BD MAX Enteric Parasite Panel In Vitro Diyagnostik Kullanım İçindir BD MAX Sistemi ile kullanım içindir

Transkript

1 BD MAX Enteric Parasite Panel In Vitro Diyagnostik Kullanım İçindir BD MAX Sistemi ile kullanım içindir P0195(04) Türkçe KULLANIM AMACI BD MAX Sistemi üzerinde gerçekleştirilen BD MAX Enteric Parasite Panel (BD MAX Enterik Parazit Paneli), enterik parazitik hastaların doğrudan teşhisi için in vitro diyagnostik bir testtir. BD MAX Enteric Parasite Panel nükleik asitleri aşağıdakilerden tespit eder: Giardia lamblia (SSU rrna) Cryptosporidium hominis ve C. parvum (Cryptosporidium-spesifik DNA parçacığı), Entamoeba histolitika (SSU rrna) Test, şüpheli gastroenteritisi, enteritisi veya kolisiti olan semptomatik hastalardan alınmış korunmayan veya %10 formalin sabitlenmiş dışkı örnekleri üzerinde gerçekleştirilir. Testin, klinik değerlendirme ve diğer laboratuvar bulguları ile birlikte kullanıldığında gastrointestinal enfeksiyon tanısına yardımcı olması amaçlanmıştır. Doğrudan örnek üzerinde yapılan bu testte spesifik hedeflerin amplifikasyonu için gerçek zamanlı polimeraz zincir reaksiyonu (PCR) kullanılır. Testte amplifiye DNA'nın saptanması için florojenik gene özgü hibridizasyon probları kullanılır. Bu testin, Giardia lamblia, Cryptosporidium (C. hominis ve C. parvum), ayrıca Entamoeba histolytica enfeksiyonlarının ayırıcı tanısında yardımcı olarak klinik sunum, laboratuvar bulguları ve epidemiyolojik bilgiler ile birlikte kullanılması amaçlanmıştır. Bu testin sonuçları, tanıda, tedavide veya diğer hastaların yönetimiyle ilgili kararlarda tek dayanak olarak ele alınmamalıdır. Pozitif test sonuçları, bu testle saptanmamış diğer organizmaların varlığında gelişen koenfeksiyon olasılığını ortadan kaldırmaz ve hastalığın tek veya ayırıcı nedeni olmayabilir. Gastroenterit ve/veya kolit ile uyumlu klinik hastalık varlığında elde edilen negatif test sonuçları, bu testle saptanmamış patojenlerin oluşturduğu bir enfeksiyondan veya ülseratif kolit, irritabl bağırsak sendromu veya Crohn hastalığı gibi bulaşıcı olmayan nedenlerden kaynaklanabilir. PROSEDÜRÜN ÖZETİ VE AÇIKLAMASI Enterik hastalıklara neden olan organizmalar dünya genelinde morbidite ve mortalitenin önemli bir nedenini oluşturmaktadır. Enterik enfeksiyonlar vücuda gastrointestinal yolla girer veya genellikle kontamine gıda ve su aracılığıyla ya da kusmuk veya gaita ile temas yoluyla yayılır. CDC, Birleşik Devletler de her yıl i hastaneye yatma ve i ölümle sonuçlanan 48 milyon gıda kaynaklı hastalık vakası otaya çıktığını tahmin etmektedir. 1 Gelişmekte olan dünyada, bu hastalıklar yılda yaklaşık 2 milyon küçük çocuğun ölümüne neden olmaktadır. 3 Sebep olan ajanların her biri karın krampları veya karın ağrısı, iştah kaybı, bulantı ya da kusma da dahil olmak üzere kısmen farklı semptomlara sebep olabilir; ancak tümü diyareye neden olur. 4 Tekrarlanan diyare nöbetleri ve dirençli diyare hastalığı bağırsak işlevini ve emilimi bozabilir, potansiyel olarak çocukluk zafiyeti ve büyümenin gecikmesine yol açabilir. 5 Diyare etiyolojilerinin arasında virüsler, bakteriler ve parazitler bulunur. Entamoeba histolytica, Giardia lamblia ve Cryptosporidium hominis ve C. parvum ishale neden olan önemli parazitler olarak bilinir. Üç organizma da kontamine gıda ve su tüketimi nedeniyle fekal-oral yolla bulaşır ve genellikle salgınlarla ilişkilendirilir. Entamoeba histolytica enfeksiyonları genelde asemptomatiktir. Belirtiler ortaya çıktığında, hafif ila şiddetli diyare ve mide şişkinliği yaygın olarak görülür. Hastalık devam ettiğinde kilo kaybı ve yorgunluğu içerecek şekilde seyir gösterebilir. 6 Entamoeba histolytica enfeksiyonu da doku yıkımına ve karaciğer apsesine yol açarak invazif bir hal alabilir. 7 Cryptosporidium hominis ve C. parvum sriptosporidiosise neden olur, bu karın kramplarının, ateşin, mide bulantısı, kusma ve kilo kaybının eşlik ettiği sulu ishalle karakterize edilir. İmmünkompromize hastalarda enfeksiyonun sonucu olarak kolanjit veya pankreatit gelişebilir. 6,8 Bununla birlikte asemptomatik enfeksiyonlar da meydana gelebilir. Tüm dünyada, Giardia su ile bulaşan hastalık çıkışları ile ilişkilendirilen en sık tanımlanan parazitlerden biridir. 8 Giyardiyaz diyare, abdominal kramplar, mide şişkinliği, kilo kaybı ve malabsorpsiyon ile şekillenir. Giyardiyaz ile enterik bozukluklar, alerjiler ve reaktif artrit ilişkilendirilmiştir. Hastalık genellikle kendini sınırlayıcıdır ve asemptomatik enfeksiyonlar da meydana gelebilir. 1

2 Mikroskobik saptama yoğundur ve uzun bir süre, ekipman ve eğitimi gerektirir. Ek olarak, mikroskobi Entamoeba histolytica'yı patojenik olmayan Entamoeba dispar türlerinden ayrıştıramaz. 9 PCR geleneksel yöntemlerden daha duyarlıdır ve daha erken saptama becerisi gösterebilir, bu da birden fazla gaita numunesinin test edilmesi ve hasta yönetiminin ve enfeksiyon kontrolünün iyileştirilmesi ihtiyacını azaltabilir. 10 BD MAX Enteric Parasite Panel Giardia lamblia, Cryptosporidium hominis ile parvum ve Entamoeba histolytica'yı eşzamanlı ve diferansiyel olarak saptayan çoklu bir test kitidir. BD MAX Enteric Parasite Panel, BD MAX Sistemi ile birlikte kullanıldığında, yaklaşık 4,5 saatte 24 tür için sonuçlar sağlayabilir. BD MAX Enteric Parasite Panel, örneğin BD MAX Sistemi'ne yerleştirilmesinden sonuçların çıkmasına kadar kullanıcı müdahalesi için ihtiyacı ortadan kaldırarak test sürecini düzene koyar ve basitleştirir. Yumuşak ila diyareli dışkı örneği toplanır ve laboratuara gönderilir, homojenize edilip bir BD MAX Enteric Parasite Panel Sample Buffer Tube'e (BD MAX Enterik Bakteriyel Parasit Panel Örnek Tampon Tüpü) aktarılır. Sample Buffer Tube, septum bir başlık ile kapatılır ve parazit organizmaların lizisini kolaylaştırmak için BD Pre-warm Heater'da (BD Ön Isıtma Isıtıcısı) ısıtılır. Ardından, Sample Buffer Tube vortekslenir ve BD MAX Sistemine aktarılır, burada aşağıdaki otomatik prosedür oluşur: hücreler lizise uğratılır; nükleik asitler manyetik boncuklardan ekstrakt ve konsantre edilir; son olarak da, varsa, BD MAX PCR Cartridge'teki (BD MAX PCR Kartuş) genetik hedefi amplifiye etmek için kullanılan hedefe spesifik primerlerin bulunduğu ayrılan nükleik asit alikotu PCR reaktiflerine eklenir. Bu testte de Örnek İşleme Kontrolü vardır. İnhibitör maddeler, enstrüman veya reaktif hatası işlemini izlemek için Örnek İşleme Kontrolü Ekstraksiyon Tüpünde kalır ve ekstraksiyon, konsantrasyon ve amplifikasyon adımlarını uygular. BD MAX Sistemi'ne örnek, BD MAX Unitized Reagent Strip (BD MAX Ünitelendirilmiş Reaktif Stribi) ve PCR Cartridge'i yüklendikten sonra operatör müdahalesi gerekmez. BD MAX Sistemi örnek lizisi, nükleik asit ekstraksiyonu ve konsantrasyonu, reaktif rehidrasyonu, nükleik asit amplifikasyonu ve gerçek zamanlı polimeraz zincir reaksiyonu (PCR) kullanılarak hedef nükleik asit sekansının saptanmasını otomatik olarak gerçekleştirir. Amplifiye hedefler, sönmüş floroforlarla etiketlenmiş hidroliz problarıyla algılanır. Sinyallerin amplifikasyonu, saptanması ve yorumlanması BD MAX Sistemi tarafından otomatik olarak yapılır. PROSEDÜR İLKELERİ Hastalardan gaita örnekleri alınır ve temiz bir kapta, koruyucu olmadan veya %10 formalinle sabitlenmiş olarak laboratuvara gönderilir. Örnek vortekslenir ve 10 µl öze, özenin derinliğine kadar örneğe yerleştirilir ve bir döndürme hareketiyle BD MAX Sample Buffer Tube e akıtılır. Sample Buffer Tube, septum bir başlık ile kapatılır ve parazit organizmaların lizisini kolaylaştırmak için BD Pre-warm Heater'da ısıtılır. Sample Buffer Tube vortekslenir ve BD MAX Sistemi'ne aktarılır. İş listesi oluşturulup örnek, BD MAX Enteric Parasite Panel Unitized Reagent Strip ve PCR Cartridge ile birlikte BD MAX cihazına yüklendikten sonra, çalışma başlatılır ve daha fazla kullanıcı müdahalesi gerekmez. BD MAX Sistemi hedef organizma lizisi, DNA ekstraksiyonu ve konsantrasyonu dahil örnek hazırlanmasını, reaktif rehidrasyonu, hedef nükleik asit sekansının amplifikasyonu ve gerçek zamanlı PCR kullanılarak saptanmasını otomatik olarak gerçekleştirir. Sinyalin yorumlanması BD MAX Sistemi tarafından otomatik olarak yapılır. Bu test ayrıca Ekstraksiyon Tüpünde bulunan ve ekstraksiyon, konsantrasyon ve amplifikasyon adımlarına tabi olan bir Numune İşleme Kontrolü içerir. Sample Processing Control, potansiyel inhibitör maddelerin varlığını ve sistem veya reaktif arızalarını izlemek için lizis, ekstraksiyon, konsantrasyon ve amplifikasyon adımlarına dahil edilmiştir. Yüksek bir sıcaklıkta enzimatik hücre lizisi sonrasında serbest kalan nükleik asitler manyetik afinite boncuklarında yakalanır. Bağlı nükleik asitlerin bulunduğu boncuklar yıkanır ve nükleik asitler Elüsyon Tamponu'nda ısıyla ve yüksek ph ile elüsyona uğratılır. Elüe edilmiş DNA nötralize edilir ve PCR reaktiflerinin rehidrasyonu için Master Mix Tube içine aktarılır. Rehidrasyon sonrasında, BD MAX Sistemi BD MAX PCR Cartridge'a PCR için sabit bir hazır solüsyon hacmi verir. BD MAX PCR Cartridge'daki mikrovalfler PCR başlamadan önce amplifikasyon karışımını sınırlamak ve böylece buharlaşma ve kontaminasyonu önlemek için sistem tarafından mühürlenir. Amplifiye DNA hedefleri bir uçta söndürücü kısım ve öteki uçta bir floresan raportör boya (florofor) ile etiketlenmiş hidroliz (TaqMan) problarıyla saptanır. Farklı floroforlarla etiketlenmiş problar, BD MAX Sistemi'nin dört farklı optik kanalında enterik parazit hedefleri (Entamoeba histolytica ve Giardia lamblia ve Cryptosporidium spesifik DNA fragmanından SSU rrna genleri) ve Sample Processing Control için amplikonları saptamak amacıyla kullanılır. Problar doğal durumundayken florofor floresansı söndürücüye yakınlığı nedeniyle söndürülür. Ancak hedef DNA varlığında problar tamamlayıcı sekanslarına hibridize olur ve DNA polimerazın, DNA şablonu boyunca yeni oluşan iplikçiği sentezlerken 5-3 ekzonükleaz aktivitesi ile hidrolize uğrar. Bunun sonucunda floroforlar söndürücü moleküllerden ayrılır ve floresan yayılır. BD MAX Sistemi bu sinyalleri her döngüde izler ve program sonunda verileri son sonuçları raporlamak üzere yorumlar. 2

