastaları, ilaçla ilişkili advers olay riskine sokabilir. Antibiyotiklerin uygunsuz kullanımı, antimikrobiyal direncin oluşmasına katkı verir ve sınırlı kaynakların gereksiz şekilde harcanmasını getirir. BD MAX Extended Bacterial Panel, BD MAX Enteric Bacterial Panel ile birlikte kullanılması gereken tek bir Master Mix'ten oluşur. BD MAX System üzerinde gerçekleştirilen BD MAX Extended Enteric Bacterial Panel prosedürü, hem BD MAX Enteric Bacterial Panel hem de BD MAX Extended Enteric Bacterial Panel hedefleri için 48 ila 96 saat sürebilen geleneksel kültür yöntemlerine kıyasla, yaklaşık olarak 3 saatte 24 örnek için sonuç sağlayabilir. BD MAX Extended Bacterial Panel, Plesiomonas shigelloides, Vibrio (V. vulnificus, V. parahaemolyticus, ve V. cholerae), Enterotoksijenik E. coli (ETEC) LT/ST ve Yersinia enterocolitica kaynaklı gastroenteritisten sorumlu patojenleri eş zamanlı olarak tespit eder. Bu test dahili bir Örnek İşleme Kontrolü içerir. BD MAX Extended Enteric Bacterial Panel, örneğin BD MAX System'a yerleştirilmesinden sonuçların çıkmasına kadar kullanıcı müdahalesini en aza indirerek test sürecini otomatikleştirir. 1

2 Yumuşak ila diyareli dışkı örneği toplanır ve laboratuvar gönderilir, homojenize edilip bir BD MAX Enteric Bacterial Panel Sample Buffer Tube'e (BD MAX Enterik Bakteriyel Panel Örnek Tampon Tüpü) aktarılır. Örnek Tampon Tüpü BD MAX System'a yerleştirilince buradaki otomatik prosedür oluşur: Bakteriyel hücreler lizise uğratılır; DNA manyetik boncuklardan ekstrakt ve konsantre edilir; son olarak da, varsa, BD MAX PCR Cartridge'teki (BD MAX PCR Kartuş) genetik hedefleri amplifiye etmek için kullanılan gene özgü primerlerin bulunduğu ayrılan DNA alikotu PCR reaktiflerine eklenir. Bu testte de Örnek İşleme Kontrolü vardır. İnhibitör maddeler, enstrüman veya reaktif hatası işlemini izlemek için Örnek İşleme Kontrolü Ekstraksiyon Tüpünde kalır ve ekstraksiyon, konsantrasyon ve amplifikasyon adımlarını uygular. İnhibitör maddeler, enstrüman veya reaktif hatası işlemini izlemek için Örnek İşleme Kontrolü Ekstraksiyon Tüpünde kalır ve ekstraksiyon, konsantrasyon ve amplifikasyon adımlarını uygular. BD MAX System'a klinik örnek, BD MAX Unitized Reagent Strip (Ünitelendirilmiş Reaktif Stribii) ve BD MAX PCR Cartridge'i (Kartuş) yüklendikten sonra operatör müdahalesi gerekmez. BD MAX System örnek lizisi, DNA ekstraksiyonu ve konsantrasyonu, reaktif rehidrasyonu, nükleik asit amplifikasyonu ve gerçek zamanlı polimeraz zincir reaksiyonu (PCR) kullanılarak hedef nükleik asit sekansının saptanmasını otomatik olarak gerçekleştirir. Amplifiye hedefler, sönmüş floroforlarla etiketlenmiş hidroliz problarıyla algılanır. Sinyallerin amplifikasyonu, saptanması ve yorumlanması BD MAX System tarafından otomatik olarak yapılır. PROSEDÜR İLKELERİ Dışkı örnekleri hastalardan alınır ve temiz bir kapta koruyucu olmadan veya Cary-Blair taşıma ortamında koruyucu ile laboratuvara gönderilir. Bir 10 µl öze, özenin derinliğine kadar örneğe yerleştirilir ve bir döndürme hareketiyle BD MAX Extended Bacterial Panel setindeki BD MAX Sample Buffer Tube e akıtılır. Sample Buffer Tube bir septum kapağıyla kapatılır, vortekslenir ve BD MAX System'a aktarılır. İş listesi oluşturulup örnek, BD MAX Enteric Bacterial Panel Unitized Reagent Strip ve PCR Cartridge ile birlikte BD MAX cihazına yüklendikten sonra, çalışma başlatılır ve daha fazla kullanıcı müdahalesi gerekmez. BD MAX System hedef organizma lizisi, DNA ekstraksiyonu ve konsantrasyonu dahil örnek hazırlanmasını, reaktif rehidrasyonu, hedef nükleik asit sekansının amplifikasyonu ve gerçek zamanlı PCR kullanılarak saptanmasını otomatik olarak gerçekleştirir. Sinyalin yorumlanması BD MAX System tarafından otomatik olarak yapılır. Bu test ayrıca Ekstraksiyon Tüpünde bulunan ve ekstraksiyon, konsantrasyon ve amplifikasyon adımlarına tabi olan bir Numune İşleme Kontrolü içerir. Örnek İşleme Kontrolü; potansiyel inhibe edici maddelerin ve sistem veya reaktif arızalarının varlığını izler. Yüksek bir sıcaklıkta enzimatik bakteriyel lizis sonrasında serbest kalan nükleik asitler manyetik afinite boncuklarıyla yakalanır. Bağlı nükleik asitlerin bulunduğu boncuklar yıkanır ve nükleik asitler elüsyona uğratılır. Elüsyona uğratılmış DNA nötralize edilir ve PCR reaktiflerinin rehidrasyonu için Master Mix (Ana Karışım) tüpleri içine aktarılır. Rehidrasyon sonrasında, BD MAX System BD MAX PCR Cartridge'a PCR için sabit bir hazır solüsyon hacmi verir. BD MAX PCR Cartridge'daki mikrovalfler PCR başlamadan önce amplifikasyon karışımını sınırlamak ve böylece buharlaşma ve amplikon kontaminasyonu önlemek için sistem tarafından mühürlenir. Amplifiye DNA hedefleri bir uçta söndürücü kısım ve öteki uçta bir floresan raportör boya (florofor) ile etiketlenmiş hidroliz (TaqMan) problarıyla saptanır. Farklı floroforlarla etiketlenmiş problar; bakteriyel hedeflerin (Plesiomonas shigelloides, Vibrio (V. vulnificus, V. parahaemolyticus, ve V. cholerae), Enterotoksijenik Escherichia coli (ETEC) LT/ST ve Yersinia enterocolitica) amplikonlarının ve Örnek İşleme Kontrolü amplikonlarının BD MAX System'daki beş farklı optik kanalında saptanmasında kullanılır. Problar doğal durumundayken florofor floresanı söndürücüye yakınlığı nedeniyle söndürülür. Ancak hedef DNA varlığında problar tamamlayıcı sekanslarına hibridize olur ve DNA polimerazın, cdna şablonu boyunca yeni oluşan iplikçiği sentezlerken 5 3 ekzonükleaz aktivitesi ile hidrolize uğrar. Bunun sonucunda floroforlar söndürücü moleküllerden ayrılır ve floresan yayılır. BD MAX System bu sinyalleri her döngüde izler ve program sonunda verileri son sonuçları raporlamak üzere yorumlar. REAKTİFLER İçindekiler BD MAX Extended Enteric Bacterial Panel Master Mix (D8) DNA polimeraz, nükleotidler, hedefe ve Örnek İşleme Kontrolüne özgü problar ve primerler içeren Kurutulmuş PCR Master Mix. Miktar 24 test (2 x 12 tüp) GEREKLİ FAKAT SAĞLANMAMIŞ EKİPMAN VE MALZEMELER BD MAX Enteric Bacterial Panel (BD