RIDASCREEN Entamoeba. Makale no.: C1701

Transkript

1 RIDASCREEN Entamoeba Makale no.: C1701 R-Biopharm AG, An der neuen Bergstraße 17, D Darmstadt, Almanya Telefon: +49 (0) / Fax: +49 (0)

2 1. Kullanım amacı İn vitro diagnostik kullanım içindir. RIDASCREEN Entamoeba insan dışkı örneklerinde Entamoeba histolytica ve Entamoeba dispar kalitatif tespiti için enzim immunoassaydir. 2. Özet ve testin açıklaması Her yıl dünya çapında 500 milyona varan insan Entamoeba histolytica ve Entamoeba dispar ile enfekte olur. Moleküler genetik analiz geleneksel diagnostik metodlarla tanımlanmış ve Entamoeba histolytica olarak belirtilmiş bu protozoanın ayırt edilemeyen bir morfoloji ile iki tür olduğunu göstermiştir. Biri patojenik türler Entamoeba histolytica ve diğeri bilginin mevcut durumunda patojenik olmayan Entamoeba dispar. Amoebiasis klinik belirtileri kolonun mukoz membranına bağırsak lümeninden parazit istilası ile tetiklenir. Burada bir çoğu fagosite eritrositler ile trofozoitleri bulur. Boyutlarından dolayı bu trofozoitler magna form olarak bilinir. Bağırsak mukozasına istila ishal, dizanteri ve hatta amoeboma ile sonuçlanır. Yayılması üzerine, olası komplikasyonlar karaciğer, akciğerler ve çok nadir durumlarda beyinde bile apseler içerir, tedavi edilmezse genellikle hastalığın ölümcül seyrini içerir. Amoebiasis akut bağırsak formunun klinik belirtileri dışkılarda kan ve mukoza ile bulantı ve masif ishal ile ağrılı karın kramplarıdır. Hastalığın akut devresi kabızlık, karın ağrısı, bulantı ve kusma ile dönüşümlü ara sıra ishal ile kronik bir duruma gelişebilir. Literatür kistlerin tamamen asemptomatik taşıyıcılarının açıklamalarını içermektedir. Patojenlerin direkt tespiti için adhesin-spesifik antikorlarla RIDASCREEN ELISA gibi duyarlı immunolojik test metodları mikroskoptan çok daha fazla avantajlıdır. Entamoeba spesifik adhesini host enterositlerinin galaktoz veya N-asetil-galaktozamine spesifik olarak bağlanan bir yüzey proteinidir ve bu hücrelerin parçalanması ile patojen tarafından sonraki istilayı kolaylaştırır. Tüm akut amoebik dizanteri durumlarının yaklaşık 10%u karaciğerde apseler veya diğer organların enfeksiyonu gibi ekstraintestinal komplikasyonlar izlemektedir. Seroloji ile antikorların tanımlanması ekstraintestinal amoebiasis durumunda gösterilir. Bu yöntem tanıyı subjektif değerlendirmeden bağımsız kılar ve morfolojik olarak ayırt edilebilir olmayan kısımların tespitinde daha duyarlıdır. Antikor titreleri genellikle klinik işaretler ve semptomlar başladığında belirlenebilir ve hemen E. histolytica tespitini mümkün kılan spesifik antikorların tespitini izler. Bu ayrıca intestinal ve ekstraintestinal amoebiasis titre seviyeleri arasında ayırt etme imkanı sunar, tedavilerin seçiminde önemlidir. RIDASCREEN Entamoeba

