N. Tiryakioğlu, B. Aksu, M. U. Hasdemir. Marmara Üni. Tıp Fakültesi, Tıbbi Mikrobiyoloji Anabilim Dalı, İstanbul

Transkript

1 Eritromisine dirençli klinik Streptococcus pneumoniae izolatlarında makrolid direncinin genetik profili ile serotip ilişkisi N. Tiryakioğlu, B. Aksu, M. U. Hasdemir Marmara Üni. Tıp Fakültesi, Tıbbi Mikrobiyoloji Anabilim Dalı, İstanbul

2 S. pneumoniae da Makrolid Direnci Uzak-Doğu %74-97 Avrupa >%25 İtalya, Fransa, İspanya, Macaristan, Türkiye Türkiye 2005 % %29 Marmara Üni. Hastanesi >%40

3 S. pneumoniae da Makrolid Direnç Mekanizması Hedefte Değişiklik 23S rrna da bir adenin rezidüsünün metillenmesi erm(b) geni (Tn917, Tn1545) erm(tr) nadir Makrolid aktif atım pompası Mef(A) veya Mef(E): MFS üyesi membran transport proteini mef (A) veya mef(e) geni kontrolünde Düşük düzey makrolid direnci L E cmls B fenotipi L E E L imls B fenotipi M fenotipi

4 Eritromisin direnci-serotip İlişkisi Eritromisin direnci Serogrup 1, 14, 19 (daha az olarak 6, 9, 33) Eritromisin ve penisilin dirençli izolatlar Serogrup 6, 9, 14, 19 ve 23

5 Direnç genlerinin epidemiyolojisi erm(b) denetimindeki direnç: Avrupa ve Güney Afrika da daha yaygın mef(a)/(e) denetimindeki direnç: Kuzey Amerika, Japonya, Avustralya, Kanada, Almanya, Yunanistan, İtalya, İngiltere de daha yaygın

6 Amaç Enfeksiyon etkeni Streptococcus pneumoniae kökenlerinde Makrolid direncinden sorumlu mekanizmaları ve Direnç mekanizması ile serotip ilişkisini belirlemek

7 İzolatlar Enfeksiyon etkeni ve eritromisine dirençli 50 S. pneumoniae izolatı Balgam 35 izolat ETA 11 BAL 1 Kan 2 Yara 1

8 Yöntem Makrolid-linkozamid duyarlılıkları Disk difüzyon Sıvı mikrodilüsyon Eritromisin, klaritromisin, azitromisin, klindamisin Makrolid direnç fenotipi Eritromisin-Klindamisin çift disk metodu Makrolid direncinin genetik determinantları PZR: erm(b), erm(tr), mef(a), mef(e) İzolatların serotipleri Multipleks PZR

9 Standart / Kontrol kökenler ATCC ATCC / gen negatif ATCC / erm(b) + ATCC / mef(a) + KTL spn-237 / mef(e) + S. pyogenes A200 / erm(tr) + Primerler erm(b) 5 -ATTGGAACAGGTAAAGGGC-3' 5 -GAACATCTGTGGTATGGCG-3 (1) meƒ(a) 5 -TGGTTCGGTGCTTACTATTGT-3 5 -CCCCTATCAACATTCCAGA-3 (2) meƒ(e) 5 -GGGAGATGAAAAGAAGGAGT TAAAATGGCACCGAAAG -3 (3) erm(tr) 5 -ACAGAAAAACCCGAAAAATACG-3 5'-TTGGATAATTTATCAAGATCAG-3' (4) 1.Amezaga MR, 2002, J. Clin. Microbiol., 40, / 2. Seppälä H., 1998AAC, 42, / 3. Clancy J, 1996, Mol. Microbiol., 22, / 4. Tait-Kamradt A, 1997, AAC, 41,

10 Kontrol ve test izolatların direnç genleri için PZR sonuçları 2. Negatif kontrol 3. erm(b) pozitif kontrol ATCC (442 bp) 4. mef(a) pozitif kontrol ATCC (553 bp) 5. mef(e) pozitif kontrol KTL spn-237 (363 bp) 6,7,10,11 erm(b) pozitif klinik kökenler 8. mef(e) pozitif klinik köken 9. erm(b)+ mef(e) pozitif klinik köken