3 REAKTİFLER VE MATERYALLER REF İçindekiler Miktar BD MAX Enteric Parasite Master Mix (BD MAX Enterik Parazit Ana Karışımı) (A7) TaqMan'e spesifik moleküler problar ve primerlerle birlikte Örnek İşleme Kontrolü'ne spesifik TaqMan probu ve primerleri içeren fazla kurutulmuş PCR Master Mix. BD MAX Enteric Parasite Unitized Reagent Strips (BD MAX Enterik Parazit Ünitelendirilmiş Reaktif Stripleri) DNA Ekstraksiyonu için gerekli tüm sıvı reaktifler ve tek kullanımlık pipet uçlarını içeren Ünitelendirilmiş Reaktif Stripleri. BD MAX Enteric Parasite Extraction Tube (BD MAX Enterik Parazit Ekstraksiyon Tüpü) (B2) DNA manyetik afinite boncukları, protaz reaktifleri ve Örnek İşleme Kontrolü içeren fırınlanarak kurutulmuş pellet. BD MAX Enteric Parasite Sample Buffer Tube (BD MAX Enterik Parazit Örnek Tamponu Tüpü) Septum Kapağı test 24 test 24 test 24 test GEREKLİ FAKAT SAĞLANMAMIŞ EKİPMAN VE MALZEMELER BD MAX Pre-warm Heater (BD MAX PCR Kartuşları) (BD Diagnostic Systems Katalog no ) BD MAX PCR Cartridges (BD MAX PCR Kartuşları) (BD Diagnostic Systems Katalog no ) VWR Çoklu Tüp Vorteks Karıştırıcı (VWR Kat. No ) Vortex Genie 2 (VWR, Kat. No ) veya eşdeğeri Nalgene Kriyojenik Flakon Tutucu (VWR, Kat. No ) Tek kullanımlık eldivenler, pudrasız 10 µl öze (BD katalog no ) Korunmayan gaita örneği türleri için: Sıvı veya yumuşak gaita örnekleri toplamak için kuru, temiz kaplar %10 formalinle sabitlenmiş gaita örneği türleri için: %10 formalin taşıma elemanı/elemanları (15 ml) UYARILAR VE ÖNLEMLER BD MAX Enteric Parasite Panel in vitro Diyagnostik Kullanım içindir. Sonuçları tanımlamak ve izlemek amacıyla doğrulama için gerekli ölçümleri belirlemek üzere devlet ve yerel kamu sağlık yetkilileri Giardia ve Cryptosporidium da dahil olmak üzere kendi yetkileri dahilinde rapor edilebilir hastalıkların bildirimi için kılavuzlar yayınlamıştır. Laboratuarlar, klinik materyallerin veya izolatların pozitif örnek olarak kendi kamu sağlık laboratuarlarına gönderilmesi için aşağıdaki devlet veya yerel yönetmeliklerden sorumludur. Son kullanma tarihi geçmiş reaktifler ve/veya materyalleri kullanmayın. Geldiğinde dış kartonu mühürleyen etiket bozulmuşsa kiti kullanmayın. Koruyucu poşetler geldiklerinde açık veya yırtıksa reaktifleri kullanmayın. Reaktif poşetleri içinde kurutucu yoksa veya kırılmışsa reaktifleri kullanmayın. Kurutucuyu reaktif poşetlerinden çıkarmayın. Reaktiflerin koruyucu poşetini her kullanımdan sonra fermuar şeklinde kapanan mühürle hemen kapatın. Mühürlemeden önce varsa poşetlerdeki fazla havayı çıkarın. Reaktifleri ısıya ve neme karşı koruyun. Neme uzun süre maruz kalma ürün performansına etki edebilir. Folyo bozulmuş veya hasarlıysa reaktifleri kullanmayın. Farklı poşetler ve/veya kitler ve/veya lotlardan reaktifleri karıştırmayın. Kontaminasyon oluşacağından ve test sonuçlarını olumsuz etkileyebileceğinden kapakları birbirleriyle değiştirmeyin veya tekrar kullanmayın. Ünitelendirilmiş Reaktif Stripleri uygun sıvı dolması için kontrol edin (sıvıların tüplerin alt kısmında olmasını sağlayın) (bkz. Şekil 1). Tüm pipet uçlarının var olduğundan emin olmak için Ünitelendirilmiş Reaktif Striplerini kontrol edin (bkz. Şekil 1). Master Mix ve Ekstraksiyon Tüp barkod okunabilirliği bozulabileceği için kimyasal solüsyonları kullanırken dikkatli olun. Bu testin düzgün yapılması için uygun laboratuvar tekniği şarttır. Testin yüksek analitik hassasiyeti nedeniyle tüm malzemelerin ve reaktiflerin saflığını korumak için büyük dikkat gösterilmelidir. Diğer PCR testlerinin laboratuvarda aynı alanlarda gerçekleştirilmesi durumunda, BD MAX Enteric Parasite Panel, test için gereken herhangi bir ek reaktif ve BD MAX Sistemi'nin kontamine olmamasına dikkat edilmelidir. Her zaman reaktiflerin mikrobiyal ve deoksiribonükleaz (DNase) kontaminasyonundan kaçının. Reaktifler ve kartuşlar kullanılmadan önce eldivenler değiştirilmelidir. Amplikonlu ortamların kontaminasyonunu önlemek için kullandıktan sonra BD MAX PCR Cartridges'u parçalarına ayırmayın. BD MAX PCR Cartridges mühürleri kontaminasyonu önleyecek şekilde tasarlanmıştır. Çapraz kontaminasyon riskinin en aza indirilmesi için laboratuvarda rutin olarak çevrenin izlenmesi gerekmektedir. 3

4 BD MAX Enteric Parasite Panel'in örnek taşıması ve saklanması için önerilen süre ve sıcaklık aralıklarının dışına çıkması geçersiz sonuçlara neden olabilir. Belirtilen süreler içinde yapılmayan testler tekrarlanmalıdır. Yerel, bölgesel, eyalet ve/veya ulusal yönetmelikler veya sertifikasyon sağlayan kurumların kılavuz ilkelerine ya da gerekliliklerine göre ek kontroller test edilebilir. Örnekleri her zaman bulaşıcı olabilirlermiş gibi ve CLSI Belgesi M29 11 'de ve Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories de tanımlandığı şekilde güvenli laboratuvar prosedürlerine göre kullanın. 12 Tüm reaktifleri kullanırken koruyucu giysiler ve tek kullanımlık eldivenler kullanın. Testi yaptıktan sonra ellerinizi iyice yıkayın. Ağzınızla pipetlemeyin. Örneklerin veya kit reaktiflerinin kullanıldığı yerlerde sigara içmeyin, bir şey içmeyin, çiğnemeyin ya da yemeyin. Kullanılmayan reaktifleri ve atığı yerel, bölgesel, eyalete özgü ve/veya ulusal yönetmeliklere göre atın. Ek uyarılar, önlemler ve prosedürler için BD MAX System Kullanıcı Kılavuzu'na 13 veya BD Pre-warm Heater Kullanıcı Kılavuzu'na 14 bakın. SAKLAMA VE STABİLİTE Koruyucu olmayan veya %10 formalin sabitlenmiş dışkı taşıma sırasında 2 C ila 25 C arasında saklanmalıdır. Donmaya veya aşırı sıcağa maruz kalmaya karşı koruyun. Örnekler, ister korunmamış ister %10 formalin sabitlenmiş dışkı olsun, test yapılmasından önce 2 8 C'de 5 güne kadar veya 2 25 C'de 48 saate kadar saklanabilir. İnoküle edilen Sample Buffer Tube'leri örnek işleme veya PCR arızası nedeniyle tekrar test edilmeden önce 2 8 C'de 5 güne kadar veya 2 25 C'de 48 saate kadar saklanabilir (Tekrar Test Prosedürü bölümüne bakın). BD MAX Enteric Parasite Panel bileşenleri 2 25 C'de belirtilen son kullanma tarihine kadar stabildir. Son kullanma tarihi geçmiş bileşenleri kullanmayın. BD MAX Enteric Parasite Master Mix ve Extraction Tubes (BD MAX Enterik Parasit Ana Karışım ve Ekstraksiyon Tüpleri) mühürlenmiş poşetlerde sağlanır. Ürünü nemden korumak için açtıktan hemen sonra tekrar mühürleyin. Reaktif Tüpleri, ilk açma ve tekrar mühürlenmesinden sonra 2 25 C'de 14 güne kadar stabildir. KULLANIM TALİMATLARI Numune Toplama/Nakil Yeterli miktarda örnek almak için örnek toplama işlemi yakından izlenmelidir. Sıvı veya yumuşak gaita örnekleri kuru, temiz bir kap kullanılarak şu işleme göre toplanır: Korunmayan örnekler: Gaita örneğini kuru, temiz bir kaba aktarın. Su veya idrar ile kirlenmesinden kaçının. Kabı etiketleyin ve laboratuara kurumun standart işletim prosedürlerine göre taşıyın ( Saklama ve Stabilite kısmına bakın). Tuvalet kağıdı, su veya sabunu örnekle karıştırmaktan kaçının. %10 formalinle sabitlenmiş örnekler: Gaita örneğini üreticinin talimatları uyarınca fiksatif bir aygıta aktarın. Su veya idrar ile kirlenmesinden kaçının. Kabı etiketleyin ve laboratuara kurumun standart işletim prosedürlerine göre taşıyın ( Saklama ve Stabilite kısmına bakın). Tuvalet kağıdı, su veya sabunu örnekle karıştırmaktan kaçının. Numune Hazırlama NOT: Test edilecek her numune ve her Harici Kontrol için bir (1) Örnek Tampon Tüpü, bir (1) Septum Kapağı, bir (1) Ana Karışım (A7), bir (1) Ekstraksiyon Tüpü (B2) ve bir (1) Ünitize Reaktif Stripi gereklidir. Gereken sayıda BD MAX malzemesini koruyucu poşetlerinden veya kutularından çıkarın. Açılmış Ana Karışım veya Ekstraksiyon Tüpü torbalarını saklamak için fazla havayı çıkarın ve poşetleri fermuar şeklinde kapanan mührü kullanarak kapatın, nem emici paketin poşette olduğundan emin olun. 1. Barkodlanmış BD MAX Sample Buffer Tube'ü (saydam kapak) uygun örnek tanımlaması ile etiketleyin. Barkodu gizlemeyin. 2. Korunmayan veya sabitlenmiş örnekleri 15 saniye boyunca yüksek hızda vorteksleyin. 3. Sample Buffer Tube'ten şeffaf kapağı çıkarın. 4. BD MAX Sample Buffer Tube'ün İnokülasyonu: a. Korunmayan gaita örnekleri için: i. Tüm öze kısmı örneğe batana dek 10 μl tek kullanımlık bir inokülasyon özesi yerleştirin. Mil üzerindeki fazla gaita PCR reaksiyonunu aşırı yükleyebileceği için özeden ilerisini sokmayın. ii. Yüklü özeyi Sample Buffer Tube e yerleştirin ve döndürme hareketi ile örneği çıkarın. iii. Özü çıkarıp atın. NOT: Tüm örneğin özeden çıkarılmasına gerek yoktur. Ortaya çıkan Sample Buffer Tube çözeltisi çay lekesi renginden daha koyu olmamalıdır. b. %10 formalinle sabitlenmiş gaita örnekleri için: i. Tüm öze kısmı örneğe batana dek 10 μl tek kullanımlık bir inokülasyon özesi yerleştirin. Özede stabil kabarcık oluşumuyla sabitlenmiş örneklerin elde etmesi zor olabilir. 4

