HbF QUIPlate Kat. No. 9325

Transkript

1 HbF QUIPlate Kat. No. 9325

2 KULLANIM AMACI HbF QUIPlate prosedür radyal immunodiffüzyon (RID) ile hemoglobin F kantitatif tayin edilmesi içindir. Fetal hemoglobin (HbF) gebeliğin onuncu haftasında fetus ta predominant hemoglobin (Hb) olarak oluşur. Doğumda, total hemoglobinin % 60-% 90 ını HbF ve kalanını yetişkin hemoglobin (HbA) oluşmaktadır 1. Normal yetişkin hemoglobin düzeyleri yaklaşık 6 aylıkken oluşur ve yaklaşık % 2 toplam Hb de HbF düzeyi ve HbA major hemoglobin ile elde edilir 1. Bebeklik sonrası, % 2 den daha yüksek olan HbF düzeyi erken yaşta başlayan orak hücre anemisi veya beta talasemia gibi anemi hastalığını göstermektedir 2,3. Yüksek HbF, megaloblastik anemi, aplastik anemi ve yetişkinlerde ortaya çıkan löseminin bazı türleri gibi birçok alakasız hematolojik hastalıklarında da rapor edilmiştir 2-4. Çok hafif HbF yükselmesi maligniteler, thalassemias ve anemilerin bazı türleri neden olacaktır 4. HbF in az miktarı bazen hamile kadın hücrelerinde de görülür 2. Yüksek HbF düzeyleri, HbF sentezi devam eden yetişkinlerde "fetal hemoglobin kalıtsal kalıcılığı" (HPFH) olarak bilinen durumda meydana gelir 1-4. HPFH için kişi heterozigotları, % 15 ile % 30 HbF konsantrasyonuna sahiptir 1. Helena HbF QUIPlates, RID kullanarak HbF düzeylerinin hızlı kantitasyonu için tasarlanmıştır. Doğru şekilde daha yüksek HbF düzeyleri ölçmek için, HPFH deki gibi, numune HbF Diluent ile dilüe edilmeli ve sonra RID ile ölçülmelidir. Elektroforez de Helena Hemoglobinopatiler Prosedürü kullanarak yüksek HbF düzeyleri ölçmek için kullanılabilir. HbF için spesifik antiserum QUIPlate un agaroz jeline dahil edilir. HbF Standartları ve hasta hemoglobin dilüsyonları (antijen) agaroz da kuyulara uygulanır. Antijen, kuyu etrafında opak bir presipite halka üreten HbF antiserum ile numunede HbF le reaksiyona girerek agaroz matriks içinde difüze olmasını sağlar. Her bir standart ve örnek için presipite halka çapı 24 saat inkübasyondan sonra ölçülür. Presipite halka kare çapı, inkübasyon sonunda doğrudan HbF konsantrasyonu ile orantılıdır. Bir referans eğrisi standartlardan hazırlanır ve örneklerde HbF konsantrasyonunu belirlemek için kullanılır. UYARILAR VE ÖNLEMLER Tüm kitler yalnızca in-vitro diyagnostikte kullanım içindir. Herhangi bir kit bileşenini ağzınızla pipetlemeyin, ağzınıza sürmeyin. Tüm kit bileşenlerinin işlemi sırasında eldiven giyin. Risk, güvenlik koşulları ve atım bilgisi için ürün güvenlik kağıdına başvurun. NOT: Standart hazırlamak için kullanılan tam kan Hepatit B Antijen (HBsAg) ve HIV antikor için negatif bulunmuştur; bundan dolayı, standartlar hasta serumda gözlenmiş gibi aynı dikkat ile çalışılmalıdır. BİLEŞENLER 1. HbF QUIPlate Koruyucu olarak eklenen 0.1% sodyum azit ile ve keçi, at veya koyun hazırlanan monospesifik antiinsan HbF antiserum ile 0.1 M Tris buffer da 1.5% agaroz içerir. Ürün paketlenmiş olarak kullanıma hazırıdır. 2. HbF Standartlar HbF Standartları saf hemoglobin A ve F den hazırlanır ve üç konsantrasyon içerir: 0.5%, 5% ve 10% HbF. Ürün paketlenmiş olarak kullanıma hazırıdır. 3. Diğer Kit Bileşenleri Her kitin kullanım talimatlarını içerir. SAKLAMA VE RAF ÖMRÜ 1. HbF QUIPlate Plakalar C de saklanmalıdır ve etiket üzerinde belirtilen son kullanma tarihine kadar stabildir. Dondurmayın. Dondurma agaroz jelde zarara neden olabilir. Her zaman plakayı sıkıca kapalı tutun. Bozulmayı: (1) agaroz un kristal görünümü, (2) agarozun asimetrik 1

