MAX Enteric Parasite Panel

Transkript

1 MAX Enteric Parasite Panel In Vitro Diyagnostik Kullanım İçindir P0219(01) BD MAX Sistemi ile kullanım içindir Türkçe 4 I KULLANIM AMACI BD MAX Sistemi üzerinde gerçekleştirilen BD MAX Enteric Parasite Panel (BD MAX Enterik Parazit Paneli), enterik parazitik hastaların doğrudan teşhisi için in vitro diyagnostik bir testtir. BD MAX Enteric Parasite Panel nükleik asitleri aşağıdakilerden tespit eder: Giardia lamblia Cryptosporidium (yalnızca C. hominis ve C. parvum) Entamoeba histolytica Test, şüpheli gastroenteritisi, enteritisi veya kolisiti olan semptomatik hastalardan alınmış korunmayan veya %10 formalin sabitlenmiş dışkı örnekleri üzerinde gerçekleştirilir. Testin, klinik değerlendirme ve diğer laboratuvar bulguları ile birlikte kullanıldığında gastrointestinal enfeksiyon tanısına yardımcı olması amaçlanmıştır. Doğrudan örnek üzerinde yapılan bu testte spesifik hedeflerin amplifikasyonu için gerçek zamanlı polimeraz zincir reaksiyonu (PCR) kullanılır. Testte amplifiye DNA'nın saptanması için florojenik gene özgü hibridizasyon probları kullanılır. Bu testin, Giardia lamblia, Cryptosporidium hominis ve C. parvum'un yanı sıra Entamoeba histolytica enfeksiyonlarının ayırıcı tanısında yardımcı olarak klinik sunum, laboratuvar bulguları ve epidemiyolojik bilgiler ile birlikte kullanılması amaçlanmıştır. Bu testin sonuçları, tanıda, tedavide veya diğer hastaların yönetimiyle ilgili kararlarda tek dayanak olarak ele alınmamalıdır. Pozitif test sonuçları, bu testle saptanmamış diğer organizmaların varlığında gelişen koenfeksiyon olasılığını ortadan kaldırmaz ve hastalığın tek veya ayırıcı nedeni olmayabilir. Gastroenterit ve/veya kolit ile uyumlu klinik hastalık varlığında elde edilen negatif test sonuçları, bu testle saptanmamış patojenlerin oluşturduğu bir enfeksiyondan veya ülseratif kolit, irritabl bağırsak sendromu veya Crohn hastalığı gibi bulaşıcı olmayan nedenlerden kaynaklanabilir. PROSEDÜRÜN ÖZETİ VE AÇIKLAMASI Enterik hastalıklara neden olan organizmalar dünya genelinde morbidite ve mortalitenin önemli bir nedenini oluşturmaktadır. Enterik enfeksiyonlar vücuda gastrointestinal yolla girer veya genellikle kontamine gıda ve su aracılığıyla ya da kusmuk veya gaita ile temas yoluyla yayılır. CDC, Birleşik Devletler de her yıl i hastaneye yatma ve i ölümle sonuçlanan 48 milyon gıda kaynaklı hastalık vakası otaya çıktığını tahmin etmektedir. 1 Gelişmekte olan dünyada, bu hastalıklar yılda yaklaşık 2,5 milyon küçük çocuğun ölümüne neden olmaktadır. 2 Sebep olan ajanların her biri karın krampları veya karın ağrısı, iştah kaybı, bulantı ya da kusma da dahil olmak üzere kısmen farklı semptomlara sebep olabilir; ancak tümü diyareye neden olur. 3 Tekrarlanan diyare nöbetleri ve dirençli diyare hastalığı bağırsak işlevini ve emilimi bozabilir, potansiyel olarak çocukluk zafiyeti ve büyümenin gecikmesine yol açabilir. 4 Diyare etiyolojilerinin arasında virüsler, bakteriler ve parazitler bulunur. Giardia lamblia, Cryptosporidium hominis ve C. parvum'un yanı sıra Entamoeba histolytica'nın diyareye neden olan önemli parazitler olduğu kabul edilir. Bu organizmaların hepsi kontamine gıda ve su tüketimi nedeniyle fekal-oral yolla bulaşır ve genellikle salgınlarla ilişkilendirilir. Tüm dünyada, Giardia su ile bulaşan hastalık çıkışları ile ilişkilendirilen en sık tanımlanan parazitlerden biridir. 5 Giyardiyaz diyare, abdominal kramplar, mide şişkinliği, kilo kaybı ve malabsorpsiyon ile şekillenir. Giyardiyaz ile enterik bozukluklar, alerjiler ve reaktif artrit ilişkilendirilmiştir. Hastalık genellikle kendini sınırlayıcıdır ve asemptomatik enfeksiyonlar da meydana gelebilir. Cryptosporidium hominis ve C. parvum, sriptosporidiosise neden olur, bu karın kramplarının, ateşin, mide bulantısı, kusma ve kilo kaybının eşlik ettiği sulu ishalle karakterize edilir. İmmünkompromize hastalarda enfeksiyonun sonucu olarak kolanjit veya pankreatit gelişebilir. 5,6 Bununla birlikte asemptomatik enfeksiyonlar da meydana gelebilir. Entamoeba histolytica enfeksiyonları genelde asemptomatiktir. Belirtiler ortaya çıktığında, hafif ila şiddetli diyare ve mide şişkinliği yaygın olarak görülür. Hastalık devam ettiğinde kilo kaybı ve yorgunluğu içerecek şekilde seyir gösterebilir. 6 Entamoeba histolytica enfeksiyonu da doku yıkımına ve karaciğer apsesine yol açarak invazif bir hal alabilir. 7 Bu parazitlerin mikroskobik saptaması duyarsızdır ve uzun bir süre, ekipman ve eğitimi gerektirir. Ek olarak, mikroskopi Entamoeba histolytica'yı patojenik olmayan Entamoeba dispar türlerinden ayrıştıramaz. 8 Entamoeba dispar PCR geleneksel yöntemlerden daha duyarlıdır ve daha erken saptama becerisi gösterebilir, bu da birden fazla gaita örneğinin test edilmesi ve hasta yönetiminin ve enfeksiyon kontrolünün iyileştirilmesi ihtiyacını azaltabilir. 9 1

2 BD MAX Enterik Parazit Paneli, Giardia lamblia, Cryptosporidium hominis ve C. parvum'un yanı sıra Entamoeba histolytica'yı eşzamanlı ve diferansiyel olarak saptayan çoklu bir deneydir. BD MAX Enteric Parasite Panel, BD MAX Sistemi ile birlikte kullanıldığında, yaklaşık 4,5 saatte 24 tür için sonuçlar sağlayabilir. BD MAX Enteric Parasite Panel, örneğin BD MAX Sistemi'ne yerleştirilmesinden sonuçların çıkmasına kadar kullanıcı müdahalesi için ihtiyacı ortadan kaldırarak test sürecini düzene koyar ve basitleştirir. Dışkı örneği toplanır ve laboratuara gönderilir, homojenize edilip bir BD MAX Enteric Parasite Panel Sample Buffer Tube'e (BD MAX Enterik Bakteriyel Parasit Panel Örnek Tampon Tüpü) aktarılır. Sample Buffer Tube, septum bir başlık ile kapatılır ve parazit organizmaların lizisini kolaylaştırmak için BD Pre-warm Heater'da ısıtılır. Ardından, Sample Buffer Tube vortekslenir ve BD MAX Sistemine aktarılır, burada aşağıdaki otomatik prosedür oluşur: hücreler lizise uğratılır; nükleik asitler manyetik boncuklardan ekstrakt ve konsantre edilir; son olarak da, varsa, BD MAX PCR Cartridge'teki (BD MAX PCR Kartuş) genetik hedefi amplifiye etmek için kullanılan hedefe spesifik primerlerin bulunduğu ayrılan nükleik asit alikotu PCR reaktiflerine eklenir. Bu testte de Örnek İşleme Kontrolü vardır. İnhibitör maddeler, enstrüman veya reaktif hatası işlemini izlemek için