KEY-CODE: FRI10285 80565 INNOTEST HIV Antigen mab Neutralization Reagents 28698 v0 2013-09-12 p 1/6 INNOTEST HIV Antijen mab Nötralizasyon Reaktifler Tarafından üretildi: Fujirebio Europe N.V. Technologiepark 6 9052 Gent Belgium +32-9 329 13 29 BTW BE 0427.550.660 RPR Gent Tarafından dağıtıldı: Fujirebio Germany GmbH Hans-Böckler-Allee 20 30173 Hannover Germany +49-511-8573931 Fujirebio Italia S.r.l. Via Vaccareccia 39/A 00040 Pomezia (Roma) Italy +39 06 965 28 700 Fujirebio France SARL Les Conquérants, Bât. Le Kilimandjaro 8/10, avenue des Tropiques 91940 Les Ulis France +33-1 69 07 48 34 0459 Fujirebio Iberia S.L. Calle Tarragona 161, Planta 14 08014 Barcelona Spain +34-93 270 53 00 Fujirebio Europe N.V Technologiepark 6 9052 Gent Belgium +32-9 329 13 29 Diğer dillere bakın / Autres langues voir / Andere Sprachen siehe / Altre lingue vedere / Ver otros idiomas / Outras línguas ver: www.e-labeling.eu/fri10285 EUROPE +800 135 79 135 GR 00 800 161 220 577 99 IS 800 8996 LT 880 030 728 RO 0800 895 084 SK 0800 606 287 TR 0800 142 064 866 LI +31 20 796 5692 MT +31 20 796 5693 non-europe +31 20 794 7071 US +1 855 236 0910 CA +1 855 805 8539 AR, BR, CO, UY, AU, NZ, RU +800 135 79 135 Türkçe 8:00 17:00 GMT+1 M T W T F S S Fujirebio Europe N.V.
80565 INNOTEST HIV Antigen mab Neutralization Reagents / 28698 v0 / KEY-CODE: FRI10285 p 2/6 İÇERİK TABLOSU Kullanılan Semboller... 2 Kullanım Amacı... 3 Test Prensibi... 3 Reaktifler... 3 Tanımlama, kullanım için hazırlama ve saklama koşulları... 3 Kit içeriğinde olmayan gerekli materyaller... 3 Güvenlik ve Çevre Koşulları... 3 Örnekler... 4 Test Prosedürü... 4 Sonuçlar... 4 Kısaltmalar... 4 Validasyon... 5 Sonuçların Yorumlanması... 5 Sınırlamalar... 5 Test Performansı... 5 Duyarlılık..... 5 Özgünlük... 5 Potansiyel çapraz-reaksiyonlu ve yanlış-pozitif örnekler... 5 Kesinlik... 5 Markalar... 6 INNOTESTdünya çapında tescilli markadır Avrupa, ABD, Japonya, Çin gibi....6 Symbols used Üretici In vitro diagnostik medikal gereç Lot numarası Katalog numarası İle Kullanım Kullanım bilgileri Sıcaklık sınırlamaları < n > testi için yeterli miktarı içerir Kontrol Solusyonu Nötralizasyon Solusyonu
80565 INNOTEST HIV Antigen mab Neutralization Reagents / 28698 v0 / KEY-CODE: FRI10285 p 3/6 Kullanım Amacı INNOTEST HIV Antijen mab test tekrarı ile reaktif bulunan örneklerde HIV p24 antijenlerinin teyit edilmesi için reaktiflerdir. Test Prensibi INNOTEST HIV Antijen mab testi ile reaktif bulunan örnekler spesifik nötralizasyon reaktifi ile inkübe edilir (HIV e karşı ansan antikorları). Eğer örnekte HIV antijeni var ise spesifik nötralizasyon antikorları ile kompleks yapar. Bu nötralizasyon antijenleri mikrokuyucuklarda kaplı anti-hiv antikorları bağlanmayı engellerler ve yıkama ile elimine ederler. Bu yüzden HRP işaretli