Diagnostic Systems Katalog no ) BD MAX PCR Cartridges (BD MAX PCR Kartuşları) (BD Diagnostic Systems Katalog no ) VWR Çoklu Tüp Vorteksleyici veya muadili (VWR, Kat. No ) Vortex Genie 2 veya muadili (VWR, Kat. No ) Nalgene Cryogenic Vial Holder (Kriyojenik Flakon Tutucu) (VWR, Kat. No ) Çok tüplü vorteks karıştırıcı ile uyumlu rak (örn. Kriyojenik Flakon Tutucu veya eşdeğeri) Tek Kullanımlık 10 µl inoculating loops (inokülasyon özeleri) (BD Diagnostic Systems Katalog no ) Laboratuvar önlüğü ve tek kullanımlık eldivenler, tek kullanımlık Kronometre veya süre ölçer dışkı örneği türü için: Sıvı veya yumuşak gaita örnekleri toplamak için kuru, temiz kaplar. Korunan dışkı örneği türü için: Cary-Blair aktarım besiyeri (15 ml). Kontrol İzolatlarının Kültivasyonu için Önerilen Besiyeri (Kalite Kontrol bölümüne başvurun): BD Trypticase Soy Agar with 5% Sheep Blood (%5 Koyun Kanı ile BD Triptikaz Soya Agarı) (Plesiomonas shigelloides, Vibrio (V. vulnificus, V. parahaemolyticus, ve V. cholerae), ETEC ve Yersinia enterocolitica için) (ör., BD BBL Trypticase Soy Agar with 5% Sheep Blood %5 Koyun Kanı ile BD BBL Triptikaz Soya Agarı) [TSA II], BD Diagnostic Systems Katalog No ) 2

3 UYARILAR VE ÖNLEMLER BD MAX Extended Enteric Bacterial Panel yalnızca in vitro diyagnostik kullanım içindir. Bildirilebilir hastalıkların bildirimine yönelik yerel, bölgesel ve federal kurallar ve yönetmelikler sürekli olarak güncellenmektedir ve gözetim ile salgın araştırmaları için önemli pek çok organizma içerir. 5,6 Laboratuarlar, kendi devlet ve/veya yerel yönetmeliklerden sorumludur ve izolat ve/veya klinik örnek gönderim yönergeleri konusunda kendi yerel ve/veya devlet kamu sağlığı laboratuvarlarına danışmalıdır. Bu ürün yalnızca BD MAX System üzerinde, BD MAX Enteric Bacterial Panel ile birlikte kullanılabilir. BD MAX Extended Enteric Bacterial Panel, herhangi bir BD MAX Enteric Bacterial Panel lotuyla kullanılabilir. Son kullanma tarihi geçmiş reaktifler ve/veya materyalleri kullanmayın. Varışıyla birlikte dış kartonu mühürleyen etiket bozulmuşsa kiti kullanmayın. Koruyucu poşetler geldiklerinde açık veya yırtıksa reaktifleri kullanmayın. Reaktifleri reaktif poşetleri içinde kurutucu yoksa veya açılmışsa kullanmayın. Reaktif poşetlerinden kurutucuyu çıkarmayın. Reaktifin koruyucu poşetini her kullanımdan sonra fermuar şeklinde kapanan mühürle hemen kapatın. Mühürlemeden önce varsa poşetlerdeki fazla havayı giderin. Reaktifleri ısıya ve neme karşı koruyun. Neme uzun süre maruziyet ürün performansına etki edebilir. Reaktifleri folyo bozulmuş veya hasarlıysa kullanmayın. Farklı poşetler ve/veya kitler ve/veya lotlardan reaktifleri karıştırmayın. Kontaminasyon oluşacağından ve test sonuçlarını olumsuz etkileyebileceğinden kapakları birbirleriyle değiştirmeyin veya tekrar kullanmayın. Ünitelendirilmiş Reaktif Stripleri uygun sıvı dolumu için kontrol edin (sıvıların tüplerin alt kısmında olmasını sağlayın [bkz. Şekil 1]). Tüm pipet uçlarının var olduğundan emin olmak için Ünitelendirilmiş Reaktif Striplerini kontrol edin (bkz. Şekil 1). Master Mix ve Ekstraksiyon tüpü barkod okunabilirliği bozulabileceğinden kimyasal solüsyonları kullanırken dikkatli davranın. Bu testin düzgün yapılması için uygun laboratuvar tekniği şarttır. Testin yüksek analitik duyarlılığı nedeniyle tüm malzeme ve reaktiflerin saflığını korumak için büyük dikkat gösterilmelidir. Diğer PCR testlerinin laboratuvarda aynı alanlarda gerçekleştirilmesi durumunda, BD MAX Extended Enteric Bacterial Panel, test için gereken herhangi bir ek reaktifin ve BD MAX System'in kontamine olmamasına dikkat edilmelidir. Her zaman reaktiflerin mikrobiyal ve deoksiribonükleaz (DNase) kontaminasyonunu önleyin. Reaktifler ve kartuşlar kullanılmadan önce eldivenler değiştirilmelidir. Herhangi hedef amplikonlara sahip ortamın kontaminasyonunu önlemek için, kullandıktan sonra BD MAX PCR Cartridge'ı parçalarına ayırmayın. BD MAX PCR Cartridges'teki mühürler kontaminasyonu önleyecek şekilde tasarlanmıştır. Çapraz kontaminasyon riskinin en aza indirilmesi için laboratuvarda rutin olarak çevrenin izlenmesi gerekmektedir. BD MAX Extended Enteric Bacterial Panel'in örnek taşıması ve saklanması için önerilen süre ve sıcaklık aralıklarının dışına çıkması geçersiz sonuçlara neden olabilir. Belirtilen süre ve sıcaklık aralığı içinde yapılmayan testler tekrarlanmalıdır. Yerel, eyalet, bölgesel ve/veya federal veya sertifikasyon sağlayan kurumların gereklilikleri veya kılavuz ilkelere göre ek kontroller test edilebilir. Örnekleri daima bulaşıcı olabilirlermiş gibi ve CLSI Belgesi M29 7 'da ve Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories 8 te tanımlandığı şekilde güvenli laboratuvar prosedürlerine göre kullanın. Tüm reaktifleri kullanırken koruyucu giysiler ve tek kullanımlık eldivenler kullanın. Testi yaptıktan sonra ellerinizi iyice yıkayın. Ağzınızla pipetlemeyin. Numunelerin veya kit reaktiflerinin kullanıldığı yerlerde sigara içmeyin ve bir şey yemeyin ve içmeyin. Kullanılmamış reaktifleri ve atıkları ulusal, bölgesel ve yerel yönetmeliklere göre atın. Ek uyarılar, önlemler ve işlemler için BD MAX System Kullanıcı El Kitabına 9 başvurun. SAKLAMA VE STABİLİTE Koruyucu olmayan veya 15 ml Cary-Blair taşıma ortamında koruyucu içeren toplanan örnekler taşıma sırasında 2 C ila 25 C arasında saklanmalıdır. Aşırı sıcağa maruz kalmaya karşı koruyun. Örnekler test yapılmasından önce 2 8 C'de 120 saate kadar veya 2 25 C'de 24 saate kadar saklanabilir. BD MAX Extended Enteric Bacterial Panel Master Mix, 2 25 C'de belirtilen son kullanma tarihine kadar stabildir. Son kullanma tarihi geçmiş bileşenleri kullanmayın. BD MAX Extended Enteric Bacterial Panel Master Mix Tüpleri mühürlenmiş poşetlerde sağlanır. Ürünü nemden korumak için açtıktan hemen sonra tekrar mühürleyin. Master Mix tüpleri, poşetin ilk açılışından ve tekrar mühürlenmesinden sonra 2 25 C'de 14 güne kadar stabildir. Rekonstitüsyon Yapılmamış Master Mix tüpleri koruyucu poşetinden çıkarıldıktan sonra 24 saate kadar 2 25 C sıcaklıkta stabildir. 3