Örnek İşleme Kontrolü Ekstraksiyon Tüpünde kalır ve ekstraksiyon, konsantrasyon ve amplifikasyon adımlarını uygular. BD MAX Sistemi'ne örnek, BD MAX Unitized Reagent Strip (BD MAX Ünitelendirilmiş Reaktif Stribi) ve PCR Cartridge'i yüklendikten sonra operatör müdahalesi gerekmez. BD MAX Sistemi örnek lizisi, nükleik asit ekstraksiyonu ve konsantrasyonu, reaktif rehidrasyonu, nükleik asit amplifikasyonu ve gerçek zamanlı polimeraz zincir reaksiyonu (PCR) kullanılarak hedef nükleik asit sekansının saptanmasını otomatik olarak gerçekleştirir. Amplifiye hedefler, sönmüş floroforlarla etiketlenmiş hidroliz problarıyla algılanır. Sinyallerin amplifikasyonu, saptanması ve yorumlanması BD MAX Sistemi tarafından otomatik olarak yapılır. PROSEDÜR İLKELERİ Hastalardan gaita örnekleri alınır ve temiz bir kapta, koruyucu olmadan veya %10 formalinle sabitlenmiş olarak laboratuvara gönderilir. Örnek vortekslenir ve 10 µl öze, özenin derinliğine kadar örneğe yerleştirilir ve bir döndürme hareketiyle BD MAX Sample Buffer Tube e akıtılır. Sample Buffer Tube, septum bir başlık ile kapatılır ve parazit organizmaların lizisini kolaylaştırmak için BD Pre-warm Heater'da ısıtılır. Sample Buffer Tube vortekslenir ve BD MAX Sistemi'ne aktarılır. İş listesi oluşturulup örnek, BD MAX Enteric Parasite Panel Unitized Reagent Strip ve PCR Cartridge ile birlikte BD MAX cihazına yüklendikten sonra, çalışma başlatılır ve daha fazla kullanıcı müdahalesi gerekmez. BD MAX Sistemi hedef organizma lizisi, DNA ekstraksiyonu ve konsantrasyonu dahil örnek hazırlanmasını, reaktif rehidrasyonu, hedef nükleik asit sekansının amplifikasyonu ve gerçek zamanlı PCR kullanılarak saptanmasını otomatik olarak gerçekleştirir. Sinyalin yorumlanması BD MAX Sistemi tarafından otomatik olarak yapılır. Bu test ayrıca Ekstraksiyon Tüpünde bulunan ve ekstraksiyon, konsantrasyon ve amplifikasyon adımlarına tabi olan bir Numune İşleme Kontrolü içerir. Sample Processing Control, potansiyel inhibitör maddelerin varlığını ve sistem veya reaktif arızalarını izlemek için lizis, ekstraksiyon, konsantrasyon ve amplifikasyon adımlarına dahil edilmiştir. Yüksek bir sıcaklıkta enzimatik hücre lizisi sonrasında serbest kalan nükleik asitler manyetik afinite boncuklarında yakalanır. Bağlı nükleik asitlerin bulunduğu boncuklar yıkanır ve nükleik asitler Elüsyon Tamponu'nda ısıyla ve yüksek ph ile elüsyona uğratılır. Elüe edilmiş DNA nötralize edilir ve PCR reaktiflerinin rehidrasyonu için Master Mix Tube içine aktarılır. Rehidrasyon sonrasında, BD MAX Sistemi BD MAX PCR Cartridge'a PCR için sabit bir hazır solüsyon hacmi verir. BD MAX PCR Cartridge'daki mikrovalfler PCR başlamadan önce amplifikasyon karışımını sınırlamak ve böylece buharlaşma ve kontaminasyonu önlemek için sistem tarafından mühürlenir. Amplifiye DNA hedefleri bir uçta söndürücü kısım ve öteki uçta bir floresan raportör boya (florofor) ile etiketlenmiş hidroliz (TaqMan) problarıyla saptanır. Farklı floroforlarla etiketlenmiş problar BD MAX System'in dört farklı optik kanalında enterik parazit hedefleri için amplikonlar ve Örnek İşleme Kontrolünü saptamak üzere kullanılır: Giardia lamblia hedef amplikonları FAM kanalında, Cryptosporidium hominis/parvum hedef amplikonları ROX kanalında, Entamoeba histolytica hedef amplikonları VIC kanalında ve Sample Processing Control (Örnek İşleme Kontrol) amplikonları Cy5.5 kanalında tespit edilir. Problar doğal durumundayken florofor floresanı söndürücüye yakınlığı nedeniyle söndürülür. Ancak hedef DNA varlığında problar tamamlayıcı sekanslarına hibridize olur ve DNA polimerazın, DNA şablonu boyunca yeni oluşan iplikçiği sentezlerken 5-3 ekzonükleaz aktivitesi ile hidrolize uğrar. Bunun sonucunda floroforlar söndürücü moleküllerden ayrılır ve floresan yayılır. BD MAX Sistemi bu sinyalleri her döngüde izler ve program sonunda verileri son sonuçları raporlamak üzere yorumlar. REAKTİFLER VE MATERYALLER REF İçindekiler Miktar BD MAX Enteric Parasite Master Mix (BD MAX Enterik Parazit Ana Karışımı) (A7) TaqMan'e spesifik moleküler problar ve primerlerle birlikte Örnek İşleme Kontrolü'ne spesifik TaqMan probu ve primerleri içeren fazla kurutulmuş PCR Master Mix. BD MAX Enteric Parasite Unitized Reagent Strips (BD MAX Enterik Parazit Ünitelendirilmiş Reaktif Stripleri) DNA Ekstraksiyonu için gerekli tüm sıvı reaktifler ve tek kullanımlık pipet uçlarını içeren Ünitelendirilmiş Reaktif Stripleri. BD MAX Enteric Parasite Extraction Tube (BD MAX Enterik Parazit Ekstraksiyon Tüpü) (B2) DNA manyetik afinite boncukları, protaz reaktifleri ve Örnek İşleme Kontrolü içeren fırınlanarak kurutulmuş pellet. BD MAX Enteric Parasite Sample Buffer Tube (BD MAX Enterik Parazit Örnek Tamponu Tüpü) Septum Kapakları test 24 test 24 test 24 test 2

3 GEREKLİ FAKAT SAĞLANMAMIŞ EKİPMAN VE MALZEMELER BD Pre-warm Heater (BD Ön Isıtma Isıtıcısı) (BD Diagnostic Systems Katalog no ) BD MAX PCR Cartridges (BD MAX PCR Kartuşları) (BD Diagnostic Systems Katalog no ) VWR Çoklu Tüp Vorteks Karıştırıcı veya muadili Vortex Genie 2 veya muadili Nalgene Cryogenic Vial Holder (Nalgene Kriyojenik Flakon Tutucu) veya muadili Tek kullanımlık eldivenler, pudrasız 10 µl öze (BD Diagnostic Systems katalog no ) Korunmayan gaita örneği türleri için: Gaita örnekleri toplamak için kuru, temiz kaplar %10 formalinle sabitlenmiş gaita örneği türleri için: %10 formalin taşıma elemanı (15 ml) UYARILAR VE ÖNLEMLER Tehlike H319 Ciddi göz tahrişine yol açar. H360 Doğmamış çocukta hasara yol açabilir veya üremeye zarar verebilir. P280 Koruyucu eldiven/koruyucu kıyafet/göz koruyucu/yüz koruyucu kullanın. P305+P351+P338 "GÖZLE TEMASI HALİNDE: Su ile birkaç dakika dikkatlice durulayın. Varsa ve çıkarılması kolaysa kontak lensleri çıkarın. Durulamaya devam edin." P405 Kilit altında saklayın. P501 İçeriği/kabı ulusal/bölgesel/yerel/uluslararası yönetmeliklere göre bertaraf edin. BD MAX Enteric Parasite Panel in vitro Diyagnostik Kullanım içindir. Sonuçları tanımlamak ve izlemek amacıyla doğrulama için gerekli ölçümleri belirlemek üzere devlet ve yerel kamu sağlık yetkilileri Giardia, Cryptosporidium ve Entamoeba da dahil olmak üzere kendi yetkileri dahilinde rapor edilebilir hastalıkların bildirimi için kılavuzlar yayınlamıştır. Laboratuarlar, klinik materyallerin veya izolatların pozitif örnek olarak kendi kamu sağlık laboratuarlarına gönderilmesi için aşağıdaki devlet veya yerel yönetmeliklerden sorumludur. Kamu Sağlığı Raporlamasına ilişkin tedbir: Bildirilebilir hastalıkların bildirimine yönelik yerel, bölgesel ve federal yönetmelikler sürekli olarak güncellenmektedir ve gözetim ile salgın araştırmaları için pek çok organizma içerir. 