RIDA QUICK Rotavirus Makale no: N 0902 R-Biopharm AG, Landwehrstr. 54, D-64293 Darmstadt, Germany Tel: +49 (0) 61 51 81 02-0 / Fax: +49 (0) 61 51 81 02-20 Χ
1. Kullanım Amacı In vitro diyagnostik kullanım içindir. RIDA QUICK Rotavirus Testi hızlı immunokromotgrafik test olup, gaitada rotavirüslerin kalitatif testpiti için kullanılır. 2. Özet ve testin açıklaması Rotavirüsler 6 aylık ile 3 yaş arası çocuklarda gastroentretitde bakteriel olmayan en önemli patojendir.daha büyük çocuklarda yetişkinlerde hastalığa sebep olduğu görüldü.yüksek risk gruplarında, örneğin çocuklarda, yaşlılarda ya da immunosupres hastalarda ölüme neden olabilir. Rotavirus enfeksiyonları sıklıkla kış aylarında görülür. Endemik ve epidemik hastalarda binlerce hastaya etki ettiği tanımlandı.akut enteretit ile hastanede yatan çocukların numuneleri test edildi, % 50 den fazlası rota virüs pozitif bulundu. Rotavirüsler, fekal oral yol ile bağırsaklarda büyük oranda elimine edilir, rotovirüsten kaynaklanan hastane kaynaklı virüsler ciddi olarak dikkate alınır, özellikle bebek istasyonlarını, pediatrik klinikleri kontrol etmek zordur. Erken ve güvenilir tespit, rota virüslerin ileri enfeksiyonları önlemede çok önem taşır. 3. Test prensibi Bu hızlı test, tek basamaklı, immunokromotgrafik yan - akış testidir. Rota virüse karşı yöneltilmiş monoklonal antikorlar kendi kendilerine kırmızı (rota virüse özel) lateks partiküllere karşı bağlanır. Patojene karşı diğer özel antikorlar sıkıca mebrana bağlanır. Gaita numunesi önce ekstraksiyon bufer ile askıya alınıp sonra çöktürülür. Üste kalan temiz sıvı süpernatant test stripi üzerine alınır. Numune, antijen bağlı lateks partikülle stripi geçer. Eğer test pozitif ise özel yakalama bantına bağlanır. RIDA QUICK Rotavirus 07-03-30 2
4. Sağlanan Reaktifler Her pakette 25 teste yetecek kadar reaktif vardır. Strip 25 det. 25 farklı numune için test tüpleri Diluent 30 ml Extraksiyon bufer, kulanıma hazır; % 0.1 sodyum azid Pipet 25 pieces Paketin içinde 25 tek kullanımlık pipet 5. Saklama koşulları Paket 2 30 C de saklanabilir paketin üzerinde yazan tarihe kadar kullanılabilir. Miadı geçenler için, kalite garantisi yoktur.buna benzer olarak, zarar görmüş paketteki striplerin kalite garantisi yoktur. 6. Gerekli materyaller ama sağlanmayanlar - Gaita süspansiyonu için test tüpleri -Tüpler (Opsiyonel: kaplanmamış kuyucuklar) - Vorteks mikser (opsiyonel) - Mikropipet (200 μl - 1000 μl) - % 0.5 sodyum hipoklorit solüsyonu içeren atık kabı - Test tubes for stool suspension 7. Kullanıcılar için önlemler Sadece in vitro diyagnostik kullanım içindir.mutlaka eğitimli bir personel tarafından kullanılmalıdır.medikal laboratuvar çalışanları için olan rehber takip edilmeli ve oradaki direktiflere tamamen uyulmalıdır.numune dilüsyonu için olan bufer, koruyucu olarak sodyum azid içerir.bu madde deriye ya da mukoz membrana temasından sakınılmalıdır. Numuneler ya da reaktifler ağız ile pipetlenmemeli ve yaralı deriyle, mukoz membran ile teması önlemelidir. Numuneler, eldiven giyilerek çalışılmalı ve test bittiği zaman eller yıkanmalıdır. Numuneler veya reaktifler ile çalışırken sigara içmeyiniz, yemek yiyip içmeyiniz. Tüm reaktifler ve metaryaller enfekte bir malzemeye dönüşür. Aynı numuneler davranıldığı gibi uygun bir dezenfektan ile dezenfekte edilmelidir.(örn: Sodyum hipoklorit) ya da 121 C de en az bir saat otoklavda bekletiniz. RIDA QUICK Rotavirus 07-03-30 3