konjugat uzun süre bağlı kalamaz. Nötralizasyonda %50 ya da daha fazla renklenmenin azalması ile sonuçlar kontrol kuyucukları ile karşılaştırılır. Reaktifler Tanımlama,kullanım için hazırlama ve saklama koşulları -Tüm test reaktifleri orjinal ambalajında, 2-8 C de saklanırsa son kullanma tarihine kadar bozulmaz. Reaktifleri dondurmayınız. - Tüm reaktifler kullanımdan yaklaşık 30 dakika önce oda sıcaklığına (18-30 C) getirilmiş olmalı ve kullanımdan hemen sonra buzdolabına (2-8 C) kaldırılmalıdır. - Reaktifleri orjinal şişelerinde kapalı olarak saklayın. - Fiziksel görünüşünde tahribata uğramış kit rekatifleri kararsızlık ya da bozulmalara neden olabilir. Herbir paket 20 test için gerekli reaktifleri içerir: 1 şişe 1 ml Kontrol Solusyonu (NP40 inaktive edilmiş örnek, koruyucu olarak 0, 0.05% Proclin, stabilizör olarak bovine casein ve proteaz inhibitor olarak bovine aprotinin içeren phosphate buffer). 2. 1 şişe 1 ml Nötralizasyon Solusyonu (NP40 inaktive edilmiş örnek, koruyucu olarak 0, 0.05% Proclin, stabilizör olarak bovine casein ve proteaz inhibitor olarak bovine aprotinin içeren insan anti-hiv antikorları). Aşağıdaki kompenentler INNOTEST HIV Antigen mab kit ile sağlanmaktadır. 1. Pozitif kontrol: Pozitif kontrolü matriks ile seyreltin. 120 μl Pozitif kontrol hazırlayın. 2. Seyreltilmiş konjugat 1: Konjugat 1 den Konjugat Diluent 1 ile 20x seyreltin. 20 test için seyreltilmiş Konjugat 1 den 1.5 ml hazırlayın. NOT: Seyreltilmiş Konjugat 1, nötralizasyon prosedüründe, INNOTEST HIV Antijen mab test prosedüründeki Konjugat Çalışma Solusyonu 1 den farklı olarak kullanılır. Kit içeriğinde bulunmayan gerekli materyaller Nötralizasyon testi INNOTEST HIV Antijen mab kit, 96T (Ref. 80563) ve 480T (Ref. 80564) ile kombinasyonlu olarak kullanılır. Güvenlik ve Çevre Koşulları Lütfen Material Safety Data Sheet (MSDS) ve potansiyel tehlikeli komponentler içeren işaretli ürün bilgilerini inceleyiniz.. En son güncellenen MSDS versiyonu www.fujirebio- europe.com web sitesinde yer almaktadır Tehlike ifadeleri H317 H319 Uyarı: 5-chloro-2-methyl-4-isothiazolin-3-one ve 2-methyl-2H- isothiazol-3-one karışımı içerir: KONTROL SOLN, NEUTR SOLN H319 H317 P280 P305+P351+P338 P363 P333+P313 P337+P313 P302+P352 Alerjik cilt reaksiyonuna sebep olabilir. Ciddi göz tahrişine sebep olur. Önlem ifadeleri P280 Koruyucu eldiven / koruyucu giysi / göz koruyucu / yüz koruyucusu kullanın. P302+P352 CİLTTE: Sabun ve bol su ile yıkayın. P305+P351+P338 GÖZLERDE: Birkaç dakika boyunca suyla dikkatlice durulayın. Varsa ve mümkünse kontak lensleri çıkarın. Durulamaya devam edin. P333+P313 Ciltte tahriş veya kızarıklık olursa: Tıbbı tavsiye / bakım alın. P337+P313 Göz tahrişi devam ederse: Tıbbı tavsiye / bakım alın. P363 Tekrar kullanmadan önce kirlenmiş olan giysileri yıkayın.
