helena www.helena-biosciences.com BioSciences Europe Kullanım Talimatları SAS-MX İDRAR PROTEİN Katalog No: 100500
KULLANIM AMACI SAS-MX İdrar Protein Kiti agaroz jel elektroforez ile konsantre edilmemiş idrar numunelerinin taraması için tasarlanmıştır. Üriner proteinler filtre yoluyla böbrekte bulunan plazma proteinlerinden öncelikli olarak türetilmiştir. İdrarda anormal plazma proteinlerinin görünen büyük değeri renal fonksiyon değerlendirmesinde bulunur. Proteinüri uygun eğitimi türün ve ektrasyon 1-4 edilen proteinlerin miktarının kantitatif ve kalitatif değerlendirmesini içermelidir. Elektroforez, Dysglobulinaemias 1-5 ile ilgili proteinüri-fizyolojik, Glomerüler (seçici ve seçici olmayan), Tubuler ve proteinürinin çeşitli türlerinin ayrımını sağlayan bir tekniktir. SAS MX İdrar Protein kiti bir agaroz jelde değişikliğine göre idrarda proteinleri ayırır. Proteinler daha sonra kantitatif veya kalitatif yorum ve görüntüleme için boyanır. Kitte kullanılan yüksek duyarlılık boyanması konsantrasyon olmadan test edilecek olan çoğu idrar numunelerine olanak sağlar ve İdrar Protein İç Standart ın kullanımı densitometrisi tarafından belirlenecek olan tek tek bant protein konsantrasyonuna yada idrar total protein yaklaşımına olanak sağlar. UYARILAR VE ÖNLEMLER Tüm kitler yalnızca in-vitro diyagnostikte kullanım içindir. Herhangi bir kit bileşenini ağzınızla pipetlemeyin, ağzınıza sürmeyin. Tüm kit bileşenlerinin işlemi sırasında eldiven giyin. Risk, güvenlik koşulları ve atım bilgisi için ürün güvenlik kağıdına başvurun. BİLEŞENLER 1. SAS-1 İdrar Protein Jel Koruyucu olarak sodyum azid ve tiyomersal ile bir Tris/Barbital buffer içeren agaroz. Paket içindeki jel kullanım için hazırdır. 2. Konsantre Tris / Barbital Buffer Koruyucu olarak sodyum azid ile konsantre Tris/barbital buffer içerir. Şişe içeriğini 1 litre saf su ile dilüe edin ve iyice karıştırın. Buffer tuzları biraz crystalize olabilir. Tamamlanan çözünmeden emin olmak için dilüe edilmiş bufferlı şişesinden alınan kristalleri yıkayın. 3.İdrar Protein Boyama Coomassie Mavi toz boya içerir. Toz boya paket üzerinde belirtilen son kullanma tarihine kadar stabildir. Suda 50% metanoldan 1 litresini şişe içeriğinde çözün. 20 ml glasial asetik asit ekleyerek asidik yapın. İyice karıştırın ve kullanım öncesi filtre edin. 4. Diğer Kit Bileşenleri Her kit kullanım talimatları ve 10 jeli tamamlamak için yeterli miktarda Numune Aplikasyon Tablası ve kurutma kağıdı A ve C içerir. SAKLAMA VE RAF ÖMRÜ 1. SAS-MX İdrar Protein Jel Jeller 15-30 derecede saklanmalıdır ve paket üzerinde belirtilen son kullanma tarihine kadar stabildir. DOLABA KOYMAYIN VEYA DONDURMAYIN. Jelin