8. Numune toplama ve saklama Gaita numuneleri hiçbir katkı maddesi olmayan temiz bir kaba konmalıdır ve test başlamadan önce 2 8 C de bekletilmelidir.eğer 3 günden fazla saklamak gerekiyorsa, numuneler 20 C de saklanmalıdır. Bu durumda da numuneler test edilmeden önce oda ısısında tamamen çözülmelidir. Tekrar tekrar çözüp dondurmaktan kaçınılmalıdır. Eğer rektal swap kullanıldıysa, test için, yeteri kadar gaita (yaklaşık 50 mg) alındığından emin olunuz. 9. Test prosedürü Genel bilgi Numuneler çalışılmadan önce ekstraksiyon bufer ve test stripleri (20 25 C) oda sıcaklığına getirilmelidir.striplerin kutusu oda sıcaklığına gelmeden önce açılıp strip dışarıda bırakılmamalıdır.gerekli olan strip alındıktan sonra kutunun kapağı hemen kapatılmalıdır. Bir kere kullanılan strip tekrar kullanılmamalıdır. Test direk gün ışığı almamalıdır. Kalan reaktifleri tekrar geri kaplarına dökmeyiniz kontaminasyona sebep olabilir. 9.2. Numuneleri Hazırlama 1 ml Extraksiyon bufer Diluent belirtilen test tüpüne konur. Sıvı gaita numunesinden 100 μl tek kullanımlık Pipet ile alınır.ve daha önce hazırlanan buferlı tüpün içine konur. Katı numunelerden, 50 mg alınıp buferın içine konur.numune iyice homojen hale getirilmelidir. Vortekslenerek ya da pipetle çekip bırakılarak bu sağlanır. Homojen hale gelen numune çökmesi temiz bir süpernatant oluşana kadar 3 dakika beklenir. Üzerinde ki süpernatantdan en az 200 µl en çok 500 µl temiz tüpe transfer edilir.(ya da kaplanmamış bir kuyucuğa) 9.3.Numuneyi Test Etme Test stripini Strip tüpünden çıkarın. Hazırlanan numunenin içine daldırın. Okla işaretli yerden daha ileri daldırılmamalıdır. Test sonucu 5 dakika sonra okunabilir. RIDA QUICK Rotavirus 07-03-30 4
10. Kalite kontrol reaktifin miadı Eğer test stripi sağlam ise, hazırlanan numunenin içine daldırmadan önce renk değişimi yok ya da bandlar üzerinde görülebiliyorsa, test değerlendirilmeli. Buna ilave olarak, test inkübasyonundan sonra,en az yeşil kontrol bandı görülebilir olmalıdır.eğer belirmezse, testi tekrarlamadan önce aşağıdakiler kontrol edilmelidir. Test striplerinin ve kullanılan ekstraksiyon buferın miadı kontrol edilmelidir. Test prosedürünü kontrol edin Ekstraksiyon buferın kontamine olup olmadığı Bunlardan emin olduktan sonra, yeni kaset ile testi tekrar ettiğinizde, eğer kontrol bandı görünür değilse, lütfen üretici ya da R-Biopharm distirübütör ile kontak kurunuz. 11. Değerlendirme ve yorumlama Maksimum sırasıyla aşağıdaki 2 band görülür: bir kırmızı ve bir mavi kontrol bandı. Eğer mavi band yoksa test geçersizdir, değerlendirilemez! Aşağıdaki olası yorumlar mümkündür: - Rotavirüs pozitif : kırmızı ve mavi band görülür. - Rotavirüs negatif: yalnızca mavi band görülür. - Geçersiz:Hiçbir band görülmez ya da yukarıda tariflenen kombinasyondan farklı olursa. Banttaki renk değişimi 10 dakika ya da daha sonra olursa bir anlam ifade etmez ve değerlendirilmez. 12. Metod Limitleri RIDA QUICK Rotavirus testi gaitadaki rota virüsleri tespit eder.test spesifik görünür bantların şiddeti ile klinik semptomların şiddetini ortaya çıkarmak için kullanılamaz. Sonuçlar klinik tablo ile birlikte yorumlanmalıdır. Pozitif sonuçlar, diğer bulaşıcı patojenlerin olmadığı anlamına gelmez. Negatif sonuçlar rotavirüs enfeksiyonu olduğunu yok saymaz. Bu enfeksiyon aralıklı olarak salgılanan patojenler ya da numune olan çok küçük miktardaki patojenler tarafından olabilir.eğer hasta anemik ya da aran patojen tarafından enfekte olduğu şüphesi varsa 4 hafta RIDA QUICK Rotavirus 07-03-30 5