5 ii. Yüklü özeyi Sample Buffer Tube e yerleştirin ve döndürme hareketi ile örneği çıkarın. iii. Özü çıkarıp atın. 5. Mavi Septum Kapağı kullanarak inoküle edilen Sample Buffer Tube'ü tekrar kapaklayın. 6. Varsa test için ek örnekleri Adım 1-5'i tekrarlayarak hazırlayın ve sonra hemen BD Pre-warm Heater Çalışması'na geçin. BD Pre-warm Heater Çalışması (Çalıştırma talimatları için BD Pre-warm Heater Kılavuzu'na bakın.) 1. Çalıştırma çalışma listesi ekranından (Run > Worklist (Çalıştır > Çalışma Listesi)) <BD MAX Ent Parasite > (<BD MAX Ent Parazit>) seçeneğini seçin. 2. Barkod tarayıcıyı kullanarak veya hasta erişim kimliğinin yanı sıra manuel girdi ile Sample Tube (Örnek Tüpü) alanında her bir BD MAX Enteric Parasite Panel SBT'den barkodu girin. 3. Run > Kit Inventory (Çalıştır > Kit Envanteri) öğesinden BD MAX Enteric Parasite Panel için kit lot numarasını barkodu tarayıcı ile tarayarak veya manuel olarak girin (lot izlenebilirliği için). 4. Bekleyen çalışma listesi artık güncellenir ve Pre-warm (Ön Isıtma) adımının planlanması için onay kutusunu görüntüler. 5. Bekleyen çalışma listesindeki kutuyu işaretleyerek örneği programlayın. 6. BD MAX Enteric Parasite Panel Sample Buffer Tube'ü (örneği içeren) BD Pre-warm Heater'a yerleştirin. İstasyon en çok 24 Sample Buffer Tube'ü barındırır. 7. BD Pre-warm Heater'daki kapağı kapatın ve Run>Worklist Panel'inde (Çalıştır>Çalışma Listesi Paneli) Pre-warm (Ön Isıtma) seçeneğini seçin. Spesifik bir BD MAX Enteric Parasite Panel ısıtma ve soğutma profili başlatılır. 8. Pre-warm çalışmasının tamamlanma süresi durum ekranında görüntülenir. 9. Pending (Bekleyen) çalışma listesi ekranında, seçilen numune/test artık 'Pre-warm Complete' (Ön Isıtma Tamamlandı) olarak görüntülenir. 10. Pre-warm adımı başarılı bir şekilde tamamlandıktan sonra, Sample Buffer Tube'ü BD Pre-warm Heater'dan çıkarın ve her bir Sample Buffer Tube'ü 5 saniye boyunca kısaca vorteksleyin veya alternatif olarak tüm Sample Buffer Tube'leri 1 dakikaya kadar çoklu vorteksleyiciye yerleştirin. 11. BD MAX System Rack'ı (BD MAX Sistem Rakı) ayarlamak için BD MAX Sistem İşlemine geçin. NOT: BD MAX Enteric Parasite Panel yalnızca yukarıdaki ön ısıtma adımının başarıyla tamamlanmasından sonra gerçekleştirilebilir. Ön ısıtma döngüsünü başarıyla tamamlamış numunelerin, yeniden test etmenin gerekli olduğu olayda tekrar ısıtılmasına gerek olmaz. BD MAX System Çalışması NOT: Ayrıntılı talimat için BD MAX System Kullanıcı Kılavuzu'na 13 başvurun (Çalıştırma kısmı). NOT: BD MAX Enteric Parasite Panel in testi yukarıdaki Pre-warm adımından hemen sonra yapılmalıdır (BD Pre-warm Heater Çalışması, Adım 10'a bakın). Yeniden test etmek gerekirse örnekleri yeniden vorteksleyin. 1. BD MAX System'in gücünü açın (daha önce yapılmadıysa) ve <user name> (kullanıcı adı) ve <password> (şifre) girerek oturum açın. 2. Reaktifler ve kartuşlar kullanılmadan önce eldivenler değiştirilmelidir. 3. BD MAX Enteric Parasite Panel kitinden gerekli sayıda Ünitelendirilmiş Reaktif Stribi çıkarın. Her Ünitelendirilmiş Reaktif Stribini, tüm sıvıların tüplerin alt kısmında olmasını sağlayacak şekilde sert bir yüzeye hafifçe vurun. 4. Gerekli sayıda Ekstraksiyon Tüpü/Tüpleri ve Master Mix Tüpü/Tüplerini koruyucu poşetlerinden çıkarın. Fazla havayı çıkarın ve poşetleri fermuar şeklinde kapanan mühür ile kapatın. 5. Test edilecek her örnek için bir (1) Ünitelendirilmiş Reaktif Stribi BD MAX System Rack'a, Rak A Pozisyon 1 ile başlayarak yerleştirin. 6. Bir (1) Ekstraksiyon Tüpünü (beyaz folyo) Şekil 1'de gösterildiği gibi her Ünitelendirilmiş Reaktif Stribinde Pozisyon 1 içine tıklatarak oturun. 7. Bir (1) Master Mix Tube'ü (yeşil folyo) Şekil 1'de gösterildiği gibi her Ünitelendirilmiş Reaktif Stribinde Pozisyon 2 içine tıklatarak oturun. 5

6 Şekil 1: BD MAX Enteric Parasite Extraction Tube ve Master Mix Tube'leri Reaktif Striplerine tıklatarak oturtun 8. Sample Buffer Tube'lerini adım 5 ila 7'de belirtildiği gibi ilgili Ünitelendirilmiş Reaktif Striplerine karşılık gelen BD MAX System Rack(lar) içine yerleştirin. NOT: Sample Buffer Tube'lerini, 1D barkod etiketleri dışarıya bakacak şekilde (böylece örnek kaydedilirken Sample Buffer Tube'leri daha kolay taranabilir) örnek rafına/raflarına yerleştirin. 9. BD MAX System'e gereken sayıda BD MAX PCR Cartridge(s) yerleştirin (bkz. Şekil 2). Her BD MAX PCR Cartridge en fazla 24 örnek barındırır. BD MAX System, her çalışma için BD MAX PCR Cartridge'da pozisyon ve sırayı otomatik olarak seçer. BD MAX PCR Cartridges tüm şeritler kullanılıncaya dek birden fazla kullanılabilir. BD MAX PCR Kartuşlarının kullanımını maksimuma çıkarmak için, 2000 Sample Mode'u kullanarak, şerit atamaları için Worklist (Çalışma listesi) sekmesinin altında Run Wizard'ı (Sihirbazı Yürüt) seçin. Daha fazla ayrıntı için BD MAX System Kullanıcı Kılavuzu'na başvurun. Şekil 2: BD MAX PCR Cartridge'larını Yükleyin 10. Rakı/rakları BD MAX System'e yükleyin (Şekil 3). A Tarafı B Tarafı Şekil 3: Rakı/Rakları BD MAX Sistemi'ne yükleyin. 6

7 11. BD MAX System kapağını kapatın ve işleme başlamak için <Start> (Başlat) öğesine tıklayın. 12. Çalışma sonunda, sonuçları hemen kontrol edin veya Sample Buffer Tube leri 2 8 C'de 5 güne kadar VEYA 25 ± 2 C'de sonuçlar kontrol edilinceye kadar maksimum 48 saat saklayın. NOT: Bir çalışma sırasında bir septum kapağı hasar görmüşse örneği saklamadan önce yenisiyle değiştirin. NOT: Hazırlanmış BD MAX Enteric Parasite Panel Sample Buffer Tube leri, örnek, Sample Buffer Tube'üne eklendikten sonra 2 8 C'de maksimum 120 sa (5 gün) VEYA 25 ± 2 C'de maksimum 48 sa saklanabilir. Bir IND (Belirsiz), UNR (Çözümlenmemiş) veya INC (Eksik) sonuç elde edildiğinde veya bir Harici Kontrol hatası oluştuğunda bu zaman çerçevesi içinde hazırlanan Sample Buffer Tube'ten bir test tekrarı yapılmalıdır ( Tekrar Test Prosedürü kısmına bakın). KALİTE KONTROLÜ Kalite kontrol prosedürleri test performansını izler. Laboratuvarlar, tüm analitik sürecin etkililiğini izlemek için yerel, bölgesel, eyalet, ulusal ve/veya ülke yönetmeliklerinin ya da sertifikasyon sağlayan kurumların kılavuz ilkelerine veya gerekliliklerine göre kontrol malzemelerinin sayısını, türünü ve test edilme sıklığını ortaya koymalıdır. Genel Kalite Kontrolü rehberliği için CLSI MM3 ve EP12. 15,16 kısımlarına bakabilirsiniz. 1. Harici Kontrol materyallerini BD sağlamaz. BD MAX System yazılımında örnek test sonucunu yorumlamak amacıyla Harici Pozitif veya Negatif Kontroller kullanılmaz. Harici kontroller hasta örnekleriymiş gibi ele alınır. (Harici Kontrol test sonuçlarının yorumlanması için Sonuçların Yorumlanması bölümündeki tabloya bakın. 2. Bir (1) Harici Pozitif Kontrol ve bir (1) Harici Negatif Kontrol, her bir laboratuvar düzeninde BD MAX System'de yeterli işlem doğrulama elde edilinceye kadar en azından günlük olarak yürütülmelidir. Kontrol testinin azaltılmış sıklığı ilgili yönetmeliklere uygun olmalıdır. 3. Harici Pozitif Kontrol, önemli reaktif hatalarını izlemek üzere tasarlanmıştır. Harici Negatif Kontrol, hedef nükleik asitlerle reaktif veya çevresel kontaminasyonu (veya taşımayı) saptamak üzere tasarlanmıştır. 4. Kullanıcının laboratuvar kalite kontrolü programı için en uygun kontrolü seçmesini mümkün kılmak üzere çeşitli tiplerde Harici Kontroller önerilir. a. Harici Negatif Kontrol: İnoküle edilmemiş BD MAX Enteric Parasite Panel Sample Buffer Tube'ü. BD, kontrol preparatının sonucu olarak kontaminasyon potansiyelini azaltmak için Harici Negatif Kontrol'ün Harici Pozitif Kontrol'den önce hazırlanmasını önerir. b. Harici Pozitif Kontrol: BD, tüm hedefler için organizma osisti/sistinin ticari olarak mevcut olmayışı ve hedef organizmaların trofozoit formu için yorucu kültür yöntemleri nedeniyle harici pozitif kontroller için Tablo 1'e göre genomik DNA'nın kullanılmasını önerir. Tablo 1: Harici Pozitif Kontrol için Ticari Olarak Temin Edilebilir Suşlar Harici Pozitif Kontrol Suşu Hedef Genomik DNA konsantrasyonu Giardia intestinalis (Lambl) (ATCC 30888D) Cryptosporidium parvum (ATCC PRA-67D) SSU rrna geni Cryptosporidium spesifik DNA fragmanı geni hedefi pg/ml pg/ml Entamoeba histolytica SSU rrna gen hedefi 150 pg/ml (ATCC 30459D) NOT: Üretici tarafından önerildiği gibi saklandığında, kantifiye edilen stok genomik DNA çözeltileri yukarıda açıklanan çoklu karışımları hazırlamak için kullanılabilir. (1) Öğe kurutulmuş formda alınırsa, flakonun içindekileri satıcının ürün sayfasında belirtildiği gibi 50 µl 1X TE Tampon (10 mm Tris-HCl, 1 mm EDTA, ph=8,0, Moleküler Biyoloji Kalitesi) ile tekrar nemlendirin. (2) Her bir DNA preparatını 260 nm'de absorbans kullanarak spektrofotometre ile belirleyin. (3) Yukarıdaki tabloda listelenen genomik DNA'ların nihai konsantrasyonu 1X TE tamponda seri seyreltim ile üç DNA preparatının karışımını hazırlayın. (4) İyice karışması için çözeltiyi vorteksleyin ve kalibre edilmiş bir pipeti kullanarak 10 µl çözeltiyi karşılık gelen BD MAX Enteric Parasite Panel Sample Buffer Tube'e sunun. Her bir hedef organizmadan gelen genomik DNA Sample Buffer Tube'teki spesifik LoD'sinde 5X'te mevcuttur. (5) Sample Buffer Tube'ü mavi bir septum kapak ile tekrar kapatın ve 5 saniye boyunca tüpü vorteksleyin. 5. Tüm Harici Kontroller beklenen sonuçları vermeli (Harici Pozitif Kontrol için pozitif, Harici Negatif Kontrol için negatif) ve hiç başarısız harici kontrol olmamalıdır (Çözümlenmemiş veya Belirsiz sonuçlar). 6. Pozitif test sonucu veren bir Harici Negatif Kontrol örnek kullanımına ve/veya kontaminasyon olayına işaret eder. Karışma ve/veya kontaminasyondan kaçınmak için örnek kullanım tekniğini gözden geçirin. Negatif sonuç veren bir Harici Pozitif Kontrol bir örnek kullanımı/hazırlanması problemine işaret eder. Örnek kullanım/hazırlık tekniğini gözden geçirin. 7. Bir Çözümlenmemiş, Belirsiz veya Eksik test sonucu veren bir Harici Kontrol, bir reaktif veya BD MAX Sistemi başarısızlığına işaret eder. BD MAX Sistemi monitörünü herhangi bir hata mesajı açısından kontrol edin. Uyarı ve hata kodlarının yorumlanması için BD MAX System Kullanıcı Kılavuzu'nda 13 "Sistem Hata Özeti" kısmına başvurun. Problem devam ederse açılmamış bir poşetten reaktifler kullanın veya yeni bir test kiti kullanın. 7