11 Serotipleme / Multipleks PZR 40 serotip St- 1, 2, 3, 4, 5, 6A/B, 6C, 7C, 7F, 8, 9N, 9V, 10A, 10F, 11A, 12F, 13, 14, 15A, 15C, 16F, 17F, 18C, 19A, 19F, 20, 21, 22F, 23A, 23B, 23F, 24F, 31, 33F, 34, 35A, 35B, 35F, 38, 39. CPSA 6A/B 19F 23F 25F/38 9V Pai R. Sequential multiplex PCR approach for determining capsular serotypes of Streptococcus pneumoniae isolates. J Clin Microbiol 2006; 44:

12 Sonuçlar İzolatların %100 ü Eritromisin, Klaritromisin, Azitromisine %88 i Klindamisin e dirençli Minimum İnhibitör Konsantrasyonu (MİK) (µg/ml) Antibiyotik Eritromisin n (%) 25(50) 6(12) 8(16) 4(8) 4(8) 1(2) 1(2) 1(2) Azitromisin n (%) 22(44) 5(10) 11(22) 2(4) 1(2) 2(4) 4(8) 2(4) 1(2) Klaritromisin n (%) 1(2) 15(30) 13(26) 8(16) 4(8) 3(6) 5(10) 1(2) Klindamisin n (%) 2(4) 2(4) 22(44) 10(20) 6(12) 2(4) 3(6) 3(6)

13 Makrolid Direnç Fenotipi Dağılımı Fenotip İzolat sayısı (%) cmlsb 43 (86) Serotip Dağılımı imlsb 2 (4) M 5 (10) Makrolid Direnç Genleri Dağılımı Genler İzolat sayısı (%) sadece erm(b) 21 (42) sadece meƒ(e) 6 (12) erm(b)+ meƒ(e) 23 (46)

14 Makrolid Direnç Genlerinin Serotiplerdeki Dağılımı

15 Sonuçlar 2 pediatrik kan izolatı 6A/B serotipinde ve erm(b)+mef(e) taşıyor

16 Yorum M fenotipinin azımsanmayacak oranı (%10) mef(e) geninin yaygınlığı (%58) erm(b)+mef(e) taşıyan izolatların yaygınlığı (%46) İzolatlarımızda makrolid efluksu etkin bir direnç mekanizması olarak erm(b) denetimindeki hedef mutasyonuna katkıda bulunmakta

17 Yorum Yaygın serotipler olan 19F, 6A/B izolatlarda erm(b)+mef(e) birlikteliği oldukça yüksek oranda Üçüncü en yaygın serotip olan 23F serotipindeki izolatların Üçüncü en yaygın serotip olan 23F serotipindeki izolatların %80 inin M fenotipinde olması ve erm(b)+mef(e) birlikteliğine bu serotipte rastlanmaması ilginç

18 Teşekkürler

19 Serotypes M phenotype n(%) Total n(%) MLS B phenotype n (%) erm(b) mef(a)/(e) erm(b)+mef(a)/(e) mef(a)/(e) 19F 6 (15.8) 1 (2.6) 3 26 (68.4) 5 (13.2) 38 (39.2) 23F 10 (41.7) 1 (4.2) 3 (12.5) 10 (41.7) 24 (24.7) 6A/B 8 (72.7) 1 (9.1)) 1 (9.1) 1 (9.1) 11 (11.3) 17F 4 (66.7) - 1 (16.7) 1 (16.7) 6 (6.2) Others 1 8 (66.7) 1 (8.3) 2 (16.7) 1 (8.3) 12 (12.4) NT 2 1 (16.7) - 2 (33.3) 3 (50) 6 (6.2) Total 37 (38.1) 4 (4.1) 35 (36.1) 21 (21.6) 97 (100) 1 includes serotypes 14 (n:3), 7F/7A (n:3), 39 (n:1), 23B (n:1), 20 (n:1), 9V/9A (n:1), 3 (n:1), 35A/35C/42 (n:1) 2 NT, non-typeable strains 3 Only this isolate displayed imls B phenotype. All other MLS B isolates expressed cmls B phenotype.