sonra bir gaita numunesi alınarak test tekrar edilmelidir. Fazla gaita numunesi, spesifik band renklerinin oluşacağına kahve rengi rengin oluşmasına sebep olur. Bu kahve rengi bantların bir anlamı yoktur. Bu gibi durumlarda, daha az miktarda gaita ile testi tekrar etmek gerekli olacaktır. Ya da daha önce hazırlanan süspansiyon dilüe edilir (temiz süpernatant oluştuktan sonra) çok fazla gaita tarafından sonucun maskelenmesi önlenip patojen bakterinin varlığı aranır. 13. Performans karakteristiği Testin hassasiyet ve özgüllük çalışması pazardaki başka bir ELISA kiti ile yapıldı.sonuçlar aşağıdaki tablodadır: Rotavirüs RIDA QUICK + - ELISA + 105 0-1 95 Hassasiyet: 100,0 % Özgüllük: 99,0 % Pos. prognoz değeri : 99.1 % Neg. prognoz değeri : 100,0 % RIDA QUICK Rotavirus hızlı testi aynı zamanda piyasadaki diğer bir PCR metot ile karşılıklı çalışıldı. Numuneler 4 yaşın altında olan hastanede gastroenterit semptomlarından dolayı yatan ya da polikliniğe gelmiş hastalarıdan alınarak çalışma yapıldı. Tablo 2 deki sonuçlar aşağıdadır. RIDA QUICK Rotavirüs Coris Bioconcept Rota-Stick + - + - PCR + - 46 0 3 51 45 1 1 53 Hassasiyet 100.0 % 97.8 % Özgüllük 94.4 % 98.1 % PPV NPV Kesinlik 93.9 % 100.0 % 97.0 % 97.8 % 98.1 % 98.0 % RIDA QUICK Rotavirus 07-03-30 6
Referanslar 1. Francki, R. I. B., Fauquet, C. M., Knudson, D. L., and Brown, F.: Classification and Nomenclature of Viruses. Fifth Report of the International Commitee on Taxonomy of Viruses. Archives of Virology Supplement 2. Springer Verlag, New York, pp 140-144 (1992) 2. Estes, M.K. and Cohen, J.: Rotavirus Gene Structure and Function. Microbiological Reviews 53: 410-419 (1989) 3. Bishop, R. F., Davidson, G. P., Holmes, I. H. and Ruck, B. J.: Detection of a new virus by electron microscopy of faecal extracts from children with acute gastroenteritis. Lancet 1, 149-151 (1974) 4. Kapikian, A. Z., Yolken, R. H., Greenberg, H. B., Wyatt, R. G., Kalica, A. R., Chanock, R. M. and Kim, H. W.: Gastroenteritis viruses. Diagnostic Procedures for Viral, Rickettsial and Chlamydial Infections, 5th Ed., (1980) Lennette, E. H., Schmidtt, N. J., Eds. Amer. Pub. Health Assoc., Washington, D.C., 927-996 5. Flewett, T. H. and Woode, G. N.: The Rotavirus. Arch. Virology 57, 1-23 (1978) 6. Steinhoff, M. C: Rotavirus: The first five years. J. Ped. 96, 611-622 (1980) 7. Blacklow, N. R. and Cukor, G.: Viral Gastroenteritis. New England Journal of Medicine 304, 397-406 (1981) 8. Wenman, W. M., Hinde, D., Feltham, S. and Gurwith, M.: Rotavirus Infection in Adults. Results of a Prospective Study. New England Journal of Medicine 301, 303-306 (1979) 9. Cubitt, W. D.: Rotavirus Infection: An Unexpected Hazard in Units Caring for the Elderly. Geriatric Medicine Today 1, 33-38 (1982) 10. Marrie, T. J., Spencer, H. S., Faulkner, R. S., Ethier, J. and Young, C. H.: Rotavirus Infection in a Geriatric Population. Arch. Intern. Med. 142, 313-316 (1982) 11. Coulson, B. S. and Holmes, I. H.: An Improved Enzyme-Linked Immunosorbent Assay for the Detection of Rotavirus in Faeces of Neonates. J. Virol. Methods 8, 165-179 (1984) 12. Hung, T., Wang, Ch., Fang, Z., Chou, Z., Chang, X., Liong, X., Chen, G., Yao, H., Chao, T., Ye, W., Den, S. and Chang, W.: Waterborne outbreak of Rotavirus Diarrhoea in Adults in China caused by a Novel Rotavirus. Lancet, 1139-1142 (1984) 13. Cukor, G., Perron, D. M., Hudson, R. and Blacklow, N. R.: Detection of Rotavirus in Human Stools by Using Monoclonal Antibody. J. Clin. Microl. 19, 888-892 (1984) RIDA QUICK Rotavirus 07-03-30 7