8 8. Her Ekstraksiyon Tüpü bir sentetik hedef DNA dizisi içeren bir plazmid olan bir Örnek İşleme Kontrolü içerir. Testin öngörüsünü sağlayarak, işlenen numunede bulunan DNA ile birlikte Sample Processing Control çıkarılır, yerleştirilir ve amplifiye edilir. Sample Processing Control örnek işleme adımları sırasında DNA yakalama, yıkama ve elüsyonun etkinliğini ve ayrıca PCR analizi sırasında DNA amplifikasyonu ve saptamanın etkinliğini izler. Örnek İşleme Kontrolü sonucu kabul kriterlerini karşılayamazsa, örnek sonucu Çözülmemiş olarak rapor edilir; ancak, tüm pozitif (POS) test kiti sonuçları rapor edilir ve hiçbir hedef NEG. olarak adlandırılmaz, Çözülmemiş bir sonuç numuneyle ilişkili inhibisyonun veya reaktif hatasının bir sonucudur. Çözümlenmemiş olarak bildirilen herhangi bir numuneyi aşağıdaki Tekrar Test Prosedürü kısmına göre tekrarlayın. SONUÇLARIN YORUMLANMASI Sonuçlar BD MAX Sistem monitöründe <Results> (Sonuçlar) penceresinde <Results> (Sonuçlar) sekmesinde bulunur. BD MAX Sistem yazılımı otomatik olarak test sonuçlarını yorumlar. Sonuçlar analitlerin her biri için ve Örnek İşleme Kontrolü için raporlanır. Bir test sonucu hedef ve Örnek İşleme Kontrolünün amplifikasyon durumu temelinde NEG (Negatif), POS (Pozitif) veya UNR (Çözümlenmemiş) olarak belirtilebilir. IND (Belirsiz) veya INC (Eksik) sonuçlar BD MAX Sistemi başarısızlığı nedeniyledir. Kısmi UNR durumunda, bir veya daha fazla hedef bir POS sonucuna sahip olduğunda ve diğer hedefler UNR sonucuna sahip olduğunda, hiçbir hedef NEG olarak adlandırılmaz. Tablo 2: BD MAX Enteric Parasite Panel Sonuç Yorumlama Bildirilen test sonucu Crypto POS Crypto NEG Crypto UNR Ehist POS Ehist NEG Ehist UNR Glamb POS Glamb NEG Sonuçların Yorumlanması a Cryptosporidium (parvum veya hominis) DNA Saptandı Cryptosporidium (parvum veya hominis) DNA Saptanmadı Çözümlenmemiş inhibitör örnek veya ayıraç başarısızlığı; hedef veya Örnek İşleme Kontrolü amplifikasyonu yok Entamoeba histolytica DNA Saptandı Entamoeba histolytica DNA Saptanmadı Çözümlenmemiş inhibitör örnek veya ayıraç başarısızlığı; hedef veya Örnek İşleme Kontrolü amplifikasyonu yok Giardia lamblia DNA Saptandı Giardia lamblia DNA Saptanmadı a Glamb UNR IND INC Çözümlenmemiş inhibitör örnek veya ayıraç başarısızlığı; hedef veya Örnek İşleme Kontrolü amplifikasyonu yok BD MAX System arızasına bağlı Belirsiz sonuç (Uyarı veya Hata Kodlarıyla birlikte b ) Tamamlanmamış Çalışma (Uyarı veya Hata Kodları b ile ) BD MAX Enteric Parasite Panel sonuçları kurumsal programlar ve uygulamalarla uyumlu olarak önlem düzeyi için bir kılavuz olarak kullanılabilir. b Uyarı ve hata kodlarının yorumlanması için BD MAX System Kullanıcı Kılavuzu'nda Sorun Giderme 13 kısmına başvurun. TEKRAR TEST PROSEDÜRÜ NOT: Örnek hacmi nedeniyle, Sample Buffer Tube'ten bir tekrar test yapılması için yeterli hacim mevcuttur. Oda sıcaklığında ( 2 25 C) saklanan Sample Buffer Tube ler için tekrar test örnekle ilk Sample Buffer Tube inokülasyonunun ve ön ısıtmanın ardından 48 saat içinde yapılmalıdır. Alternatif olarak 2 8 C'de saklanan Örnek Tampon Tüplerinden tekrar testi 120 saat (5 gün) içinde yapılmalıdır. Kalan gaita örneği de 2 8 C'de saklanırsa alındıktan sonraki 5 gün veya 2 25 C'de saklanırsa 48 saat içinde tekrar test için kullanılabilir. NOT: Yeni örnekler tekrar örneklerle aynı çalışmada test edilebilir. Çözümlenmemiş Sonuç Çözümlenmemiş sonuçlar, örnekle ilişkili inhibisyon veya reaktif başarısızlığı, uygun hedef veya Örnek İşleme Kontrolü amplifikasyonunu önlerse alınabilir. Örnek İşleme Kontrolü belirginleşmezse, örnek UNR olarak rapor edilir, tüm pozitif (POS) test kiti sonuçları rapor edilir ve hiçbir hedef NEG olarak adlandırılmaz. 8

9 BD MAX Sistem her bir hedef için sonuçları ayrı ayrı raporlar ve bir veya daha fazla BD MAX Enteric Parasite Panel hedefi için UNR sonucu edinilebilir. Eksiksiz bir UNR durumunda, tüm hedefler bir UNR sonucuna sahip olduğunda, testin tekrarlanması gereklidir. Kısmi UNR durumunda, bir veya daha fazla hedef bir POS sonucuna sahip olduğunda ve diğer hedefler UNR sonucuna sahip olduğunda, testin yukarıda açıklandığı gibi tekrarlanması önerilir. Nadir durumlarda, tekrarlanan bir test ilk olarak POS olarak bildirilmiş hedefler için yürütüldüğünde tutarsız sonuçlar gözlemlenebilir. Geçerli laboratuvar prosedürleri uyarınca ilgili prosedürleri takip edin. Numuneler, yukarıda tanımlanan zaman dilimlerinde ilgili Sample Buffer Tube'leriyle tekrarlanabilir. Örneği/örnekleri bir (1) dakika boyunca vorteksleyin ve BD MAX Sisteminin Çalışması bölümündeki bilgileri izleyerek tekrar başlayın. Kalan gaita örneği, yukarıda belirtilen zaman çerçeveleri içinde yeni bir Sample Buffer Tube ile tekrar test için de kullanılabilir. Örnek Hazırlama kısmından tekrar başlayın. Belirsiz Sonuç Belirsiz sonuçlar, bir Sistem hatası olması durumunda alınabilir. Örnek(ler) karşılık gelen Sample Buffer Tube'lerinden yukarıda tanımlanan zaman çerçeveleri içinde tekrarlanabilir. Örneği/örnekleri bir (1) dakika boyunca vorteksleyin ve BD MAX Çalışması kısmından tekrar başlayın. Kalan gaita örneği, yeni bir Sample Buffer Tube ile yukarıda belirtilen zaman çerçeveleri içinde tekrar test için de kullanılabilir. Örnek Hazırlama kısmından tekrar başlayın. Uyarı veya hata kodu mesajlarının yorumlanması için BD MAX System Kullanıcı Kılavuzu'na 13 (Sorun Giderme kısmı) bakın. Eksik Sonuç Eksik sonuçlar, Örnek Hazırlama veya PCR tamamlanamazsa alınabilir. Örnek(ler) karşılık gelen Sample Buffer Tube'lerinden yukarıda belirtilen izin verilen zaman çerçeveleri içinde tekrarlanabilir. Örneği/örnekleri bir (1) dakika boyunca vorteksleyin ve BD MAX Çalışması kısmını izleyerek tekrar başlayın. Kalan gaita örneği, yukarıda belirtilen zaman çerçeveleri içinde yeni bir Sample Buffer Tube ile tekrar test için de kullanılabilir. Örnek Hazırlama kısmından tekrar başlayın. Uyarı veya hata kodu mesajlarının yorumlanması için BD MAX System Kullanıcı Kılavuzu'na 13 (Sorun Giderme kısmı) bakın. Harici Kontrol Hatası Harici Kontroller test edildiklerinde beklenen sonuçlar vermelidir. Numunelerin hatalı bir Harici Kontrol sonucu nedeniyle tekrarlanması gerekirse, Sample Buffer Tube'ten taze hazırlanmış Harici Kontroller ile birlikte yukarıda tanımlanan izin verilen zaman çerçeveleri içinde tekrarlanmaları gerekir. Örneği/örnekleri bir (1) dakika boyunca vorteksleyin ve BD MAX Çalışması kısmını izleyerek tekrar başlayın. Pre-warm (Ön Isıtma) Arızası Ön ısıtma arızası durumunda, etkilenen Sample Buffer Tube'ler tam 30 dakika soğutma döngüsü için ön ısıtma istasyonunda bırakılmalıdır. Soğutma döngüsü tamamlandığında, Sample Buffer Tube'ler, Saklama ve Stabilite kısmında tanımlanan zaman sınırlarını karşıladığı takdirde, BD Pre-warm Heater Çalışması kısmında açıklandığı gibi aynı Sample Buffer Tube'leri kullanarak ön ısıtma prosedürünü tekrar başlatın. Sample Buffer Tube'ler için tanımlanan Saklama ve Stabilite zaman aralığının dışındaysa, Örnek Hazırlama kısmından tekrar başlayarak orijinal örnekten yeni Sample Buffer Tube'ler hazırlayın. PROSEDÜRÜN KISITLI OLDUĞU ALANLAR Bu ürün sadece koruyucu içermeyen veya %10 formalinle sabitlenmiş insan dışkı örnekleri ile kullanılmak içindir. Rektal swablardan alınan dışkı örnekleri BD MAX Enteric Parasite Panel ile valide edilmemiştir. Hatalı sonuçların nedeni uygunsuz örnek toplama, muamele, saklama, teknik hata, örnek karışması veya örnekteki organizma sayısının testin analitik duyarlılığının altında olması olabilir. Hatalı negatif sonuçlar örnek BD MAX Enteric Parasite Sample Buffer Tube e eklenmemişse görülebilir. BD MAX Enteric Parasite Panel sonucu IND, INC veya UNR ise, bu durumda test tekrar edilmelidir. Bir BD MAX Enteric Parasite Panel pozitif sonucu canlı organizmaların mutlaka bulunduğu anlamına gelmez. Ancak, Entamoeba histolytica, Giardia lamblia veya Cryptosporidium parvum veya hominis DNA'sının varlığını belirtir, BD MAX Enteric Parasite Panel organizmalarının tanımlanmasını sağlar. Primer veya prob bağlayıcı bölgelerdeki mutasyonlar veya polimorfizmler hedef organizmaların saptanmasını etkileyebilir ve BD MAX Enteric Parasite Panel ile yanlış negatif bir sonuç verebilir. Tüm PCR tabanlı in vitro diyagnostik testlerde olduğu gibi testin analitik duyarlılığının altında çok düşük hedef düzeyleri saptanabilir ama sonuçlar tekrar edilemeyebilir. Yanlış negatif sonuçlar numunelerin yetersiz toplanması, taşınması veya saklanması sonucunda nükleik asit kaybı veya yetersiz organizma lizisi nedeniyle oluşabilir. Örnek İşleme Kontrolü teste PCR amplifikasyonu inhibitörleri içeren örneklerin tanımlanmasına yardımcı olmak üzere eklenmiştir. Örnek İşleme Kontrolü nükleik asidin örneklerin yetersiz toplanması, taşınması veya saklanması nedeniyle kaybedilip kaybedilmediğini veya hücrelerin yetersiz lizise uğrayıp uğramadığını belirtmez. BD MAX Enteric Parasite Panel sonuçları doktorun elindeki diğer bilgiler ve klinik gözlemlerle birlikte kullanılmalıdır. Tüm in vitro diyagnostik testlerle olduğu gibi pozitif ve negatif prediktif değerler prevalansa yüksek ölçüde bağlıdır. BD MAX Enteric Parasite Panel performansı prevalansa ve test edilen popülasyona göre değişebilir. BD MAX Enteric Parasite Panel sonuçları hedef varlığını azaltabilecek eş zamanlı antimikrobiyal tedaviden etkilenebilir veya etkilenmeyebilir. 9

