Antimikrobik duyarlılık testine yönelik EUCAST disk difüzyon yöntemi. Sürüm 3.0 Ocak 2014

Benzer belgeler
Antimikrobik duyarl k testine yönelik EUCAST disk difüzyon yöntemi. Sürüm 5.0 Ocak 2015

Değerlendirme kılavuzu

EUCAST tarafından önerilen rutin iç kalite kontrol Sürüm 3.1, geçerlilik tarihi

De erlendirme. Antimikrobik duyarl k testine yönelik EUCAST disk difüzyon yöntemi. Sürüm 4.0 Haziran 2014

Avrupa Antimikrobik Duyarlılık Testleri Komitesi

Antimikrobik duyarl k testine yönelik EUCAST disk difüzyon yöntemi

Avrupa Antimikrobik Duyarlılık Testleri Komitesi

Avrupa Antimikrobial Duyarlılık Testi Komitesi

GRAM POZİTİF BAKTERİ ANTİBİYOGRAMLARI

Kullanılan Standartlar ve Farkları (CLSI, EUCAST)

Enfeksiyon odaklarından izole edilen Gram negatif ve Gram pozitif bakterilerde antimikrobiyal duyarlılık sonuçları

BD Mueller Hinton Fastidious Agar (MH-F)

EUCAST a Geçiş. Dr. Deniz Gür Ph.D. Hacettepe Üniversitesi Tıp Fakültesi Tıbbi Mikrobiyoloji Anabilim Dalı

Ae- MİKROBİYOLOJİ LABORATUVARI İÇ KALİTE KONTROL VE DÖF TALİMATI

KISITLI BİLDİRİM. ADTS grubunun hazırladığı Kısıtlı Bİldirim Tabloları ile ilgili olarak dikkat edilmesi gereken konular.

Kan Kültürlerini Nasıl Değerlendirelim? Rehber Eşliğinde. Dr. Banu Sancak

Hazırlayanlar: Doç. Dr. Yasemin ZER Mikrobiyoloji AD Öğrt. Üyesi

Sorunlu Mikroorganizmalar, Sorunlu Antibiyotikler ve E Test. Prof.Dr.Güner Söyletir Marmara Üniversitesi, İstanbul

1.5 Kalite Kontrol Bölüm Fiziksel Kalite Kriterleri Bölüm Mikrobiyolojik Kalite Kriterleri Mikrobiyal Kontaminasyon

Kan Dolaşım Enfeksiyonlarında Karar Verme Süreçleri. Prof. Dr. Aynur EREN TOPKAYA Namık Kemal Üniversitesi Tıp Fakültesi Tıbbi Mikrobiyoloji AD

Pozitif kan kültürü şişesinden doğrudan MALDI-TOF MS ile identifikasyon

Ne değişti? Dr. Özlem Kurt-Azap

Antibiyotik Duyarlılık Testleri, EUCAST: Uygulama, Yorum ve Uzman Kurallar


ANTİBİYOTİK DUYARLILIĞI VE DİRENÇLERİN YORUMLANMASINDA UZMAN SİSTEMLERİN ROLÜ

ULUSAL ANTİMİKROBİYAL DİRENÇ SÜRVEYANSI BAKTERİ TANIMLAMA VE ADT STANDART UYGULAMA PROSEDÜRLERİ

EUCAST a Geçiş Sonrası Neler Değişti Kliniğe Yansımaları

BD Mueller Hinton Agar with 5% Sheep Blood BD Mueller Hinton Agar with 5% Sheep Blood (150 mm) BD Mueller Hinton Agar with 5% Sheep blood, Square

ANTİFUNGAL DİRENÇ ve ANTİFUNGAL DUYARLILIK TESTLERİ

Tüberküloz laboratuvarında kalite kontrol

ULUSAL ANTİMİKROBİYAL DİRENÇ SÜRVEYANS SİSTEMİ. KALİTE KONTROLÜ ve KALİTE GÜVENCESİ STANDART UYGULAMA PROSEDÜRLERİ

REVİZYON DURUMU. Revizyon Tarihi Açıklama Revizyon No

Minimum Bakterisidal. Prof.Dr.Ayşe Willke Topcu Mart 2010, Aydın

Prof.Dr. Müzeyyen MAMAL TORUN. İ.Ü.Cerrahpaşa Tıp Fakültesi Tıbbi Mikrobiyoloji Anabilim Dalı

ANTİBİYOTİK DUYARLILIK TEST SİSTEMLERİNİN VERİFİKASYONU

Gram Pozitif Bakteriler ve Duyarlılık Testleri. Güner Söyletir

Antibiyogram nasıl değerlendirilir?