3 3. Test prensibi RIDASCREEN Entamoeba Testi sandviç-tip yöntemde spesifik antikorlar kullanır. Mikrokuyu plağın kuyu yüzeyi Entamoeba histolytica ve Entamoeba dispar antijenleri için spesifik antikorlarla kaplanır. Bir pipet oda sıcaklığında (20 25 C) inkübasyon için biyotinli anti- Entamoeba antikorları (Konjugat 1) ile birlikte mikrokuyu plağın kuyusuna incelenecek kontrol numuneleri ve dışkı örneğinin bir süspansiyonunu yerleştirmek için kullanılır. ıkama aşaması sonrası, streptavidin poly-peroksidaz konjugat (Konjugat 2) eklenir ve tekrar oda sıcaklığında (20 25 C) inkübe edilir. Numunedeki Entamoeba antijenlerinin varlığıyla, hareketsiz antikorlar, Entamoeba antijeni ve konjuge antikor sandviç kompleks oluşturur. Başka yıkama aşaması bağlanmamış streptavidin poly-peroksidaz konjugatı kaldırır. Substrat eklenmesinden sonra bağlanan enzim mikrokuyu plağın kuyularındaki önceden renksiz olan solüsyonun rengini eğer test pozitifse maviye dönüştürür. Durdurma reaktifinin eklenmesi rengi maviden sarıya dönüştürür. Ekstinksiyon numunedeki Entamoeba antijenlerinin konsantrasyonuyla orantılıdır. 4. Sağlanan reaktifler Kit içindeki reaktifler 96 tespit için yeterlidir. Plak 96 Mikrokuyu plak, strip tutucuda 12 mikrokuyu strip (bölünebilen), Entamoeba histolytica ve Entaboeba dispar için spesifik monoklonal antikorlarla kaplı Seyreltici ml Örnek dilüsyon buffer, protein-buffered NaCl solüsyonu; kullanıma hazır;mavi renkli Yıkama 100 ml Yıkama buffer, fosfat buffered NaCl solüsyonu (konsantre 10-kat); 0.1% thimerosal içerir Kontrol + 2 ml İnaktif Entamoeba antijeni; kullanıma hazır Kontrol - Konjugat 1 Konjugat 2 2 ml 13 ml 13 ml Negatif kontrol (örnek dilüsyon buffer); kullanıma hazır Stabilize protein solüsyonunda Entamoeba antijenleri için biyotin konjuge antikorlar; kullanıma hazır,yeşil renkte Stabilize protein solüsyonunda streptavidin poly- peroksidaz konjugat; kullanıma hazır; turuncu renkli Substrat 13 ml Hidrojen peroksit/tmb; kullanıma hazır Durdurma 8 ml Durdurma reaktifi; 1 N sülfürik asit;kullanıma hazır RIDASCREEN Entamoeba

4 5. Reaktifler ve onların saklanması Tüm reaktifler 2 8 C de saklanmalıdır ve etikette basılı tarihe kadar kullanılabilir. Seyreltilmiş yıkama buffer 2 8 C de saklanması şartıyla maksimum 4 hafta için kullanılabilir. Mikrobiyel kontaminasyon önlenmelidir. Son kullanma tarihinden sonra kalite garantisi artık geçerli değildir. Alüminyum çanta kilit parçalanmayacak şekilde makasla açılmalıdır. Gerekmeyen herhangi mikrokuyu strip hemen alüminyum çantaya konulmalı ve 2 8 C de saklanmalıdır. Renksiz substratın ayrışmasını veya oto-oksidasyon nedeniyle maviye dönmesini önlemek için direkt ışıktan korunmalıdır. Birkez substrat maviye dönmüşse kullanılmamalıdır. 6. Ek gerekli reaktifler ve gerekli ekipman 6.1. Reaktifler - Distile veya deiyonize su 6.2. Ekipman Test tüpleri Tek kullanımlık pipetler (Makale no.: Z0001) Vorteks karıştırıcı (isteğe bağlı, 9.3. bakın) µl ve 1 ml hacimleri için mikropipet Ölçüm silindiri (1,000 ml) Kronometre Mikrokuyu plaklar veya çok kanallı pipetler için yıkama cihazı (300 µl) Mikrokuyu plaklar için fotometre (450 nm ve referans filtre nm) Filtre kağıdı (laboratuvar havlusu) 0.5% hipoklorit solüsyonu içeren atık kabı 7. Kullanıcılar için önlemler Sadece in vitro diagnostik kullanım içindir. Bu test sadece eğitimli laboratuvar personeli tarafından yapılmalıdır. Medikal laboratuvarlardaki çalışma kuralları takip edilmelidir. Her zaman bu test için kullanıcı talimatlarına sıkıca bağlı kalın. Numuneler veya reaktifler ağızla pipetlenmemeli ve yaralı cilt veya mukoz membranlarıyla temas önlenmelidir. Numuneleri kullanırken kişisel koruyucu donanım (Uygun eldivenler, laboratuvar ceketi, koruyucu gözlük) giyin ve test bittikten sonra ellerinizi yıkayın. Örneklerin işlendiği alanlarda sigara içmeyin veya birşey yiyip içmeyin. Daha fazla detay için da Malzeme Güvenlik Bilgi Formuna (MSDS) bakın. RIDASCREEN Entamoeba