bozulması :,1) jelin dondurulması kristal görünümü belirtir, 2) jelin kuruması, çatlama ve kuruluğu veya 3) bakteriyal ya da fungal kaynaklı agarozun kontaminasyonunu belirtir. 2 - Tris / Barbital Buffer Konsantre buffer 15-30 derecede saklanmalıdır ve etiket üzerinde belirtilen son kullanma tarihine kadar stabildir. Dilüe boya solüsyonu 15-30 derecede 2 ay stabildir. Bufferın bulanık ve zayıf performansı bozulduğunu belirtebilir. 3- İdrar Protein Boyama Konsantre boya 15-30 derecede saklanmalıdır ve etiket üzerinde belirtilen son kullanma tarihine kadar stabildir. Dilüe boya solüsyonu 15-30 derecede 6 ay stabildir. Zayıf boyama performansı bozulduğunu belirtebilir. SAĞLANMAYAN FAKAT GEREKSİNİLEN ÖĞELER Katalog No.4063 SAS-MX odası Katalog No.1525 EPS600 Güç kaynağı Katalog No.3032 İdrar Protein İç Standart 50-60 derece hava üfleme kapasiteli kurutma fırını Sabitleme Solüsyonu: 500ml saf su ile 500ml metanol karıştırın. 100 ml glasial asetik ekleyin. İyi kapatılmış bir şişede saklanır. Boya arındırıcı solüsyon: 950 ml saf su ve 50 ml glasial asetik asit karıştırın. İyi kapatılmış bir şişede saklanır. Saf su NUMUNE TOPLANMASI VE HAZIRLANMASI Tercih edilen numune taze toplanan idrardır. Numuneler 2...6 C de 72 saate kadar yada -20 C de 2 haftaya kadar buzdolabında saklanmalıdır. Total protein 1000mg/L ın üstünde olmazsa numuneler konsantrasyon veya dilüsyon olmadan başlangıçta kullanılmamalıdır. Eğer tamamlanmış jel densitometre ile taranırsa, İdrar Toplam Proteinin göstergesi ya da tek tek protein bölgesinin konsantrasyonu numune hazırlama prosedürü içinde İdrar Protein İç Standart ın (Kat. No. 3032) birleşmesi ile yapılabilir. Kullanım talimatları her İdrar Protein İç Standart ile sağlanır. ADIM-ADIM PROSEDÜR 1.Jeli paketinden çıkarın ve kağıt havlu üstüne koyun. Ambalajını çıkarın ve kurutucu C ile jel yüzeyini kurutun ve kurutucuyu atın. 2.Jel köşesindeki oklarla numune aplikasyon kalıbını hizalayın ve kalıbın başına kurutucu A yı koyun ve iyi temas sağlaması için yarığın içine parmağınızı sürtün. Kurutucuları alın ve adım 5'te kullanmak için saklayın. 3.Her yarığa 5μl numune uygulayın ve 20 dakika absorb olması için bırakın. 4. Numune emiliyorken, SAS-MX odasının her iç bölümüne 25ml buffer dökün. 5.Numune emilimi ardından, adım 2 den kalan kurutucu A ile kalıbı kurutun ve hem kurutucuyu hem de kalıbı alın. 6. Jeli oda içine agoraz tarafı aşağı olacak şekilde yerleştirin. Odanın başına karşılık gelen pozisyonlar ile pozitif (+) ve negatif (-) tarafları hizalayın.