4 KULLANIM TALİMATLARI Örnek Toplama/Taşıma Yeterli bir örnek almak için örnek toplama işlemi yakından izlenmelidir. Kuru, temiz bir kap kullanılarak sıvı veya yumuşak gaita örnekleri şu işleme göre toplanır: 1. örnekler: Sıvı veya yumuşak dışkı örneklerini kuru, temiz bir kaba aktarın. Su veya idrar ile kontaminasyondan kaçının ve örneğin tuvalet kağıdı veya sabun ile karışmasından kaçının. Kabı etiketleyin ve laboratuvara kurumun standart işletim prosedürlerine göre taşıyın ( Saklama ve Stabilite kısmına bakın). 2. Cary-Blair koruyucu içeren örnekler: Sıvı veya yumuşak dışkı örneğini üreticinin talimatları uyarınca 15 ml taşıma aygıtına aktarın. Su veya idrar ile kontaminasyondan kaçının ve örneğin tuvalet kağıdı veya sabun ile karışmasından kaçının. Kabı etiketleyin ve laboratuvara kurumun standart işletim prosedürlerine göre taşıyın ( Saklama ve Stabilite kısmına bakın). Örnek Hazırlama NOT: Her bir numune ve External Control'ün (Harici Kontrol) test edilmesi için bir (1) Örnek Tampon Tüpü, bir (1) Septum Kapağı, iki (2) Master Mix Tüpü [bir tanesi BD MAX Enteric Bacterial Panel (B5) ve diğeri de BD MAX Extended Enteric Bacterial Panel'inden (D8)], bir (1) Ekstraksiyon Tüpü (B2) ve bir (1) Ünitize Reaktif Stribi gereklidir. Gereken sayıda malzemeyi koruyucu poşetlerinden veya kutularından çıkarın. Açılmış Master Mix veya Ekstraksiyon Tüpü torbalarını saklamak için fazla havayı çıkarın ve poşetleri fermuar şeklinde kapanan mührü kullanarak kapatın. 1. Barkodlanmış BD MAX Sample Buffer Tube'ü (saydam kapak) uygun örnek tanımlaması ile etiketleyin. 2B barkodu gizlemeyin, üzerine yazmayın veya etiket yapıştırmayın. 2. Koruyucu içermeyen veya Cary-Blair koruyucu içeren örnekleri 15 saniye boyunca yüksek hızda vorteksleyin. 3. Saydam kapağı Sample Buffer Tube'ten çıkarın ve aşağıdaki gibi inoküle edin: a. Tüm öze kısmı örneğe batana dek 10 μl tek kullanımlık bir inokülasyon özesi yerleştirin. Mil üzerindeki fazla dışkı PCR reaksiyonunu aşırı yükleyebileceği için özeden ötesini sokmayın; b. Yüklü özeyi Sample Buffer Tube e yerleştirin ve döndürme hareketi ile örneği çıkarın. NOT: Tüm örneğin özeden çıkarılmasına gerek yoktur. Ortaya çıkan Sample Buffer Tube çözeltisi renkli süzgeçten geçirilmelidir. 4. Septum Kapağı kullanarak inoküle edilen Sample Buffer Tube'ü tekrar kapaklayın. 5. Varsa, Sample Buffer Tube ü çok tüplü vorteks karıştırıcı ile uyumlu raka yerleştirin. (örn. kriyojenik flakon tutucu veya eşdeğeri). 6. Varsa test için ek örnekleri Adım 1 5'i tekrarlayarak hazırlayın. Ek örnekleri elinize almadan önce eldivenlerin temiz olduğundan emin olun. 7. Tüm hazırlanmış örnekleri aynı anda çoklu tüp vorteks karıştırıcı ile bir (1) dakika boyunca maksimum hızda vorteksleyin. 8. BD MAX System'da BD MAX Extended Enteric Bacterial Panel i test etmek için BD MAX System'ın Çalışması bölümüne ilerleyin. BD MAX System'ın Çalışması NOT: Ayrıntılı talimatlar için BD MAX System Kullanıcı Kılavuzu'na 9 bakın ( Çalıştırma bölümüne bakın). NOT: BD MAX Extended Enteric Bacterial Panel in testi yukarıdaki vorteksleme adımından hemen sonra yapılmalıdır (Örnek Hazırlama, Adım 7'ye bakın). Yeniden test etmek gerekirse örnekleri yeniden vorteksleyin. 1. BD MAX System'ın gücünü açın (daha önce yapılmadıysa) ve <user name> (kullanıcı adı) ve <password> (şifre) girerek oturum açın. 2. Reaktifler ve kartuşlar kullanılmadan önce eldivenler değiştirilmelidir. 3. BD MAX Enteric Bacterial Panel kitinden gerekli sayıda Ünitelendirilmiş Reaktif Stribi çıkarın. Her Ünitize Reaktif Stribini, tüm sıvıların tüplerin alt kısmında olmasını sağlayacak şekilde sert bir yüzeye hafifçe vurun. 4. Gereken sayıda malzemeyi koruyucu poşetlerinden çıkarın: a. BD MAX Enteric Bacterial Panel setindeki Ekstraksiyon ve Master Mix tüpleri. b. BD MAX Extended Enteric Bacterial Panel setindeki Master Mix tüpleri. 5. Fazla havayı çıkarın ve poşetleri fermuar şeklinde kapanan mühür ile kapatın. 6. Test edilecek her örnek için bir (1) Ünitelendirilmiş Reaktif Stribi BD MAX System Rack'a, Rak A Pozisyon 1 ile başlayarak yerleştirin. 7. Bir (1) Ekstraksiyon Tüpünü (B2) (beyaz folyo) Şekil 1'de gösterildiği gibi her Ünitelendirilmiş Reaktif Stribinde Pozisyon 1 içine tıklatarak oturun. 8. Bir (1) BD MAX Enteric Bacterial Panel Master Mix tüpünü (B5) (yeşil folyo) Şekil 1'de gösterildiği gibi her Ünitelendirilmiş Reaktif Stribinde Pozisyon 2 içine tıklatarak oturun. 9. Bir (1) BD MAX Extended Enteric Bacterial Panel Master Mix tüpünü (D8) (mavi folyo) Şekil 1'de gösterildiği gibi her Ünitelendirilmiş Reaktif Stribinde Pozisyon 4 içine tıklatarak oturun. 4

5 Şekil 1: BD MAX Enteric Bacterial Panel Ekstraksiyon tüpleri ve BD MAX Enteric Bacterial Panel ile BD MAX Extended Enteric Bacterial Panel Master Mix tüplerini Unitized Reagent Strip'lerine tıklatarak oturtun. 10. Run (Çalıştır) sekmesine ve ardından Inventory (Envanter) alt sekmesine tıklayın ve BD MAX Enteric Bacterial Panel için kit lot numarasını ve BD MAX Extended Enteric Bacterial Panel için ana karışım lot numarasını, barkodu tarayıcı ile tarayarak veya manuel olarak girin (lot izlenebilirliği için). NOT: Adım 10'i her yeni kit lotu kullanıldığında tekrarlayın. NOT: Bu test için 2000 Numune Modunun kullanılması zorunludur. Set lot numarası ile ana karışım lot numarasının Configuration/System (Yapılandırma/Sistem) sekmesinde seçili olduğundan emin olun. 11. Worklist'te (Çalışma Listesi) gezinin. Aşağı açılan menüyü kullanarak <BD MAX EX ENT BAC 26> öğesini seçin. 12. Açılır menüden uygun set lot numarasını (BD MAX Enteric Bacterial Panel'in dış kutusunda yazan) ve BD MAX Extended Enteric Bacterial Panel için ana karışım lot numarasını seçin. 13. Worklist'e (Çalışma Listesi) BD MAX Enteric Bacterial Panel Örnek Tampon tüpü Kimliği, Hasta Kimliği ve Erişim Numarasını (varsa) barkodu tarayıcıyla tarayarak veya manuel olarak girin. 14. Geriye kalan tüm Örnek Tampon Tüpleri için adım 13'ü tekrarlayın. 