5 Bu kit inaktif Entamoeba antijeni içeren bir pozitif kontrol içerir. Hasta örnekleri gibi olası bulaşıcı materyal gibi işlenmeli ve uluslararası güvenlik düzenlemeleri ile uyumlu kullanılmalıdır. Yıkama buffer koruyucu olarak 0.1 % thimerosal içerir. Bu maddenin cilt veya mukoz membranlarıyla teması önlenmelidir. Kullanımdan sonra tüm reaktiflerin ve materyallerin uygun ve sorumlu şekilde atımını sağlayın. Atım için lütfen ulusal düzenlemelere bağlı kalın! 8. Numune toplama ve saklama Kullanılıncaya kadar test materyalini 2 8 C de saklayın. Eğer materyal üç gün içinde test için kullanılamıyorsa -20 C veya daha soğukta saklanmasını öneririz. Numunenin tekrar tekrar dondurulup çözdürülmesinden kaçının. Dışkı örnekleri ve rektal lekeler koruyucular, hayvan serumları, metal iyonlar, oksitleyici maddeler veya deterjanlar içeren taşıma ortamıyla taşıma kaplarında toplanmamalıdır, bunlar RIDASCREEN Entamoeba Testine müdahale edebilir. Rektal lekeler kullanılacaksa dışkı materyali hacminin test için yeterli olduğundan emin olun (yaklaşık 100 mg). Kontakt izleme asemptomatik taşıyıcıları belirlemek amacıyla klinik semptomlar göstermeyen kontakt kişilerden alınan dışkı örneklerini içermelidir. 9. Test prosedürleri 9.1. Genel bilgi Tüm reaktifler ve mikrokuyu Plak kullanımdan önce oda sıcaklığına (20 25 C) getirilmelidir. Bu mikrokuyu stripler oda sıcaklığına erişene kadar alüminyum çantadan çıkartılmamalıdır. Bu reaktifler kullanımdan hemen önce iyice karıştırılmalıdır. Kullandıktan sonra mikrokuyu stripler (kapalı çantalarda yerleşik) ve reaktifler tekrar 2 8 C de saklanmalıdır. Birkez kullanıldığında mikrokuyu stripler tekrar kullanılmamalıdır. Bu reaktifler ve mikrokuyu stripler paketleme zarar görmüşse veya şişelerden sızıntı varsa kullanılmamalıdır. Çapraz kontaminasyonu önlemek için örneklerin kit bileşenleriyle direkt teması önlenmelidir. Bu test direkt güneş ışığında yapılmamalıdır. Buharlaşma kayıplarını önlemek için mikrokuyu plağın kaplanmasını veya üstüne plastik wrap yerleştirilmesini öneririz Yıkama buffer hazırlama 9 kısım distile suyla 1 kısım yıkama buffer konsantreyi Yıkama karıştırın. Konsantre içinde bulunan herhangi kristali 37 C de su banyosunda ısıtılarak önceden çözülmüş olmalıdır. RIDASCREEN Entamoeba