7.Elektroforez jel: 80 volt, 25 dakika 8.Elektroforezin ardından, fiksatif solüsyonunda 5 dakika boyunca jeli sabitleyin. 9. 60...70 C de jeli kurutun. Not: Eğer jel 60 C den yukarıda kurursa, jelin bulanıklaşması gibi bazı problemlere neden olabilir. 10. Kuru jeli boya solüsyonu içine 10 dakika daldırın. 11. Arka plan temizlenene ya da boya arındırıcı solüsyon 2 x 1 dakika yıkanana kadar jeli boyadan arındırın. 12.Saf suda kısa süre jeli yıkayın ve kurutun. KALİTE KONTROL Normal bir serum numunesi (saf suda 1:100 oranında dilüe edilmiş) her bandın konumunu belirlemek için kullanılabilir. SONUÇLARIN YORUMLANMASI 1.Kalitatif Değerlendirme: Jelde mevcut bantların görünür yorumu: Proteinuria nın tipi Jelde görülen bantlar Mevcut proteinler Normal ürin küçük albümin bant albümin Glomerular albümin, alfa-1, beta, albümin, alfa-1, antitripsin, gama transferrin, gama globulinler Tubüler alfa-1, alfa-2, beta Retinol bağlayıcı Protein, beta2-mikroglobulin, alfa-2 mikroglobulin Taşan gama veya çeşitli immunoglobulins,serbest ışık zincirleri 2.Kantitatif Değerlendirme: 595nm de, oturtulan jeller taranır. Diğer bir durumda, genel olmayan idrar bileşenlerinin tespiti ileri araştırmaları gerektirir. Tamamlanan SAS-MX idrar Protein jeli süresiz bir zaman için stabildir. İdrarda protein tanımlanması immunofixation tarafından Helena Biyoteknoloji SAS- MX İdrar IFE kiti kullanılarak elde edilebilir (Kat.no.100600) SINIRLAMALAR Bariz kristal çökeltisi bulunan numuneler kullanmadan önce santrifüj edilmelidir. PERFORMANS ÖZELLİKLERİ a) Tekrarlanabilirlik 400mg/L ve 20mg/L içeren protein numunesi dansitometre ile düşük protein konsantrasyonu ve jel içi ve jel arası tekrarlanabilirliği belirlemek için üç jel üzerinde 5 kez test edilmelidir.
Jel İçi Jel Arası Ortalama (%) CV(%) Ortalama (%) CV(%) 400mg/L 62.8 1.3 62.4 1.6 20mg/L 10.8 7.0 11.9 12.1 b) Hassasiyet Tamamlanan jelde bir ayrık bant gibi görünen proteinin en düşük konsantrasyonu olarak band başına 25ng (numunede 5mg/L ye eştir) belirlenmiştir. c)doğrusallık Metodun doğrusallığı, jel performansı gibi densitometre özelliğinin bir fonksiyonudur. Laboratuarda kullanılan densitometreye dayalı metodun doğrusallığının belirlenmesi her müşteriye tavsiye edilir. d) Total Proteinin kantifikasyon korelasyonu İdrar numunelerinin değeri densitometre tarafından toplam proteini belirlemek için İdrar Protein İç Standart (Kat. No. 3032) kullanılarak SAS-MX İdrar Protein Jelde test edildi. Elde edilen değerler (mg/l) değerler, Pyrogallol bir kırmızı- molybdate komplekse dayalı piyasada bulunan test sistemi kullanılarak idrar toplam protein için elde edilen değerler ile karşılaştırıldı 6. BİBLİYOGRAFİ 1. Fauchier, P. and Catalan, F. Interpretive Guide to Clinical Electrophoresis Alfred Fournier Institute, Paris, France, 1988. 2. Killingsworth, L.M., Cooney, S.K. and Tyllia, M.M. Finding Clues to Disease in Urine Diagnostic Medicine, 1980 ; May/June : 69-75. 3. Umbreit, A. and Wiedemann, G. Determination of Urinary Protein Fractions. A Comparison With Different Electrophoretic Methods and Quantitatively Determined Protein Concentrations Clin. Chim. Acta., 2000; 297 : 163-172. 4. Wiedemann, G. and Umbreit, A. Determination of Urinary Protein Fractions by Different Electrophoretic Methods, Clin. Lab.; 1999, 45 : 257-262. 5. Wong, W.K., Wieringa, G.E., Stec, Z., Russell, J., Cooke, S., Keevil, B.G. and Lockhart, S. A Comparison of Three Procedures for the Detection of Bence-Jones Proteinuria Ann. Clin. Biochem., 1997, 34 : 371-374. 6. Microprotein-PRTM (Procedure No. 611) Sigma Diagnostics, September 1995.