18,19 Buna ek olarak Hastalık Kontrol Merkezleri (CDC), bildirilebilir hastalıklardan kültürden bağımsız diyagnostik test (CIDT) ile patojenler tespit edildiğinde laboratuvar, salgın tespiti ve epidemiyolojik araştırmalarda yardımcı olmak adına ilgili kamu sağlığı laboratuvarlarına göndermek üzere izolat veya klinik materyal toplanmasını önermektedir. Laboratuarlar, kendi devlet ve/veya yerel yönetmeliklerden sorumludur ve izolat ve/veya klinik örnek gönderim yönergeleri konusunda kendi yerel ve/veya devlet kamu sağlığı laboratuvarlarına danışmalıdır. Son kullanma tarihi geçmiş reaktifler ve/veya materyalleri kullanmayın. Varışıyla birlikte dış kartonu mühürleyen etiket bozulmuşsa kiti kullanmayın. Koruyucu poşetler geldiklerinde açık veya yırtıksa reaktifleri kullanmayın. Reaktifleri reaktif poşetleri içinde kurutucu yoksa veya açılmışsa kullanmayın. Reaktif poşetlerinden kurutucuyu çıkarmayın. Reaktiflerin koruyucu poşetini her kullanımdan sonra fermuar şeklinde kapanan mühürle hemen kapatın. Mühürlemeden önce varsa poşetlerdeki fazla havayı çıkarın. Reaktifleri ısıya ve neme karşı koruyun. Neme uzun süre maruziyet ürün performansına etki edebilir. Reaktifleri folyo bozulmuş veya hasarlıysa kullanmayın. Farklı poşetler ve/veya kitler ve/veya lotlardan reaktifleri karıştırmayın. Kontaminasyon oluşacağından ve test sonuçlarını olumsuz etkileyebileceğinden kapakları birbirleriyle değiştirmeyin veya tekrar kullanmayın. Ünitelendirilmiş Reaktif Stripleri uygun sıvı dolması için kontrol edin (sıvıların tüplerin alt kısmında olmasını sağlayın) (bkz. Şekil 1). Tüm pipet uçlarının var olduğundan emin olmak için Ünitelendirilmiş Reaktif Striplerini kontrol edin (bkz. Şekil 1). Master Mix ve Extraction Tube barkod okunabilirliği bozulabileceğinden kimyasal solüsyonları kullanırken dikkatli davranın. Bu testin düzgün yapılması için uygun laboratuvar tekniği şarttır. Testin yüksek analitik duyarlılığı nedeniyle tüm malzeme ve reaktiflerin saflığını korumak için büyük dikkat gösterilmelidir. Diğer PCR testlerinin laboratuvarda aynı alanlarda gerçekleştirilmesi durumunda, BD MAX Enteric Parasite Panel, test için gereken herhangi bir ek reaktif ve BD MAX Sistemi'nin kontamine olmamasına dikkat edilmelidir. Her zaman reaktiflerin mikrobiyal ve deoksiribonükleaz (DNase) kontaminasyonunu önleyin. Reaktifler ve kartuşlar kullanılmadan önce eldivenler değiştirilmelidir. Ortamın amplikasyonlar tarafından kontaminasyonunu önlemek için, kullandıktan sonra BD MAX PCR Cartridges'ı parçalarına ayırmayın. BD MAX PCR Cartridges mühürleri kontaminasyonu önleyecek şekilde tasarlanmıştır. BD MAX Enteric Parasite Panel'in (BD MAX Enterik Parazit Paneli) önerilen süre aralıklarının dışına çıkması geçersiz sonuçlara neden olabilir. Belirtilen süreler içinde yapılmayan testler tekrarlanmalıdır. Yerel, bölgesel ve/veya ulusal yönetmelikler veya sertifikasyon sağlayan kurumların gereklilikleri veya kılavuz ilkelere göre ek kontroller test edilebilir. 3

4 Örnekleri her zaman bulaşıcı olabilirlermiş gibi ve CLSI Belgesi M29 10 'da ve Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories de tanımlandığı şekilde güvenli laboratuvar prosedürlerine göre kullanın. 11 Tüm reaktifleri kullanırken koruyucu giysiler ve tek kullanımlık eldivenler kullanın. Testi yaptıktan sonra ellerinizi iyice yıkayın. Ağzınızla pipetlemeyin. Örneklerin veya kit reaktiflerinin kullanıldığı yerlerde sigara içmeyin ve bir şey yemeyin, içmeyin ve çiğnemeyin. Kullanılmamış reaktifleri ve atığı ulusal, bölgesel ve yerel yönetmeliklere göre atın. Ek uyarılar, önlemler ve işlemler için BD MAX System Kullanıcı El Kitabına 12 başvurun. SAKLAMA VE STABİLİTE Koruyucu olmayan veya %10 formalin sabitlenmiş dışkı taşıma sırasında 2 C ila 25 C arasında saklanmalıdır. Donmaya veya aşırı sıcağa maruz kalmaya karşı koruyun. Örnekler, ister korunmamış ister %10 formalin sabitlenmiş dışkı olsun, test yapılmasından önce 2 8 C'de 120 saate (5 güne) kadar veya 2 25 C'de maksimum 48 saate kadar saklanabilir. Ön ısıtma öncesinde veya sonrasında, inoküle edilen Örnek Tampon Tüpleri, test için (veya yeniden test için) en fazla şu süreye kadar saklanabilir: Time (Zaman) Sıcaklık 120 saat (5 gün) 2 8 C 48 saat 2 25 C BD MAX Enteric Parasite Panel bileşenleri 2 25 C'de belirtilen son kullanma tarihine kadar stabildir. Son kullanma tarihi geçmiş bileşenleri kullanmayın. BD MAX Enteric Parasite Master Mix ve Extraction Tubes mühürlenmiş poşetlerde sağlanır. Ürünü nemden korumak için açtıktan hemen sonra tekrar mühürleyin. Reaktif Tüpleri, poşetin ilk açılışından ve tekrar mühürlenmesinden sonra veya son kullanma tarihine kadar, hangisi önce gerçekleşirse, 2 25 C'de 14 güne kadar stabildir. KULLANIM TALİMATLARI Örnek Toplama/Nakil Yeterli bir örnek almak için örnek toplama işlemi yakından izlenmelidir. Gaita örnekleri şu işleme göre toplanır: Korunmayan örnekler: Gaita örneğini kuru, temiz bir kaba aktarın. Su veya idrar ile kirlenmesinden kaçının. Kabı etiketleyin ve laboratuara kurumun standart işletim prosedürlerine göre taşıyın ( Saklama ve Stabilite kısmına bakın). Tuvalet kağıdı, su veya sabunu örnekle karıştırmaktan kaçının. %10 formalinle sabitlenmiş örnekler: Gaita örneğini üreticinin talimatları uyarınca fiksatif bir aygıta aktarın. Su veya idrar ile kirlenmesinden kaçının. Kabı etiketleyin ve laboratuara kurumun standart işletim prosedürlerine göre taşıyın ( Saklama ve Stabilite kısmına bakın). Tuvalet kağıdı, su veya sabunu örnekle karıştırmaktan kaçının. Örnek Hazırlama 1. Barkodlanmış BD MAX Sample Buffer Tube'ü (saydam kapak) uygun örnek tanımlaması ile etiketleyin. Barkodu gizlemeyin. 2. Korunmayan veya sabitlenmiş örnekleri 15 saniye boyunca yüksek hızda vorteksleyin. Materyal kabın kapağına yapışabileceği için vortekslenmiş örnekleri açarken dikkatli olun. 3. Sample Buffer Tube'ten şeffaf kapağı çıkarın. 