10 BD MAX Sample Buffer Tube'ler organizmanın morfoloji muayenesini desteklemek üzere tasarlanmamıştır. Morfolojik muayene ve/veya boyama orijinal örnekten gerçekleştirilmelidir. Bu testin performansı Giardia lamblia, Cryptosporidium hominis ve parvum veya Entamoeba histolytica izleme tedavisi için tesis edilmemiştir. Bu test kalifiye bir testtir ve kantitatif değerler sağlamaz veya mevcut organizmaların miktarını göstermez. Bu testin performansı immünolojik olarak engelli kişiler için veya gastrointertinal enfeksiyon semptomu olmayan hastalar için değerlendirilmemiştir. Müdahale eden maddelerin etkisi yalnızca bu etikette listelenenler için değerlendirilmiştir. Olası interferans, İnterferans bölümünde açıklanan maddeler hariç diğer maddeler için değerlendirilmemiştir. Analitik Spesifite bölümünde listelenenler dışındaki organizmalarla çapraz reaktivite değerlendirilmemiştir. PERFORMANS ÖZELLİKLERİ BD MAX Enteric Parasite Panel'in klinik performans özellikleri klinik olarak elde edilmiş retrospektif örnekler kullanılarak dahili, simüle edilmiş klinik bir çalışmada saptanmıştır. Çalışma örnekleri, tanı prosedürleri endike olan ve istenen gastroenterit veya kolit hastalarından alınan koruyucu içermeyen veya %10 formalinle sabitlenmiş gaitalardan oluşmaktaydı. Korunmayan örnekler dondurulmuş saklanır ve %10 formalinle sabitlenmiş örnekler test vaktine kadar dondurucuda saklanır. Toplam 316 korunmayan örnek ve 240 %10 formalinle sabitlenmiş örnek çalışmaya katıldı. BD MAX Enteric Parasite Panel hedefleri için negatif örnekler örnek türü başına yaklaşık %50 prevalansta çalışmaya dahil edildi. Örnekler, sahadan alınan örnekler için referans yöntemi (RY) içeren kaynak tesisin rutin laboratuvar yöntemleri ile karakterize edilmiştir. Enterik parazitif patojenlerin karakterizasyonu için rutin laboratuvar metodolojileri alana göre değişti ve mikroskobik muayene, immün testi, doğrudan floresan antikoru (DFA) saptaması ve Giardia lamblia, Cryptosporidium parvum ve C. hominis) ve Entamoeba histolytica/dispar için PCR dahil bir veya daha fazla tekniği içerdi. Tüm retrospektif örnek sonuçları Giardia lamblia, Cryptosporidium parvum ve hominis ve Entamoeba histolytica için analitik olarak doğrulanmış alternatif PCR/çift yönlü sıralama deneylerinin kullanımı ile klinik simülasyona dahil edilmek için nitelikliydi. Retrospektif örnek sonuçları ancak her bir hedef için sıralama ve referans yöntem arasında eş zamanlı bir sonuç varsa performans hesaplamalarına dahil edilmiştir. Simüle edilen klinik çalışmadan gelen performans sonuçları aşağıda Tablo 3 ila 5'te sunulmaktadır. Tablo 3: Cryptosporidium parvum / hominis Performansı BD MAX Onaylanan RY Pozitif Negatif Toplam Pozitif Birleştirilmiş Örnek Türleri Negatif 8 a Toplam Pozitif Yüzde Benzerlik: %91,4 [%95 GA: %83,93 - %95,58] Negatif Yüzde Benzerlik: %99,55 [%95 GA: %98,37-99,88] Pozitif Korunmayan Örnekler Negatif 5 a Toplam Pozitif Yüzde Benzerlik: %91,38 [%95 GA: %81,36-96,26] Negatif Yüzde Benzerlik: %99,18 [%95 GA: %97,06-99,77] Pozitif %10 Formalinle Sabitlenmiş Örnekler Negatif 3 a Toplam Pozitif Yüzde Benzerlik: %91,43 [%95 GA: %77,62-97,04] Negatif Yüzde Benzerlik: %100 [%95 GA: %98,1-100] a Bu örnekler için alternatif gerçek zamanlı PCR deneyi ile edinilen Ct.Score değerleri 37,52 ila 40,98 arasında değişerek örneklerin düşük hedef yükü içermesi ihtimalini belirtmektedir. 10

11 Tablo 4: Giardia lamblia Performansı Birleştirilmiş Örnek Türleri Onaylanan RY BD MAX Pozitif Negatif Toplam Pozitif Negatif Toplam Pozitif Yüzde Benzerlik: %100 [%95 GA: %96,07-100] Negatif Yüzde Benzerlik: %99,06 [%95 GA: %97,61-99,63] Korunmayan Örnekler Pozitif Negatif Toplam Pozitif Yüzde Benzerlik: %100 [%95 GA: %91,8-100] Negatif Yüzde Benzerlik: %99,24 [%95 GA: %97,27 99,79] %10 Formalinle Sabitlenmiş Örnekler Pozitif Negatif Toplam Pozitif Yüzde Benzerlik: %100 [%95 GA: %93-100] Negatif Yüzde Benzerlik: %98,77 [%95 GA: %95,64-99,66] Tablo 5: Entamoeba histolytica Performansı Birleştirilmiş Örnek Türleri Onaylanan RY BD MAX Pozitif Negatif Toplam Pozitif Negatif 0 a Toplam Pozitif Yüzde Benzerlik: %100 [%95 GA: %64,57-100] Negatif Yüzde Benzerlik: %100 [%95 GA: %99,27-100] Korunmayan Örnekler Pozitif Negatif Toplam Pozitif Yüzde Benzerlik: %100 [%95 GA: %20,65-100] Negatif Yüzde Benzerlik: %100 [%95 GA: %98,74-100] %10 Formalinle Sabitlenmiş Örnekler Pozitif Negatif Toplam Pozitif Yüzde Benzerlik: %100 [%95 GA: %60,97-100] Negatif Yüzde Benzerlik: %100 [%95 GA: %98,29-100] a BD MAX Enteric Parasite Panel ile negatif olmuş dört (4) RY Pozitif Örneğin, sıralanarak ve sonrasında performans tablosundan çıkarılarak Entamoeba dispar olduğu onaylandı. BD MAX Enteric Parasite Panel'in klinik simülasyon çalışması sırasındaki başarısızlık oranları hesaplandı. İlk testten sonra çözümlenmeyen bir sonuç edinilmişse, örnek aynı Sample Buffer Tube için tekrar test edildi (Tablo 6'ya bakın). 11

12 Hata Başlangıç Rapor Edilemez (N) Tablo 6: BD MAX Enteric Parasite Panel Arıza Oranları İlk Oran Başlangıç Hızı %95 GA Nihai Rapor Edilemez (N) Nihai Oran Son Hız %95 GA UNR 12 %2,16 %1,24-3,73 1 %0,18 %0,03-1,01 IND 0 %0,00 %0,00-0,69 0 %0,00 %0,00-0,69 INC 0 %0,00 %0,00-0,69 0 %0,00 %0,00-0,69 Toplam 12 %2,16 %1,24-3,73 1 %0,18 %0,03-1,01 Simüle edilen klinik çalışmadaki Entamoeba histolytica örneği sayısını takviye etmek için, bulunan örnekler kullanılarak ek bir çalışma gerçekleştirildi. Sample Buffer Tube'ler 2X deney LOD'sinde (LOD [= Limit of Detection] veya Saptama Limiti) kültürlenmiş Entamoeba histolytica trofozoitleri (HM-1:IMSS) ile inoküle edildi. Formalinle sabitlenmiş örnekler için, trofozoitler, BD MAX Enteric Parasite Panel Sample Buffer Tube'üne inokülasyondan önce %10 formalinde önceden sabitlendi. BD MAX Enteric Parasite Panel Sample Buffer Tube için negatif olduğu önceden onaylanan korunmayan veya %10 formalinle sabitlenmiş gaita örnekleri 10 µl öze kullanılarak her bir SBT'ye eklendi. Her bir örnek türü için eşit sayıda, güçlendirilmemiş, negatif Sample Buffer Tube hazırlandı. Her bir Sample Buffer Tube daha sonra BD MAX Enteric Parasite Panel ile test edildi. Sonuçlar bulunan her bir örnek için bilinen girdi ile karşılaştırıldı. Her bir örnek için bilinen girdiye kıyasla, BD MAX Enteric Parasite Panel, hem korunmayan hem de %10 formalinle sabitlenmiş gaita örneği türleri için analit eklenmiş Entamoeba histolytica bulunan örneklerin %100'ünü tanımladı (Tablo 7'ye bakın). Tablo 7: Bulunan Entamoeba histolytica Takviyesi Birleştirilmiş Örnek Türleri Beklenen Sonuçlar BD MAX Pozitif Negatif Toplam Pozitif Negatif Toplam Pozitif Yüzde Benzerlik: %100 [%95 GA: %92,6-100] Negatif Yüzde Benzerlik: %100 [%95 GA: %92,6-100] Takviye edilen Entamoeba histolytica bulunan çalışmada test edilen 96 örnek aynı Sample Buffer Tube'ten tekrar test ile çözümlenen tek bir UNR sonucu (%1,04) verdi. Analitik Dahil Olma Çeşitli BD MAX Enteric Parasite Panel deneyi hedef izolatları ve genomik DNA, deneyin, bir dizi coğrafi çeşitliliği temsil eden organizmaları saptamak becerisini değerlendirmek için bu çalışmaya dahil edildi. Üç deney hedefini temsil eden yirmi iki (22) izolat test edilmiş ve bunlara iyi karakterize edilmiş klinik izolatlar ve halka açık koleksiyonlar dahil edilmiştir. Ek olarak, genomik DNA ve hazırlanan genomik DNA kitaplıkları da değerlendirildi. Dahiliyet testi 11 Giardia lamblia ve Giardia intestinalis izolatını, 10 Entamoeba histolytica izolatını, 1 Cryptosporidium hominis izolatını içermiştir. İzolatlar iki deney hedefi içeren hedef olarak veya korunmayan gaita matrisinde test için bireysel olarak 2X LOD seviyesinde test edilmiştir. Her bir BD MAX Enteric Parasite Panel hedefinin bir genomik DNA temsilcisi deney için 2X LOD'de dahil edilmiştir. Cryptosporidium parvum ve Cryptosporidium hominis organizmalarının kullanılamaması nedeniyle, 9 ayrı Cryptosporidium parvum izolatından hazırlanan ticari olarak kullanılabilir genomik DNA kitaplıkları da değerlendirilmiştir. Deney, test edilen malzemelerin tümünü doğru şekilde tanımladı. Analitik Hassasiyet BD MAX Enteric Parasite Panel için analitik hassasiyet (Saptama Limiti veya LOD) şu şekilde belirlenmiştir: Stok organizmalar bu çalışmaya dahil olmaları için saflaştırıldı ve bunların miktarları belirlendi. Bağımsız inokülasyon özeleri her bir organizma preparatına batırılmıştır ve her bir inokülasyon özesi sonrasında BD MAX Enteric Parasite Panel tarafından tüm hedefler için negatif olarak önceden belirlenmiş halihazırda fekal matris içeren bir Sample Buffer Tube e aktarılmıştır (korunmayan veya %10 formalinle sabitlenmiş). Her organizma her örnek tipinde minimum 30 replikat ile (korunmayan veya %10 formalinle sabitlenmiş) tek kullanıcı tarafından 3 farklı BD MAX Enteric Parasite Panel üretim lotu kullanarak çalışılmıştır. %95 güven aralığıyla pozitif olarak test edilmesi beklenen tüm replikatların %95'ten büyük olduğu en düşük konsantrasyon olarak tanımlanan analitik hassasiyet (LOD) korunmayan örnekleri için her öze başına 7,41 ila 160,17 organizma arasında ve %10 formalinle sabitlenmiş örnekler için her öze başına 11,1 ila 161,7 organizma arasında değişmiştir (Tablo 8'e bakın). 12