15. Örnek Tampon Tüplerini adım 6 ila 9'de belirtildiği gibi ilgili Ünitelendirilmiş Reaktif Striplerine karşılık gelen BD MAX System Rack'ler içine yerleştirin. NOT: Örnek Tampon Tüplerini, 1D barkod etiketleri dışarıya bakacak şekilde (böylece örnek kaydedilirken Örnek Tampon Tüpleri daha kolay taranabilir) örnek rafına yerleştirin. 16. BD MAX System'a gerekli sayıda BD MAX PCR Cartridge yerleştirin (bkz. Şekil 2). BD MAX Enteric Bacterial Panel ve BD MAX Extended Enteric Bacterial Panel aynı anda kullanılırken: Her bir MD MAX PCR Cartridge toplam 12 örnek için 12 adede kadar 1 çalışmayı alır. BD MAX System, her çalışma için BD MAX PCR Cartridge'da pozisyon ve sırayı otomatik olarak seçer. BD MAX PCR Kartuşları çalışmaya göre VE raka göre temelinde kullanılır (kartuş başına 1 çalışma ve raf başına 1 kartuş). BD MAX PCR Kartuşlarının kullanımını maksimuma çıkarmak için, 2000 Sample Mode'u kullanarak, şerit atamaları için Worklist (Çalışma listesi) sekmesinin altında Run Wizard'ı (Sihirbazı Yürüt) seçin. Daha fazla ayrıntı için BD MAX System Kullanıcı El Kitabına 9 başvurun. Şekil 2: BD MAX PCR Cartridge'larını Yükleyin 5

6 17. Rakı/rakları BD MAX System'e yükleyin (bkz. Şekil 3). A Tarafı B Tarafı Şekil 3: Rafı/rafları BD MAX System'a yükleyin. 18. BD MAX System kapağını kapatın ve işleme başlamak için <Start > (Başlat) öğesine tıklayın. 19. Çalışma sonunda, sonuçları hemen kontrol edin veya Sample Buffer Tube leri 2 8 C'de 5 güne (120 saate) kadar VEYA 25 ± 2 C'de sonuçlar kontrol edilinceye kadar maksimum 48 saat saklayın. NOT: Bir çalışma sırasında bir septum kapağı hasar görmüşse örneği saklamadan önce yenisiyle değiştirin. NOT: Hazırlanmış BD MAX Enteric Bacterial Panel Örnek Tampon Tüpleri, 2 8 C'de maksimum 120 saat (5 gün) VEYA 25 ± 2 C'de maksimum 48 saat saklanabilir. Bir IND (Belirsiz), UNR (Çözümlenmemiş) veya INC (Eksik) sonuç elde edildiğinde veya bir External Control (Harici Kontrol) hatası oluştuğunda bu zaman çerçevesi içinde hazırlanan Sample Buffer Tube'ten bir test tekrarı yapılmalıdır ( Tekrar Test Prosedürü kısmına bakın). KALİTE KONTROLÜ Kalite kontrol prosedürleri test performansını izler. Laboratuvarlar, tüm analitik sürecin etkililiğini izlemek için yerel, bölgesel, eyalet, ulusal ve/veya ülke yönetmeliklerinin ya da sertifikasyon sağlayan kurumların kılavuz ilkelerine veya gerekliliklerine göre kontrol malzemelerinin sayısını, türünü ve test edilme sıklığını ortaya koymalıdır. Genel Kalite Kontrolü rehberliği için, kullanıcı Klinik Laboratuvar Standartları Enstitüsü belgeleri MM3 10 ve EP12'ye. 11 başvurmak isteyebilir External Control (Harici Kontrol) materyallerini BD sağlamaz. BD MAX System yazılımında örnek test sonucunu yorumlamak amacıyla Harici Pozitif veya Negatif Kontroller kullanılmaz. External Control'ler (Harici Kontroller) hasta örnekleriymiş gibi ele alınır. (External Control (Harici Kontrol) test sonuçlarının yorumlanması için bkz. Tablo 2.) 2. Bir (1) Harici Pozitif Kontrol ve bir (1) Harici Negatif Kontrol her bir laboratuvar düzeninde BD MAX System'de yeterli işlem doğrulama elde edilinceye kadar en azından günlük olarak çalışılmalıdır. Kontrol testinin azaltılmış sıklığı ilgili yönetmeliklere uygun olmalıdır. 3. Harici Pozitif Kontrol, önemli reaktif hatalarını izlemek üzere tasarlanmıştır. Harici Negatif Kontrol hedef nükleik asitlerle ayıraç veya çevresel kontaminasyonu (veya taşımayı) saptamak üzere tasarlanmıştır. 4. Kullanıcının laboratuvar kalite kontrol programı için en uygun kontrolü seçmesini mümkün kılmak üzere çeşitli tiplerde harici kontroller önerilir. a. Harici Negatif Kontrol: Ticari olarak temin edilebilir kontrol malzemesi veya negatif olduğu bilinen önceden karakterize edilen örnek. BD, kontrol preparatının sonucu olarak kontaminasyon potansiyelini azaltmak için Harici Negatif Kontrol'ün Harici Pozitif Kontrol'den önce hazırlanmasını önerir. b. Harici Pozitif Kontrol: Aşağıda listelenen (Tablo 1'e başvurun) ATCC suşları gibi ticari olarak temin edilebilir kontrol malzemeleri veya pozitif olduğu bilinen önceden karakterize edilen örnekler. Harici Pozitif Kontrol Suşu Yersinia enterocolitica (ATCC 9610) Vibrio cholerae (ATCC 14033) Vibrio parahaemolyticus (ATCC 17802) ETEC (ATCC 35401) Plesiomonas shigelloides (ATCC 14029) Tablo 1: Harici Pozitif Kontrol için Ticari Olarak Temin Edilebilir Suşlar Kültür Koşulu Triptikaz Soya Agarı %5 Koyun Kanı ile 35 C'de saat 0.5 McFarland Son Seyreltimi (1x10 8 CFU/mL) 1,1 x 10 5 CFU/mL 1,3 x 10 5 CFU/mL 6,2 x 10 4 CFU/mL 6,9 x 10 4 CFU/mL 1,3 x 10 5 CFU/mL 6

7 External Control (Harici Kontrol) süspansiyonunun hazırlanması için, izolatların salin solüsyonda 0.5 McFarland (~1 x 10 8 CFU/mL) turbiditede yeniden süspanse edilmesi önerilir. Tablo 1'de belirtilen konsantrasyonda bir süspansiyon elde etmek için salin çözeltisi içerisinde seri seyreltimler gerçekleştirin. Bakteriyel süspansiyonun 10 μl'si ilgili Örnek Tampon Tüpüne inoküle edin. Örnek gibi işleme koyun ve test edin (Örnek Hazırlama ve BD MAX System'ın çalışma kısımlarına bakın). 5. Tüm External Control'ler (Harici Kontroller) beklenen sonuçları vermeli (Harici Pozitif Kontrol için pozitif, Harici Negatif Kontrol için negatif) ve hiç başarısız harici kontrol olmamalıdır (Çözümlenmemiş, Belirlenmeyen veya Eksik sonuçlar). 6. Pozitif test sonucu veren bir Harici Negatif Kontrol örnek kullanımına ve/veya kontaminasyon olayına işaret eder. Karışmayı ve/ veya kontaminasyonu engellemek için örnek kullanım tekniğini gözden geçirin. Negatif bir sonuç veren bir Harici Pozitif Kontrol bir numune muamelesi/hazırlık problemine işaret eder. Örnek kullanım/hazırlık tekniğini gözden geçirin. 7. Çözümlenmemiş, Belirsiz veya Eksik test sonucu veren bir External Control (Harici Kontrol), bir reaktif veya BD MAX System hatasına işaret eder. BD MAX System monitörünü herhangi bir hata mesajı açısından kontrol edin. Uyarı ve hata kodlarının yorumlanması için BD MAX System Kullanıcı El Kitabında 9 Sistem Hata Özeti kısmına başvurun. Problem devam ederse açılmamış bir poşetten reaktifler kullanın veya yeni bir BD MAX Enteric Bacterial Panel ve BD MAX Extended Enteric Bacterial Panel setleri kullanın. 