4. BD MAX Sample Buffer Tube'ün İnokülasyonu: a. Korunmayan gaita örnekleri için: i. Tüm öze kısmı örneğe batana dek 10 μl tek kullanımlık bir inokülasyon özesi yerleştirin. Mil üzerindeki fazla gaita PCR reaksiyonunu aşırı yükleyebileceği için özeden ilerisini sokmayın. ii. Yüklü özeyi Sample Buffer Tube e yerleştirin ve döndürme hareketi ile örneği çıkarın. iii. Özü çıkarıp atın. NOT: Tüm örneğin özeden çıkarılmasına gerek yoktur. Ortaya çıkan Sample Buffer Tube çözeltisi çay lekesi renginden daha koyu olmamalıdır. b. %10 formalinle sabitlenmiş gaita örnekleri için: i. Tüm öze kısmı örneğe batana dek 10 μl tek kullanımlık bir inokülasyon özesi yerleştirin. Özede stabil kabarcık oluşumuyla sabitlenmiş örneklerin elde etmesi zor olabilir. ii. Yüklü özeyi Sample Buffer Tube e yerleştirin ve döndürme hareketi ile örneği çıkarın. iii. Özü çıkarıp atın. 5. Mavi Septum Kapağı kullanarak inoküle edilen Sample Buffer Tube'ü tekrar kapaklayın. 6. Varsa test için ek örnekleri Adım 1-5'i tekrarlayarak hazırlayın ve sonra BD Pre-warm Heater Çalışması'na geçin. 4

5 BD Pre-warm Heater Çalışması (Çalıştırma talimatları için BD Pre-warm Heater El Kitabı'na 13 bakın.) 1. Run>Worklist Panel (Çalıştır>Çalışma Listesi Paneli) üzerinden <BD MAX ENT PARA 53> seçeneğini seçin 2. BD MAX Enteric Parasite için (lot takip edilebilirliği için) kit lot numarasını seçin (bekleme listesinde bakmadan önce kit LOT bilgilerinin ayrı olarak taratılması gerektiğini unutmayın). NOT: Configuration > System (Yapılandırma > Sistem) ekranında Lot Number tracking (Lot Numarası izleme) işlevinin etkin olduğundan emin olun. 3. Barkod tarayıcıyı kullanarak veya hasta erişim kimliğinin yanı sıra manuel girdi ile Sample Tube (Örnek Tüpü) alanında her bir BD MAX Enteric Parasite Panel Sample Buffer Tube'ten barkodu girin. 4. Bekleyen çalışma listesi artık güncellenir ve Pre-warm (Ön Isıtma) adımının planlanması için onay kutusunu görüntüler. 5. Çalışma listesindeki kutuyu işaretleyerek örneği programlayın. 6. BD MAX Enteric Parasite Panel Sample Buffer Tube'ü (örneği içeren) BD Pre-warm Heater'a yerleştirin. İstasyon en çok 24 Sample Buffer Tube'ü barındırır. 7. BD Pre-warm Heater'daki kapağı kapatın ve Run>Worklist Panel'inde (Çalıştır>Çalışma Listesi Paneli) Start Pre-warm (Ön Isıtmayı Başlat) seçeneğini seçin. Spesifik bir BD MAX Enteric Parasite Panel ısıtma ve soğutma profili başlatılır. NOT: Tüplerin BD Pre-warm rafına fiziksel olarak yerleştirilmiş olduğunu ve rafın BD Pre-warm Heater'a yüklenmiş olduğunu onaylayın, Pre-warm (Ön Isıtma) mesajını başlatmak OK'i (Tamam) seçin. 8. Status (Durum) ekranında Pre-warm çalışmasının tamamlanma süresi gösterilecek ve çalışma listesi ekranı da Ön Isıtmanın "İlerlemekte" olduğunu belirtecektir. 9. Çalışma listesi ekranında, seçilen örnek/test, başarılı Ön Isıtmanın ardından 'Pre-warm Complete' (Ön Isıtma Tamamlandı) olarak görüntülenir. 10. Pre-warm adımı başarılı bir şekilde tamamlandıktan sonra, Sample Buffer Tube'ü BD Pre-warm Heater'dan çıkarın ve her bir Sample Buffer Tube'ü 5 saniye boyunca kısaca vorteksleyin veya alternatif olarak tüm Sample Buffer Tube'leri 1 dakikaya kadar çoklu vorteksleyiciye yerleştirin. 11. BD MAX System Rack'ı (BD MAX Sistem Rakı) ayarlamak için BD MAX Sistem İşlemine geçin. NOT: Başarısız Pre-warm adımı durumunda, BD MAX System Timer Status Failed / Cooling (Başarısız / Soğutuyor) mesajını görüntüler. BD MAX System üzerinde test etmeden önce Pre-warm adımını tekrarlamak gerekli olabilir. Pre-warm başarısız soğutma adımının tamamlanmasından sonra çalışma listesi ekranına başvurun. Pre-warm durumu, söz konusu örnekler için "Failed" (Başarısız) ibaresini gösteriyorsa Pre-warm adımı tekrarlanmalıdır. Pre-warm durumu "Complete" (Tamamlandı) ibaresini gösteriyorsa tüplerin BD MAX Enteric Parasite Panel ile testine geçilebilir. NOT: BD MAX Enteric Parasite Panel yalnızca yukarıdaki ön ısıtma adımının başarıyla tamamlanmasından sonra gerçekleştirilebilir. Ön ısıtma döngüsünü başarıyla tamamlamış örneklerin, yeniden test etmenin gerekli olduğu olayda tekrar ısıtılmasına gerek olmaz (Depolama ve Stabilite bölümüne başvurun). NOT: Birden fazla BD MAX System ve BD Pre-warm Heater'lı laboratuvarlar için, örnekler, ön ısıtma adımının gerçekleştirildiği aynı BD MAX System üzerinde test edilmeli ve/veya tekrar test edilmelidir. NOT: Pre-warm'dan sonra BD MAX Enteric Parasite Paneli'nin testi, Depolama ve Stabilite bölümünde belirlenen zaman aralığında gerçekleştirilmelidir. Yeniden test etmek gerekirse örnekleri yeniden vorteksleyin. BD MAX System'ın Çalışması NOT: Ayrıntılı talimat için BD MAX System Kullanıcı El Kitabına 12 başvurun (Çalıştırma kısmı). NOT: Test edilecek her numune ve her Harici Kontrol için bir (1) Örnek Tampon Tüpü, bir (1) Septum Kapağı, bir (1) Ana Karışım (A7), bir (1) Ekstraksiyon Tüpü (B2) ve bir (1) Ünitize Reaktif Stripi gereklidir. Gereken sayıda BD MAX malzemesini koruyucu poşetlerinden veya kutularından çıkarın. Açılmış Ana Karışım veya Ekstraksiyon Tüpü torbalarını saklamak için fazla havayı çıkarın ve poşetleri fermuar şeklinde kapanan mührü kullanarak kapatın, nem emici paketin poşette olduğundan emin olun. 1. BD MAX System'ın gücünü açın (daha önce yapılmadıysa) ve <user name> (kullanıcı adı) ve <password> (şifre) girerek oturum açın. 2. Reaktifler ve kartuşlar kullanılmadan önce eldivenler değiştirilmelidir. 3. BD MAX Enteric Parasite Panel kitinden gerekli sayıda Ünitelendirilmiş Reaktif Stribi çıkarın. Her Ünitelendirilmiş Reaktif Stribini, tüm sıvıların tüplerin alt kısmında olmasını sağlayacak şekilde sert bir yüzeye hafifçe vurun. 4. Gerekli sayıda Ekstraksiyon Tüpü/Tüpleri ve Ana Karışım Tüpü/Tüplerini koruyucu poşetlerinden çıkarın. Fazla havayı çıkarın ve poşetleri fermuar şeklinde kapanan mühür ile kapatın. 5. Test edilecek her örnek için bir (1) Ünitelendirilmiş Reaktif Stribi BD MAX System Rack'a, Rak A Pozisyon 1 ile başlayarak yerleştirin. 6. Bir (1) Ekstraksiyon Tüpünü (beyaz folyo) Şekil 1'de gösterildiği gibi her Ünitelendirilmiş Reaktif Stribinde Pozisyon 1 içine tıklatarak oturun. 7. Bir (1) Master Mix Tube'ü (yeşil folyo) Şekil 1'de gösterildiği gibi her Ünitelendirilmiş Reaktif Stribinde Pozisyon 2 içine tıklatarak oturun. 5