Çocuk ve Yetişkin Üriner Escherichia coli İzolatlarında Plazmidik Kinolon Direnç Genlerinin Araştırılması

ADTS Grubunun Hazırladığı Kısıtlı Bİldirim Tabloları İle İlgili Olarak Dikkat Edilmesi Gereken Hususlar:

Direnç Mekanizmalarının Saptanmasında EUCAST Önerileri

Çok ilaca dirençli Mycobacterium tuberculosis izolatlarının hızlı tespitinde nitrat redüktaz testinin değerlendirilmesi: Çok merkezli bir çalışma

KÜLTÜR VE DUYARLILIK TESTLERİNİN KULLANIMI VE YORUMU. Feriha Çilli Hall Ege Üniversitesi Tıp Fakültesi Tıbbi Mikrobiyoloji Anabilim Dalı

Türk Mikrobiyoloji Cemiyeti-ADTS Grubunun hazırladığı "Kısıtlı Bİldirim Tabloları" ile ilgili olarak dikkat edilmesi gereken noktalar:

STANDARDİZASYON KURUMLARI VE TÜRKİYE

AMAÇ. o Sefoperazon-sulbaktam (SCP), o Ampisilin-sulbaktam (SAM), o Polimiksin-B (PB) o Rifampin (RİF)

Antimikrobiyal Duyarlılık Testleri (AMD) Hangi Durumlarda Yapılmalı? Genel kavramlar

ANTİMİKROBİYAL DUYARLILIK TESTLERİ

EUCAST Uzman Kuralları. Sürüm 3.1. Doğal Direnç ve Beklenmeyen Fenotip Tabloları

KISITLI ANTİBİYOTİK DUYARLILIK TESTİ BİLDİRİMİ TALİMATI

Sağlık Hizmetleri ile İlişkili İnfeksiyonlardan Soyutlanan Bakterilerin Antibiyotik Duyalılık Sonuçları

Oya Coşkun, İlke Çelikkale, Yasemin Çakır, Bilgecan Özdemir, Kübra Köken, İdil Bahar Abdüllazizoğlu

Sonuçların Gönderildiği Son Tarihi : 10 Ekim 2014

V. HAZıR BESivERi, TAM OTOMATiK KAN KÜLTÜRÜ, TANıMLAMA VE ANTiBivOTiK DUVARLILIK TEST SiSTEMi TEKNiK ŞARTNAMESi

Olgularla Antimikrobiyal Duyarlılık Testleri (Gram Negatif Bakteriler)

CLSI M100-S20 STANDARDINDAKİ DEĞİŞİKLİKLER. Ahmet Başustaoğlu Gülhane Askeri Tıp Akademisi Tıbbi Mikrobiyoloji Anabilim Dalı

KULLANMA TALİMATI. VAXORAL 7 mg YETİŞKİNLER İÇİN KAPSÜL Ağızdan alınır.

EYLÜL 2011 S0485&S0486

DİRENÇLİ BAKTERİ ENFEKSİYONLARINA KARŞI KULLANILAN ANTİBİYOTİKLER

Enzimlerinin Saptanmasında

Mitokondrial DNA Analiz Paneli

SÜRÜNTÜ ÖRNEKLERİNE YAKLAŞIM

KISITLI ANTİBİYOTİK BİLDİRİMİ

Antibiyotik Direnci: Global Problem

MAYIS 2012 S0501&S0502

KULLANMA TALİMATI. NETİRA göz damlası 5 ml Göze uygulanır. Etkin madde :

EYLÜL 2010 S0461&S0462

OTOMATİZE TANIMLAMA SİSTEMLERİ KALİTE GÜVENCESİ. Melda SINIRTAŞ

BAKTERİLER YELLERİNİN BELİRLENMES RLENMESİ. Page 1

MİKROBİYOLOJİ LABORATUVARINDA UYULMASI GEREKEN KURALLAR

Kistik Fibrozis DNA Analiz Paneli

Klinik Örneklerden İzole Edilen E.coli Suşlarının Kümülatif Antibiyotik Duyarlılıklarının Belirlenmesi

MIDDLE-BROOK 7H10 BESİYERİ İLE ANTİBİYOTİK DUYARLILIK TESTLERİ

CLSI DAN EUCAST A. Deniz Gür Zeynep Gülay Volkan Korten

KULLANMA TALİMATI. VAXORAL 3,5 mg ÇOCUKLAR İÇİN KAPSÜL Ağızdan alınır.

Ġ.Ü. MÜHENDĠSLĠK FAKÜLTESĠ ÇEVRE MÜHENDĠSLĠĞĠ BÖLÜMÜ MĠKROORGANĠZMALARIN ASEPTĠK TRANSFERĠ VE ÇĠZGĠ EKĠM

BD Mueller Hinton II Agar BD Mueller Hinton II Agar 150 mm BD Mueller Hinton II Agar, Square

Eklem Protez Enfeksiyonlarında Antimikrobiyal Tedavi

Riskli Ünitelerde Yatan Hastalarda Karbapenemaz Üreten Enterobacteriaceae taranması

Mikroaerofilik (düşük oksijen) ve kapnofilik (artmış karbondioksit) (5%O 2,10%CO 2,85%N 2 ) İnsanlara bulaş: kontamine gıdalarla

