RIDASCREEN Adenovirüs

Transkript

1 RIDASCREEN Adenovirüs Makale no.: C1001 R-Biopharm AG, An der neuen Bergstraße 17, D Darmstadt, Almanya Telefon: +49 (0) / Fax: +49 (0)

2 1. Kullanım amacı İn vitro diagnostik kullanım içindir. RIDASCREEN Adenovirüs insan dışkı örneklerinde adenovirüslerin kalitatif tespiti için enzim immunoassaydir. 2. Özet ve testin açıklaması Adenovirüsler yüzeyde sivri yapılara sahip tipik icosahedral formlarından tanımlanabilir. 50 den fazla adenovirüsün farklı tipi bilinir ve gözlerde, solunum yolu ya da bağırsak yolunda enfeksiyona neden olabilir. Bağırsak yolu enfeksiyonları özellikle tip 40 ve 41 tarafından kaynaklanır. Enteritler virüsün başka tiplerinden dolayı beraberinde enfeksiyonların semptomu olarak oluşabilir. Çocuklarda viral ishal ile ilgili, adenovirüsler ve astrovirüsler rotavirüslerden sonra en sık nedenler olarak ayı derecede değerlendirilir. Ayrıca yetişkinlerde bu tür enfeksiyon ile hasta olabilir. Adenovirüs kaynaklı gastroenteritler rotavirüs veya astrovirüs ile enfeksiyondan klinik olarak ayırt edilemediği için hastalar her zaman üç patojenin hepsi için test edilmelidir. RIDASCREEN Adenovirüs içinde kullanılan monoklonal antikorlar adenovirüs-spesifik hexon protein için reaktiftir ve aralık enteral tipler 40 ve 41 ve göz enfeksiyonları ve solunum yolu enfeksiyonlarına sebep olan virüsün başka tiplerini içerir. 3. Test prensibi RIDASCREEN Adenovirüs Testi sandviç-tip yöntemde monoklonal antikorlar kullanır. Adenovirüslerin hexon antijeni için monoklonal antikor mikrokuyu plağın kuyu yüzeyine kaplanır. Bir pipet oda sıcaklığında (20 25 C) inkübasyon için biyotinli monoklonal anti-adenovirüs antikorları (Konjugat 1) ile birlikte mikrokuyu plağın kuyusuna incelenecek kontrol numuneleri ve dışkı örneğinin bir süspansiyonunu yerleştirmek için kullanılır. Yıkama aşaması sonrası, streptavidin poly-peroksidaz konjugat (Konjugat 2) eklenir ve tekrar oda sıcaklığında (20 25 C) inkübe edilir. Dışkı örneğinde adenovirüslerin varlığı ile hareketsiz antikorlar, adenovirüs antijenler ve biyotin-streptavidin-peroksidaz kompleksi ile konjuge antikorlar içeren bir sandviç kompleksi oluşur. Başka yıkama aşaması bağlanmamış streptavidin poly-peroksidaz konjugatı kaldırır. Substrat eklenmesinden sonra bağlanan enzim mikrokuyu plağın kuyularındaki önceden renksiz olan solüsyonun rengini eğer test pozitifse maviye dönüştürür. Durdurma reaktifinin eklenmesi rengi maviden sarıya dönüştürür. Ekstinksiyon numunede bulunan adenovirüslerin konsantrasyonuyla orantılıdır. RIDASCREEN Adenovirüs