6 9.3 Örnekleri hazırlama 1 ml RIDASCREEN örnek dilüsyon buffer Seyreltici 1 ile etiketli bir test tüpünü doldurun. Sadece ikinci çıkıntının üstüne ince dışkı örneğini aspire etmek için (yaklaşık 100 µl) ve süspansiyon yapmak için test tüpünde buffera eklenmesi için tek kullanımlık bir pipet kullanın (makale no. Z0001). Katı dışkı örneğini askıya almak için spatula veya tek kullanımlık aşılama döngüsü ile eşit miktarda (yaklaşık mg) örnek kullanın. İçine aspirasyon ve tek kullanımlık pipetten ejeksiyon ile dışkı süspansiyonunu homojenize edin veya alternatif olarak Vorteks karıştırıcıda karıştırın. İri dışkı partiküllerinin çökelmesi için kısa süre süspansiyonu beklemeye bırakın ve dışkı süspansiyonunun bu netleşmiş supernatantı testte direkt olarak kullanılabilir. Eğer test prosedürü otomatik ELISA sisteminde yapılıyorsa supernatant partikülsüz olmalıdır. Bu durumda 5 dakika 2,500 G da örneğin santrifüj edilmesi önerilir. Not: Seyreltici 1 içinde seyreltilen dışkı örnekleri Seyreltici 1 kullanılması şartıyla herhangi başka RIDASCREEN ELISA içinde kullanılabilir İlk inkübasyon Strip tutucuda yeterli sayıda kuyunun yerleştirilmesinden sonra 100 µl pozitif kontrol Kontrol +, negatif kontrol Kontrol - veya dışkı örneği süspansiyonunu kuyulara ekleyin. Daha sonra 100 μl biyotin-konjugatlı antikor Konjugat 1 ekleyin ve karıştırın (plağın kenarına hafifçe vurarak); sonra oda sıcaklığında (20 25 C) 30 dk inkübe edin Yıkama Dikkatli yıkama doğru sonuçların elde edilmesi için önemlidir ve bu nedenle talimatlara göre ilerleyin. Kuyularda inkübe edilen madde bir atık kabına boşaltılmalı ve yerel düzenlemelere uygun olarak atılmalıdır. Bundan sonra kalan nemi uzaklaştırmak için emici kağıt üstüne plağa vurarak çıkartın. Sonra her defasında 300 µl yıkama buffer kullanılarak 5 kez plağı yıkayın. Emici kağıdın hala kuru ve kullanılmamış olan kısmında her yıkama sonrası vurup çıkartarak tamamen kuyuların boşaldığından emin olun. Mikroplak yıkayıcı veya tam otomatik ELISA kullanıyorsanız makinenin doğru şekilde ayarlandığından emin olun; gerekirse üreticiden ayarları isteyin. R-Biopharm tarafından verilen aletler valide ayarlar ve iş protokolleri ile zaten programlanmıştır. Yıkama iğnelerinin tıkanmasını önlemek için, sadece partikülsüz dışkı süspansiyonları dağıtılmaldır (bakın 9.3.,Önekleri hazırlama). Ayrıca tüm sıvının her yıkama aşamasında aspire edildiğinden emin olun. RIDASCREEN Entamoeba

7 9.6. İkinci inkübasyon Kuyulara 100 µl streptavidin poly-peroksidaz konjugat Konjugat 2 doldurmak için bir pipet kullanın sonra oda sıcaklığında (20 25 C) 15 dk inkübe edin Yıkama Kısım 9.5 de belirtildiği gibi yıkayın Üçüncü inkübasyon Tüm kuyuları 100 µl substrat Substrat ile doldurun. Sonra oda sıcaklığında karanlıkta (20 25 C) 15 dk plağı inkübe edin. Daha sonra reaksiyonu durdurmak için 50 µl durdurma reaktifi Durdurma ile tüm kuyuları doldurun. Plağın kenarına hafifçe vurarak dikkatlice karıştırdıktan sonra 450 nm de ekstinksiyon (isteğe bağlı: 450/620 nm) ölçün. Havada yani mikrokuyu plak olmadan sıfır noktasını ayarlayın. Not: Yüksek-pozitif hasta örnekleri substratın siyah renkli çökeltilerine sebep olabilir. 10. Kalite kontrol reaktif süresi bitiminin belirtileri Kalite kontrol amaçları için, testin doğru şekilde yapılmış olması ve reaktiflerin stabil olmasını sağlamak için pozitif ve negatif kontroller her test yapıldığında kullanılmalıdır. Negatif kontrol için ekstinksiyon oranı (OD) 450 nmde 0.2 den küçükse (450/620 nm de dan küçük) ve pozitif kontrol için ölçülen değer 450 nm veya 450/620 nm de 0.8 den büyükse test doğru yapılmıştır. Negatif kontrol için 0.2 den (0.160) büyük değer yıkamanın yetersiz olmuş olabileceğini gösterir. Olması gereken değerlerden sapma, bir bulanıklık veya kuyulara doldurulmadan önce renksiz substratın mavi renklenmesi reaktiflerin süresinin bittiğini gösterebilir. Öngörülen değerler karşılanmazsa, aşağıdaki noktalar testi tekrarlamadan önce kontrol edilmelidir: - Kullanılan reaktiflerin son kullanma tarihi - Kullanılan ekipmanın işlevselliği (ör. kalibrasyon) - Doğru test prosedürü - Kontaminasyon veya sızıntılar için kit bileşenlerinin görsel kontrolü maviye dönen substrat solüsyonu kullanılmamalıdır. Testi tekrarladıktan sonra hala şartlar yerine getirilmediyse, lütfen üretici veya yerel R-Biopharm distribütörünüzle temasa geçin. RIDASCREEN Entamoeba