13 İzolat Cryptosporidium parvum Giardia lamblia Entamoeba histolytica a SBT: Örnek Tampon Tüpü Tablo 8: BD MAX Enteric Parasite Panel Saptama Limiti Numune Tipi LOD [Organizma/mL, SBT a (%95 GA)] Korunmayan 160,17 (96,93, 264,22) %10 formalinle sabitlenmiş 161,7 (99,3, 263,1) Korunmayan 7,41 (5,25, 10,29) %10 formalinle sabitlenmiş %11,1 (5,9, 16,3) Korunmayan %16,78 (11,97, 23,38) %10 formalinle sabitlenmiş %15,5 (11,0, 21,8) Analitik Özgüllük BD MAX Enteric Parasite Panel örneklerinde bulunması muhtemel diğer organizmalar (parazitler, bakteriler, virüsler, parazitler, maya) veya filogenetik olarak ilgili örnekleri içeren örneklerle yapılmıştır. Altıda altı (6) Entamoeba spp. (E. histolytica dışındaki Entamoeba örnekler) BD MAX Enteric Parasite Panel ile negatif sonuçlar ortaya koyar. Sample Buffer Tube'teki olası en yüksek konsantrasyonu elde etmek için, organizmalar 1:10 seyreltikten alınmış bir stokta doğrudan test edilmiştir, konsantrasyonlar Sample Buffer Tube'te 4,00 x 10 3 organizma/ml ila 2,90 x 10 5 organizma/ml olarak değişmiştir. E. barretti (ATCC 30996) titre edilmemiş stok olarak sağlanmıştır. 1'de bir (1) Cryptosporidium spp. (Cryptosporidium parvum veya Cryptosporidium hominis dışındaki Cryptosporidium suşlar), C. meleagridis Sample Buffer Tube'e 1 x 10 5 cycts/ml'lik bir konsantrasyonda test edilmiştir, BD MAX Enteric Parasite Panel ile pozitif sonuçlar ortaya koymuştur. Cryptosporidium meleagridis semptomatik insan enfeksiyonunda belgelendirilmiştir. 113'te yüz on üç (113) bakteri suşu, Sample Buffer Tube'e 1x10 6 CFU/mL'lik bir konsantrasyonda test edilmiştir, BD MAX Enteric Parasite Panel'de negatif sonuçlar ortaya koymuştur. 15'te on beş (15) virüs BD MAX Enteric Parasite Panel ile negatif sonuçlar ortaya koyar. Sample Buffer Tube'e olası en yüksek konsantrasyonu elde etmek için, on üçü (13) doğrudan stoktan 1:10 seyreltikle test edilmiştir, konsantrasyonlar 1,6 x 10 4 TCID 50-8,9 x 10 8 TCID 50 arasında değişmiştir. Human Papillomavirus, Escherichia coli ve Rotavirus yüksek titer kalitatif standartta plazmid olarak test edilmiştir. 5'te beş (5) filogenetik olarak ilgisiz parazit Sample Buffer Tube'e 1x10 5 organizma/ml'de test edilmiştir, BD MAX Enteric Parasite Panel'de negatif sonuçlar ortaya koymuştur. 2'de iki (2) Candida spp., Sample Buffer Tube'e 1x10 6 organizma/ml'lik bir konsantrasyonda test edilmiştir, BD MAX Enteric Parasite Panel'de negatif sonuçlar ortaya koymuştur. BD MAX Enteric Parasite Panel in her bir hedefini temsil eden üç (3) Enterik organizma test edilmiştir, sonuçlar aşağıdaki gibidir: o 1'de bir (1) Cryptosporidium spp.; Cryptosporidium parvum Sample Buffer Tube'e 1x10 5 cycts/ml'lik bir konsantrasyonda test edilmiştir, BD MAX Enteric Parasite Panel ile Cryptosporidium için pozitif sonuç ve diğer tüm hedeflerle negatif sonuç ortaya koymuştur. o 1'de bir (1) Giardia spp.; Giardia lamblia Sample Buffer Tube'e 1 x 10 5 cycts/ml'lik bir konsantrasyonda test edilmiştir, BD MAX Enteric Parasite Panel ile Giardia için pozitif sonuç ve diğer tüm hedeflerle negatif sonuç ortaya koymuştur. o 1'de bir (1) Entamoeba spp.; Entamoeba histolytica Sample Buffer Tube'e 1 x 10 5 cycts/ml'lik bir konsantrasyonda test edilmiştir, BD MAX Enteric Parasite Panel ile Entamoeba için pozitif sonuç ve diğer tüm hedeflerle negatif sonuç ortaya koymuştur. Enterferans Yapan Maddeler Her bir belirli hedef için LOD'nin yanında BD MAX Enteric Parasite Panel ile potansiyel enterferans açısından perianal, rektal ve/veya gaita örneklerinde bazen bulunan veya kullanılan yirmi bir (21) biyolojik ve kimyasal madde değerlendirilmiştir. Bu çalışmaya her biri gaita örneğinde atılabilecek konsantrasyonda olan 8 farklı antibiyotik kombinasyonundan oluşan Antibiyotik Karışımı dahil edilmiştir. Test edilen maddelerin üçü BD MAX Enteric Parasite Panel ile potansiyel enterferans sergilemiştir (Tablo 9'a bakın). Vagisil* krem gaitada %9'dan fazla konsantrasyonlarda potansiyel enterferans göstermiştir. Tam insan kanı gaitada %25'ten fazla konsantrasyonlarda potansiyel enterferans göstermiştir. Çok kanlı klinik gaita örnekleri ile ilave testler, test edilen 12 örneğin tamamının 1'inde potansiyel enterferans göstermiştir. 13

14 Tablo 9: BD MAX Enteric Parasite Panel ile Test Edilen Endojen ve Ticari Olarak Eksojen Maddeler Marka Adı veya Açıklama Sonuç Marka Adı veya Açıklama Sonuç Fekal Yağ NI Spermisidal Yağlayıcı NI İnsan DNA sı NI Bebek Bezi Pişik Kremi NI Mukus NI Vagisil* I Tam İnsan Kanı I Laksatif NI Hidrokortizon Krem NI Anti Diyare (sıvı) NI Antiseptik Islak Mendil NI Anti Diyare (hap) NI Lavman NI Antibiyotik Karışım NI Hemoroid Jeli NI Antasid NI Nistatin Krem NI Steroid Olmayan Anti Inflamatuvar (NSAID) NI %10 Tamponlanmış Formalin NI Topik Antibiyotik NI %20 Tamponlanmış Formalin NI Çok Kanlı Gaita I I: BD MAX Enteric Parasite Panel Sonuç İle Enterferans. NI: BD MAX Enteric Parasite Panel Sonuç İle Raporlanabilir Enterferans Yok. Karışık Enfeksiyon/Kompetitif İnterferant Karışık enfeksiyon/kompetitif interferans çalışması, yüksek konsantrasyonlarda diğer hedeflerin mevcudiyetinde düşük pozitif sonuçları saptamak için BD MAX Enteric Parasite Panel becerisini değerlendirmek amacıyla tasarlanmıştır. Dört (4) organizma (Giardia lamblia, Cryptosporidium parvum ve iki Entamoeba histolytica) preparatı, BD MAX Enteric Parasite Panel Sample Buffer Tube'e düşük hedef olarak kullanılmak için kendi ilgili 2X LOD'larında hazırlanmıştır. Sample Buffer Tube'te > 1 x 10 5 CFU/mL'lik bir konsantrasyondaki diğer iki BD MAX Enteric Parasite Panel analitlerini temsil eden organizmalardan oluşmuş yüksek hedef 10 µl korunmayan dışkı ile birlikte Sample Buffer Tube'te bozundurulmuştur ve karışık enfeksiyonları simüle etmek için test edilmiştir. Entamoeba histolytica için ikinci hedef karışım da Entamoeba dispar içermiştir, yukarıda açıklanan yöntemin aynısı kullanılarak hazırlanmıştır. Kendi ilgili yüksek hedef konsantrasyonlarında karıştırılmış preparatlarla birleştirildiğinde, dört hedef organizmanın tamamı BD MAX Enteric Parasite Panel ile başarılı bir şekilde tespit edilmiştir. Kesinlik Laboratuvar içi kesinlik bir (1) çalışma yerinde BD MAX Enteric Parasite Panel için değerlendirilmiştir. Testler 12 gün boyunca günde 2 çalışmayla (2 teknisyen tarafından birer tane) toplam 24 çalışma için yapılmıştır. Bu çalışma için panel üyeleri oluşturmak için farklı konsantrasyonlarda üç özel hedef organizma kullanılmıştır. Panel üyeleri Giardia lamblia, Cryptosporidium parvum ve Entamoeba histolytica'yı dahil etmiştir. Aşağıdaki değerler her bir panel üyesinde bulunan hedef organizmalar için analit ekleme düzeyi olarak kullanılmıştır ve üç kopya halinde test edilmiştir. Orta Pozitif (MP): 3 ila 5x LOD Düşük Pozitif (LP): 0,8 ila 1,2x LOD Yüksek Negatif (HN): 0,1 ila 0,5x LOD Gerçek Negatif (TN): Hedef Yok Negatif korumasız dışkı matriksi içeren her bir örnek. Gerçek Negatif (TN) örnekleri hiç hedef içermiyordu. Yüksek Negatif (HN) örnekler testin analitik LOD unun altında hedef organizmalarla güçlendirilmiştir; ancak, HN örneklerinin PCR testlerinin doğal duyarlılığı nedeniyle tekrarların yaklaşık %20 ila %80 inde pozitif sonuç vermesi beklenmekteydi. Sonuçları Tablo 10 daki hedef ve konsantrasyon ile özetlenmiştir. 14

15 Tablo 10: BD MAX Enteric Parasite Panel in Bir Lotunu Kullanarak Kesinlik Çalışması Sonuçları Kategori Giardia lamblia Cryptosporidium parvum Entamoeba histolytica a %100,0, (72/72) TN (%94,9, %100,0) a %50,0, (36/72) HN (%38,7, %61,3) LP MP %98,6, (71/72) (%92,5, %99,8) %100,0 (72/72) (%94,9, %100,0) %100,0 (72/72) (%94,9, %100,0) %41,7 (30/72) (%31,0, %53,2) %98,6 (71/72) (%92,5, %99,8) %100,0 (72/72) (%94,9, %100,0) %100,0 (72/72) (%94,9, %100,0) %37,5 (27/72) (%27,2, %49,0) %98,6, (71/72) (%92,5, %99,8) %100,0 (72/72) (%94,9, %100,0) a Gerçek Negatif (TN) ve Yüksek Negatif (HN) kategoriler için beklenen test kiti sonucunun negatif olduğu kabul edilmiştir; bu nedenle yüzde anlaşması negatif sonuçlar için hesaplanmıştır. Tekrarlanabilirlik Çalışma Yerinden Çalışma Yerine Tekrarlanabilirlik için, her bir kategorideki örneklerin 3 tekrarı 3 çalışma yerinde 8 gün boyunca her çalışma yerinde günde iki çalışma olacak şekilde test edilmiştir. Çalışma Yerinden Çalışma Yerine Tekrarlanabilirlik bir lot BD MAX Enteric Parasite Panel ile değerlendirilmiştir. Kullanılan paneller yukarıdaki Hassasiyet bölümünde açıklananla aynıdır. Gerçek Negatif (TN) ve Yüksek Negatif (HN) kategoriler için beklenen test sonucunun negatif olduğu kabul edilmiştir. Bu nedenle yüzde anlaşma negatif sonuçlar için hesaplanmıştır. Tesisler arasında ve hedefe göre kalitatif ve kantitatif yeniden üretilebilirlik Tablo arasında gösterilmiştir. Son test kiti sonucunu belirlemek üzere kullanılan bir dahili kriter olan Ct.Puanı test kiti tekrarlanabilirliğini değerlendirmenin ek bir yolu olarak seçilmiştir. Varyans bileşenleri (SD (standart sapma) ve %CV (katsayı varyasyonu)) ile genel ortalama Ct. Puanı değerleri 12, 14 ve 16'da gösterilmiştir. Kategori Tablo 11: Giardia lamblia Çalışma Yerinden Çalışma Yerine Tekrarlanabilirlik Çalışması Sonuçları Konsantrasyon TESİS Toplam Doğru Yanlış Doğru Yanlış Doğru Yanlış Doğru Yanlış N % N % N % N % N % N % N % N % TN , , , ,0 0 0 HN 1 kist/ml 23 47, , , , , , , ,7 LP MP 0,8-1,2 x LOD 3-5 x LOD 46 95,8 2 4, ,9 1 2, ,9 1 2, ,2 4 2, , , , ,0 0 0 Tablo 12: Giardia lamblia Pozitif Örnekler için Çalışma Yerinden Çalışma Yerine Kantitatif Tekrarlanabilirlik Çalışması Sonuçları Ct. Puanı Çalışma dahilinde Gün İçinde Çalıştırma Tesis İçinde Gün Tesisler Kategori N Ortalama SD %CV SD %CV SD %CV SD %CV SD %CV HN 73 32,2 1,35 %4,2 0,32 %1,0 0,73 %2,3 0,00 %0,0 1,56 %4,8 LP ,5 0,81 %2,7 0,00 %0,0 0,00 %0,0 0,43 %1,4 0,92 %3,1 MP ,6 0,43 %1,6 0,15 %0,6 0,00 %0,0 0,18 %0,7 0,50 %1,8 NOT: Gösterilen değerler pozitif sonuç vermiş örneklerle elde edilenlerdir. Genel 15