3 4. Sağlanan reaktifler Kit içindeki reaktifler 96 tespit için yeterlidir. Plak Seyreltici 1 96 Mikrokuyu plak, strip tutucuda 12 mikrokuyu strip (bölünebilen); monoklonal anti-adenovirüs antikorlarıyla kaplı 100 ml Örnek dilüsyon buffer, protein-buffered NaCl solüsyonu; kullanıma hazır;mavi renkli Yıkama 100 ml Yıkama buffer, fosfat buffered NaCl solüsyonu (konsantre 10-kat); 0.1% thimerosal içerir Kontrol + Kontrol - Konjugat 1 Konjugat 2 2 ml 2 ml 13 ml 13 ml Pozitif kontrol; inaktif adenovirüs kültürü, kullanıma hazır Negatif kontrol (örnek dilüsyon buffer); kullanıma hazır Stabilize protein solüsyonunda biyotin-konjuge monoklonal antiadenovirüs antikorlarları; kullanıma hazır; yeşil renkte Stabilize protein solüsyonunda streptavidin poly-peroksidaz konjugat; kullanıma hazır; turuncu renkli Substrat 13 ml Hidrojen peroksit/tmb; kullanıma hazır Durdurma 8 ml Durdurma reaktifi; 1 N sülfürik asit;kullanıma hazır 5. Reaktifler ve onların saklanması Tüm reaktifler 2 8 C de saklanmalıdır ve etikette basılı tarihe kadar kullanılabilir. Seyreltilmiş yıkama buffer 2 8 C de saklanması şartıyla maksimum 4 hafta için kullanılabilir. Mikrobiyel kontaminasyon önlenmelidir. Son kullanma tarihinden sonra kalite garantisi artık geçerli değildir. Alüminyum çanta kilit parçalanmayacak şekilde makasla açılmalıdır. Gerekmeyen herhangi mikrokuyu strip hemen alüminyum çantaya konulmalı ve 2 8 C de saklanmalıdır. Renksiz substratın ayrışmasını veya oto-oksidasyon nedeniyle maviye dönmesini önlemek için direkt ışıktan korunmalıdır. Birkez substrat maviye dönmüşse kullanılmamalıdır. 6. Ek gerekli reaktifler ve gerekli ekipman 6.1. Reaktifler - Distile veya deiyonize su 6.2. Ekipman Test tüpleri Tek kullanımlık pipetler (Makale no.: Z0001) RIDASCREEN Adenovirüs

4 Vorteks karıştırıcı (isteğe bağlı, 9.3. bakın) µl ve 1 ml hacimleri için mikropipet Ölçüm silindiri (1,000 ml) Kronometre Mikrokuyu plaklar veya çok kanallı pipetler için yıkama cihazı (300 µl) Mikrokuyu plaklar için fotometre (450 nm ve referans filtre nm) Filtre kağıdı (laboratuvar havlusu) 0.5% hipoklorit solüsyonu içeren atık kabı 7. Kullanıcılar için önlemler Sadece in vitro diagnostik kullanım içindir. Bu test sadece eğitimli laboratuvar personeli tarafından yapılmalıdır. Medikal laboratuvarlardaki çalışma kuralları takip edilmelidir. Her zaman bu test için kullanıcı talimatlarına sıkıca bağlı kalın. Numuneler veya reaktifler ağızla pipetlenmemeli ve yaralı cilt veya mukoz membranlarıyla temas önlenmelidir. Numuneleri kullanırken kişisel koruyucu donanım (Uygun eldivenler, laboratuvar ceketi, koruyucu gözlük) giyin ve test bittikten sonra ellerinizi yıkayın. Örneklerin işlendiği alanlarda sigara içmeyin veya birşey yiyip içmeyin. Daha fazla detay için da Malzeme Güvenlik Bilgi Formuna (MSDS) bakın. Bu kit inaktif adenovirüs kültürü içeren bir pozitif kontrol içerir. Hasta örnekleri gibi olası bulaşıcı materyal gibi işlenmeli ve uluslararası güvenlik düzenlemeleri ile uyumlu kullanılmalıdır. Yıkama buffer koruyucu olarak 0.1 % thimerosal içerir. Bu maddenin cilt veya mukoz membranlarıyla teması önlenmelidir. Kullanımdan sonra tüm reaktiflerin ve materyallerin uygun ve sorumlu şekilde atımını sağlayın. Atım için lütfen ulusal düzenlemelere bağlı kalın. 8. Numune toplama ve saklama Dışkı örnekleri ishalin ilk belirtileri ortaya çıktıktan sonra üç gün içinde mümkün olduğu kadar kısa zamanda alınmalıdır. Kullanılıncaya kadar test materyalini 2 8 C de saklayın. Eğer materyal üç gün içinde test için kullanılamıyorsa -20 C veya daha soğukta saklanmasını öneririz. Numunenin tekrar tekrar dondurulup çözdürülmesinden kaçının. Örnek dilüsyon buffer içinde dışkı örneğini seyrelttikten sonra 1:11, yedi gün içinde kullanım için 4 C de saklanabilir. Dışkı örnekleri ve rektal lekeler koruyucular, hayvan serumları, metal iyonlar, oksitleyici maddeler veya deterjanlar içeren taşıma ortamıyla taşıma kaplarında toplanmamalıdır, bunlar RIDASCREEN Adenovirüs Testine müdahale edebilir. Rektal lekeler kullanılacaksa dışkı materyali hacminin test için yeterli olduğundan emin olun (yaklaşık 100 mg). RIDASCREEN Adenovirüs