8 11. Değerlendirme ve yorumlama Cut-off hesaplama Cut-off oluşturmak için 0.15 ekstinksiyon birimleri negatif kontrol için ölçülen ekstinksiyona eklenir. Cut-off = negatif kontrol için ekstinksiyon Test sonuçları Ekstinksiyon oranı hesaplanan cut-off değerinden %10 daha fazlaysa numunenin değerlendirilmesi pozitiftir. Ekstinksiyon oranı cut-off değerinden %10 az ve %10 fazlası aralığındaysa numunenin değerlendirilmesi marjinaldir. Tekrar taze dışkı örneğiyle yeniden inceleme giri bölge içine düşüyorsa örneğin değerlendirilmesi negatifdir. Hesaplanan cut-off altında %10 dan fazla ekstinksiyonlara sahip örnekler negatif düşünülmelidir. 12. Yöntem sınırlamaları RIDASCREEN Entamoeba Testi Entamoeba histolytica ve Entamoeba dispar antijenlerini belirler. Klinik belirtilerin ortaya çıkması ya da şiddeti için ekstinksiyonun belirlenen seviyesiyle ilişkilendirmek mümkün değildir. Elde edilen sonuçlar her zaman klinik işaretler ve semptomlarla birlikte yorumlanmalıdır. Pozitif sonuç başka bulaşıcı patojenlerin varlığını ekarte etmez. Negatif sonuç amoebiasis olasılığını ekarte etmez Böyle bir sonuç patojenin aralıklı atılımından veya örnekteki antijen miktarının çok küçük olabilmesinden kaynaklanabilir. Hasta geçmişi Entamoeba histolytica enfeksiyon şüphesini destekliyorsa inceleme başka dışkı örneğiyle tekrarlanmalıdır. Ekstraintestinal amoebiasis şüphesi için neden varsa şüphe serumda Entamoeba histolytica için spesifik antikorların tespitiyle onaylanabilir (RIDASCREEN E. histolytica IgG, Mak. No.: K1721). Marjinal bir sonuç dışkı örneğindeki antijenlerin homojen olmayan dağılımından kaynaklanabilir. Bu durumda inceleme aynı örnekten ikinci bir süspansiyonla veya incelenmesi gereken başka dışkı örneğiyle tekrarlanmalıdır. RIDASCREEN Entamoeba

9 13. Performans özellikleri 13.1 Analitik duyarlılık RIDASCREEN Entamoeba ELISA analitik duyarlılığını tespit etmek için bilinen miktarda Entamoeba kistleriyle bir örnekten lineer dilüsyon serileri hazırlandı ve üç kez ölçüldü. Tespit sınırı (LoD) tüm tekrarlarda pozitif olarak değerlendirilecek son konsantrasyondur. Çalışmanın sonuçları Tablo 1 de gösterilmektedir. Tablo 1: RIDASCREEN Entamoeba ELISA içinde Entamoeba histolytica için analitik duyarlılık sonuçları E. histolytica E. dispar MV [OD 450/620] Kistler / Reaksiyon MV [OD 450/620] Kistler / Reaksiyon LoD Rakip ürün ile karşılaştırma Önceden tanısı konulmuş dışkı örnekleri (10 Entamoeba pozitif ve 30 Entamoeba negatif) RIDASCREEN Entamoeba Testiyle analiz edildi ve rakip ELISA ile kıyaslandı. Bu çalışmanın sonuçları Tablo 2 de özetlenmektedir. Tablo 2: Dışkı örnekleri kullanılarak RIDASCREEN Entamoeba ELISA ve rakip ELISA kıyaslaması Rakip Pozitif Negatif RIDASCREEN Entamoeba Pozitif 10 0 Negatif 0 30 Uyum: 100 % Ek olarak bir seri dilüsyon iki rakip ürüne karşı RIDASCREEN Entamoeba ELISA kıyaslama çalışması için sertifikalı E. histolytica soylarından üretildi. Sonuçlar Tablo 3 de gösterilmektedir. RIDASCREEN Entamoeba