16 Kategori Tablo 13: Cryptosporidium parvum Çalışma Yerinden Çalışma Yerine Tekrarlanabilirlik Çalışması Sonuçları Konsantrasyon TESİS Toplam Doğru Yanlış Doğru Yanlış Doğru Yanlış Doğru Yanlış N % N % N % N % N % N % N % N % TN , , , ,0 0 0 HN 10 kist/ml 17 35, , , , , , , ,8 LP MP 0,8-1,2 x LOD 3-5 x LOD 46 95,8 2 4, ,9 1 2, ,9 1 2, ,2 4 2, , , , ,0 0 0 Tablo 14: Cryptosporidium parvum Pozitif Örnekler için Çalışma Yerinden Çalışma Yerine Kantitatif Tekrarlanabilirlik Çalışması Sonuçları Ct. Puanı Çalışma dahilinde Gün İçinde Çalıştırma Tesis İçinde Gün Tesisler Kategori N Ortalama SD %CV SD %CV SD %CV SD %CV SD %CV Genel HN 89 35,7 1,52 %4,3 0,54 %1,5 0,59 %1,7 0,42 %1,2 1,77 %5,0 LP ,4 1,08 %3,4 0,41 %1,3 0,00 %0,0 0,10 %0,3 1,16 %3,7 MP ,1 0,73 %2,4 0,45 %1,5 0,00 %0,0 0,18 %0,6 0,88 %2,9 Kategori Tablo 15: Entamoeba histolytica Çalışma Yerinden Çalışma Yerine Tekrarlanabilirlik Çalışması Sonuçları Konsantrasyon TESİS Toplam Doğru Yanlış Doğru Yanlış Doğru Yanlış Doğru Yanlış N % N % N % N % N % N % N % N % TN , , , ,0 0 0 HN 1 trof/ml 22 45, , , , , , , ,8 LP MP 0,8-1,2 x LOD 3-5 x LOD 47 97,9 1 2, ,9 1 2, , ,6 2 1, , , , ,0 0 0 Tablo 16: Entamoeba histolytica Pozitif Örnekler için Çalışma Yerinden Çalışma Yerine Kantitatif Tekrarlanabilirlik Çalışması Sonuçları Ct. Puanı Çalışma dahilinde Gün İçinde Çalıştırma Tesis İçinde Gün Tesisler Kategori N Ortalama SD %CV SD %CV SD %CV SD %CV SD %CV HN 76 30,5 2,34 %7,7 1,37 %4,5 0,66 %2,2 0,32 %1,0 2,81 %9,2 LP ,6 0,88 %3,4 0,25 %1,0 0,00 %0,0 0,00 %0,0 0,91 %3,6 MP ,5 0,58 %2,5 0,37 %1,6 0,00 %0,0 0,09 %0,4 0,69 %2,9 Genel Lottan Lota Tekrarlanabilirlik için, her bir kategorideki örneklerin 3 tekrarı tek bir çalışma yerinde 3 üretim lotu ile 5 gün boyunca günde 2 çalışma olacak şekilde test edilmiştir. Kullanılan paneller yukarıdaki Hassasiyet bölümünde açıklananla aynıdır. 5 günlük doğruluk ve hassasiyet çalışmalarından elde edilen sonuçlar Lotlar arası çalışma için reaktiflerin bir lotundan toplanan verileri karşılaştırmak için kullanılmıştır (Tablo 17 ila 22'ye bakın). 16

17 Kategori Konsantrasyon Tablo 17: Giardia lamblia Lottan Lota Tekrarlanabilirlik Çalışması Sonuçları LOT Toplam Doğru Yanlış Doğru Yanlış Doğru Yanlış Doğru Yanlış N % N % N % N % N % N % N % N % TN , , , ,0 0 0 HN 1 kist/ml 13 43, , , , , , , ,1 LP MP 0,8-1,2 x LOD 3-5 x LOD , ,7 1 3, ,7 1 3, ,8 2 2, , , , ,0 0 0 Tablo 18: Giardia lamblia Pozitif Örnekler için Lottan Lota Kantitatif Tekrarlanabilirlik Çalışması Sonuçları Ct. Puanı Çalışma dahilinde Gün İçinde Çalıştırma Lot İçinde Gün Lot Kategori N Ortalama SD %CV SD %CV SD %CV SD %CV SD %CV HN 46 32,4 1,11 %3,4 0,49 %1,5 0,44 %1,4 0,54 %1,7 1,40 %4,3 LP 88 30,3 0,94 %3,1 0,22 %0,7 0,22 %0,7 0,58 %1,9 1,15 %3,8 MP 90 28,0 0,41 %1,5 0,38 %1,4 0,00 %0,0 0,31 %1,1 0,64 %2,3 Kategori NOT: Gösterilen değerler pozitif sonuç vermiş örneklerle elde edilenlerdir. Tablo 19: Cryptosporidium parvum Lottan Lota Tekrarlanabilirlik Çalışması Sonuçları Konsantrasyon LOT Toplam Genel Doğru Yanlış Doğru Yanlış Doğru Yanlış Doğru Yanlış N % N % N % N % N % N % N % N % TN , , , ,0 0 0 HN 10 kist/ml 10 33, , , , ,7 7 23, , ,4 LP MP 0,8-1,2 x LOD 3-5 x LOD , , ,3 2 6, ,8 2 2, , , , ,0 0 0 Tablo 20: Cryptosporidium parvum Pozitif Örnekler için Lottan Lota Kantitatif Tekrarlanabilirlik Çalışması Sonuçları Ct. Puanı Çalışma dahilinde Gün İçinde Çalıştırma Lot İçinde Gün Lot Kategori N Ortalama SD %CV SD %CV SD %CV SD %CV SD %CV HN 40 36,9 1,58 %4,3 1,16 %3,2 0,00 %0,0 1,09 %3,0 2,25 %6,1 LP 88 33,2 1,72 %5,2 0,74 %2,2 0,10 %0,3 1,35 %4,1 2,31 %7,0 MP 90 32,1 1,25 %3,9 1,09 %3,4 0,00 %0,0 1,89 %5,9 2,52 %7,8 NOT: Gösterilen değerler pozitif sonuç vermiş örneklerle elde edilenlerdir. Genel 17

18 Kategori Tablo 21: Entamoeba histolytica Lottan Lota Tekrarlanabilirlik Çalışması Sonuçları Konsantrasyon LOT Toplam Doğru Yanlış Doğru Yanlış Doğru Yanlış Doğru Yanlış N % N % N % N % N % N % N % N % TN , , , ,0 0 0 HN 1 trof/ml 14 46, , , , , , , ,0 LP MP 0,8-1,2 x LOD , ,7 1 3, , ,9 1 1,1 3-5 x LOD , , , ,0 0 0 Tablo 22: Entamoeba histolytica Pozitif Örnekler için Lottan Lota Kantitatif Tekrarlanabilirlik Çalışması Sonuçları Ct. Puanı Çalışma dahilinde Gün İçinde Çalıştırma Lot İçinde Gün Lot Kategori N Ortalama SD %CV SD %CV SD %CV SD %CV SD %CV HN 45 30,8 2,70 %8,8 0,00 %0,0 0,85 %2,8 0,16 %0,5 2,83 %9,2 LP 89 26,0 0,93 %3,6 0,40 %1,6 0,00 %0,0 0,62 %2,4 1,19 %4,6 MP 90 24,6 0,87 %3,5 0,51 %2,1 0,22 %0,9 0,91 %3,7 1,37 %5,6 NOT: Gösterilen değerler pozitif sonuç vermiş örneklerle elde edilenlerdir. Bulaşma / Çapraz Kontaminasyon BD MAX Enteric Parasite Panel'de Giardia lambila, Entamoeba histolytica ve Cryptosporidium parvum yüksek yükü ile örnekler işlenirken çalışma içi taşıması ve çalışma arası taşımasını incelemek için bir çalışma yürütülmüştür. Üç hedef organizma içeren bir yüksek pozitif üye ve bir negatif üyeden oluşan bir panel çok sayıda örnek hazırlamak için kullanılmıştır. Giardia lambila (WBI ), Entamoeba histolytica (LSHTM) ve Cryptosporidium parvum (WBI ) izolatları yüksek pozitif panel üyesi için (ml başına 1 x 10 5 kist/trofozoit) kullanılmıştır. Negatif üye herhangi bir hedef analit içermemiştir. Yüksek pozitif panel üyesinden on iki (12) replikat ve negatif panel üyesinden 12 replikat, her çalışmada negatif ve pozitif örnekler sırasıyla kullanılarak test edilmiştir. İki (2) kullanıcı 24 örneği içeren her bir çalışma ile toplam 15 çalışma gerçekleştirmiştir. Genel Bulaşma kontaminasyonu BD MAX Enteric Parasite Panel de her bir hedef için değerlendirilmiştir. Her biri 3 BD MAX Enteric Parasite Panel hedefi içeren toplam 180 Sample Buffer Tube bulaşma kontaminasyonu çalışmasında değerlendirilmiştir. 180 güçlendirilmiş Sample Buffer Tube'ün tümü, tüm 3 hedef organizma için beklenen pozitif sonuçları üretmiştir. Her biri 3 BD MAX Enteric Parasite Panel hedefin tümü için her biri negatif toplam 180 Sample Buffer Tube te bulaşma kontaminasyonu çalışmasında değerlendirilmiştir. 180 güçlendirilmiş Sample Buffer Tube'ün yüz yetmiş sekizi (178), tüm 3 hedef organizma için beklenen negatif sonuçları üretmiştir. Beklenen bir negatif sonuçlar Giardia lamblia için pozitif olmuş ve ikisi hem Giardia lamblia hem de Entamoeba histolytica için tek bir Sample Buffer Tube'te pozitif olmuştur. 18

19 REFERANSLAR 1. World Health Organization: Food safety and foodborne illness, Located at: 2. CDC: Estimates of Foodborne Illness in the United States, Located at: 3. Kosek et al. Estimating child mortality due to diarrhoea in developing countries. Bulletin of the World Health Organization (2003) 81: NIH: Bacterial Gastroenteritis, Located at: 5. Petri WA, Miller M, Binder HJ, Levine MM, Dillingham R, and Guerrant RL. Enteric infections, diarrhea, and their impact on function and development. J. Clin. Invest. (2008) 118: FDA. Bad Bug Book. 2 nd Ed Located at: ok/ucm pdf 7. Ralston, K and Petri, WA Tissue destruction and invasion by Entamoeba histolytica. Trends in Parasitology, (2011) Vol. 27, No CDC MMWR, Cryptosporidiosis Surveillance and Giardiasis Surveillance United States, , Located at: 9. Fotedar R., Stark D, Beebe N, Marriott D, Ellis J, and Harkness J. Laboratory Diagnostic Techniques for Entamoeba Species. Clinical Microbiology Reviews. (2007) 20: Platt-Mills JA, Operario DJ, Houpt ER, Molecular Diagnosis of Diarrhea: Current Status and Future PotentialCurr Infect Dis Rep (2012) 14: Clinical and Laboratory Standards Institute. Protection of laboratory workers from occupationally acquired infections; Approved Guideline. Document M29 (Refer to the latest edition). 12. Centers for Disease Control and Prevention, and National Institutes of Health. Biosafety in microbiological and biomedical laboratories. Chosewood L.C. and Wilson D.E. (eds) (2009). HHS Publication number (CDC) BD MAX System User s Manual (US IVD Versiyonu) BD Diagnostics, Sparks, MD, USA. 14. BD Pre-warm Kullanıcı Kılavuzu (US IVD Versiyonu) BD Diagnostics, Sparks, MD, USA. 15. Clinical and Laboratory Standards Institute. Molecular Diagnostic Methods for Infectious Diseases; Approved Guideline, document MM3 (Refer to the latest edition). 16. Clinical and Laboratory Standards Institute. User Protocol for Evaluation of Qualitative Test Performance; Approved Guideline, Document EP12 (Refer to the latest edition). 19