6 Şekil 1: BD MAX Enteric Parasite Panel Ekstraksiyon Tüpleri ve Master Mix Tüplerini Unitized Reagent Strip'lerine tıklatarak oturtun. 8. Örnek Tampon Tüplerini adım 5 ila 7'de belirtildiği gibi ilgili Ünitelendirilmiş Reaktif Striplerine karşılık gelen BD MAX System Rack'ler içine yerleştirin. NOT: Sample Buffer Tube'lerini, 1D barkod etiketleri dışarıya bakacak şekilde (böylece örnek kaydedilirken Sample Buffer Tube'leri daha kolay taranabilir) örnek rafına/raflarına yerleştirin. 9. BD MAX System'a gerekli sayıda BD MAX PCR Cartridge yerleştirin (bkz. Şekil 2). Her kartuş toplam 24 örnek için 12 adede kadar örneklik 2 çalışmayı alır. BD MAX System her çalışma için PCR Kartuşunda pozisyon ve sırayı otomatik olarak seçer. PCR Kartuşları çalışmaya göre VE raka göre temelinde kullanılır (kartuş başına 2 çalışma ve rak başına 1 kartuş). Şekil 2: BD MAX PCR Cartridge'leri yükleyin. 10. Rafı/rafları BD MAX System'a yükleyin (bkz. Şekil 3). Taraf A Taraf B Şekil 3: Rafı/Rafları BD MAX System'a yükleyin. 6

7 11. BD MAX System kapağını kapatın ve işleme başlamak için <Start> (Başlat) öğesine tıklayın. 12. Çalışma sonunda, sonuçları hemen kontrol edin veya Sample Buffer Tube leri 2 8 C'de 120 saate (5 güne) kadar VEYA 2 25 C'de sonuçlar kontrol edilinceye kadar maksimum 48 saat saklayın. NOT: Bir çalışma sırasında bir septum kapağı hasar görmüşse örneği saklamadan önce kapağı yenisiyle değiştirin. NOT: Hazırlanmış BD MAX Enteric Parasite Panel Sample Buffer Tube leri, örnek, Örnek Tampon Tüplerine eklendikten sonra 2 8 C'de maksimum 120 saate (5 güne) kadar VEYA 2 25 C'de maksimum 48 saat saklanabilir. Bir IND (Belirsiz), UNR (Çözümlenmemiş) veya INC (Eksik) sonuç elde edildiğinde veya bir Harici Kontrol hatası oluştuğunda bu zaman çerçevesi içinde hazırlanan Sample Buffer Tube'ten bir test tekrarı yapılmalıdır ( Tekrar Test Prosedürü kısmına bakın). KALİTE KONTROLÜ Kalite kontrol prosedürleri test performansını izler. Laboratuvarlar, tüm analitik sürecin etkililiğini izlemek için yerel, bölgesel, eyalet, ulusal ve/veya ülke yönetmeliklerinin ya da sertifikasyon sağlayan kurumların kılavuz ilkelerine veya gerekliliklerine göre kontrol malzemelerinin sayısını, türünü ve test edilme sıklığını ortaya koymalıdır. Genel Kalite Kontrolü rehberliği için CLSI MM3 14 ve EP kısımlarına bakabilirsiniz. 1. Harici Kontrol malzemelerini BD sağlamaz. BD MAX System yazılımında örnek test sonucunu yorumlamak amacıyla Harici Pozitif veya Negatif Kontroller kullanılmaz. Harici kontroller hasta örnekleriymiş gibi ele alınır. (Harici Kontrol test sonuçlarının yorumlanması için Sonuçların Yorumlanması bölümündeki tabloya bakın. 2. Bir (1) Harici Pozitif Kontrol ve bir (1) Harici Negatif Kontrol her bir laboratuvar düzeninde BD MAX System'de yeterli işlem doğrulama elde edilinceye kadar en azından günlük olarak çalışılmalıdır. Kontrol testinin azaltılmış sıklığı ilgili yönetmeliklere uygun olmalıdır. 3. Harici Pozitif Kontrol, önemli reaktif hatalarını izlemek üzere tasarlanmıştır. Harici Negatif Kontrol hedef nükleik asitlerle ayıraç veya çevresel kontaminasyonu (veya taşımayı) saptamak üzere tasarlanmıştır. 4. Kullanıcının laboratuvar kalite kontrolü programı için en uygun kontrolü seçmesini mümkün kılmak üzere çeşitli tiplerde Harici Kontroller önerilir. a. Harici Negatif Kontrol: İnoküle edilmemiş BD MAX Enteric Parasite Panel Sample Buffer Tube'ü. BD, kontrol preparatının sonucu olarak kontaminasyon potansiyelini azaltmak için Harici Negatif Kontrol'ün Harici Pozitif Kontrol'den önce hazırlanmasını önerir. b. Harici Pozitif Kontrol: BD, tüm hedefler için organizma osisti/sistinin ticari olarak mevcut olmayışı ve hedef organizmaların trofozoit formu için yorucu kültür yöntemleri nedeniyle harici pozitif kontroller için Tablo 1'e göre genomik DNA'nın kullanılmasını önerir. Tablo 1: Harici Pozitif Kontrol için Ticari Olarak Temin Edilebilir Suşlar Harici Pozitif Kontrol Suşu Giardia intestinalis (Lambl) (ATCC 30888D) Cryptosporidium parvum (ATCC PRA-67D) Entamoeba histolytica (ATCC 30459D) Genomik DNA konsantrasyonu pg/ml pg/ml 150 pg/ml NOT: Üretici tarafından önerildiği gibi saklandığında, aşağıda açıklandığı gibi birden çok üçlü karışımı hazırlamak için genomik DNA'nın miktarı belirlenen stok çözeltileri kullanılabilir. (1) Öğe kurutulmuş formda alınırsa, flakonun içindekileri satıcının ürün sayfasında belirtildiği gibi 50 µl 1X TE Tampon (10 mm Tris-HCl, 1 mm EDTA, ph=8,0, Moleküler Biyoloji Kalitesi) ile tekrar nemlendirin. (2) Her bir DNA preparatını 260 nm'de absorbans kullanarak spektrofotometre ile belirleyin. (3) Yukarıdaki tabloda listelenen genomik DNA'ların nihai konsantrasyonu 1X TE tamponda seri seyreltim ile üç DNA preparatının karışımını hazırlayın. (4) İyice karışması için çözeltiyi vorteksleyin ve kalibre edilmiş bir pipeti kullanarak 10 µl çözeltiyi ilgili BD MAX Enteric Parasite Panel Sample Buffer Tube'a sunun. Her bir hedef organizmanın genomik DNA'sı Sample Buffer Tube içinde kendi özgül LoD'sinde 5X olarak bulunacaktır. (5) Sample Buffer Tube'ü mavi bir septum kapak ile tekrar kapatın ve 5 saniye boyunca tüpü vorteksleyin. 5. Tüm Harici Kontroller beklenen sonuçları vermeli (Harici Pozitif Kontrol için pozitif, Harici Negatif Kontrol için negatif) ve hiç başarısız harici kontrol olmamalıdır (Çözümlenmemiş, Belirsiz veya Tamamlanmamış sonuçlar). 6. Pozitif test sonucu veren bir Harici Negatif Kontrol, örnek işleme ve/veya kontaminasyon olayına işaret eder. Karışma ve/veya kontaminasyondan kaçınmak için örnek kullanım tekniğini gözden geçirin. Negatif sonuç veren bir Harici Pozitif Kontrol, bir örnek işleme/hazırlama sorununa veya reaktif başarısızlığına işaret eder. Örnek kullanımı/hazırlık tekniğini gözden geçirin. 7. Çözümlenmemiş, Belirsiz veya Eksik test sonucu veren bir Harici Kontrol, bir reaktif veya BD MAX System hatasına işaret eder. BD MAX System monitörünü herhangi bir hata mesajı açısından kontrol edin. Uyarı ve hata kodlarının yorumlanması için BD MAX System Kullanıcı Kılavuzunda 12 Sistem Hata Özeti bölümüne bakın. Sorun devam ederse açılmamış bir poşetten reaktifler kullanın veya yeni bir test kiti kullanın. 7