10 Tablo 3: Entamoeba histolytica soylarının bir karışımı kullanılarak iki rakip ELISA ile RIDASCREEN Entamoeba ELISA kıyaslaması E. histolytica Soy HM1:IMSS RIDASCREEN Entamoeba MV [OD 450/620] ELISA 1 MV [OD 450/620] ELISA 2 MV [OD 450/620] 1: : : : : : Soy HK9 1: : : : : : Soy 200:N1H 1: : : : : : OD450/ : +++ OD450/620 = : ++ OD450/620 <0.5: + OD450/620 < cut off: Çapraz reaktivite Bağırsak kanalından patojenik mikroorganizmaların çeşitliliği RIDASCREEN Entamoeba Testiyle incelendi ve Campylobacter coli dışında çapraz reaktivite göstermedi. Bu çalışmalar ml başına organizma konsantrasyonları gösteren seyreltilmemiş bakteri veya virüs süspansiyonlarıyla yapıldı. Bu çalışmanın sonuçları Tablo 4 de özetlenmektedir. RIDASCREEN Entamoeba

11 Tablo 4: Patojenik mikroorganizmalarla çapraz reaktivite Organizma Köken [OD 450/620] Ortalama değer Adenovirus Hücre kültür supernatant Aeromonas hydrophila Kültür Arcobacter butzleri Kültür Astrovirus Hücre kültür supernatant Bacillus cereus Kültür Bacteroides fragilis Kültür Campylobacter coli Kültür Campylobacter jejuni Kültür Candida albicans Kültür Citrobacter freundii Kültür Clostridium difficile Kültür Clostridium perfringens Kültür Clostridium sordellii Kültür Cryptosporidium muris Kültür Cryptosporidium parvum Kültür E. coli (O26:H-) Kültür E. coli (O6) Kültür E. coli (O157:H7) Kültür Enterobacter cloacae Kültür Enterococcus faecalis Kültür Giardia lamblia Dışkı Klebsiella oxytoca Kültür Proteus vulgaris Kültür Pseudomonas aeruginosa Kültür Rotavirus Hücre kültür supernatant Salmonella enteritidis Kültür Salmonella typhimurium Kültür Serratia liquefaciens Kültür Shigella flexneri Kültür Staphylococcus aureus Kültür Staphylococcus epidermidis Kültür Vibrio parahaemolyticus Kültür Yersinia enterocolitica Kültür RIDASCREEN Entamoeba