5 Kontakt izleme asemptomatik taşıyıcıları belirlemek amacıyla klinik semptomlar göstermeyen kontakt kişilerden alınan dışkı örneklerini içermelidir. 9. Test prosedürleri 9.1. Genel bilgi Tüm reaktifler ve mikrokuyu Plak kullanımdan önce oda sıcaklığına (20 25 C) getirilmelidir. Bu mikrokuyu stripler oda sıcaklığına erişene kadar alüminyum çantadan çıkartılmamalıdır. Bu reaktifler kullanımdan hemen önce iyice karıştırılmalıdır. Kullandıktan sonra mikrokuyu stripler (kapalı çantalarda yerleşik) ve reaktifler tekrar 2 8 C de saklanmalıdır. Birkez kullanıldığında mikrokuyu stripler tekrar kullanılmamalıdır. Bu reaktifler ve mikrokuyu stripler paketleme zarar görmüşse veya şişelerden sızıntı varsa kullanılmamalıdır. Çapraz kontaminasyonu önlemek için örneklerin kit bileşenleriyle direkt teması önlenmelidir. Bu test direkt güneş ışığında yapılmamalıdır. Buharlaşma kayıplarını önlemek için mikrokuyu plağın kaplanmasını veya üstüne plastik wrap yerleştirilmesini öneririz Yıkama buffer hazırlama 9 kısım distile suyla 1 kısım yıkama buffer konsantreyi Yıkama karıştırın. Konsantre içinde bulunan herhangi kristali 37 C de su banyosunda ısıtılarak önceden çözülmüş olmalıdır. 9.3 Örnekleri hazırlama 1 ml RIDASCREEN örnek dilüsyon buffer Seyreltici 1 ile etiketli bir test tüpünü doldurun. Sadece ikinci çıkıntının üstüne ince dışkı örneğini aspire etmek için (yaklaşık 100 µl) ve süspansiyon yapmak için test tüpünde buffera eklenmesi için tek kullanımlık bir pipet kullanın (makale no. Z0001). Katı dışkı örneğiyle süspansiyon yapmak için spatula veya tek kullanımlık aşılama döngüsü ile eşit miktarda (yaklaşık mg) ekleyin. İçine aspirasyon ve tek kullanımlık pipetten ejeksiyon ile dışkı süspansiyonunu homojenize edin veya alternatif olarak Vorteks karıştırıcıda karıştırın. İri dışkı partiküllerinin çökelmesi için kısa süre (10 dakika) süspansiyonu beklemeye bırakın ve dışkı süspansiyonunun bu netleşmiş supernatantı testte direkt olarak kullanılabilir. Eğer test prosedürü otomatik ELISA sisteminde yapılıyorsa supernatant partikülsüz olmalıdır. Bu durumda 5 dakika 2,500 G da örneğin santrifüj edilmesi önerilir. RIDASCREEN Adenovirüs