Gram negatif bakteriler. Zeynep Gülay

Daptomisin: Laboratuvar Yaklaşım. Prof. Dr. Güner Söyletir Marmara Üniversitesi Tıp Fakültesi İstanbul

Analiz Süresi: C'de 48 saat

SU ÜRÜNLERİİŞLEME TESİSİNDEKİ MİKROBİYAL FLORANIN DEĞİŞİMİNDE TİCARİ DEZENFEKTANLARIN ETKİSİNİN ARAŞTIRILMASI. Aysu BESLER

Serolojik Test Sonuçları, Bakteri İdantifikasyonu,Antibakteriyel Duyarlılık Testleri Olgu Sunuları. Mik.Uzm.Dr.Uğur Çiftçi Düzen Laboratuvarlar Grubu

Biyofilmler; mikroorganizmaların, biyotik veya abiyotik yüzeylere adhezyonu sonrasında oluşturdukları glikokaliks olarak da adlandırılan

ANTİBAKTERİYEL DİRENÇ SÜRVEYANSI CEASAR VE UAMDS PROJELERİ

Listeria monocytogenes in Asit Dirençli Türlerinin Benzalkonyum Klorür Direnci ve Biyofilm Oluşumu. Emel ÜNAL TURHAN, Karin Metselaar, Tjakko Abee

Antibiyotik Duyarlılık Testlerinde Sık Sorulan Sorular

Netilmisin sülfat. Her tek dozluk kap (0.3 ml) mg netilmisin sülfat (0.900 mg Netilmisin e eşdeğer) içerir.

BD MacConkey II Agar / Columbia CNA Agar with 5% Sheep Blood (Biplate)

BRCA 1/2 DNA Analiz Paneli

BD Haemophilus Test Medium Agar (HTM)

VERİFİKASYON. Dr. Tijen ÖZACAR. Ege Üniversitesi Tıp Fakültesi Tıbbi Mikrobiyoloji AD - İZMİR

ULUSAL ANTİMİKROBİYAL DİRENÇ SURVEYANS SİSTEMİ (UAMDSS) Doç.Dr.Nilay ÇÖPLÜ

Antibiyotik duyarlılık testlerinde standardizasyon. Prof.Dr. Ahmet Başustaoğlu

CEFT P7 Sayfa 2

GIDA MİKROBİYOLOJİSİ LABORATUVAR UYGULAMASI

TÜBERKÜLOZ LABORATUVARI TEST REHBERİ

MİKROBİYOLOJİ LABORATUVAR HİZMETLERİ

Antibiyotik Duyarl l k Testlerinin Yorumu

Transkript:

Antimikrobik duyarlılık testine yönelik EUCAST disk difüzyon yöntemi Sürüm 3.0 Ocak 2014

İçindekiler Besiyerleri İnokülum hazırlığı Plakların inoküle edilmesi Diskler İnkübasyon Zonların değerlendirilmesi Yorumlama KK Hata analizi EUCAST 2014 Sürüm 3.0 2

EUCAST disk difüzyon yöntemi slayt gösterisi değişiklikleri Sürüm Sürüm 3.0 Nisan 2013 Değişiklikler MH-F plaklarındaki defibrine edilmiş at kanı hakkında açıklama eklendi; slayt 5 ve 6. Slayt 6 ve 19 a Pasteurella multocida ve Campylobacter jejuni ve coli eklendi. Disk difüzyon testine yönelik kolonilerin seçilmesi hakkında açıklama eklendi; slayt 11 ve 12. Campylobacter jejuni ATCC 33560 eklendi; slayt 30. E. faecalis ATCC 51922 ye DSM ve CCUG numaraları eklendi; slayt 31. Sürüm 2.1 Şubat 2012 Sürüm 2.0 Ocak 2012 Sürüm 1.1 Haziran 2010 Sürüm 1.0 Aralık 2009 Slayt 23 ve 25 te zonların değerlendirilmesi hakkında açıklama eklendi. Slayt 6 ve 19 a yeni terminoloji (viridans grup streptokoklar) ve Listeria monocytogenes eklendi. Slayt 24 te zonların değerlendirilmesi hakkında açıklama eklendi. Slayt 27 de zonların değerlendirilmesi hakkında istisnalar eklendi. Slayt 31 e K. pneumoniae ATCC 700603 ve E. faecalis ATCC 51299 eklendi. Slayt 7 de agar derinliği hakkında açıklama eklendi. Slayt 30 ve 31 e İspanyol Kültür Koleksiyonu numaraları eklendi. EUCAST web sitesinde yayınlanan ilk EUCAST disk difüzyon yöntemi slayt gösterisi EUCAST 2014 Sürüm 3.0 3