8 8. Her Ekstraksiyon Tüpü bir sentetik hedef DNA dizisi içeren bir plazmid olan bir Örnek İşleme Kontrolü içerir. Testin öngörüsünü sağlayarak, işlenen numunede bulunan DNA ile birlikte Sample Processing Control çıkarılır, yerleştirilir ve amplifiye edilir. Sample Processing Control örnek işleme adımları sırasında DNA yakalama, yıkama ve elüsyonun etkinliğini ve ayrıca PCR analizi sırasında DNA amplifikasyonu ve saptamanın etkinliğini izler. Sample Processing Control (Örnek İşleme Kontrolü) sonucu kabul kriterlerini karşılayamazsa, örnek sonucu Çözülmemiş olarak rapor edilir; ancak, tüm pozitif (POS) test kiti sonuçları rapor edilir ve hiçbir hedef negatif (NEG) olarak adlandırılmaz. Çözümlenmemiş bir sonuç örnekle ilişkili inhibisyon veya reaktif hatasına işaret eder. Çözümlenmemiş olarak bildirilen herhangi bir örneği aşağıdaki Tekrar Test Prosedürü bölümüne göre tekrarlayın. SONUÇLARIN YORUMLANMASI Sonuçlar BD MAX Sistem monitöründe <Results> (Sonuçlar) penceresinde <Results> (Sonuçlar) sekmesinde bulunur. BD MAX Sistem yazılımı otomatik olarak test sonuçlarını yorumlar. Sonuçlar analitlerin her biri için ve Örnek İşleme Kontrolü için raporlanır. Bir test sonucu hedef ve Örnek İşleme Kontrolünün amplifikasyon durumu temelinde NEG (Negatif), POS (Pozitif) veya UNR (Çözümlenmemiş) olarak belirtilebilir. IND (Belirsiz) veya INC (Eksik) sonuçlar BD MAX System hatasından kaynaklanır. Kısmi UNR durumunda, bir veya daha fazla hedef bir POS sonucuna sahip olduğunda ve diğer hedefler UNR sonucuna sahip olduğunda, hiçbir hedef NEG olarak adlandırılmaz. Tablo 2: BD MAX Enteric Parasite Panel Sonuç Yorumlama Bildirilen Test Sonucu Sonuçların Yorumlanması a Glamb POS Giardia lamblia DNA Saptandı Glamb NEG Giardia lamblia DNA Saptanmadı Glamb UNR Çözümlenmemiş inhibitör örnek veya ayıraç başarısızlığı; hedef veya Örnek İşleme Kontrolü amplifikasyonu yok Crypto POS Cryptosporidium parvum veya hominis DNA Saptandı Crypto NEG Cryptosporidium parvum veya hominis DNA Saptanmadı Crypto UNR Çözümlenmemiş inhibitör örnek veya ayıraç başarısızlığı; hedef veya Örnek İşleme Kontrolü amplifikasyonu yok Ehist POS Entamoeba histolytica DNA Saptandı Ehist NEG Entamoeba histolytica DNA Saptanmadı Ehist UNR IND INC Çözümlenmemiş inhibitör örnek veya ayıraç başarısızlığı; hedef veya Örnek İşleme Kontrolü amplifikasyonu yok BD MAX System hatası nedeniyle belirlenmemiş sonuç (Uyarı veya Hata Kodlarıyla b ) Eksik Çalışma (Uyarı veya Hata Kodlarıyla b ) a BD MAX Enteric Parasite Panel sonuçları kurumsal programlar ve uygulamalarla uyumlu olarak önlem düzeyi için bir kılavuz olarak kullanılabilir. b Uyarı ve hata kodlarının yorumlanması için BD MAX Sistemi Kullanıcı El Kitabında 12 Sorun Giderme kısmına başvurun. 8

9 TEKRAR TEST PROSEDÜRÜ NOT: Örnek hacmi nedeniyle, Sample Buffer Tube'ten bir tekrar testi yapılması için yeterli hacim mevcuttur C sıcaklıkta saklanan Sample Buffer Tube ler için tekrar test örnekle ilk Sample Buffer Tube inokülasyonunun ve ön ısıtmanın ardından 48 saat içinde yapılmalıdır. Alternatif olarak 2 8 C'de saklanan Örnek Tampon Tüplerinden tekrar testi 120 saat (5 gün) içinde yapılmalıdır. Kalan gaita örneği de 2 8 C'de saklanırsa alındıktan sonraki 5 gün veya 2 25 C'de saklanırsa 48 saat içinde tekrar test için kullanılabilir. NOT: Yeni örnekler tekrar örneklerle aynı çalışmada test edilebilir. Çözümlenmemiş Sonuç Çözümlenmemiş sonuçlar, örnekle ilişkili inhibisyon veya reaktif başarısızlığı, uygun hedef veya Örnek İşleme Kontrolü amplifikasyonunu önlerse alınabilir. Örnek İşleme Kontrolü belirginleşmezse, örnek Çözümlenmemiş olarak rapor edilir, tüm pozitif (POS) test kiti sonuçları rapor edilir ve hiçbir hedef NEG olarak adlandırılmaz. BD MAX Sistem her bir hedef için sonuçları ayrı ayrı raporlar ve bir veya daha fazla BD MAX Enteric Parasite Panel hedefi için UNR sonucu edinilebilir. Eksiksiz bir UNR durumunda, tüm hedefler bir UNR sonucuna sahip olduğunda, testin tekrarlanması gereklidir. Kısmi UNR durumunda, bir veya daha fazla hedef bir POS sonucuna sahip olduğunda ve diğer hedefler UNR sonucuna sahip olduğunda, testin yukarıda açıklandığı gibi tekrarlanması önerilir. Nadir durumlarda, tekrarlanan bir test ilk olarak POS olarak bildirilmiş hedefler için yürütüldüğünde tutarsız sonuçlar gözlemlenebilir. Geçerli laboratuvar prosedürleri uyarınca ilgili prosedürleri takip edin. Numuneler, yukarıda tanımlanan zaman dilimlerinde ilgili Sample Buffer Tube'leriyle tekrarlanabilir. Örneği/örnekleri bir (1) dakika boyunca vorteksleyin ve BD MAX Sisteminin Çalışması bölümündeki bilgileri izleyerek tekrar başlayın. Kalan gaita örneği, yukarıda belirtilen zaman çerçeveleri içinde yeni bir Sample Buffer Tube ile tekrar test için de kullanılabilir. Örnek Hazırlama kısmından tekrar başlayın. Belirsiz Sonuç Belirsiz sonuçlar, bir Sistem hatası olması durumunda alınabilir. Örnek(ler) karşılık gelen Sample Buffer Tube'lerinden yukarıda tanımlanan zaman çerçeveleri içinde tekrarlanabilir. Örneği/örnekleri bir (1) dakika boyunca vorteksleyin ve BD MAX Çalışması kısmından tekrar başlayın. Kalan gaita örneği, yeni bir Sample Buffer Tube ile yukarıda belirtilen zaman çerçeveleri içinde tekrar test için de kullanılabilir. Örnek Hazırlama kısmından tekrar başlayın. Uyarı veya hata kodu mesajlarının yorumlanması için BD MAX System Kullanıcı Kılavuzu'na 12 (Sorun Giderme kısmı) bakın. Eksik Sonuç Eksik sonuçlar, Örnek Hazırlama veya PCR tamamlanamazsa alınabilir. Örnek(ler) karşılık gelen Sample Buffer Tube'lerinden yukarıda belirtilen izin verilen zaman çerçeveleri içinde tekrarlanabilir. Örneği/örnekleri bir (1) dakika boyunca vorteksleyin ve BD MAX Çalışması kısmını izleyerek tekrar başlayın. Kalan gaita örneği, yukarıda belirtilen zaman çerçeveleri içinde yeni bir Sample Buffer Tube ile tekrar test için de kullanılabilir. Örnek Hazırlama kısmından tekrar başlayın. Uyarı veya hata kodu mesajlarının yorumlanması için BD MAX System Kullanıcı Kılavuzu'na 12 (Sorun Giderme kısmı) bakın. Harici Kontrol Hatası Harici Kontroller test edildiklerinde beklenen sonuçlar vermelidir. Numunelerin hatalı bir Harici Kontrol sonucu nedeniyle tekrarlanması gerekirse, Sample Buffer Tube'ten taze hazırlanmış Harici Kontroller ile birlikte yukarıda tanımlanan izin verilen zaman çerçeveleri içinde tekrarlanmaları