6 Not: Seyreltici 1 içinde seyreltilen dışkı örnekleri Seyreltici 1 kullanılması şartıyla tüm RIDASCREEN ELISA içinde kullanılabilir İlk inkübasyon Strip tutucuda yeterli sayıda kuyunun yerleştirilmesinden sonra 100 µl pozitif kontrol kontrol +, negatif kontrol kontrol - veya dışkı örneği süspansiyonunu kuyulara ekleyin. Daha sonra 100 μl biyotin-konjugatlı antikor Konjugat 1 ekleyin ve karıştırın (plağın kenarına hafifçe vurarak); sonra oda sıcaklığında (20 25 C) 60 dk inkübe edin Yıkama Dikkatli yıkama doğru sonuçların elde edilmesi için önemlidir ve bu nedenle talimatlara göre ilerleyin. Kuyularda inkübe edilen madde yerel düzenlemelere uygun olarak atım için atık kabı içine boşaltılmalıdır. Bundan sonra kalan nemi uzaklaştırmak için emici kağıt üstüne plağa vurarak çıkartın. Sonra her defasında 300 µl yıkama buffer kullanılarak 5 kez plağı yıkayın. Emici kağıdın hala kuru ve kullanılmamış olan kısmında her yıkama sonrası vurup çıkartarak tamamen kuyuların boşaldığından emin olun. Mikroplak yıkayıcı veya tam otomatik ELISA kullanıyorsanız makinenin doğru şekilde ayarlandığından emin olun; gerekirse üreticiden ayarları isteyin. R-Biopharm tarafından verilen aletler valide ayarlar ve iş protokolleri ile zaten programlanmıştır. Yıkama iğnelerinin tıkanmasını önlemek için, sadece partikülsüz dışkı süspansiyonları dağıtılmaldır (bakın 9.3.,Önekleri hazırlama). Ayrıca tüm sıvının her yıkama aşamasında aspire edildiğinden emin olun İkinci inkübasyon Kuyulara 100 µl streptavidin poly-peroksidaz konjugat Konjugat 2 doldurmak için bir pipet kullanın sonra oda sıcaklığında (20 25 C) 30 dk inkübe edin Yıkama Kısım 9.5 de belirtildiği gibi yıkayın Üçüncü inkübasyon Tüm kuyuları 100 µl substrat Substrat ile doldurun. Sonra oda sıcaklığında karanlıkta (20 25 C) 15 dk plağı inkübe edin. Daha sonra reaksiyonu durdurmak için 50 µl durdurma reaktifi Durdurma ile tüm kuyuları doldurun. Plağın kenarına hafifçe vurarak dikkatlice karıştırdıktan sonra 450 nm de ekstinksiyon (isteğe bağlı: 450/620 nm) ölçün. Havada yani mikrokuyu plak olmadan sıfır noktasını ayarlayın. Not: Yüksek-pozitif hasta örnekleri substratın siyah renkli çökeltilerine sebep olabilir. RIDASCREEN Adenovirüs

