RIDA QUICK Rotavirus/Adenovirus Combi Makale no: N 1003 R-Biopharm AG, Landwehrstr. 54, D-64293 Darmstadt, Germany Tel: +49 (0) 61 51 81 02-0 / Fax: +49 (0) 61 51 81 02-20 Χ
1. Kullanım Amacı In vitro diyagnostik kullanım içindir. RIDA QUICK Rotavirus/Adenovirus Combi testi hızlı immunokromotografik test olup, gaitada rotavirüslerin ve/veya adenovirüslerin kalitatif tespiti için kullanılır. 2. Özet ve testin açıklaması Adenovirüsler, 1953 yılında Rowe ve iş arkadaşları tarafından adenoid dokuda keşfedildi.bu virüslerin etiolojik anlamı akut solunum hastalıklarında hemen fark edildi. Adenovirüsler, faranjite, farma konjuktival ateşe ve zatüreye sebeb olabilir. 5 yaşın altındaki çocuklarda olan akut solunum hastalığının % 5 indn sorumludur.bebeklerde görülen zatürenin % 10 nundan sorumludur.gastro intestinal bozukluklarda adeno virüslerin önemi çok zaman için şüpheliydi. Çünkü hücre kültürüyle sadece bazı tipleri tespit edilebildi.akut gastroenterit olan çocuklarda, bakılan gaitanın % 4-14 ünde adenovirüs tespit edildi.rota virüsten sonra, bebeklerde en fazla semptomlara sebep olan virüstür.enterik adeno virüs tarafından olan epidemik hastalıklar tariflendi. Rota virüs gibi, patojenin kesin teşhisi hastane kaynaklı enfeksiyonlardan korunmak için önemlidir.rota virüsler 6 aydan 3 yaşa kadar bakterial olmayan gastroenteritde en önemli virüslerdir.aynı zamanda çocuklarda ve yetişkinlerde hastalığın sebebini gösterir.risk gruplarında, örneğin çocuklarda, yaşlılarda ya da immunosupres hastalarda ölüme neden olabilir. Rotavirus enfeksiyonları sıklıkla kış aylarında görülür. Endemik ve epidemik hastalarda binlerce hastaya etki ettiği tanımlandı.akut enterit ile hastanede yatan çocukların numuneleri test edildi, % 50 den fazlası rota virüs pozitif bulundu. Rotavirüsler, fekal oral yol ile bağırsaklarda büyük oranda elimine edilir, rotovirüsten kaynaklanana hastane kaynaklı virüsle ciddi olarak dikkate alınır, özellikle bebek istasyonlarını, pediatri kliniklerini kontrol etmek zordur. Erken ve güvenilir tespit, rota virüslerin ileri enfeksiyonları önlemede çok önem taşır. 3. Test prensibi Bu hızlı test, tek basamaklı, immunokromotografik yan - akış testidir. Her iki virüse karşı yöneltilmiş monoklonal antikorlar kendi kendilerine kırmızı (rota virüse özel) ya da mavi (adeno virüse özel) lateks partiküllere karşı bağlanır. İki patojene karşı diğer özel antikorlar sıkıca membrana bağlanır. Gaita numunesi önce ekstraksiyon bufer ile askıya alınıp sonra çöktürülür. Üste kalan temiz sıvı süpernatant test kaseti üzerine alınır. Numune, antijen bağlı lateks RIDA QUICK Rotavirus/Adenovirus Combi 07-03-30 2
partikülle kasete geçer. Eğer test pozitif ise özel yakalama bantına bağlanır. Numunedeki antijene balı olarak, mavi ve /veya kırmızı bant oluşur. 4. Gerekli Reaktifler Her pakette 20 teste yetecek kadar reaktif vardır. Kaset 20 test 20 farklı numune için test kasetleri Diluent 30 ml Extraksiyon bufer, kullanıma hazır; % 0.1 sodyum azid Pipet 25 parça Paketin içinde 25 tek kullanımlık pipet 5. Saklama koşulları Paket 2 30 C de saklanabilir paketin üzerinde yazan tarihe kadar kullanılabilir. Miadı geçenler için, kalite garantisi yoktur.buna benzer olarak, zarar görmüş paketteki kasetlerin kalite garantisi yoktur. 6. Gerekli materyaller ama sağlanmayanlar - Gaita süspansiyonu için test tüpleri - Vorteks mikser (opsiyonel) - Mikropipet (200 μl - 1000 μl) - % 0.5 sodyum hipoklorit solüsyonu içeren atık kabı 7. Kullanıcılar için önlemler Sadece in vitro diyagnostik kullanım içindir.mutlaka eğitimli bir personel tarafından kullanılmalıdır.medikal laboratuvar çalışanları için olan rehber takip edilmeli ve oradaki RIDA QUICK Rotavirus/Adenovirus-Combi 07-03-30 3