12 13.4. Kesinlik Negatif-yüksek pozitif aralığında tam ölçümü temsil ederek intra-test tekrarlanabilirliğini bellirlemek için bu referansların 40 tekrarı test edildi. Ortalama değerler ve varyasyon katsayıları (VC) kitlerin üç lotu için belirlendi. İnter- test tekrarlanabilirliği için 10 farklı çalışma gününden elde edilen referanslar gün başına iki çalışmayla iki kez test edildi. Ölçümler kitlerin üç lotu için üç teknisyen tarafından belirlendi. İnter-lot tekrarlanabilirliği kitlerin tüm üç lotu için belirlendi. Çalışmanın sonuçları Tablo 5 de gösterilmektedir. Tablo 5: RIDASCREEN Entamoeba ELISA tekrarlanabilirliği ve kesinliği Referans MV [OD 450/620] Kit lot 1 Intra-test Inter-test Inter-lot Kit lot 2 Kit lot 3 Kit lot 1 Kit lot 2 Kit lot 3 Kit lot VC (%) 6.07% 8.39% 5.91% 17.00% 16.70% 18.71% 18.17% MV [OD 450/620] VC (%) 5.82% 7.45% 5.74% 13.71% 14.97% 16.25% 15.74% MV [OD 450/620] VC (%) 5.31% 10.58% 6.07% 16.20% 15.17% 14.00% 16.68% MV [OD 450/620] VC (%) 5.45% 6.44% 7.93% 19.52% 14.33% 17.21% 19.08% MV [OD 450/620] VC (%) 6.61% 12.20% 16.90% 19.78% 17.50% 21.16% 20.92% MV [OD 450/620] VC (%) n/a n/a n/a n/a n/a n/a n/a 13.5 Müdahale edici maddeler Aşağıdaki maddelerin belirlenen konsantrasyonlarda Entamoeba pozitif ve Entamoeba negatif dışkı örneklerinin supernatantlarına karıştırıldığında test sonuçlarına etkisi görülmedi: loperamid (antidiarrheal ilaç; 0.02% w/w), Pepto-Bismol (antidiarrheal ilaç, 6.6% v/w), mukinler (5.0% w/w), siklamat (yapay tatlandırıcı, 1.3% v/w), insan kanı (5.0% v/w), stearik asit ve palmitinik asit (karışım 1:1, 40.0% w/w), metronidazol (0.5% solüsyon), diklofenak (0.1 % v/w). Olası bir doz etki ilişkisi baryum sülfat için araştırıldı (18.5% w/w). Ancak baryum sülfatla bu seri dilüsyon araştırması konsantrasyon ve OD değerleri arasında direkt ilişki göstermedi. Test edilen tek istisna en yüksek konsantrasyondur ancak ilk analizde zaten test edilmiş "en kötü RIDASCREEN Entamoeba

13 durum" konsantrasyonundan bile daha yüksektir (üç kez günlük doz). Baryum sülfat kaynaklı müdahale bu nedenle imkansız olarak düşünülebilir. RIDASCREEN Entamoeba

14 Ek Teste özgü semboller: Plak Seyreltici 1 Yıkama Kontrol + Kontrol - Mikrokuyu plak Örnek dilüsyon buffer Yıkama buffer Pozitif kontrol Negatif kontrol Konjugat 1 Konjugat 1 Konjugat 2 Konjugat 2 Substrat Durdurma Substrat Durdurma reaktifi RIDASCREEN Entamoeba

15 Bibliyografi 1. Bracha, R. et al.: Differentiation of clinical isolates of Entamoeba histolytica by using specific DNA probes. Clin. Microbiol. 28 (No. 4), (1990). 2. Citronberg, R. J., Semel, J. D.: Severe vaginal infection with Entamoeba histolytica in a woman who recently returned from Mexico: Case report and review. Clin. Infect. Dis. 20, (1995). 3. Espinosa-Cantellano, M., Martinez-Palomo, A.: Entamoeba histolytica: Mechanism of surface receptor capping. Exp. Parasitol. 79, (1994). 4. Katzwinkel-Wladarsch, S. et al.: Direct amplification and differentiation of pathogenic and nonpathogenic Entamoeba histolytica DNA from stool specimen. Am. J. Trop. Med.-Hyg. 51 (1), (1994). 5. Kean, B. H. et al.: Epidemic of amoebiasis and giardiasis in a biased population. Brit. J. Ven. Dis. 55, (1979). 6. Mannweiler, E.: Immundiagnostik der Amöbiasis. Der Mikrobiologe 5. Jg., Heft 6, (1995). 7. Ohnishi, K. et al.: Brain abscess due to infection with Entamoeba histolytica. Am. J. Trop. Med. Hyg. 51 (2), (1994). 8. Petter, R. et al.: Characterization of two distinct gene transcripts for ribosomal protein L 21 from pathogenic and nonpathogenic strains of Entamoeba histolytica. Gene 150, (1994). 9. Reed, Sh. L.: New Concepts regarding the pathogenesis of amebiasis. Clin. Infect. Dis. 21 (Suppl. 2), (1995). 10. Strachan, W. D. et al.: Immunological differentiation of pathogenic and non-pathogenic isolates of Entamoeba histolytica. Lancet 12, (1988). 11. van Lunzen, J., Tannich, E., Burchard, G.-D.: Amöbenruhr und Amöbenleberabszeß. Deutsches Ärzteblatt 93, Heft 2, (1996). RIDASCREEN Entamoeba