20 Manufacturer / Производител / Výrobce / Fabrikant / Hersteller / Κατασκευαστής / Fabricante / Tootja / Fabricant / Proizvođać / Gyártó / Fabbricante / Атқарушы / Gamintojas / Ražotājs / Tilvirker / Producent / Producător / Производитель / Výrobca / Proizvođač / Tillverkare / Üretici / Виробник Use by / Използвайте до / Spotřebujte do / Brug før / Verwendbar bis / Χρήση έως / Usar antes de / Kasutada enne / Date de péremption / Upotrijebiti do / Felhasználhatóság dátuma / Usare entro / Дейін пайдалануға / Naudokite iki / Izlietot līdz / Houdbaar tot / Brukes for / Stosować do / Prazo de validade / A se utiliza până la / Использовать до / Použite do / Upotrebiti do / Använd före / Son kullanma tarihi / Використати до\line YYYY-MM-DD / YYYY-MM (MM = end of month) ГГГГ-ММ-ДД / ГГГГ-ММ (ММ = края на месеца) RRRR-MM-DD / RRRR-MM (MM = konec měsíce) ÅÅÅÅ-MM-DD / ÅÅÅÅ-MM (MM = slutning af måned) JJJJ-MM-TT / JJJJ-MM (MM = Monatsende) ΕΕΕΕ-MM-HH / ΕΕΕΕ-MM (MM = τέλος του μήνα) AAAA-MM-DD / AAAA-MM (MM = fin del mes) AAAA-KK-PP / AAAA-KK (KK = kuu lõpp) AAAA-MM-JJ / AAAA-MM (MM = fin du mois) GGGG-MM-DD / GGGG-MM (MM = kraj mjeseca) ÉÉÉÉ-HH-NN / ÉÉÉÉ-HH (HH = hónap utolsó napja) AAAA-MM-GG / AAAA-MM (MM = fine mese) ЖЖЖЖ-АА-КК / ЖЖЖЖ-АА / (АА = айдың соңы) MMMM-MM-DD / MMMM-MM (MM = mėnesio pabaiga) GGGG-MM-DD/GGGG-MM (MM = mēneša beigas) JJJJ-MM-DD / JJJJ-MM (MM = einde maand) ÅÅÅÅ-MM-DD / ÅÅÅÅ-MM (MM = slutten av måneden) RRRR-MM-DD / RRRR-MM (MM = koniec miesiąca) AAAA-MM-DD / AAAA-MM (MM = fim do mês) AAAA-LL-ZZ / AAAA-LL (LL = sfârşitul lunii) ГГГГ-ММ-ДД / ГГГГ-ММ (ММ = конец месяца) RRRR-MM-DD / RRRR-MM (MM = koniec mesiaca) GGGG-MM-DD / GGGG-MM (MM = kraj meseca) ÅÅÅÅ-MM-DD / ÅÅÅÅ-MM (MM = slutet av månaden) YYYY-AA-GG / YYYY-AA (AA = ayın sonu) РРРР-MM-ДД / РРРР-MM (MM = кінець місяця) Catalog number / Каталожен номер / Katalogové číslo / Katalognummer / Αριθμός καταλόγου / Número de catálogo / Katalooginumber / Numéro catalogue / Kataloški broj / Katalógusszám / Numero di catalogo / Каталог нөмірі / Katalogo numeris / Kataloga numurs / Catalogus nummer / Numer katalogowy / Număr de catalog / Номер по каталогу / Katalógové číslo / Kataloški broj / Katalog numarası / Номер за каталогом CE marked Medical Device In Vitro Diagnostic Medical Device / Медицински уред за диагностика ин витро / Lékařské zařízení určené pro diagnostiku in vitro / In vitro diagnostisk medicinsk anordning / Medizinisches In-vitro-Diagnostikum / In vitro διαγνωστική ιατρική συσκευή / Dispositivo médico para diagnóstico in vitro / In vitro diagnostika meditsiiniaparatuur / Dispositif médical de diagnostic in vitro / Medicinska pomagala za In Vitro Dijagnostiku / In vitro diagnosztikai orvosi eszköz / Dispositivo medicale per diagnostica in vitro / Жасанды жағдайда жүргізетін медициналық диагностика аспабы / In vitro diagnostikos prietaisas / Medicīnas ierīces, ko lieto in vitro diagnostikā / Medisch hulpmiddel voor in-vitro diagnostiek / In vitro diagnostisk medisinsk utstyr / Urządzenie medyczne do diagnostyki in vitro / Dispositivo médico para diagnóstico in vitro / Dispozitiv medical pentru diagnostic in vitro / Медицинский прибор для диагностики in vitro / Medicínska pomôcka na diagnostiku in vitro / Medicinski uređaj za in vitro dijagnostiku / Medicinteknisk produkt för in vitro-diagnostik / İn Vitro Diyagnostik Tıbbi Cihaz / Медичний пристрій для діагностики in vitro Temperature limitation / Температурни ограничения / Teplotní omezení / Temperaturbegrænsning / Temperaturbegrenzung / Περιορισμοί θερμοκρασίας / Limitación de temperatura / Temperatuuri piirang / Limites de température / Dozvoljena temperatura / Hőmérsékleti határ / Limiti di temperatura / Температураны шектеу / Laikymo temperatūra / Temperatūras ierobežojumi / Temperatuurlimiet / Temperaturbegrensning / Ograniczenie temperatury / Limites de temperatura / Limite de temperatură / Ограничение температуры / Ohraničenie teploty / Ograničenje temperature / Temperaturgräns / Sıcaklık sınırlaması / Обмеження температури Contains sufficient for <n> tests / Съдържанието е достатъчно за <n> теста / Dostatečné množství pro <n> testů / Indeholder tilstrækkeligt til <n> tests / Ausreichend für <n> Tests / Περιέχει επαρκή ποσότητα για <n> εξετάσεις / Contenido suficiente para <n> pruebas / Küllaldane <n> testide jaoks / Contenu suffisant pour <n> tests / Sadržaj za <n> testova / <n> teszthez elegendő / Contenuto sufficiente per <n> test / <п> тесттері үшін жеткілікті / Pakankamas kiekis atlikti <n> testų / Satur pietiekami <n> pārbaudēm / Inhoud voldoende voor n testen / Innholder tilstrekkelig til <n> tester / Zawiera ilość wystarczającą do <n> testów / Conteúdo suficiente para <n> testes / Conţinut suficient pentru <n> teste / Достаточно для <n> тестов(а) / Obsah vystačí na <n> testov / Sadržaj dovoljan za <n> testova / Innehåller tillräckligt för <n> analyser / <n> test için yeterli malzeme içerir / Вистачить для аналізів: <n> Authorized Representative in the European Community / Оторизиран представител в Европейската общност / Autorizovaný zástupce pro Evropském společenství / Autoriseret repræsentant i De Europæiske Fællesskaber / Autorisierter Vertreter in der Europäischen Gemeinschaft / Εξουσιοδοτημένος αντιπρόσωπος στην Ευρωπαϊκή Κοινότητα / Representante autorizado en la Comunidad Europea / Volitatud esindaja Euroopa Nõukogus / Représentant autorisé pour la Communauté européenne / Autorizuirani predstavnik u Europskoj uniji / Meghatalmazott képviselő az Európai Közösségben / Rappresentante autorizzato nella Comunità Europea / Европа қауымдастығындағы уəкілетті өкіл / Įgaliotasis atstovas Europos Bendrijoje / Pilnvarotais pārstāvis Eiropas Kopienā / Bevoegde vertegenwoordiger in de Europese Gemeenschap / Autorisert representant i EU / Autoryzowane przedstawicielstwo we Wspólnocie Europejskiej / Representante autorizado na Comunidade Europeia / Reprezentantul autorizat pentru Comunitatea Europeană / Уполномоченный представитель в Европейском сообществе / Autorizovaný zástupca v Európskom spoločenstve / Autorizovano predstavništvo u Evropskoj uniji / Auktoriserad representant i Europeiska gemenskapen / Avrupa Topluluğu Yetkili Temsilcisi / Уповноважений представник у країнах ЄС Batch Code (Lot) / Код на партидата / Kód (číslo) šarže / Batch-kode (lot) / Batch-Code (Charge) / Κωδικός παρτίδας (παρτίδα) / Código de lote (lote) / Partii kood / Numéro de lot / Lot (kod) / Tétel száma (Lot) / Codice batch (lotto) / Топтама коды / Partijos numeris (LOT) / Partijas kods (laidiens) / Lot nummer / Batch-kode (parti) / Kod partii (seria) / Código do lote / Cod de serie (Lot) / Код партии (лот) / Kód série (šarža) / Kod serije / Partinummer (Lot) / Parti Kodu (Lot) / Код партії Consult Instructions for Use / Направете справка в инструкциите за употреба / Prostudujte pokyny k použití / Se brugsanvisningen / Gebrauchsanweisung beachten / Συμβουλευτείτε τις οδηγίες χρήσης / Consultar las instrucciones de uso / Lugeda kasutusjuhendit / Consulter la notice d emploi / Koristi upute za upotrebu / Olvassa el a használati utasítást / Consultare le istruzioni per l uso / Пайдалану нұсқаулығымен танысып алыңыз / Skaitykite naudojimo instrukcijas / Skatīt lietošanas pamācību / Raadpleeg de gebruiksaanwijzing / Se i bruksanvisningen / Zobacz instrukcja użytkowania / Consultar as instruções de utilização / Consultaţi instrucţiunile de utilizare / См. руководство по эксплуатации / Pozri Pokyny na používanie / Pogledajte uputstvo za upotrebu / Se bruksanvisningen / Kullanım Talimatları na başvurun / Див. інструкції з використання Keep dry / Пазете сухо / Skladujte v suchém prostředí / Opbevares tørt / Trocklagern / Φυλάξτε το στεγνό / Mantener seco / Hoida kuivas / Conserver au sec / Držati na suhom / Száraz helyen tartandó / Tenere all asciutto / Құрғақ күйінде ұста / Laikykite sausai / Uzglabāt sausu / Droog houden / Holdes tørt / Przechowywać w stanie suchym / Manter seco / A se feri de umezeală / Не допускать попадания влаги / Uchovávajte v suchu / Držite na suvom mestu / Förvaras torrt / Kuru bir şekilde muhafaza edin / Берегти від вологи Keep away from light / Пазете от светлина / Nevystavujte světlu / Må ikke udsættes for lys / Vor Licht schützen / Κρατήστε το μακριά από το φως / Mantener alejado de la luz / Hoida eemal valgusest / Conserver à l abri de la lumière / Držati dalje od svjetla / Fény nem érheti / Tenere al riparo dalla luce / Қараңғыланған жерде ұста / Laikyti atokiau nuo šilumos šaltinių / Sargāt no gaismas / Niet blootstellen aan zonlicht / Må ikke utsettes for lys / Przechowywać z dala od źródeł światła / Manter ao abrigo da luz / Feriţi de lumină / Хранить в темноте / Uchovávajte mimo dosahu svetla / Držite dalje od svetlosti / Får ej utsättas för ljus / Işıktan uzak tutun / Берегти від дії світла Perforation / Перфорация / Perforace / Perforering / ιάτρηση / Perforación / Perforatsioon / Perforacija / Perforálás / Perforazione / Тесік тесу / Perforacija / Perforācija / Perforatie / Perforacja / Perfuração / Perforare / Перфорация / Perforácia / Perforasyon / Перфорація 20