7 10. Kalite kontrol reaktif süresi bitiminin belirtileri Kalite kontrol amaçları için, testin doğru şekilde yapılmış olması ve reaktiflerin stabil olmasını sağlamak için pozitif ve negatif kontroller her test yapıldığında kullanılmalıdır. Negatif kontrol için ekstinksiyon oranı (OD) 450 nmde 0.2 den küçükse (450/620 nm de dan küçük) ve pozitif kontrol için ölçülen değer 450 nm veya 450/620 nm de 0.8 den büyükse test doğru yapılmıştır. Negatif kontrol için 0.2 den (0.160) büyük değer yıkamanın yetersiz olmuş olabileceğini gösterir. Olması gereken değerlerden sapma, bir bulanıklık veya kuyulara doldurulmadan önce renksiz substratın mavi renklenmesi reaktiflerin süresinin bittiğini gösterebilir. Öngörülen değerler karşılanmazsa, aşağıdaki noktalar testi tekrarlamadan önce kontrol edilmelidir: - Kullanılan reaktiflerin son kullanma tarihi - Kullanılan ekipmanın işlevselliği (ör. kalibrasyon) - Doğru test prosedürü - Kontaminasyon veya sızıntılar için kit bileşenlerinin görsel kontrolü maviye dönen substrat solüsyonu kullanılmamalıdır. Testi tekrarladıktan sonra hala şartlar yerine getirilmediyse, lütfen üretici veya yerel R-Biopharm distribütörünüzle temasa geçin. 11. Değerlendirme ve yorumlama Cut-off hesaplama Cut-off oluşturmak için 0.15 ekstinksiyon birimleri negatif kontrol için ölçülen ekstinksiyona eklenir. Cut-off = negatif kontrol için ekstinksiyon Test sonuçları Ekstinksiyon oranı hesaplanan cut-off değerinden %10 daha fazlaysa numunenin değerlendirilmesi pozitiftir. Ekstinksiyon oranı cut-off değerinden %10 az ve %10 fazlası aralığındaysa numunenin değerlendirilmesi marjinaldir. Tekrar taze dışkı örneğiyle yeniden inceleme giri bölge içine düşüyorsa örneğin değerlendirilmesi negatifdir. Hesaplanan cut-off altında %10 dan fazla ekstinksiyonlara sahip örnekler negatif düşünülmelidir. RIDASCREEN Adenovirüs

8 12. Yöntem sınırlamaları RIDASCREEN Adenovirüs Testi dışkı örneklerindeki adenovirüsün antijenlerini belirler. Klinik belirtilerin ortaya çıkması ya da şiddeti için ekstinksiyonun belirlenen seviyesiyle ilişkilendirmek mümkün değildir. Elde edilen sonuçlar her zaman klinik işaretler ve semptomlarla birlikte yorumlanmalıdır. Pozitif sonuç başka bulaşıcı patojenlerin varlığını ekarte etmez. Negatif sonuç adenovirüs enfeksiyon olasılığını ekarte etmez. Böyle bir sonuç virüsün aralıklı atılımından veya örnekteki antijen miktarının çok küçük olabilmesinden kaynaklanabilir. Hasta geçmişi adenovirüs enfeksiyon şüphesini destekliyorsa inceleme başka dışkı örneğiyle tekrarlanmalıdır. Sınırda bir sonuç dışkı örneğindeki virüslerin homojen olmayan dağılımından kaynaklanabilir. Bu durumda inceleme aynı örnekten ikinci bir süspansiyonla veya incelenmesi gereken başka dışkı örneğiyle tekrarlanmalıdır. 13. Performans özellikleri Test kalitesi RIDASCREEN Adenovirüs üç ticari olarak mevcut adenovirüs ELISA ile kıyaslanarak valide edildi. Taze kullanılan, rutin laboratuvardan alınan aynı-gün örnekleri ve önceden -20 C de dondurulmuş hazırlanmış örneklerden oluşan toplu örnek kıyaslama çalışmasında kullanıldı. Bir homojen bazal süspansiyonu üreticinin talimatlarına uyumlu şekilde her bir ELISA ile test edildi. Üç referans testin üzerinden ikisinin sonuçları uyum içindeyse örnek pozitif veya negatif düşünüldü. Bu çalışmanın sonuçları Tablo 1 de özetlenmektedir. Tablo 1: RIDASCREEN Adenovirüs ELISA ve üç diğer ticari ELISA arasında korelasyon Rakip ELISA RIDASCREEN Adenovirüs poz neg Toplam poz neg Toplam Duyarlılık: > 99.9 % Özgüllük: > 99.9 % RIDASCREEN Adenovirüs