Duyarlılık testi besiyerleri EUCAST 2014 Sürüm 3.0 4

Duyarlılık testi besiyerleri Yalnızca Mueller-Hinton agar (MH) kullanılmalıdır. Güç üreyen organizmalara yönelik besiyeri (MH-F, Mueller-Hinton Fastidious) %5 oranında mekanik yöntemlerle defibrine edilmiş at kanı ve 20 mg/l β-nad (nikotinamid adenin dinükleotid) eklenmiş MH dir. EUCAST 2014 Sürüm 3.0 5

Farklı organizmalara yönelik besiyerleri Organizmalar Enterobacteriaceae Pseudomonas türleri Stenotrophomonas maltophilia Acinetobacter türleri Staphylococcus türleri Enterococcus türleri Streptococcus pneumoniae Grup A, B, C ve G streptokoklar Viridans grubu streptokoklar Haemophilus türleri Moraxella catarrhalis Listeria monocytogenes Pasteurella multocida Campylobacter jejuni ve coli Diğer güç üreyen organizmalar Besiyeri Mueller-Hinton agar Mueller-Hinton agar + %5 oranında mekanik olarak defibrine edilmiş at kanı + 20 mg/l β- NAD (MH-F) Araştırma sürecinde EUCAST 2014 Sürüm 3.0 6

Besiyerlerinin laboratuvar tarafından hazırlanması Besiyerleri üreticinin talimatlarına uygun şekilde hazırlanmalıdır. Besiyerinin sıcaklığı 42-45 C ye getirilene dek kan veya β-nad eklenmemeli (besiyeri hazırlayıcıların doğru sıcaklık ayarlarına sahip olduğundan emin olunmalıdır), iyice karıştırılmalı ve besiyerleri derhal dökülmelidir. Besiyerleri 4.0 mm ± 0.5 mm lik eşit bir derinlik sağlayacak şekilde düz bir yüzeyde dökülmelidir. Tekrarlanan ölçümlerle derinliğin tekrarlayan şekilde 4 mm nin altında veya üstünde olduğu gözlenirse, agar derinliği 3.5 4.5 mm aralığında olsa dahi hacim ayarlanmalıdır. Sıklıkla kullanılan plak boyutları 90 mm lik yuvarlak plak (~25 ml), 100 mm lik yuvarlak plak (~31 ml), 150 mm lik yuvarlak plak (~71 ml) ve 100 mm lik kare plaktır (~40 ml). EUCAST 2014 Sürüm 3.0 7

Mueller-Hinton agarın kalite kontrolü Tüm Mueller-Hinton serilerinin, bakteri-antimikrobik madde kombinasyonlarının tümü için kontrol sınırları içinde olduğundan emin olunmalıdır. Belirgin problemler: Aminoglikozidler ve P. aeruginosa ATCC 27853 ile söz konusu olan inhibisyon zonlarının kalite kontrol sınırlarının üzerinde/altında olması, iki değerlikli katyonların konsantrasyonunun yüksek veya düşük olduğuna işaret edebilir. Trimetoprim-sülfametoksazol ve E. faecalis ATCC 29212 nin inhibisyon zonlarının kalite kontrol sınırlarının altında olması timin ve timidinin aşırı miktarda mevcut olduğunu gösterebilir. EUCAST 2014 Sürüm 3.0 8

Agar plaklarının kurutulması ve saklanması Plaklar kullanılırken agar yüzeyinde gözle görülür su damlaları bulunmamalıdır. Plaklar aşırı kurutulmamalıdır. Laboratuvar tarafından hazırlanan besiyerlerine ilişkin kurutma ve saklama koşulları mevcut donanıma bağlı olacaktır ve yerel olarak belirlenmelidir. Ticari olarak hazırlanmış besiyerleri için, üretici tarafından tanımlanmış olan saklama şartlarına uyulmalıdır. EUCAST 2014 Sürüm 3.0 9

İnokülum Yöntem 0.5 McFarland standardına* eşdeğer bir inokülum süspansiyonu gerektirmektedir. * E. coli için yaklaşık olarak 1-2 x 10 8 CFU/mL ye karşılık gelmektedir. EUCAST 2014 Sürüm 3.0 10

Seçici olmayan besiyerinde bir gecelik üreme sonrasında izole koloniler seçilmelidir. EUCAST 2014 Sürüm 3.0 11

İnokülum hazırlığı Atipik bir varyantı seçmekten kaçınmak için (mümkünse) morfolojik olarak benzer olan birden fazla koloni kullanılmalı ve 0.5 McFarland standardının yoğunluğuna eşit, gözle görülür bulanıklık elde etmek için kolonilerden steril öze veya eküvyon ile serum fizyolojik içerisinde süspansiyon hazırlanmalıdır. İstisna: Streptococcus pneumoniae için kanlı agar plağındaki üreme kullanılıyorsa 0.5 McFarland a, çikolata agar plağındaki üreme kullanılıyorsa 1.0 McFarland a eşdeğer süspansiyon hazırlanır. Yoğunluğu 0.5 McFarland a ayarlamak için daha fazla bakteri veya serum fizyolojik çözeltisi ilave edilebilir, bu amaçla tercihen bir fotometrik cihaz kullanılmalıdır. EUCAST 2014 Sürüm 3.0 12