direktiflere tamamen uyulmalıdır.numune dilüsyonu için olan bufer, koruyucu olarak sodyum azid içerir.bu madde deriye ya da mukoz membrana temasından sakınılmalıdır. Numuneler ya da reaktifler ağız ile pipetlenmemeli ve yaralı deriyle, mukoz membran ile teması önlemelidir. Numuneler, eldiven giyilerek çalışılmalı ve test bittiği zaman eller yıkanmalıdır. Numuneler veya reaktifler ile çalışırken sigara içmeyiniz, yemek yiyip içmeyiniz. Tüm reaktifler ve metaryeller enfekte bir malzemeye dönüşür. Aynı numuneler davranıldığı gibi uygun bir dezenfektan ile dezenfekte edilmelidir.(örn: Sodyum hipoklorit) ya da 121 C de en az bir saat otoklavda bekletiniz. 8. Numune toplama ve saklama Gaita numuneleri hiçbir katkı maddesi olmayan temiz bir kaba konmalıdır ve test başlamadan önce 2 8 C de bekletilmelidir.eğer 3 günden fazla saklamak gerekiyorsa, numuneler 20 C de saklanmalıdır. Bu durumda da numuneler test edilmeden önce oda ısısında tamamen çözülmelidir. Tekrar tekrar çözüp dondurmaktan kaçınılmalıdır. Eğer rektal swap kullanıldıysa, test için, yeteri kadar gaita (yaklaşık 50 mg) alındığından emin olunuz. 9. Test prosedürü 9.1. Genel bilgi Numuneleri kullanmadan önce, ekstraksiyon numunesi,ve test kasetleri oda sıcaklığına (20 25 C) getirilmelidir. Test kasetleri kullanılmadan önce paketinden dışarı çıkarılmalıdır.bir defa kullanılan paketler tekrar kullanılmamalıdır. Test direk olarak gün ışığına maruz kalmamalıdır. Kalan reaktifleri kaplarına geri dökmek kontaminasyona sebep olabilir. 9.2. Numuneleri Hazırlama 1 ml Extraksiyon bufer Diluent belirtilen test tüpüne konur. Sıvı gaita numunesinden 100 μl tek kullanımlık Pipet ile alınır. (pipetteki ikinci çizginin üzerine kadar) ve daha önce hazırlana buferlı tüpün içine konur. Katı numunelerden, 50 mg alınıp buferın içine konur.numune iyice homojen hale getirilmelidir. Vortekslenerek ya da pipetle çekip bırakılarak bu sağlanır. Homojen hale gelen numune çökmesi temiz bir süpernatant oluşana kadar 3 dakika beklenir. RIDA QUICK Rotavirus/Adenovirus Combi 07-03-30 4
9.3. Numuneyi test etme Dış ambalajından çıkarılan Kaset, düz bir yere konur. Mikropipet ile 200 µl süpernatant pipetlenir ya da tek kullanımlık Pipet ile 4 damla damlatılır.sıvının membran boyunca akıp emildiğinden emin olunuz.pipetle emilen herhangi bir partikül tıkanmaya sebep olur.bu sebepten önce bu tip partiküller uzaklaştırılmalı.test 5 dakika sonra okunabilir. 10. Kalite kontrol reaktifin miadı Eğer test kaseti sağlam ise, numune pipetlemeden önce renk değişimi yok ya da bandlar membranda görülebiliyorsa, test değerlendirilmeli. Buna ilave olarak, test inkübasyonundan sonra,en az yeşil kontrol bandı görülebilir olmalıdır.eğer belirmezse, testi tekrarlamadan önce aşağıdakiler kontrol edilmelidir. Test kasetlerinin ve kullanılan ekstraksiyon buferın miadı kontrol edilmelidir. Ekstraksiyon buferın kontamine olup olmadığı Bunlardan emin olduktan sonra, yeni kaset ile testi tekrar ettiğinizde, eğer kontrol bandı görünür değilse, lütfen üretici ya da R-Biopharm distirübütör ile kontak kurunuz. 11. Değerlendirme ve yorumlama Maksimum sırasıyla aşağıdaki 3 band görülür: bir mavi (T 1 = Test band 1), bir kırmızı (T 2 = Test band 2) ve bir yeşil (C = kontrol band) band. Eğer yeşil band yoksa test geçersidir, değerlendirilemez! Aşağıdaki olası yorumlar mümkündür: - Adenovirus pozitif : mavi ve yeşil band görülür. - Rotavirus pozitif : kırmızı ve yeşil band görülür. - Adenovirus ve rotavirüs pozitif : mavi, kırmızı ve yeşil oluşur. - Negatif: yalnızca yeşil band görülür. RIDA QUICK Rotavirus/Adenovirus-Combi 07-03-30 5