8. Her BD MAX Enteric Bacterial Panel Ekstraksiyon Tüpü bir sentetik hedef DNA dizisi içeren bir plazmid olan bir Örnek İşleme Kontrolü içerir. Testin öngörüsünü sağlayarak, işlenen numunede bulunan DNA ile birlikte Örnek İşleme Kontrolü çıkarılır, yerleştirilir ve amplifiye edilir. Örnek İşleme Kontrolü, örnek işleme adımları sırasında DNA yakalama, yıkama ve DNA elüsyonunun etkinliğini ve ayrıca PCR analizi sırasında DNA hedef amplifikasyonu ve saptamanın etkinliğini izler. Sample Processing Control (Örnek İşleme Kontrolü) sonucu kabul kriterlerini karşılayamazsa, örnek sonucu Çözülmemiş olarak rapor edilir; ancak, tüm pozitif (POS) test kiti sonuçları rapor edilir ve hiçbir hedef negatif (NEG) olarak adlandırılmaz. Bu Master Mix başına rapor edilecektir. Çözümlenmemiş bir sonuç örnekle ilişkili inhibisyon veya reaktif hatasına işaret eder. Çözümlenmemiş olarak bildirilen herhangi bir örneği aşağıdaki Tekrar Test Prosedürü kısmına göre tekrarlayın. SONUÇLARIN YORUMLANMASI Sonuçlar BD MAX System monitöründe <Results> (Sonuçlar) penceresinde <Results> (Sonuçlar) sekmesinde bulunur. BD MAX System yazılımı otomatik olarak test sonuçlarını yorumlar. Sonuçlar analitlerin her biri için ve Örnek İşleme Kontrolü için raporlanır. Bir test sonucu hedef ve Örnek İşleme Kontrolünün amplifikasyon durumu temelinde NEG (negatif), POS (pozitif) veya UNR (çözümlenmemiş) olarak belirtilebilir. IND (Belirsiz) veya INC (Eksik) sonuçlar BD MAX System hatasından kaynaklanır. Kısmi UNR durumunda, bir veya daha fazla hedef bir POS sonucuna sahip olduğunda ve diğer hedefler UNR sonucuna sahip olduğunda, hiçbir hedef NEG olarak adlandırılmaz. Bu Master Mix başına rapor edilecektir. Sonuçlarının yorumlanması için BD MAX Enteric Bacterial Panel Prospektüsüne bakın. BD MAX Extended Enteric Bacterial Panel sonuç yorumlama aşağıda Tablo 2 de açıklanmaktadır. Tablo 2: BD MAX Extended Enteric Bacterial Panel sonuç yorumlama BİLDİRİLEN TEST SONUCU SONUCUN YORUMLANMASI Plesio POS Plesiomonas shigelloides DNA saptandı Vibrio POS Vibrio (V. vulinificus, V. parahaemolyticus ve/veya V. cholerae) DNA saptandı ETEC POS Enterotoksijenik E. coli (ETEC) Isıya duyarlı ve/veya ısıya dayanıklı (LT/ST) DNA saptandı Yersi POS Yersinia enterocolitica DNA saptandı Plesio NEG Plesiomonas shigelloides DNA'sı saptanmadı ve Örnek İşleme Kontrolü saptandı Vibrio NEG Vibrio (V. vulinificus, V. parahaemolyticus ve V. cholerae) DNA'sı saptanmadı Örnek İşleme Kontrolü saptandı ETEC NEG Enterotoksijenik E. coli (ETEC) Isıya duyarlı ve/veya ısıya dayanıklı (LT/ST) DNA saptanmadı ve Örnek İşleme Kontrolü saptandı Yersi NEG Yersinia enterocolitica DNA'sı saptanmadı ve Örnek İşleme Kontrolü saptandı Plesio UNR Plesiomonas shigelloides DNA'sı saptanmadı ve Örnek İşleme Kontrolü saptanmadı (inhibitör örnek veya reaktif başarısızlığı göstergesi) Vibrio UNR Vibrio (V. vulinificus, V. parahaemolyticus ve V. cholerae) DNA'sı saptanmadı ve Örnek İşleme Kontrolü saptanmadı (inhibitör örnek veya reaktif başarısızlığı göstergesi) ETEC UNR Enterotoksijenik E. coli (ETEC) Isıya duyarlı ve/veya ısıya dayanıklı (LT/ST) DNA saptanmadı ve Örnek İşleme Kontrolü saptanmadı (inhibitör örnek veya reaktif başarısızlığı göstergesi) Yersi UNR Yersinia enterocolitica DNA'sı saptanmadı ve Örnek İşleme Kontrolü saptanmadı (inhibitör örnek veya reaktif başarısızlığı göstergesi) Belirsiz (IND) BD MAX System başarısızlığı nedeniyle belirsiz (Uyarı veya Hata Kodları ile a ) Eksik (INC) Tamamlanmamış Çalışma (Uyarı veya Hata Kodları ile a ) a Uyarı ve hata kodlarının yorumlanması için BD MAX System Kullanıcı Kılavuzu'nun 9 Sorun Giderme kısmına başvurun. 7

8 TEKRAR TEST PROSEDÜRÜ NOT: Örnek hacmi nedeniyle, Sample Buffer Tube'ten bir tekrar testi yapılması için yeterli hacim mevcuttur. 25 ± 2 C'de saklanan Sample Buffer Tube ler için tekrar test örnekle ilk Sample Buffer Tube inokülasyonunun ardından 48 saat içinde yapılmalıdır. Alternatif olarak 2 8 C'de saklanan Sample Buffer Tube ler için tekrar test örnekle ilk Sample Buffer Tube inokülasyonunun ardından 120 saat (5 gün) içinde yapılabilir. Kalan gaita örneği de 2 8 C'de saklanırsa alındıktan sonraki 5 gün veya 2 ± 25 C'de saklanırsa 120 saat (5 gün) içinde tekrar test için kullanılabilir. NOT: Yeni örnekler tekrar örneklerle aynı çalışmada test edilebilir. Çözümlenmemiş Sonuç Çözümlenmemiş sonuçlar, örnekle ilişkili inhibisyon veya reaktif başarısızlığı, uygun hedef veya Örnek İşleme Kontrolü amplifikasyonunu önlerse alınabilir. Örnek İşleme Kontrolü belirginleşmezse, örnek Çözümlenmemiş olarak rapor edilir, tüm pozitif (POS) test kiti sonuçları rapor edilir ve tüm diğer hedefler UNR olarak adlandırılır. BD MAX System her bir hedef için sonuçları ayrı ayrı raporlar ve bir veya daha fazla BD MAX Enteric Bacterial Panel veya BD MAX Extended Enteric Bacterial Panel hedefi için UNR sonucu edinilebilir. Eksiksiz bir UNR durumunda, tüm hedefler bir UNR sonucuna sahip olduğunda, testin tekrarlanması gereklidir. Kısmi BD MAX Extended Enteric Bacterial Panel UNR sonucu durumunda, bir veya daha fazla hedef bir POS sonucuna sahip olduğunda ve diğer tüm hedefler UNR sonucuna sahip olduğunda, testin yukarıda açıklandığı gibi tekrarlanmalıdır. Kısmi BD MAX Enteric Bacterial Panel UNR sonucu durumunda, bir veya daha fazla hedef bir POS sonucuna sahip olduğunda ve diğer tüm hedefler UNR sonucuna sahip olduğunda, testin BD MAX Enteric Bacterial Panel Prospektüsü nde açıklandığı gibi tekrarlanmalıdır. Nadir durumlarda, tekrarlanan bir test ilk olarak POS olarak bildirilmiş hedefler için yürütüldüğünde tutarsız sonuçlar gözlemlenebilir. Bu durumda herhangi pozitif sonuç tutulabilir. Örnekler, yukarıda tanımlanan zaman dilimlerinde ilgili Örnek Tampon Tüpleriyle