9 13.2. Çapraz reaktivite Bağırsak kanalından patojenik mikroorganizmaların çeşitliliği RIDASCREEN Adenovirüs ELISA ile incelendi ve çapraz reaktivite göstermedi. Bu çalışmalar ml başına organizma konsantrasyonları gösteren bakteriyel süspansiyonlarla yapıldı. Virüs kültür supernatantları, toksinler ve dışkı örnekleri buna göre listelenir. Bu çalışmanın sonuçları Tablo 2 de özetlenmektedir. Tablo 2: Patojenik mikroorganizmalarla çapraz reaktivite Organizma Köken Kaynak [OD 450 nm] ortalama değer Acinetobacter lwoffii Kültür DSM Aeromonas hydrophila anaerogenes Kültür DSM Aeromonas hydrophila hydrophila Kültür DSM Citrobacter spp. Kültür DSM Citrobacter freundii Kültür DSM Enterobacter cloacae Kültür DSM Enterococcus faecalis Kültür DSM Enterococcus faecium Kültür DSM E. coli Kültür LMU Münih E. coli Kültür LMU Münih E. coli Kültür LMU Münih E. hermannii Kültür DSM Lactococcus lactis Kültür DSM Listeria innocua Kültür DSM Proteus mirabilis Kültür DSM Proteus mirabilis Kültür DSM Proteus vulgaris Kültür DSM Providencia stuartii Kültür DSM Pseudomonas aeruginosa Kültür DSM Pseudomonas fluorescens Kültür DSM Pseudomonas fluorescens Kültür DSM Pseudomonas putida Kültür DSM Salmonella agona Kültür LMU Münih Salmonella choleraesuis Kültür DSM Salmonella infantis Kültür LMU Münih Salmonella Ohio Kültür LMU Münih Salmonella typhimurium Kültür DSM Serratia liquefaciens Kültür DSM Shigella flexneri Kültür DSM Shigella sonnei Kültür DSM Staphylococcus aureus Kültür DSM Streptococcus agalactiae Kültür DSM RIDASCREEN Adenovirüs

10 Streptococcus dysgalactiae Kültür DSM Streptococcus uberis Kültür DSM E. coli (O157:H-) Kültür LMU Münih E. coli (O116:H21) Kültür LMU Münih E. coli (O111:H-) Kültür LMU Münih E. coli (O22:H8) Kültür LMU Münih E. coli (O26:H11) Kültür LMU Münih Candida albicans Kültür ATCC Salmonella enteritidis Kültür DSM Campylobacter jejuni Kültür DSM Campylobacter coli Kültür DSM Campylobacter fetus Kültür DSM Helicobacter pylori Kültür DSM Morganella morganii Kültür DSM Astrovirus hücre kültür supernatant Kültür Micromun Astrovirus örneği Dışkı TU Dresden Rotavirus hücre kültür supernatant Kültür Microbix Rotavirus örneği Dışkı TU Dresden H. pylori örneği Kit kontrol İnaktif RIDASCREEN H. pylori lysate FemtoLab H. pylori Toksoid Kit kontrol C. perfringens 50 µg/ml C. perfringens enterotoxin A Shigatoxin STX1 Toksoid Toksin Teknolojisi Shigatoxin STX2 Toksoid Toksin Teknolojisi C. sordellii Kültür tgcbiomics 0.52 C. difficile Kültür VPI Cryptosporidium parvum Kültür Waterborne Inc Campylobacter örnek Dışkı Rutin lab Giardia lamblia örnek Dışkı TI Berlin Entamoeba histolytica Dışkı TI Berlin Salmonella enteritidis örneği Dışkı Rutin lab Sapovirus Dışkı TU Dresden Kesinlik RIDASCREEN Adenovirüs ELISA tekrarlanabilirliği zayıf-yüksek pozitif aralığında tam ölçümü gösteren altı referans ile test edildi. İntra-test tekrarlanabilirliğini bellirlemek için bu referansların 40 tekrarı test edildi. Ortalama değerler ve varyasyon katsayıları (VC) üç lot için belirlendi. İnter- test tekrarlanabilirliği için 10 farklı çalışma gününden elde edilen referanslar gün başına iki çalışmayla iki kez test edildi. Ölçümler üç teknisyen tarafından üç lotta belirlendi. İnter-lot tekrarlanabilirliği üç lotun hepsi için belirlendi. Çalışmanın sonuçları Tablo 3 de gösterilmektedir. RIDASCREEN Adenovirüs