Plakların inoküle edilmesi En uygun kullanım için; inokülum süspansiyonu hazırlanmasının ardından 15 dakika içerisinde ve daima 60 dakika içerisinde kullanılmalıdır. Süspansiyona bir eküvyona batırılmalı ve eküvyonu tüpün iç duvarına yaslanmış halde çevirerek, eküvyondaki fazla sıvı uzaklaştırılmalıdır. Üç yönde inoküle ederek veya bir plak döndürücü kullanılarak, inokülum yüzeyin tamamına eşit şekilde yayılmalıdır. EUCAST 2014 Sürüm 3.0 13

Plakları yoğun şekilde inoküle etmekten kaçınılmalıdır Plakların aşırı şekilde inoküle edilmemesi önemlidir. Kontrol kökenlerine ilişkin zon çaplarının normal aralık içerisinde olduğundan emin olunmalıdır. Yoğun inokülumlar daha dar zon çaplarına neden olur. Plak inoküle edilmeden önce, eküvyon tüpün iç duvarına nazikçe bastırıp çevrilerek fazla sıvı uzaklaştırılmalıdır (ancak özelikle gram pozitif organizmalar için inokülum hazırlarken bu işlemde aşırıya kaçılmamalıdır). EUCAST 2014 Sürüm 3.0 14

Antimikrobik disklerinin saklanması Disk stokları üretici tarafından tavsiye edilen koşullarda saklanmalıdır. Kullanımda olan diskler bir nem gidericiyle ve ışıktan korunarak, hava geçirmez şekilde kapatılmış kaplarda 4-8 C de saklanmalıdır. Diskler üzerinde su yoğuşması meydana gelmesini önlemek için, kaplar açılmadan önce disklerin oda sıcaklığına gelmesi beklenmelidir. Gün içinde disklerin oda sıcaklığında tutulması, sürekli şekilde buzdolabına konup, geri alınmalarından daha iyidir. Diskler kutularının üzerinde yer alan üreticinin belirttiği son kullanma tarihinden sonra kullanılmamalıdır. EUCAST 2014 Sürüm 3.0 15

Antimikrobik disklerinin yerleştirilmesi Diskler inokülasyondan sonraki 15 dakika içerisinde yerleştirilmelidir. Diskler besiyeri yüzeyiyle sıkı, eşit bir temas halinde olmalıdır. Zonların üst üste binmesinin ve maddeler arasında etkileşim meydana gelmesinin önlenmesi için plak üzerindeki disk sayısı sınırlı olmalıdır. Zon çaplarının güvenilir şekilde ölçülebilmesi önem taşımaktadır. EUCAST 2014 Sürüm 3.0 16

İnokülasyon işleminin özeti Süspansiyon seçici olmayan besiyerinde bir gecelik inkübasyon sonrası üreyen kültürden izole edilmiş kolonilerden hazırlanmalıdır. Tercihen bir fotometrik cihaz kullanılarak, yoğunluk 0.5 McFarland a eşdeğer bir yoğunluğa ayarlanmalıdır. En uygunu, hazırlanan inokülumun 15 dakika içerisinde kullanılmasıdır. Süspansiyona steril bir eküvyon daldırılmalı ve eküvyonu tüpün iç kısmına yaslanmış halde çevirerek fazla sıvı uzaklaştırılmalıdır. İnokülum eşit darbelerle agar yüzeyinin tamamına yayılmalıdır. Plağın inokülasyonundan sonra 15 dakika içerisinde antibiyotik diskleri yerleştirilmeli ve bunun ardından yine 15 dakika içerisinde inkübasyona başlanmalıdır. EUCAST 2014 Sürüm 3.0 17

Plakların inkübasyonu Plaklar ters çevrilmeli ve diskler yerleştirildikten sonra 15 dakika içerisinde inkübe edilmelidir. Bu uygulama, geniş inhibisyon zonu boyutlarına neden olabilecek ön difüzyonu sınırlar. Plakların eşit şekilde ısıtılmaması zon boyutlarını etkileyebileceğinden (inkübatörün verimliliğine bağlı olarak), üst üste yerleştirilen plak gruplarının sayısı mümkün olduğu kadar az sayıda tutulmalıdır. MH normal atmosferde, MH-F ise %4-6 CO 2 içeren atmosferde inkübe edilmelidir. EUCAST 2014 Sürüm 3.0 18