tekrarlanabilir. Örneği/örnekleri bir (1) dakika boyunca vorteksleyin ve BD MAX System'ın Çalışması kısmını izleyerek tekrar başlayın. Kalan gaita örneği, yukarıda belirtilen zaman çerçeveleri içinde yeni bir Sample Buffer Tube ile tekrar test için de kullanılabilir. Örnek Hazırlama kısmından tekrar başlayın. Belirsiz Sonuç Belirsiz sonuçlar, bir Sistem hatası olması durumunda alınabilir. Örnekler, yukarıda tanımlanan zaman dilimlerinde ilgili Örnek Tampon Tüpleriyle tekrarlanabilir. Örnekleri bir (1) dakika boyunca vorteksleyin ve BD MAX System'ın Çalışması bölümünü izleyerek tekrar başlayın. Kalan gaita örneği, yeni bir Sample Buffer Tube ile yukarıda belirtilen zaman çerçeveleri içinde tekrar test için de kullanılabilir. Örnek Hazırlama kısmından tekrar başlayın. Uyarı veya hata kodu mesajlarının yorumlanması için BD MAX System Kullanıcı Kılavuzu'na 9 bakın ( Sorun Giderme bölümüne başvurun). Eksik Sonuç Eksik sonuçlar, Örnek Hazırlama veya PCR tamamlanamazsa alınabilir. Örnekler, yukarıda tanımlanan zaman dilimlerinde ilgili Örnek Tampon Tüpleriyle tekrarlanabilir. Örnekleri bir (1) dakika boyunca vorteksleyin ve BD MAX System'ın Çalışması kısmını izleyerek tekrar başlayın. Kalan gaita örneği, yeni bir Sample Buffer Tube ile yukarıda belirtilen zaman çerçeveleri içinde tekrar test için de kullanılabilir. Örnek Hazırlama kısmından tekrar başlayın. Uyarı veya hata kodu mesajlarının yorumlanması için BD MAX System Kullanıcı Kılavuzu'na 9 bakın ( Sorun Giderme bölümüne başvurun). External Control (Harici Kontrol) Hatası External Control'ler (Harici Kontroller) test edildiklerinde beklenen sonuçlar vermelidir. Örneklerin hatalı bir Harici Kontrol sonucu nedeniyle tekrarlanması gerekirse, Örnek Tampon Tüplerinden taze hazırlanmış Harici Kontroller ile birlikte yukarıda tanımlanan zaman çerçeveleri içinde tekrarlanmaları gerekir. Örnekleri bir (1) dakika boyunca vorteksleyin ve BD MAX System'ın Çalışması bölümünü izleyerek tekrar başlayın. ÖRNEKLERDEN KÜLTÜR ALINMASI Pozitif örneklerden organizmaların kültürü ve tanımlanması laboratuvar prosedürleri uyarınca yapılmalıdır. PROSEDÜRÜN KISITLI OLDUĞU ALANLAR Bu ürün yalnızca BD MAX System üzerinde ve BD MAX Enteric Bacterial Panel ile birlikte kullanılmalıdır. BD MAX Enteric Bacterial Panel e özel kısıtlamalar için BD MAX Enteric Bacterial Panel Prospektüsüne bakın. Bu ürün sadece koruyucu içermeyen ve Cary-Blair koruyucu içeren insan dışkı örnekleri ile kullanılmak içindir. Rektal swablardan veya sabit dışkılardan alınan dışkı örnekleri BD MAX Extended Enteric Bacterial Panel ile valide edilmemiştir. Hatalı sonuçların nedeni uygunsuz örnek toplama, muamele, saklama, teknik hata, örnek karışması veya örnekteki organizma sayısının testin analitik duyarlılığının altında olması olabilir. BD MAX Extended Enteric Bacterial Panel sonucu IND, INC veya UNR (bir veya daha fazla hedef için) ise, bu durumda test tekrar edilmelidir. Bir BD MAX Extended Bacterial Panel pozitif sonucu canlı organizmaların mutlaka bulunduğu anlamına gelmez. Ancak hedef DNA varlığına işaret eder. Primer veya prob bağlayıcı bölgelerdeki mutasyonlar veya polimorfizmler yeni veya bilinmeyen hedef varyantlarının saptanmasını etkileyebilir ve BD MAX Extended Enteric Bacterial Panel testi ile yalancı negatif bir sonuç verebilir. BD MAX Extended Enteric Bacterial Panel eş zamanlı olarak Vibrio vulnificus, V. parahaemolyticus, ve V. cholerae saptar ve türler arasında ayrıştırma yapmaz. Tüm PCR tabanlı testlerde olduğu gibi testin LoD (Saptama Sınırı) altında çok düşük hedef düzeyleri saptanabilir ama sonuçlar tekrar edilemeyebilir. 8

9 Yanlış negatif sonuçlar örneklerin yetersiz toplanması, taşınması veya saklanması sonucunda nükleik asit kaybı veya yetersiz bakteriyel bakteriyel lizis nedeniyle oluşabilir. Örnek İşleme Kontrolü teste PCR amplifikasyonu inhibitörleri içeren örneklerin tanımlanmasına yardımcı olmak üzere, bir bütün halinde reaktif entegrasyonu ve test sisteminin kontrolü olarak eklenmiştir. Örnek İşleme Kontrolü nükleik asidin örneklerin yetersiz toplanması, taşınması veya saklanması nedeniyle kaybedilip kaybedilmediğini veya bakteriyel hücrelerin yetersiz lizise uğrayıp uğramadığını belirtmez. BD MAX Extended Enteric Bacterial Panel sonuçları doktorun elindeki diğer bilgiler ve klinik gözlemlerle birlikte kullanılmalıdır. Tüm in vitro diyagnostik testlerle olduğu gibi pozitif ve negatif prediktif değerler prevalansa yüksek ölçüde bağlıdır. BD MAX Extended Enteric Bacterial Panel performansı prevalansa ve test edilen popülasyona göre değişebilir. BD MAX Extended Enteric Bacterial Panel sonuçları hedef varlığını azaltabilecek eş zamanlı tıbbi tedaviden etkilenebilir veya etkilenmeyebilir. Sample Buffer Tube organizmanın canlılığını desteklemek üzere tasarlanmamıştır. Kültür gerekliyse orijinal örnekten gerçekleştirilmelidir. Bu testin performansı Yersinia enterocolitica, Plesiomonas shigelloides, ETEC LT/ST, Vibrio cholerae, V. parahaemolyticus veya V. vulnificus enfeksiyonlarının izlenmesi için tesis edilmemiştir. Bu test kalifiye bir testtir ve kuantitatif değerler sağlamaz veya mevcut organizmaların miktarını göstermez. Bu testin performansı immünolojik olarak engelli kişiler için veya gastrointertinal enfeksiyon semptomu olmayan hastalar için değerlendirilmemiştir. Müdahale eden maddelerin etkisi yalnızca bu etikette listelenenler için değerlendirilmiştir. Olası interferans, İnterferans bölümünde açıklanan maddeler hariç diğer maddeler için değerlendirilmemiştir. Aşağıdaki interferans bölümünde açıklanan maddeler hariç diğer maddelerin interferansı hatalı sonuçlar doğurabilir. İnsanlarda enfeksiyonla ilişkili V. mimicus ve bir kategorize edilmemiş Vibrio türü, yani Vibrio HENC'nin BD MAX Extended Enteric Bacterial Panel ile çapraz reaksiyona girme potansiyeli olduğu gösterilmiştir. Analitik Spesifite bölümünde listelenenler dışındaki organizmalarla çapraz reaktivite değerlendirilmemiştir. BEKLENEN DEĞERLER BD MAX Extended Enteric