11 Tablo 3: RIDASCREEN Adenovirüs ELISA tekrarlanabilirliği ve kesinliği Referans Ortalama değer / VC Intra-test Inter-test Inter-lot Kit lot 1 Kit lot 2 Kit lot 3 Kit lot 1 Kit lot 2 Kit lot 3 Kit lotları MV VC (%) 5.11% 6.67% 6.08% 15.39% 20.81% 19.91% 18.95% MV VC (%) 5.16% 4.03% 9.64% 14.28% 21.66% 18.81% 19.35% MV VC (%) 8.07% 6.14% 8.16% 13.66% 17.75% 18.93% 18.23% MV VC (%) 7.75% 7.81% 15.22% 16.20% 24.41% 18.37% 20.03% MV VC (%) 7.88% 5.78% 11.73% 16.92% 23.77% 16.84% 19.79% MV VC (%) 8.27% 6.63% 19.65% 24.65% 24.35% 17.00% 22.43% Analitik duyarlılık RIDASCREEN Adenovirüs ELISA tespit sınırı immunoelektron mikroskopuyla (IEM) ölçülen dışkı örneğinin seri dilüsyonuyla belirlendi. Ölçümler 1.3 x 10 7 partikül/ml virüs titresine dayalı olarak üç kez alındı. Tespit sınırı 3.25 x 10 2 virüs partikül/ml dışkı örneği olarak belirlendi. Titrasyon serilerinin sonuçları Tablo 4 de gösterilmektedir. ELISA içindeki pozitif OD değerinin intakt virüs partikülleri nedeniyle olduğu gibi IEM içinde sayılmayan virüs parçaları nedeniyle olduğuda dikkate alınmalıdır. Tablo 4: RIDASCREEN Adenovirüs ELISA analitik duyarlılığının tespiti IEM RIDASCREEN Adenovirüs Virüs partikülleri/ml Ortalama değer [OD 450] Sonuçlar 6.5 x Pozitif 6.5 x Pozitif 3.25 x Pozitif 1.63 x Pozitif 8.2 x Pozitif 6.5 x Pozitif 3.25 x Pozitif RIDASCREEN Adenovirüs

12 1.63 x Pozitif 8.2 x Pozitif 6.5 x Pozitif 3.25 x Pozitif 1.63 x Negatif 14. Müdahale edici maddeler Aşağıdaki maddelerin belirlenen konsantrasyonlarda adenovirüs pozitif ve adenovirüs negatif dışkı örneklerine karıştırıldığında test sonuçlarına etkisi görülmedi: baryum sülfat (5% w/w), loperamid (antidiarrheal ilaç, 5% w/w), Pepto-Bismol (antidiarrheal ilaç, 5% v/w), mukinler (5% w/w), siklamat (yapay tatlandırıcı, 5% v/w), insan kanı (5% v/w), stearik asit ve palmitinik asit kombinasyonu (karışım 1:1, 40% w/w), metronidazol (0.5% solüsyon v/w), diklofenak ( % v/w). RIDASCREEN Adenovirüs

13 Ek Teste özgü semboller: Plak Seyreltici 1 Yıkama Kontrol + Kontrol - Mikrokuyu plak Örnek dilüsyon buffer Yıkama buffer Pozitif kontrol Negatif kontrol Konjugat 1 Konjugat 1 Konjugat 2 Konjugat 2 Substrat Durdurma Substrat Durdurma reaktifi RIDASCREEN Adenovirüs