gerekir. Örneği/örnekleri bir (1) dakika boyunca vorteksleyin ve BD MAX Çalışması kısmını izleyerek tekrar başlayın. Pre-warm (Ön Isıtma) Arızası Ön ısıtma arızası durumunda, etkilenen Sample Buffer Tube'ler tam 30 dakika soğutma döngüsü için ön ısıtma istasyonunda bırakılmalıdır. Soğutma döngüsü tamamlandığında, Sample Buffer Tube'ler, Saklama ve Stabilite kısmında tanımlanan zaman sınırlarını karşıladığı takdirde, BD Pre-warm Heater Çalışması kısmında açıklandığı gibi aynı Sample Buffer Tube'leri kullanarak ön ısıtma prosedürünü tekrar başlatın. Sample Buffer Tube'ler için tanımlanan Saklama ve Stabilite zaman aralığının dışındaysa, Örnek Hazırlama kısmından tekrar başlayarak orijinal örnekten yeni Sample Buffer Tube'ler hazırlayın. PROSEDÜRÜN KISITLI OLDUĞU ALANLAR Bu ürün sadece koruyucu içermeyen veya %10 formalinle sabitlenmiş insan dışkı örnekleri ile kullanılmak içindir. Rektal swablardan alınan dışkı örnekleri ve baryum ile kontamine olan dışkılar BD MAX Enteric Parasite Panel ile valide edilmemiştir. Hatalı sonuçların nedeni uygunsuz örnek toplama, muamele, saklama, teknik hata, örnek karışması veya örnekteki organizma sayısının testin analitik duyarlılığının altında olması olabilir. BD MAX Enteric Parasite Panel sonucu IND, INC veya UNR ise, bu durumda test tekrar edilmelidir. Bir BD MAX Enteric Parasite Panel pozitif sonucu canlı organizmaların mutlaka bulunduğu anlamına gelmez. Ancak, Giardia lamblia, Cryptosporidium parvum, Cryptosporidium hominis veya Entamoeba histolytica DNA'sının varlığını belirtir, BD MAX Enteric Parasite Panel organizmalarının tanımlanmasını sağlar. Primer veya prob bağlayıcı bölgelerdeki mutasyonlar veya polimorfizmler hedef organizmaların saptanmasını etkileyebilir ve BD MAX Enteric Parasite Panel ile yanlış negatif bir sonuç verebilir. Tüm PCR tabanlı in vitro diyagnostik testlerde olduğu gibi testin analitik duyarlılığının altında çok düşük hedef düzeyleri saptanabilir ama sonuçlar tekrar edilemeyebilir. Yanlış negatif sonuçlar numunelerin yetersiz toplanması, taşınması veya saklanması sonucunda nükleik asit kaybı veya yetersiz organizma lizisi nedeniyle oluşabilir. Örnek İşleme Kontrolü teste PCR amplifikasyonu inhibitörleri içeren örneklerin tanımlanmasına yardımcı olmak üzere eklenmiştir. Örnek İşleme Kontrolü nükleik asidin örneklerin yetersiz toplanması, taşınması veya saklanması nedeniyle kaybedilip kaybedilmediğini veya hücrelerin yetersiz lizise uğrayıp uğramadığını belirtmez. 9

10 BD MAX Enteric Parasite Panel sonuçları doktorun elindeki diğer bilgiler ve klinik gözlemlerle birlikte kullanılmalıdır. Tüm in vitro diyagnostik testlerle olduğu gibi pozitif ve negatif prediktif değerler prevalansa yüksek ölçüde bağlıdır. BD MAX Enteric Parasite Panel performansı prevalansa ve test edilen popülasyona göre değişebilir. BD MAX Sample Buffer Tube'ler organizmanın morfoloji muayenesini desteklemek üzere tasarlanmamıştır. Morfolojik muayene ve/veya boyama orijinal örnekten gerçekleştirilmelidir. Bu testin performansı Giardia lamblia, Cryptosporidium parvum, Cryptosporidium hominis veya Entamoeba histolytica izleme tedavisi için tesis edilmemiştir. BD MAX Enteric Parasite Panel, birbirleri arasında ayrım yapmadan C. hominis ve C. parvum 'dan DNA tespit etmek içindir. Bu test Cryptosporidium'un diğer türlerinden DNA tespit etmek için değildir. Bu test kalifiye bir testtir ve kuantitatif değerler sağlamaz veya mevcut organizmaların miktarını göstermez. Bu testin performansı immünolojik olarak engelli kişiler için veya gastrointertinal enfeksiyon semptomu olmayan hastalar için değerlendirilmemiştir. Müdahale eden maddelerin etkisi yalnızca aşağıdaki Etkileşen Maddeler bölümünde listelenen maddeler için değerlendirilmiştir. Olası interferans, Etkileşen Maddeler bölümünde açıklanan maddeler hariç diğer maddeler için değerlendirilmemiştir. Analitik Spesifite bölümünde listelenenler dışındaki organizmalarla çapraz reaktivite değerlendirilmemiştir. PERFORMANS ÖZELLİKLERİ BD MAX Enteric Parasite Panel'in performans özellikleri çok merkezli bir araştırma çalışmasında belirlenmiştir. Çalışma, örneklerin rutin hasta bakımının parçası olarak toplandığı, deneye katıldığı ve BD MAX Enteric Parasite Panel ile test edildiği, coğrafi olarak farklı, toplam beş (5) klinik merkezi içermiştir. Ek yedi (7) toplama merkezi, merkezi konumda değerlendirilecek örnekleri katmıştır. Örnekler hedef parazitik diyagnostik testlerin bir sağlık hizmetleri sağlayıcısı tarafından istendiği, akut bakteriyel gastroenterit, enterit veya kolitten şüphelenilen pediyatrik veya yetişkin hastalardan alınmıştır. Enterik parazitik patojenlerin tanımlanması amacıyla prospektif örnekler için standardize edilmiş referans yöntemi (DFA mikroskopi ve trikrom boyama), ardından ise kompozit referans yöntemini oluşturan ve alternatif PCR ile çift yönlü sekanslama uygulanmıştır. DFA, Cryptosporidium'u genus seviyesine kadar tanımladığı için çift yönlü sekanslama ile belirlenen C. hominis veya C. parvum haricinde DFA-pozitif örnekler referans yöntemi negatif olarak değerlendirilmiştir. Referans yöntemi testi, her bir ürünün ilgili prospektüsüne uygun şekilde gerçekleştirilmiştir. Retrospektif örnekler için, geçmiş sonuçları toplama tesisinde kaydedilmiş ve örnekler tekrar değerlendirilmiştir. Geçmiş sonuçları alternatif PCR ve hedef DNA'nın varlığını onaylamak üzere kompozit referans yönteminin parçası olarak iki yönlü sekanslama kullanılarak onaylanmıştır. Klinik değerlendirmeye toplam prospektif örnek (1.128 %10 formalinle sabitlenmiş, korunmayan ve 18 uyumsuz) ve 411 retrospektif örnek (148 %10 formalinle sabitlenmiş, 251 korunmayan ve 12 uyumsuz) kaydolmuştur. Tablo 3'te hasta yaşına ve örnek türüne göre katılan uyumlu örneklerin sayısı açıklanmaktadır. Geçmiş sonuçlar alternatif bir PCR ve iki yönlü sekanslama ile onaylanmadığından, toplam 128 retrospektif örnek aşağıdaki performans hesaplamalarına dahil edilmemiştir. Tablo 4 ila 7 boyunca klinik deney sırasında gözlemlenen, BD MAX Enteric Parasite Panel'in performans özellikleri açıklanmaktadır. Yaş Grubu Tablo 3: Yaş grubuna ve örnek tipine göre uyumlu klinik deney kayıt özeti Örnek Türü Formalin %10 Korunmayan Toplu 0 1 ay aydan 2 yıla yıl yıl yıl yaş üzeri Unknown (Bilinmeyen) Toplam