Bacterial Panel çalışmasındaki bildirilebilir sonuçlar, coğrafi olarak farklı altı (6) klinik merkezden elde edilmiştir. Çalışma, iki gaita örneği türüyle yapılmıştır; Cary-Blair korumalı ve korumasız. BD MAX Extended Enteric Bacterial Panel çalışmasında belirlendiği şekliyle hedef başına pozitif vakaların sayısı ve yüzdesi Tablo 3'te sunulmuştur. Tablo 3. Çalışma Merkezi başına BD MAX Extended Enteric Bacterial Panel Pozitivitesi Örnek Türü Tesis Vibrio P. shigelloides Y. enterocolitica ETEC Cary-Blair Korunan 1 %0,3 (1/302) %0,0 (0/302) %0,3 (1/302) %1,0 (3/302) 2 %0,5 (3/635) %0,2 (1/635) %0,2 (1/635) %0,3 (2/635) 3 %6,7 (1/15) %6,7 (1/15) %6,7 (1/15) %0,0 (0/15) 4 %0,5 (2/413) %0,2 (1/413) %0,0 (0/413) %1,9 (8/413) 1 %0,0 (0/58) %0,0 (0/58) %0,0 (0/58) %0,0 (0/58) 3 %0,3 (1/295) %0,0 (0/295) %0,0 (0/295) %1,0 (3/295) 4 %0,0 (0/1) %0,0 (0/1) %0,0 (0/1) %0,0 (0/1) 5 %0,3 (1/301) %0,3 (1/301) %0,0 (0/301) %3,0 (9/302) 6 %0,0 (0/217) %0,0 (0/217) %0,0 (0/217) %2,3 (5/217) PERFORMANS ÖZELLİKLERİ BD MAX Extended Enteric Bacterial Panel in klinik performans özellikleri çok merkezli bir araştırma çalışmasında belirlenmiştir. Çalışma, dışkı örneklerinin rutin hasta bakımının parçası olarak toplandığı, deneye katıldığı ve BD MAX Extended Enteric Bacterial Panel ile test edildiği, coğrafi olarak farklı, toplam altı (6) klinik merkezi içermiştir. Örnekler dışkı kültürünün bir sağlık hizmetleri sağlayıcısı tarafından istendiği, akut bakteriyel gastroenterit, enterit veya kolitten şüphelenilen pediyatrik veya yetişkin hastalardan alınmıştır. Taze ve dondurulmuş prospektif örneklerde Yersinia enterocolitica, Vibrio ve Plesiomonas shigelloides tanımlaması için referans yöntem, görünüşe ve alternatif PCR testi ve kesin tanı için potansiyel koloniler üzerinde yapılan çift yönlü sekanslama işlemiyle devam eden oksidaz testine dayanan potansiyel kolonileri tanımlamak için kültür besiyerinde büyütülür. ETEC için karşılaştırma yöntemi, dışkı örnekleri üzerinde uygulanan iki alternatif PCR testi ve ardından çift yönlü sekanslamadır. Retrospektif örnekler için, geçmiş sonuçları toplama tesisinde kaydedilmiştir. Geçmiş sonuçları alternatif PCR testi ve hedef DNA nın varlığını onaylamak üzere kompozit karşılaştırma yönteminin parçası olarak iki yönlü sekanslama kullanılarak onaylanmıştır. Kaydolan toplam örnek arasından prospektif örnek (882 korunmayan ve Cary-Blair korunan) ve 146 retrospektif örnek (87 korunmayan ve 59 Cary-Blair korunan) klinik değerlendirmeye katılmıştır. BD MAX Extended Enteric Bacterial Panel ve karşılaştırma yönteminden alınan tüm test sonuçları tek sonuçlardı; hiç ko-enfeksiyon tespit edilmemişti. Tablo 4'te toplamda uygun örnek için hasta yaşına ve örnek türüne göre katılan uyumlu örneklerin sayısı açıklanmaktadır. Tablo 5 ila 13 boyunca klinik deney sırasında gözlemlenen, BD MAX Extended Enteric Bacterial Panel'in performans özellikleri açıklanmaktadır. 9

10 Tablo 4. Yaş Grubuna ve Örnek Tipine Göre Uyumlu Klinik Deney Kayıt Özeti Yaş Grubu Cary-Blair korunan Toplu 0 1 ay aydan 2 yıla Üzeri Unknown (Bilinmeyen) Toplam Vibrio Performans Sonuçları Cary-Blair korunan örnek tipi için, BD MAX Extended Enteric Bacterial Panel sırasıyla % ve %99,6 Vibrio prospektif pozitif ve negatif örnek, ve % retrospektif pozitif ve negatif örnek tanımlamıştır. örnek tipi için, BD MAX Extended Enteric Bacterial Panel Vibrio negatif örneklerin %99,8'ini tanımlamıştır. Vibrio için herhangi bir korunmayan prospektif pozitif bulunmamıştır, dolayısıyla performans tahmini yapılmamıştır. Retrospektif pozitif ve negatif örneklerin sırasıyla %'ü ve %97,8'i tanımlanmıştır (bkz. Tablo 5). Vibrio prevalansı düşük olduğundan, çalışmada toplanan verileri desteklemek için, bulunan örneklerin değerlendirmesi yapılmıştır. Bunlar, negatif dışkı matriksinde BD MAX Extended Enteric Bacterial Panel ile saptanan her bir Vibrio türü için 4 farklı suşun güçlendirilmesiyle hazırlanmıştır. Suşlar, çeşitli klinik olarak önemli yüklerde güçlendirilmiş ve BD MAX Extended Enteric Bacterial Panel testi için üç (3) klinik çalışma tesisi arasında rastgele dağıtılmıştır. Test edilen yükler arasında % pozitif benzerlik elde edilmiştir. Sonuçlar Tablo 6 de gösterilmiştir. Tablo 5. Vibrio Genel Performansı Örnek Türü Örnek Kökeni BD MAX Cary-Blair korunan Cary-Blair korunan Prospektif (Taze+Dondurulmuş) Pozitif Referans Yöntem Negatif Toplam P N Toplam Pozitif Yüzde Anlaşması : % (%34,2, %) Negatif Yüzde Anlaşması : %99,6% (%99,1, %99,8) Retrospektif (Dondurulmuş) P N Toplam Pozitif Yüzde Anlaşması : % (%34,2, %) Negatif Yüzde Anlaşması : %% (%80,6, %) Prospektif (Taze+Dondurulmuş) P N Toplam Pozitif Yüzde Anlaşması Hesaplaması için Veri Yok Negatif Yüzde Anlaşması : %99,8 (%99,2, %99,9) Retrospektif (Dondurulmuş) P N Toplam Pozitif Yüzde Anlaşması : % (%34,2, %) Negatif Yüzde Anlaşması : %97,8 (%88,7, %99,6) BD MAX Extended Enteric Bacterial Panel V. paraheamoliticus, V. cholerae ve V. vulnificus türlerini saptamak için tasarlanmışken, panel, sonuçları tür seviyesine bildirmez. Vibrio tür tanımlaması, referans yöntemi varsayılan pozitif izolat varlığından yapılan alternatif PCR testinin sekanslamasıyla elde edilmiştir. Çalışma sırasında eşit sayıda V. cholerae ve V. parahaemoliticus elde edilmiş olup hiç V. vulnificus elde edilmemiştir. Üç (3) V. parahaemoliticus ve (3) V. cholerae elde edilmiştir. 10