20 PZR Koşulları erm(b) mef(a) mef(e) erm(tr) Siklus sayısı Başlangıç denatürasyonu 94 C 4 dak 94 C 4 dak 94 C 4 dak 94 C 4 dak 1 Denatürasyon 94 C 1 dak 94 C 1 dak 94 C 1 dak 94 C 1 dak 30 Bağlanma 55 C 1 dak 55 C 1 dak 55 C 1 dak 50 C 1 dak 30 Uzama 72 C 1 dak 72 C 1 dak 72 C 1 dak 72 C 1 dak 30 Son Uzama 72 C 7 dak 72 C 7 dak 72 C 7 dak 72 C 7 dak 1

21 N o Serotip Fenotip erm (TR) erm (B) mef (A) mef (E) Eritromisin Azitromisin Klaritromisin Klindamisin 1 19F cmls B N P N P 512 R 512 R 512 R 256 R 2 19F cmls B N P N P 512 R 512 R 512 R 256 R 3 19F cmls B N P N P 512 R 512 R 512 R 256 R 4 23F M N N N P 1 R 8 R 2 R 0.25 S 5 19F cmls B N P N N 512 R 512 R 256 R 256 R 6 19F cmls B N P N N 256 R 256 R 64 R 64 R 7 23F cmls B N P N N 512 R 512 R 128 R 512 R 8 39 imls B N N N P 8 R 8 R 16 R 64 R 9 19F cmls B N P N N 512 R 512 R 512 R 256 R 10 N cmls B N P N N 128 R 256 R 128 R 64 R 11 19F cmls B N P N P 512 R 512 R 512 R 256 R 12 19F cmls B N P N P 512 R 512 R 256 R 256 R 13 15A-F M N P N P 8 R 8 R 4 R 0.25 S cmls B N P N N 512 R 512 R 512 R 512 R 15 19F cmls B N P N P 512 R 512 R 512 R 256 R 16 19F cmls B N P N P 512 R 512 R 512 R 128 R 17 19F cmls B N P N P 512 R 512 R 512 R 256 R 18 19F cmls B N P N P 512 R 512 R 512 R 256 R 19 15A-F cmls B N N N P 128 R 256 R 64 R 256 R 20 N cmls B N P N N 256 R 256 R 256 R 128 R 21 23B cmls B N P N P 512 R 512 R 64 R 512 R 22 6A/B cmls B N P N P 512 R 512 R 512 R 256 R 23 6A/B cmls B N P N N 256 R 256 R 64 R 4 R 24 6A/B cmls B N P N P 512 R 512 R 128 R 512 R 25 19F cmls B N P N N 512 R 512 R 512 R 256 R 26 19F cmls B N P N N 512 R 256 R 256 R 128 R 27 N cmls B N P N N 256 R 128 R 256 R 256 R 28 23F M N N N P 8 R 8 R 4 R S 29 N cmls B N P N N 512 R 256 R 128 R 128 R 30 19F cmls B N P N P 512 R 512 R 512 R 512 R

22 No Serotip Fenotip erm (TR) erm (B) mef (A) mef (E) Eritromisin Azitromisin Klaritromisin Klindamisin 31 N cmls B N P N N 256 R 256 R 256 R 128 R 32 23F M N N N P 8 R 4 R 4 R 0.25 S 33 19F cmls B N P N N 128 R 256 R 256 R 128 R 34 19F cmls B N P N P 512 R 512 R 512 R 256 R 35 19F cmls B N P N P 512 R 512 R 512 R 256 R 36 19F cmls B N P N P 512 R 512 R 512 R 128 R 37 19F cmls B N P N N 256 R 64 R 128 R 64 R 38 19F cmls B N P N N 128 R 32 R 16 R 64 R 39 19F cmls B N P N N 256 R 256 R 128 R 128 R 40 19F cmls B N P N N 512 R 256 R 256 R 64 R 41 23F M N N N P 2 R 2 R 4 R S 42 19F cmls B N P N N 512 R 128 R 256 R 128 R 43 6A/B cmls B N P N P 512 R 512 R 16 R 256 R 44 19F cmls B N P N P 512 R 512 R 128 R 256 R 45 6A/B cmls B N P N P 512 R 512 R 128 R 256 R 46 19F cmls B N P N P 512 R 512 R 256 R 256 R 47 N imls B N P N N 4 R 4 R 4 R S 48 19F cmls B N P N P 512 R 512 R 256 R 256 R 49 6A/B cmls B N P N P 512 R 512 R 256 R 256 R 50 19F cmls B N P N N 256 R 32 R 256 R 128 R