- Geçersiz: Hiçbir bant görülmez ya da yukarıda tariflenen kombinasyondan farklı olursa. Banttaki renk değişimi 10 dakika ya da daha sonra olursa bir anlam ifade etmez ve değerlendirilmez. 12. Metot Limitleri RIDA QUICK Rotavirus/Adenovirus Combi testi gaitadaki rota virüsleri ve adeno virüsleri tespit eder.test spesifik görünür bantların şiddeti ile klinik semptomların şiddetini ortaya çıkarmak için kullanılamaz. Sonuçlar klinik tablo ile birlikte yorumlanmalıdır. Pozitif sonuçlar, diğerbulaşıcı patojenlerin olmadığı anlamına gelmez. Negatif sonuçlar rotavirüs ya da adenovirüs enfeksiyonunun olmadığı anlamına gelmez. Bu enfeksiyon aralıklı olarak salgılanan patojenler ya da numune olan çok küçük miktardaki patojenler tarafından olabilir.eğer hasta anemik ya da aran patojen tarafından enfekte olduğu şüphesi varsa 4 hafta sonra bir gaita numunesi alınarak test tekrar edilmelidir. Fazla gaita numunesi, spesifik bant renklerinin oluşacağına kahve rengi rengin oluşmasına sebep olur. Bu kahve rengi bantların bir anlamı yoktur. Bu gibi durumlarda, daha az miktarda gaita ile testi tekrar etmek gerekli olacaktır. Ya da daha önce hazırlanan süspansiyon dilüe edilir (temiz süpernatant oluştuktan sonra) çok fazla gaita tarafından sonucun maskelenmesi önlenip patojen bakterinin varlığı aranır. 13. Performans nitelikleri Testin hassasiyeti ve özgüllüğü piyasadaki bir ELISA kiti ile kıyaslanarak test edildi. Sonuçlar aşağıdaki tablodadır. Adenovirus Rotavirus ELISA RIDA QUICK + - ELISA RIDA QUICK + - + 9 1 + 105 0-0 189-1 95 RIDA QUICK Rotavirus/Adenovirus Combi 07-03-30 6
Hassasiyet : 90,0 % Hassasiyet : 100,0 % Özgüllük : 100,0 % Özgüllük : 99,0 % Pos. tahmini değer : 100,0 % Pos. tahmini değer : 99.1 % Neg. Tahmini değer : 99.5 % Neg. Tahmini değer : 100,0 % RIDA QUICK Rotavirus/Adenovirus Combi hızlı testi aynı zamanda piyasadaki diğer bir PCR metot ile karşılıklı çalışıldı. Numuneler 4 yaşın altında olan hastanede gastroenterit semptomlarından dolayı yatan ya da polikliniğe gelmiş hastalardan numuneler alınarak çalışma yapıldı. Tablo 2 deki sonuçlar aşağıdadır. RIDA QUICK Rotavirus/Adenovirus Combi Coris Bioconcept Combi-Stick Rotavirus Adenovirus Rotavirus Adenovirus + - + - + - + - PCR + - 45 1 3 51 32 12 1 55 44 2 1 53 23 21 0 56 Hassasiyet 97.8 % 72.7 % 95.7 % 52.3 % Özgüllük 94.4 % 98.2 % 98.1 % 100.0 % PPV NPV Kesinlik 93.8 % 98.1 % 96.0 % 97.0 % 80.9 % 87.0 % 97.8 % 96.4 % 97.0 % 100.0 % 72.7 % 79.0 % RIDA QUICK Rotavirus/Adenovirus-Combi 07-03-30 7
Referanslar 1. Francki, R. I. B., Fauquet, C. M., Knudson, D. L., and Brown, F.: Classification and Nomenclature of Viruses. Fifth Report of the International Commitee on Taxonomy of Viruses. Archives of Virology Supplement 2. Springer Verlag, New York, pp 140-144 (1992) 2. Estes, M.K. and Cohen, J.: Rotavirus Gene Structure and Function. Microbiological Reviews 53: 410-419 (1989) 3. Bishop, R. F., Davidson, G. P., Holmes, I. H. and Ruck, B. J.: Detection of a new virus by electron microscopy of faecal extracts from children with acute gastroenteritis. Lancet 1, 149-151 (1974) 4. Kapikian, A. Z., Yolken, R. H., Greenberg, H. B., Wyatt, R. G., Kalica, A. R., Chanock, R. M. and Kim, H. W.: Gastroenteritis viruses. Diagnostic Procedures for Viral, Rickettsial and Chlamydial Infections, 5th Ed., (1980) Lennette, E. H., Schmidtt, N. J., Eds. Amer. Pub. Health Assoc., Washington, D.C., 927-996 5. Flewett, T. H. and Woode, G. N.: The Rotavirus. Arch. Virology 57, 1-23 (1978) 6. Steinhoff, M. C: Rotavirus: The first five years. J. Ped. 96, 611-622 (1980) 7. Blacklow, N. R. and Cukor, G.: Viral Gastroenteritis. New England Journal of Medicine 304, 397-406 (1981) 8. Wenman, W. M., Hinde, D., Feltham, S. and Gurwith, M.: Rotavirus Infection in Adults. Results of a Prospective Study. New England Journal of Medicine 301, 303-306 (1979) 9. Cubitt, W. D.: Rotavirus Infection: An Unexpected Hazard in Units Caring for the Elderly. Geriatric Medicine Today 1, 33-38 (1982) 10. Marrie, T. J., Spencer, H. S., Faulkner, R. S., Ethier, J. and Young, C. H.: Rotavirus Infection in a Geriatric Population. Arch. Intern. Med. 142, 313-316 (1982) 11. Coulson, B. S. and Holmes, I. H.: An Improved Enzyme-Linked Immunosorbent Assay for the Detection of Rotavirus in Faeces of Neonates. J. Virol. Methods 8, 165-179 (1984) 12. Hung, T., Wang, Ch., Fang, Z., Chou, Z., Chang, X., Liong, X., Chen, G., Yao, H., Chao, T., Ye, W., Den, S. and Chang, W.: Waterborne outbreak of Rotavirus Diarrhoea in Adults in China caused by a Novel Rotavirus. Lancet, 1139-1142 (1984) 13. Cukor, G., Perron, D. M., Hudson, R. and Blacklow, N. R.: Detection of Rotavirus in Human Stools by Using Monoclonal Antibody. J. Clin. Microl. 19, 888-892 (1984) 14. Horwitz, M.S.: Adenoviral Diseases. In B.N. Fields, ed. Virology, Raven Press, New York, 477-495. 15. Wigand, R. and Th. Adrian: Die Diagnostik von Adenovirus-Infektionen [The diagnosis of adenovirus infections]. Internist 26, 109-112 (1985). 16. Wigand, R.: Klinische Relevanz von Adenovirusinfektionen [Clinical relevance of adenovirus infections]. Laboratoriums-blätter 30, 118-123 (1980). RIDA QUICK Rotavirus/Adenovirus Combi 07-03-30 8
17. Brandt, C.D., H.W.Kim, A.J. Vargosdo, B.C. Jeffries, J.O. Arrobio, B.Rindge, R.H. Parrot and R.M. Chanock: Infections in 18,000 infants and children in a controlled study of respiratory tract disease. I. Adenovirus pathogenicity in relation to serologic type and illness syndrome. Am. J. Epidemiol. 90, 484-500 (1969). 18. Mallet, R., M. Riberre, F. Bonnenfant, B. Labrune and L. Reyrole: Les pneumopathies graves a adeno-virus. Arch. Fr. Pediatr. 23, 1057-1073 (1966). 19. Takiff, H.F., S.E. Straus and C.F. Garon: Propagation and in vitro studies of previously non-cultivable enteric adenoviruses in 293 cells. Lancet 2, 832-834 (1981). 20. Herrmann, J.E., D.M. Perron-Henry, D. Stobbs-Walro and N.R. Blacklow: Preparation and characterization of monoclonal antibodies to enteric adenovirus types 40 and 41. Arch. Virology 94, 259-265 (1987). 21. Uhnoo, I., G. Wadell, L. Svensson and M.E. Johansson: Importance of enteric adenoviruses 40 and 41 in acute gastroenteritis in infants and young children. J. Clin. Microbiol. 20, 365-372 (1984). 22. Kidd, A.H., E.H. Harley and M.J. Erasmus: Specific detection and typing of adenovirus types 40 and 41 in stool specimens by dot-blot hybridization. J. Clin. Microbiol. 22, 934-939 (1985). 23. Cukor G. and N.R. Blacklow: Human viral gastroenteritis. Microbiological Reviews 48, 157-179 (1984). 24. Mogabgab, W.J.: Mycoplasma pneumonia and adenovirus respiratory illnesses in military and university personnel, 1959-1966. Am. Rev. Respir. Dis. 97, (345-358) (1968). 25. Richmond, S.J., E.O. Caul, S.M. Dunn, C.R. Ashley, S.K.R. Clarken: An outbreak of gastroenteritis in young children caused by adenoviruses. Lancet 1, 1178-1180 (1979). 26. Chiba, S., S. Nakata, I. Nakamura, K. Tanigudi, S. Urasawa, K. Fujinaga and T. Nakao: Outbreak of infantile gastroenteritis due to type 40 adenovirus. Lancet 2, 954-957 (1983). RIDA QUICK Rotavirus/Adenovirus-Combi 07-03-30 9