80565 INNOTEST HIV Antigen mab Neutralization Reagents / 28698 v0 / KEY-CODE: FRI10285 p 4 - İnsan anti-hiv antikorları içeren nötralizasyon solusyonu, HbsAg ve HCV için negatif bulunmuştur. - Hiçbir test metodu kan ürünlerinin enfeksiyon ajanlarını geçirmeyeceğine dair garanti vermemektedir. Tüm biyolojik materyallerinin potansiyel enfeksiyon ajanı olduğu göz önüne alınarak kullanılmalıdır. Sadece yeterince tecrübesi olan personel bu testi çalışmalıdır. Tüm biyolojik materyaller güvenlik koşullarına uygun olarak atılmalıdır. 121 C de 15 dakika otklavlanmalıdır. Tek kullanımlık materyaller yakılmalıdır. Sodyum hipokloritli miks likit atıkların son konsantrasyonu ± 1% sodyum hipoklorit olmalıdır. Atmadan önce bir gece bekletiniz. ÖNLEM: asit içeren likitlere sodium hipoklorit eklemeden önce nötralize ediniz. - Tehlikeli ya da enfeksiyonlu ajanlar ile çalışılırken koruyucu giysiler; eldiven ve koruyucu gözlük kullanılması gereklidir. - Atıklar hastanelerin atılım talimatlarına göre yok edilmelidir. Kamusal ve çevresel düzenlemelere uyulmalıdır. Örnekler - INNOTEST HIV Antijen mab ile tekrar testi ile reaktif bulunan örnekler (serum, plazma ya da hücre kültür supernatant). - Isı ile inaktive olmuş örnekleri kullanmayın. - Örnekler mikrobiyal kontaminasyonlu olmamalıdır. - Test yapılmadan önce örneklerin çözülmemiş kısımları santrfüj ile ortadan kaldırılmalıdır. - Devamlı dondurup çözdürülmüş, lipemik ve hemolizli örnekler hatalı sonuçlara neden olabilir. - Hücre kültür medyumu, hücrelerin ve debrilerin uzaklaştırılması için önce santrifüj edilmelidir. Test için supernatant kullanılır ve kontrol olarak bir HIV-nagatif hücre kültür süpernatantı kullanılmalıdır. - Örnekleri 2-8 C de saklayınız. 1 haftadan uzun süre saklamak için -20 C de alikuatlayarak saklayınız. - Saklamadan önce, serum ya da plazmadan santrifüjle kan pıhtısı ve kan hücreleri ayrılmış olmalıdır. Test Prosedürü Tüm test materyallerinin kullanmadan önce oda sıcaklığına (15-30 C) getirilmiş olduğundan emin olunuz. 1. Her bir örnek için mikrotiter pleytte 2 kuyucuk ayırın. Bu kuyucuklar; kontrol kuyucuğu A ve nötralizasyon kuyucuğu B olarak adlandırılır. Ayrıca, Nötralizasyon ve Kontrol Solüsyonlarının aktivitelerini teyit etmek için Pozitif kontrolü de bir örnek gibi uygulayın. 2. 1 kuyucuk Pozitif Kontrol, 1 kuyucuk Negatif Kontrol için ayırın (INNOTEST HIV Antijen mab testi ile sağlanan). 3. Her bir kontrol kuyucuğu A ya 50 μl Kontrol Solüsyonu ekleyin. 4. Her bir Nötralizasyon kuyucuğu B ye 50 μl Nötralizasyon Solüsyonu ekleyin. 5. Negatif ve Pozitif kontrol için ayrılan kuyucuklara 50 μl NP40 solüsyonu ekleyin (INNOTEST HIV Antijen mab testi ile sağlanan). 6. Her bir kuyucuğa 50 μl seyreltilmiş Konjugat 1 ekleyin. NOT: Seyreltilmiş Konjugat 1, nötralizasyon prosedüründe, INNOTEST HIV Antijen mab test prosedüründeki Konjugat Çalışma Solusyonu 1 den farklı olarak kullanılır. 7. Uygun olan Kontrol kuyucuğu A ve Nötralizasyon kuyucuğu B ye herbir örnekten 100 μl ekleyin. Add 100 μl of Positive and Negative Control in their respective wells. Kuyucuklardaki miksi pipetleme ile 5 kez ya da plate shaker kullanarak 1000 rpm de 1 dakika karıştırın. 8. Stripleri yapışkan kaplayıcı ile kapatın. 37 C de 60 dakika inkübe edin. 9. INNOTEST HIV Antijen mab test prosedürünün 3-7 arası adımlarını uygulayarak takip edin. 10. Solusyonların absorbanslarını 450 nmde mikroplate okuyucu da okutunuz. Dual dalga boyu analizini uygulamayın (450-690 ya da 620 nm). Sonuçlar Kısaltmalar N = Negatif Kontrol absorbansı P = Pozitif Kontrol absorbansı A = Kontrol kuyucuğu A absorbansı B = Nötralizasyon kuyucuğu B absorbansı BP = Nötralize olmuş Pozitif Kontrol absorbansı AP = Kuyucuk A2daki Pozitif Kontrol absorbansı Results Validasyon - N < 0.150, P > 0.800 ve BP. 0.5 x AP is e test ça lışmas ıgeçerlidir - Eğer kontrol kuyucuğu A absorbansı, mikroplate reader limitinden yüksek ise, örnek dilusyondan sonra HIV negatif insan serumu ile tekrar test edilmelidir.