Plakların inkübasyonu Organizma Enterobacteriaceae Pseudomonas türleri Stenotrophomonas maltophilia Acinetobacter türleri Staphylococcus türleri Enterococcus türleri Grup A, B, C ve G streptokoklar Viridans grubu streptokoklar Streptococcus pneumoniae Haemophilus türleri Moraxella catarrhalis Listeria monocytogenes Pasteurella multocida Campylobacter jejuni ve coli Diğer güç üreyen organizmalar İnkübasyon koşulları 35±1 C, normal atmosfer, 16-20 saat 35±1 C, normal atmosfer, 16-20 saat 35±1 C, normal atmosfer, 16-20 saat 35±1 C, normal atmosfer, 16-20 saat 35±1 C, normal atmosfer, 16-20 saat 35±1 C, normal atmosfer, 16-20 saat 35±1 C, %4-6 CO 2 içeren atmosfer, 16-20 saat 35±1 C, %4-6 CO 2 içeren atmosfer, 16-20 saat 35±1 C, %4-6 CO 2 içeren atmosfer, 16-20 saat 35±1 C, %4-6 CO 2 içeren atmosfer, 16-20 saat 35±1 C, %4-6 CO 2 içeren atmosfer, 16-20 saat 35±1 C, %4-6 CO 2 içeren atmosfer, 16-20 saat 35±1 C, %4-6 CO 2 içeren atmosfer, 16-20 saat 41±1 C, mikroaerop atmosfer, 24 saat Araştırma sürecindedir EUCAST 2014 Sürüm 3.0 19

15-15-15 dakika kuralı Plaklar aşağıdaki kurallara uyulabilecek şekilde hazırlanmalıdır: İnokülum hazırlanmasının ardından 15 dakika içerisinde ve daima 60 dakika içerisinde kullanılmalıdır. Diskler, plakların inokülasyonundan sonraki 15 dakika içerisinde yerleştirilmelidir. Disklerin yerleştirilmesinin ardından 15 dakika içerisinde inkübasyona başlanmalıdır. EUCAST 2014 Sürüm 3.0 20

İnkübasyon sonrası plakların incelenmesi Doğru bir inokülum ve tatmin edici şekilde ekilmiş plaklar iyi bir üreme sağlayacaktır. Düzgün dairesel (çentikli zon sınırı gözlenmeyen) inhibisyon zonları elde edilebilmesi için üreme plak üzerinde eşit şekilde dağılım sergilemelidir (bir sonraki slayta bakınız). Eğer tek tek koloniler görülebiliyorsa, inokülum yoğunluğu çok azdır ve test tekrarlanmalıdır. EUCAST 2014 Sürüm 3.0 21

Üreme bitişik olmalı ve plak üzerinde eşit şekilde yayılım sergilemelidir Plaklar böyle görünmelidir......böyle GÖRÜNMEMELİDİR! EUCAST 2014 Sürüm 3.0 22

Zonların değerlendirilmesi Zon sınırları, plak gözden 30 cm uzakta tutularak, çıplak gözle bakıldığında, üremenin tam olarak inhibe olduğu nokta olarak değerlendirilmelidir. Örnekler: E. coli Siprofloksasin S. aureus Eritromisin KoNS Trimetoprim S. pneumoniae Rifampisin EUCAST 2014 Sürüm 3.0 23

Zonların değerlendirilmesi MH plakları, yansıyan ışıkla aydınlatılmış koyu renkli bir zemin üzerinde, plağın tersinden değerlendirilmelidir. MH-F plakları, kapakları çıkarılmış ve yansıyan ışıkla aydınlatılmış halde, plağın ön yüzünden değerlendirilmelidir. EUCAST 2014 Sürüm 3.0 24

Zonların değerlendirilmesi Aksi belirtilmediği takdirde geçirgen ışık (plak ışığa doğru tutularak) veya büyüteç kullanılmamalıdır (aşağıya bakınız). Zon çapları bir cetvel, çap ölçer (kumpas) veya bir otomatik zon ölçer ile ölçülmelidir. Zon içerisinde belirgin koloniler bulunması durumunda koloniler pasajlanarak, kültürün saflığı kontrol edilmeli ve gerekli durumlarda test tekrar edilmelidir. EUCAST 2014 Sürüm 3.0 25

Zonların değerlendirilmesi istisnalar (1) Organizma Antimikrobik madde İnhibisyon zonlarının değerlendirilmesi Proteus türleri Herhangi bir madde Yayılma göz ardı edilmelidir. Streptococcus türleri Herhangi bir madde Hemoliz zonu değil, üremenin inhibisyonu değerlendirilmelidir. Herhangi bir organizma Staphylococcus türleri Trimetoprim Trimetoprim-sülfametoksazol Linezolid Belirgin sınırlara sahip zon içerisindeki hafif puslu görünümlü üreme göz ardı edilmelidir. (Plak ışığa doğru tutularak) geçirgen ışıkla incelenmelidir. Enterococcus türleri Vankomisin (Plak ışığa doğru tutularak) geçirgen ışıkla incelenmelidir. Enterobacteriaceae Ampisilin Bazı MH agar serilerinde bir iç zon şeklinde görülebilecek ince üreme göz ardı edilmelidir. EUCAST 2014 Sürüm 3.0 26