11 %10 formalinle sabitlenmiş örnek tipi için, BD MAX Enteric Parasite Panel sırasıyla %95,5 ve %99,7 Giardia lamblia prospektif pozitif ve negatif örnek, ve sırasıyla %100 ve %100 retrospektif pozitif ve negatif örnek tanımlamıştır. Korunmayan örnek tipi için, BD MAX Enteric Parasite Panel sırasıyla %94,4 ve %100 Giardia lamblia prospektif pozitif ve negatif örnek, ve sırasıyla %98,6 ve %94,9 retrospektif pozitif ve negatif örnek tanımlamıştır (Tablo 4). Tablo 4: Giardia lamblia - Klinik Performans Örnek Türü Örnek Kökeni BD MAX Enteric Parasite Panel P Referans Yöntem N Toplam %10 Formalinle Sabitlenmiş Korunmayan Prospektif Retrospektif Prospektif Retrospektif P N Toplam DUYARLILIK (%95 CI): %95,5 (%78,2, %99,2) ÖZGÜNLÜK (%95 CI): %99,7 (%99,1, %99,9) P N Toplam PPA (%95 CI): %100,0 (%93,5, %100,0) NPA (%95 CI): %100,0% (%94,9, %100,0) P N Toplam DUYARLILIK (%95 CI): %94,4 (%74,2, %99,0) ÖZGÜNLÜK (%95 CI): %100,0 (%99,4, %100,0) P ,6 79 N Toplam PPA (%95 CI): %98,6 (%92,6, %99,8) NPA (%95 CI): %94,9 (%89,8, %97,5) 1 Bu örnek için referans yönteminin alternatif PCR ve çift yönlü sekanslama bileşeni negatifti. Referans yönteminin DFA bileşeni pozitifti. Alternatif PCR ve çift yönlü sekanslama ile tutarsızlık tekrar testi uygulandı ve negatif sonuç verdi. DFA ile tutarsızlık tekrar testi uygulandı ve negatif sonuç verdi. On iki (12) replikat için BD MAX Enteric Parasite Panel ile tutarsızlık tekrar testi uygulandı ve tamamı negatif sonuç verdi (0/12). Örnek aynı zamanda tutarsızlık testi olarak Giardia antijeni EIA kullanılarak test edildi ve negatif sonuç verdi. 2 Bir (1) örnek tutarsızlık testi olarak Giardia antijeni EIA kullanılarak test edildi ve negatif sonuç verdi. Bu örneğin (6) replikatı için BD MAX Enteric Parasite Panel ile tutarsızlık tekrar testi uygulandı ve 1/6 pozitif sonuç verdi. Diğer iki (2) örnek için tutarsızlık testi uygulanmadı. 3 Bu örnek için referans yönteminin alternatif PCR ve çift yönlü sekanslama bileşeni negatifti. Referans yönteminin DFA segmenti pozitifti. Alternatif PCR ve çift yönlü sekanslama ile tutarsızlık tekrar testi uygulandı ve negatif sonuç verdi. DFA ile tutarsızlık tekrar testi uygulandı ve pozitif sonuç verdi. Altı (6) replikat için BD MAX Enteric Parasite Panel ile tutarsızlık tekrar testi uygulandı ve tamamı negatif sonuç verdi (0/6). Bu örnek aynı zamanda tutarsızlık testi olarak antijen algılayan EIA kullanılarak test edildi ve negatif sonuç verdi. 4 Bu örnek için tutarsızlık testi uygulanmadı. 5 Bir (1) örnek tutarsızlık testi olarak antijen algılayan EIA ve ticari olarak mevcut moleküler tayin testi kullanılarak test edildi ve ikisi için de pozitif sonuç verdi. Bu örneğin (6) replikatı için BD MAX Enteric Parasite Panel ile tutarsızlık tekrar testi uygulandı ve tamamı pozitif sonuç verdi (6/6). 6 Bir (1) örnek tutarsızlık testi olarak EIA ve ticari olarak mevcut moleküler tayin testi kullanılarak test edildi. EIA pozitif sonuç verdi ve moleküler tayin negatif sonuç verdi. Bu örneğin on bir (11) replikatı için BD MAX Enteric Parasite Panel ile tutarsızlık tekrar testi uygulandı ve 5 pozitif sonuç verdi (5/11). Diğer beş (5) örnek için tutarsızlık testi uygulanmadı. 11

12 %10 formalinle sabitlenmiş örnek tipi için, BD MAX Enteric Parasite Panel sırasıyla %90,3 ve %99,8 Cryptosporidium hominis/ parvum prospektif pozitif ve negatif örnek, ve sırasıyla %93 ve %100 retrospektif pozitif ve negatif örnek tanımlamıştır. Korunmayan örnek tipi için, BD MAX Enteric Parasite Panel sırasıyla %100 ve %99,5 Cryptosporidium hominis/parvum prospektif pozitif ve negatif örnek, ve sırasıyla %97,7 ve %98,4 retrospektif pozitif ve negatif örnek tanımlamıştır (Tablo 5'e bakın). Tablo 5: Cryptosporidium hominis/parvum Klinik Performans Örnek Türü Örnek Kökeni BD MAX Enteric Parasite Panel P Referans Yöntem N Toplam %10 Formalinle Sabitlenmiş Korunmayan Prospektif Retrospektif Prospektif Retrospektif P N 6 1, Toplam DUYARLILIK: %90,3 (%80,5, %95,5) ÖZGÜNLÜK: %99,8 (%99,2, %99,9) P N Toplam PPA: %93 (%81,4, %97,6) NPA: %100 (%95,3, %100) P N Toplam DUYARLILIK: %100 (%90,1, %100) ÖZGÜNLÜK: %99,5 (%98,6, %99,8) P N Toplam PPA: %97,7 (%88,2, %99,6) NPA: %98,4 (%95,3, %99,4) 1 Kompozit referans yönteminin DFA bileşenine göre tüm altı (6) örnek de pozitifti. Kompozit referans yönteminin alternatif PCR ve çift yönlü sekanslamasına göre bir (1) örnek C. parvum, olarak sekanslandı, üç (3) örnek negatif ve iki (2) örnek de raporlanamaz olarak sonuç verdi. 2 Tüm altı (6) örnekte de alternatif PCR ve çift yönlü sekanslama ile tutarsızlık tekrar testi uygulandı ve negatif sonuç verdi. Bir (1) örnek Cryptosporidium parvum olarak sekanslandı, bir (1) örnek Cryptosporidium felis olarak sekanslandı ve kalan dört (4) örnek de tutarsızlık tekrar testine göre PCR negatif sonucu verdi. Tutarsızlık testi aynı zamanda antijen algılayan ve Cryptosporidium ile Giardia arasında ayrım yapmayan EIA kullanılarak da uygulandı. İki örnek EIA negatifken dört örnek EIA pozitif sonuç verdi; bu dört örnek iki tanesi diğer test yöntemlerine göre Giardia için pozitifti. 3 Bir DFA-pozitif örnek, Cryptosporidium meleagridis'i tanımlayan alternatif PCR ve çift yönlü sekanslama sonuçlarına göre referans yöntemi negatif olarak sınıflandırıldı. 4 Altı DFA pozitif örnek, (4) Cryptosporidium canis, (1) C. meleagridis ve (1) Cryptosporidium spp'yi tanımlayan alternatif PCR ve çift yönlü sekanslama sonuçlarına göre referans yöntemi negatif olarak sınıflandırıldı. (tanımlanmamış) 5 Örnek başına on iki (12) replikat için BD MAX Enteric Parasite Panel ile tutarsızlık tekrar testi uygulandı. Bir örnek, on iki (12) replikatın beşi (5) için pozitif ve bir örnek de on iki (12) replikatın ikisi (2) için pozitif sonuç verdi. 6 Örnek başına altı (6) replikat için BD MAX Enteric Parasite Panel ile tutarsızlık tekrar testi uygulandı. Bir örnek, altı (6) replikatın beşi (5) için pozitif ve bir örnek de altı (6) replikatın üçü (3) için pozitif sonuç verdi. Üçüncü bir örnek için altı (6) replikatın altısı (6) için negatif sonuç verdi. 7 Örnek başına altı (6) replikat için BD MAX Enteric Parasite Panel ile tutarsızlık tekrar testi uygulandı. İki örnek, altı (6) replikatın altısı (6) için de negatifti. 12