11 Tablo 6. Örnek Tipi Başına Vibrio için Bulunan Örnek Sonuçları Örnek Türü Cary-Blair korunan BD MAX Pozitif Beklenen Sonuç Negatif Toplam P N Toplam Pozitif Yüzde Anlaşması: % (%92,6, %) Negatif Yüzde Anlaşması: % (%97,4, %) P N Toplam Pozitif Yüzde Anlaşması: % (%92,6, %) Negatif Yüzde Anlaşması: % (%97,4, %) Plesiomonas shigelloides Performans Sonuçları Cary-Blair korunan örnek tipi için, BD MAX Extended Enteric Bacterial Panel, Plesiomonas shigelloides prospektif negatif örneklerinin %99,9'unu ve retrospektif pozitif ve negatif örneklerin %'ünü tanımlamıştır. Cary-Blair prospektif pozitif P. shigelloides tanımlanmamıştır, dolayısıyla performans tahmini yapılmamıştır. örnek tipi için, BD MAX Extended Enteric Bacterial Panel P. shigelloides negatif örneklerin %99,9'unu tanımlamıştır. Prospektif pozitif P. shigelloides tanımlanmamıştır, dolayısıyla performans tahmini yapılmamıştır. Retrospektif pozitif ve negatif örneklerin sırasıyla %'ü ve %97,9'i tanımlanmıştır (bkz. Tablo 7). P. shigelloides prevalansı düşük olduğundan, çalışmada toplanan verileri desteklemek için, bulunan örneklerin değerlendirmesi yapılmıştır. Bunlar, 12 farklı P. shigelloides suşu negatif dışkı matrikslerinde güçlendirilerek hazırlanmıştır. Suşlar, çeşitli klinik olarak önemli yüklerde güçlendirilmiş ve BD MAX Extended Enteric Bacterial Panel testi için üç (3) klinik çalışma tesisi arasında rastgele dağıtılmıştır. Test edilen yükler arasında % pozitif benzerlik elde edilmiştir. Sonuçlar Tablo 8 de gösterilmiştir. Tablo 7. Plesiomonas shigelloides Genel Performans Örnek Türü Örnek Kökeni BD MAX Cary-Blair Korunan Cary-Blair Korunan Prospektif (Taze+Dondurulmuş) Pozitif Yüzde Anlaşması Hesaplaması için Veri Yok Negatif Yüzde Anlaşması: %99,9 (%99,5%, %) Retrospektif (Dondurulmuş) Pozitif Yüzde Anlaşması: % (%51, %) Negatif Yüzde Anlaşması: % (%90,8, %) Prospektif (Taze+Dondurulmuş) Pozitif Yüzde Anlaşması Hesaplaması için Veri Yok Negatif Yüzde Anlaşması: %99,9 (%99,3%, %) Retrospektif (Dondurulmuş) Pozitif Yüzde Anlaşması: % (%43,9, %) Negatif Yüzde Anlaşması: %97,9 (%88,9, %99,6) Pozitif Referans Yöntem Negatif Toplam P N P N P N P N

12 Tablo 8. Örnek Tipi Başına Plesiomonas shigelloides için Bulunan Örnek Sonuçları Örnek Türü Cary-Blair Korunan BD MAX Pozitif Beklenen Sonuç Negatif Toplam Pozitif Negatif Toplam Pozitif Yüzde Anlaşması: % (%92,6, %) Negatif Yüzde Anlaşması: % (%97,4, %) Pozitif 48 1 a 49 Negatif Toplam Pozitif Yüzde Anlaşması: % (%92,6, %) Negatif Yüzde Anlaşması: %99,3 (%96,2, %99,9) a Örnek XW0007C başlangıçta Plesiomonas shigelloides için pozitif bulunmuş ancak SBT'den (Örnek Tampon Tüpü) tekrar test edildiğinde (Tutarsız analiz) bu hedef için negatif bulunmuştur. Yersinia enterocolitica Performans Sonuçları Cary-Blair korunan örnek tipi için, BD MAX Extended Enteric Bacterial Panel, Yersinia enterocolitica prospektif negatif örneklerinin %99,9'unu ve retrospektif negatif örneklerin %'ünü tanımlamıştır. Cary-Blair prospektif pozitif ve retrospektif pozitif Y. enterocolitica tanımlanmamıştır, dolayısıyla performans tahmini yapılmamıştır. örnek tipi için, BD MAX Extended Enteric Bacterial Panel Y. enterocolitica negatif prospektif örneklerin %'unu tanımlamıştır. Prospektif pozitif Y. enterocolitica tanımlanmamıştır, dolayısıyla performans tahmini yapılmamıştır. Retrospektif pozitif ve negatif örneklerin %'ü tanımlanmıştır (bkz. Tablo 9). Y. enterocolitica prevalansı düşük olduğundan, çalışmada toplanan verileri desteklemek için, bulunan örneklerin değerlendirmesi yapılmıştır. Bunlar, 12 farklı Y. enterocolitica suşu negatif dışkı matrikslerinde güçlendirilerek hazırlanmıştır. Suşlar, çeşitli klinik olarak önemli yüklerde güçlendirilmiş ve BD MAX Extended Enteric Bacterial Panel testi için üç (3) klinik çalışma tesisi arasında rastgele dağıtılmıştır. %97,9 anlaşma elde edilen klinik yükteki bir Cary-Blair korunan örnek tipi hariç test edilen yüklerde % pozitif anlaşma elde edilmiştir (Sonuçlar Tablo 10'da verilmiştir). Tablo 9. Yersinia enterocolitica Genel Performans Örnek Türü Örnek Kökeni BD MAX Cary-Blair Korunan Cary-Blair Korunan Prospektif (Taze+Dondurulmuş) Pozitif Yüzde Anlaşması Hesaplaması için Veri Yok Negatif Yüzde Anlaşması: %99,9 (%99,6%, %) Retrospektif (Dondurulmuş) Pozitif Yüzde Anlaşması Hesaplaması için Veri Yok Negatif Yüzde Anlaşması: % (%89,3%, %) Prospektif (Taze+Dondurulmuş) Pozitif Yüzde Anlaşması Hesaplaması için Veri Yok Negatif Yüzde Anlaşması: % (%99,6%, %) Retrospektif (Dondurulmuş) Pozitif Yüzde Anlaşması: % (%70,1, %) Negatif Yüzde Anlaşması: % (%92,4, %) Pozitif Referans Yöntem Negatif Toplam P N P N P N P N

13 Tablo 10. Örnek Tipi Başına Yersinia enterocolitica için Bulunan Örnek Sonuçları Örnek Türü Cary-Blair Korunan BD MAX Pozitif Beklenen Sonuç Negatif Toplam Pozitif Negatif 1 a Toplam Pozitif Yüzde Anlaşması: %97,9 (%89,1, %99,6) Negatif Yüzde Anlaşması: % (%97,4, %) Pozitif Negatif Toplam Pozitif Yüzde Anlaşması: % (%92,6, %) Negatif Yüzde Anlaşması: % (%97,4, %) a Örnek XW0351C başlangıçta Yersinia enterocolitica için negatif bulunmuş ancak SBT'den tekrar test edildiğinde (Tutarsız analiz) bu hedef için pozitif bulunmuştur. Enterotoxigenic E. coli (ETEC LT/ST) Performans Sonuçları Cary-Blair korunan örnek tipi için, BD MAX Extended Enteric Bacterial Panel sırasıyla % ve %99,8 ETEC prospektif pozitif ve negatif örnek, ve % retrospektif pozitif ve negatif örnek tanımlamıştır. örnek tipi için, BD MAX Extended Enteric Bacterial Panel sırasıyla % ve %99,9 ETEC prospektif pozitif ve negatif örnek, ve sırasıyla %90 ve %96,3 retrospektif pozitif ve negatif örnek tanımlamıştır (Tablo 11'e bakın). Tablo 11. Enterotoksijenik E. coli (ETEC LT/ST) Genel Performans Örnek Türü Örnek Kökeni BD MAX Cary-Blair Korunan Cary-Blair Korunan Prospektif (Taze+Dondurulmuş) Pozitif Yüzde Anlaşması: % (%72,2, %) Negatif Yüzde Anlaşması: %99,8 (%99,3, %99,9) Retrospektif (Dondurulmuş) Pozitif Yüzde Anlaşması: % (%56,6, %) Negatif Yüzde Anlaşması: % (%87,9, %) Prospektif (Taze+Dondurulmuş) Pozitif Yüzde Anlaşması: % (%80,6, %) Negatif Yüzde Anlaşması: %99,9 (%99,3, %) Retrospektif (Dondurulmuş) Pozitif Yüzde Anlaşması: %90 (%59,6, %98,2) Negatif Yüzde Anlaşması: %96,3 (%81,7, %99,3) Karşılaştırıcı Yöntemi P N Toplam P N P N P N P N ETEC için referans yöntemi, dışkı örnekleri üzerinde uygulanan iki alternatif PCR testi ve çift yönlü sekanslamadır (Bkz. Tablo 12). BD MAX Extended Enteric Bacterial Panel aşağıda açıklanan toksin tiplerini saptamak için tasarlanmışken, panel, sonuçları türlere veya toksin seviyesine bildirmez. 13