Zonların değerlendirilmesi istisnalar (2) Organizma Antimikrobik madde İnhibisyon zonlarının değerlendirilmesi E. coli Mesilinam İnhibisyon zonu içerisindeki izole koloniler göz ardı edilmelidir. Stafilokoklar Benzilpenisilin (Plak ışığa doğru tutularak) geçirgen ışıkla zon sınırları dikkatli şekilde incelenmelidir. Stafilokoklar Sefoksitin İnhibisyon zonu içerisindeki kolonileri tespit etmek için zonlar dikkatli şekilde incelenmelidir. EUCAST 2014 Sürüm 3.0 27

Zonların yorumlanması Testleri yorumlamadan önce kontrol kökenlerine ilişkin zon çaplarının kabul edilebilir aralıklar içerisinde olduğundan emin olunmalıdır. Ölçülen zon çapları (milimetre cinsinden en yakın uzunluk) EUCAST Sınır Değer Tabloları'na (www.eucast.org) uygun şekilde yorumlanarak duyarlılık kategorilerine ayrılır (S, I ve R). Alternatif olarak, EUCAST sınır değerlerini içeren bir şablon kullanılabilir. EUCAST 2014 Sürüm 3.0 28

Duyarlılık testinin kontrolü Test performansını izlemek için tavsiye edilen rutin kalite kontrol kökenleri kullanılmalıdır (bkz. EUCAST Kalite Kontrol Tabloları). Direnç tespit etme yeterliliğinin doğrulanması için, tanımlanmış direnç mekanizmalarına sahip kalite kontrol kökenleri kullanılabilir. Kültür koleksiyonlarından veya ticari kaynaklardan kalite kontrol kökenleri satın alınabilir. EUCAST 2014 Sürüm 3.0 29

EUCAST rutin kalite kontrol kökenleri Organizma Kültür koleksiyonu numaraları Özellikler E. coli ATCC 25922; NCTC 12241; CIP 7624 DSM 1103; CCUG 17620, CECT 434 P. aeruginosa ATCC 27853; NCTC 12903; CIP 76110 DSM 1117; CCUG 17619; CECT 108 S. aureus ATCC 29213; NCTC 12973; CIP 103429 DSM 2569; CCUG 15915; CECT 794 E. faecalis ATCC 29212; NCTC 12697; CIP 103214 DSM 2570; CCUG 9997; CECT 795 S. pneumoniae ATCC 49619; NCTC 12977; CIP 104340 DSM 11967; CCUG 33638 Duyarlı, sokak tipi Duyarlı, sokak tipi Zayıf β-laktamaz üreten köken Duyarlı, sokak tipi Penisiline orta-duyarlı H. influenzae NCTC 8468; CIP5494, CCUG 23946 Duyarlı, sokak tipi Campylobacter jejuni ATCC 33560; NCTC 11351; CIP 702 DSM 4688; CCUG 11284 Duyarlı, sokak tipi EUCAST 2014 Sürüm 3.0 30

Özel direnç mekanizmalarının tespitine yönelik EUCAST kökenleri (geliştirilme aşamasındadır) Organizma E. coli K. pneumoniae Kültür koleksiyonu numaraları ATCC 35218; NCTC 11954; CIP 102181; DSM 5564; CCUG 30600; CECT 943 ATCC 700603; NCTC 13368; CCUG 45421; CECT 7787 S. aureus NCTC 12493 E. faecalis H. influenzae ATCC 51922; NCTC 13379; CIP 104676; DSM 12956 CCUG 34289 ATCC 49247; NCTC 12699; CIP 104604; DSM 9999; CCUG 26214 Özellikler TEM-1 β-laktamaz üreten organizma GSBL üreten organizma (SHV-18) Oksasiline heterodirençli, meca pozitif Yüksek düzey aminoglikozid direncine sahip (HLAR) ve vankomisine dirençli (vanb pozitif) β-laktamaz negatif, ampisiline dirençli (BLNAR) EUCAST 2014 Sürüm 3.0 31

Kültür Koleksiyonları ATCC, American Type Culture Collection, 12301 Parklawn Drive, Rockville, MD 20852, USA. NCTC, National Collection of Type Cultures, Health Protection Agency Centre for Infections, 61 Colindale Avenue, London NW9 5HT, UK. CIP, Collection de l Institut Pasteur, 25 28 Rue du Docteur Roux, 75724 Paris Cedex 15 France. DSMZ, Deutsche Stammsammlung für Mikroorganismen und Zellkulturen, Mascheroder Weg 16, D-38124 Braunschweig, Germany. CCUG, The Culture Collection University of Gothenburg. http://www.ccug.se/ CECT, Colección Española de Cultivos Tipo, Universidad de Valencia, 46100 Burjassot, Valencia, Spain. http://www.cect.org EUCAST 2014 Sürüm 3.0 32