80565 INNOTEST HIV Antigen mab Neutralization Reagents / 28698 v0 / KEY-CODE: FRI10285 p 5 Sonuçların yorumlanması Cut-off değeri N + 0.050 hesaplayın. % azalma = (A - B) x 100 A Eğer kontrol kuyucuğu A cut-off değerinden yüksek absorbansa sahip ise ve kontrol kuyucuğu ile karşılaştırıldığında nötralizasyon kuyucuğunda %50 ya da daha fazla renk azalması var ise örnek, HIV p24 antijenleri için pozitif olarak teyit edilebilir. A N + 0.050 and B 0.5 x A NOT: - Negatif kontrolün 450 nm de beklenen absorbans değeri 0.065 ± 0.010, sonuçlarda beklenen cut-off değeri: 0.115 ± 0.010. - Pozitif kontrolün 450 nm de beklenen absorbans değeri 1.200 ± 0.400. - Nötralize Pozitif kontrolün 450 nm de beklenen absorbans değeri 0.124 ± 0.016, yaklaşık %90 azalmaya uyan. - Nötralize örnekler HIV antijen pozitif olarak göz ününe alınmalıdır. - Negatif örnekler HIV enfenksiyonları ile enfenksiyona maruz kalınmayacağına dair kanıt olarak kullanılamaz. Sınırlamalar - Lütfen INNOTEST HIV Antijen mab testi sınırlamalarını dikkatlice okuyun. - Testte optimal performası sağlayabilmek için protokole bazı sınırlamalar getirilmiştir. - Devamlı dondurup çözdürülmüş, lipemik ve hemolizli örnekler hatalı sonuçlara neden olabilir. Test performansı Duyarlılık 22 HIV antikoru için pozitif INNOTEST HIV Antijen mab ile reaktif bulunan örnek yanında toplamda 95 viral kültür supernatantı test edilmiştir. Nötralizasyon sonrası, bir örnek hariç renklenmede %50 azalma gözlenmiştir. Nötralize olmayan örnek, alternatif ticari HIV antijen testlerinde negatiftir. İki BBI HIV Antijen Miks Titre paneli (PRA201 ve PRA202) INNOTEST HIV Antijen mab Neutralization Reagents ile test edilmiştir. Tüm pozitif örnekler %50 renk azalması göstermiştir. Özgünlük Sağlıklı kan donörleri Sağlıklı kan donörlerinde toplamda 197 serum test edilmiştir ve kontrol ve nötralizasyon kuyucuklarında aynı sonuçlar elde edilmiştir. Potansiyel çapraz-kontaminasyon ve yanlış-pozitif örnekler INNOTEST HIV Antigen mab testi ile pozitif sonuç veren 6 potansiyel çapraz kontaminasyon örneği için, nötralizasyondan sonra renklenmede %50 azalma görülür. HIV enfeksiyonuna dair kanıt olmayan 14 örnek ve INNOTEST HIV Antigen mab ile pozitif bulunan sağlıklı kan donörlerinden 4 örnek test edilmiştir. Bu örneklerin hiçbiri %50 den daha fazla nötralize olmamıştır ve bu testing yanlış pozitif olduğunu gösterir. Kesinlik % nötralizasyonun çalışma-içi değişkenliği bir çalışmada 14 replikatta 3 pozitif örnek (yüksek, orta, düşük) test edilerek belirlenmiştir. %VK 0.3-3.7% arasında değişkenlik gösterir. % nötralizasyonun çalışmalar-arası değişkenliği 6 farklı günde 5 pozitif örnek ve pozitif kontrol test edilerek belirlenmiştir. %VK 0.3-3.9% arasında değişir. % nötralizasyonun lotlar-arası değişkenliği 3 farklı lotta 14 pozitif ve 1 negatif örnek test edilerek belirlenmiştir. %VK 0.1-3.2% arasında değişir. Markalar INNOTEST dünya çapında tescilli bir markadır Avrupa, ABD, Japonya, Çin gibi.