14 Bibliyografi 1. Horwitz, M.S.: Adenoviral Diseases. In B.N. Fields, ed. Virology, Raven Press, New York, Wigand, R. and Th. Adrian: Die Diagnostik von Adenovirus-Infektionen. Internist 26, (1985). 3. Wigand, R.: Klinische Relevanz von Adenovirusinfektionen. Laboratoriums-blätter 30, (1980). 4. Brandt, C.D., H.W.Kim, A.J. Vargosdo, B.C. Jeffries, J.O. Arrobio, B.Rindge, R.H. Parrot and R.M. Chanock: Infections in infants and children in a controlled study of respiratory tract disease. I. Adenovirus pathogenicity in relation to serologic type and illness syndrome. Am. J. Epidemiol. 90, (1969). 5. Mallet, R., M. Riberre, F. Bonnenfant, B. Labrune and L. Reyrole: Les pneumopathies graves a adeno-virus. Arch. Fr. Pediatr. 23, (1966). 6. Kemp, M.C., J.C. Hierholzer, C.P. Cabradilla and J.F. Obijesti: The changing etiology of epidemic keratoconjunctivitis: Antigenic and restriction enzyme analysis of adenovirus types 19 and 37 isolated over a 10 year period. J. Infect. Dis. 148, (1983). 7. Foy, H.M., M.K. Cooney and J.B. Hatlen: Adenovirus type 3 epidemic associated with intermittend chlorination of a swimming pool. Arch. Environ. Health 17, (1968). 8. De Jong, P.J., G. Valderrama, I. Spigland and M.S. Horwitz: Adenovirus isolates from the urines of patients with the acquired immunodeficiency syndrome. Lancet 1, (1983). 9. Takiff, H.F., S.E. Straus and C.F. Garon: Propagation and in vitro studies of previously non-cultivable enteric adenoviruses in 293 cells. Lancet 2, (1981). 10. Herrmann, J.E., D.M. Perron-Henry, D. Stobbs-Walro and N.R. Blacklow: Preparation and characterization of monoclonal antibodies to enteric adenovirus types 40 and 41. Arch. Virology 94, (1987). 11. Uhnoo, I., G. Wadell, L. Svensson and M.E. Johansson: Importance of enteric adenoviruses 40 and 41 in acute gastroenteritis in infants and young children. J. Clin. Microbiol. 20, (1984). 12. Kidd, A.H., E.H. Harley and M.J. Erasmus: Specific detection and typing of adenovirus types 40 and 41 in stool specimens by dot-blot hybridization. J. Clin. Microbiol. 22, (1985). 13. Cukor G. and N.R. Blacklow: Human viral gastroenteritis. Microbiological Reviews 48, (1984). 14. Mogabgab, W.J.: Mycoplasma pneumonia and adenovirus respiratory illnesses in military and university personnel, Am. Rev. Respir. Dis. 97, ( ) (1968). 15. Richmond, S.J., E.O. Caul, S.M. Dunn, C.R. Ashley, S.K.R. Clarken: An outbreak of gastroenteritis in young children caused by adenoviruses. Lancet 1, (1979). 16. Chiba, S., S. Nakata, I. Nakamura, K. Tanigudi, S. Urasawa, K. Fujinaga and T. Nakao: Outbreak of infantile gastroenteritis due to type 40 adenovirus. Lancet 2, (1983). RIDASCREEN Adenovirüs

15 17. E.H. Lennette and N.J. Schmidt: Diagnostic Procedures for Viral, Rickettsial andchlamydial Infections, Fifth edition, 1979, American Public Health Associates, Inc., Washington, D. C., , Cepko, C.L., C.A. Whetstone and P.A. Sharp: Adenovirus hexon monoclonal antibody that is group specific and potentially useful as a diagnostic reagent. J. Clin. Microbiol. 17, (1983). RIDASCREEN Adenovirüs