Genel performansı değerlendirmek için rutin kalite kontrol kökenleri kullanılmalıdır Kontrol testleri, en azından rutin panellerin parçası olan antibiyotikler için, her gün gerçekleştirilmeli ve sonuçları kontrol edilmelidir. Testlerin yapıldığı her gün, son 20 ardışık testin sonuçları incelenmelidir. Sonuçlar sürekli şekilde hedefin üstünde veya altında kalan zonlar ya da eğilimler açısından incelenmelidir. 20 test içinde iki veya daha fazla test aralığın dışında olduğu takdirde sorunun sebebinin araştırılması gerekmektedir. EUCAST 2014 Sürüm 3.0 33

Zon çapı (mm) Test performansının izlenmesi 25 20 15 10 5 Kontrol sınırları dışındaki tek sonuçlar Tüm sonuçlar sınırlar içinde ancak hedefin tek tarafında Aralığın üst sınırı Hedef Aralığın alt sınırı Hedefin aynı tarafında sınırların dışında ardışık sonuçlar 0 0 5 10 15 20 25 30 35 40 Gün EUCAST 2014 Sürüm 3.0 34

KK sonuçları aralık dışında olduğunda yapılması gerekenler 20 teste ilişkin zon çapları içerisinde ardışık olmayan iki kontrol zon çapı kabul edilebilir aralığın dışında olduğu takdirde, duyarlılık testi sonuçları bildirilmeli ancak durum araştırılmalıdır. 20 teste ilişkin zon çapları içerisinde ardışık iki kontrol zon çapı kabul edilebilir aralığın dışında olduğu takdirde, duyarlılık testi sonuçlarını bildirmeden önce durum araştırılmalıdır. Testlerin tekrarlanması gerekebilir. Aynı gün içinde birden fazla (>2) disk aralık dışında olduğu takdirde, duyarlılık testi sonuçlarını bildirmeden önce durum araştırılmalıdır. Testlerin tekrarlanması gerekebilir. Dirençli bir kontrol kökeninde direnç tespit edilmediği takdirde, duyarlılık testi sonuçları bildirilmemeli, durum araştırılmalı ve test tekrarlanmalıdır. EUCAST 2014 Sürüm 3.0 35

Kontrol kökenlerine ilişkin saklama ve pasaj işlemleri Kökenler biri kullanılan ve diğeri arşiv olmak üzere iki stok besiyeri halinde, -70ºC de gliserol sıvı besiyeri içeren boncuklarla saklanmalıdır. Alternatif olarak, dondurulmuş kültürler veya ticari saklama sistemleri kullanılmalıdır. Her hafta, kullanımda olan stok besiyerinden, uygun seçici-olmayan besiyerine pasaj yapılmalı ve kültürün saflığı kontrol edilmelidir. 7 güne dek her gün, saf olan plaktan pasaj yapılmalıdır. Güç üreyen organizmalar sadece 6 gün seri olarak pasajlanabilir. Kullanımda olan stok besiyeri tükendiğinde, arşiv stok besiyerinden yapılan pasajla yeni bir kullanılan stok besiyeri hazırlanmalıdır. EUCAST 2014 Sürüm 3.0 36

Potansiyel hata kaynakları (1) Besiyeri Test koşulları Plakların saklanması Talimatlara uygun şekilde hazırlanmaması Seriler arasında değişkenlik veya agar tedarikçisinde değişiklik Katkı maddeleri (seriler arasında değişkenlik, yanlış miktar veya son kullanma tarihinin geçmesi) ph Agar derinliği/agar miktarı Son kullanma tarihi 15-15-15 kuralına bağlı kalınmaması (süspansiyonun 15 dakika içerisinde kullanılması, disklerin 15 dakika içerisinde yerleştirilmesi ve inkübasyonun 15 dakika içerisinde başlatılması) İnkübasyon (sıcaklık, atmosfer ve süre) Yanlış inokülasyon (aşırı az, aşırı yoğun veya eşit olmayan) Değerlendirme koşulları Zon sınırlarının değerlendirilmesi EUCAST 2014 Sürüm 3.0 37

Potansiyel hata kaynakları (2) Diskler Kontrol organizmaları Yanlış disk kullanılması (maddenin veya disk içeriğinin yanlış olması) Diskin potansiyeli (yanlış saklama, maddede kararsızlık, son kullanma tarihi) Kaplar açıldığında disklerin oda sıcaklığında olmaması Plakta aşırı miktarda disk bulunması (maddeler arasında etkileşim) Yanlış KK kökeni kullanılması Mutasyon Kontaminasyon Kültürün eskiliği EUCAST 2014 Sürüm 3.0 38

EUCAST web sitesi Yöntem, KK aralıkları ve sınır değerler konusundaki güncellemeler için EUCAST web sitesi düzenli olarak kontrol edilmelidir. www.eucast.org Lütfen tüm yorumlarınızı ve önerilerinizi erika.matuschek@ltkronoberg.se adresine veya EUCAST sekreterliğine gönderin (web sitesine bakınız). EUCAST 2014 Sürüm 3.0 39