3 kuyuları, (3) agarozda kırılma veya yırtılma, (4) agarozun düzensiz boya rengi sahip olması, (5) HbF Standartlar elde edilen lineer bir referans eğrisinin başarısızlığı gösterebilir.bu durumlardan herhangi biri varsa plaka kullanılmamalıdır. 2. HbF Standartlar Standartlar C de saklanmalıdır ve etiket üzerinde belirtilen son kullanma tarihine kadar stabildir. SAĞLANMAYAN FAKAT GEREKSİNİLEN ÖĞELER Kat. No HbF QUIPlate Control Kat. No HbF Diluent Kat. No QUIP Comparator Kat. No Dialamatic Microdispenser Kat. No Dialamatic Tubes Kat. No Humidity Chamber Deiyonize su NUMUNE ALINMASI VE HAZIRLANMASI Örnek: EDTA gibi bir antikoagülanlı yetişkin tam kan tercih edilen örnektir. Tercihen hasta numuneleri alındıktan hemen sonra çalışılmalıdır. Numuneler 5 gün boyunca C de saklanabilir. Hasta örneğinin hazırlanması 1. Standart bie laboratuar yöntemi kullanarak toplam hemoglobin konsantrasyonunu belirleyin. 2. Hasta örnekleri 0.5% ile 10% HbF içerir. a.1 g/dl final hemoglobin konsantrasyon için deiyonize su ile 0.2 ml örneği dilüe edin. Gerekli deiyonize su miktarını belirlemek için aşağıdaki denklemi kullanın: Toplam hacim = (0.2 ml tam kan) x (g/dl Hb) 1 g/dl Hb Deiyonize su hacmi = Toplam hacim 0.2 ml i. En yakın 0.5g/dL toplam Hb konsantrasyonu yuvarlak içine alın. ii. 0.2ml tam kan örneğine eklenecek suyun hacmini hesaplayın. b. Dilüsyon sonrası, testin doğruluğu için hemolizi tamamlamak için örnekleri agitate edin. c. Bu çökelti HbF QUIPlate üzerinde aplikasyon için kullanılacaktır. 3. Hasta örnekleri 10% HbF den daha fazla içerir. a. 1 g/dl final hemoglobin konsantrasyon için deiyonize su ile 0.2 ml örneği dilüe edin. Gerekli su miktarını belirlemek için yukarıda Adım 2.a da sağlanan denklemi kullanın. b. Hem örnek preparatı hem de HbF Dilüenti vorteksleyin. 1g/dL örnek preparatı kullanarak, 1 kısım hasta örneği ve 9 kısım HbF Diluent kullanarak 1:10 oranında dilüe edin. (Önerilen hacim 5μl örnek artı 45μl dilüenttir). c. Plakaya uygulama öncesi dilüsyon kuyularını karıştırın. d. Bu preparat HbF QUIPlate ye uygulama için kullanılacaktır. ADIM-ADIM PROSEDÜR NOT: C ye gelene kadar plakayı bekletin. Plaka, plaka flanşların her birine bir başparmak ve işaret parmağı yerleştirerek ve sonra ayrı bölümlerde çevirerek kolayca açılabilir. 1. Eğer varsa, kuyulardan fazla nemi alın. 2. Plaka üzerinde uygun kuyulara 5μL HbF Standard (0.5%, 5% ve10%) pipetleyin. NOT: Uygulama sırasında kuyuda oluşan hasar asimetrik presipite halkalar ve hatalı sonuçlara neden olacaktır. 2

4 3. Plaka üzerinde uygun kuyulara 5μL dilüe edilmiş hasta örneği ve 5μL HbF Kontrol pipetleyin. NOT: Uygulama öncesi her bir hasta dilüsyonu iyice karıştırıldığından emin olun. 4. Plakayı kapatın ve Nem Çemberi içine koyun. Plaka flanşlarının üstü ve altınının birbiri ile hizalanmadığından emin olun C de en az 24 saat boyunca kapalı plakayı inkübe edin. NOT: Plaka inkübasyon zamanı (24 saat) kısa olmamalıdır. 24 saatten daha az olan inkübasyon hatalı sonuçlara neden olabilir. 6. İnkübsayon sonunda tanktan plakaları alın. 7. Presipite halka ölçümünü aşağıdaki gibi yapın: i. Plakanın kapağını açın ii. QUIP Comparator (ocular) altında bir presipite halkayı inceleyin. iii.doğru, tekrarlanabilir okumaları için oküleri mümkün olduğunca yakın olarak göze tutun. iv. En yakın 0.1 mm halka çapını okuyun ve kaydedin (aşağıdaki Şekil 1 bakın, ölçek mm de). Şekil 1. Halka çapı 0.7 mm olarak ölçülmüştür NOT: Eğer QUIPlate da bazı kuyular kullanmazsa, plaka kapatılarak nemli çember içinde C de saklanabilir. Bu saklama koşulları altında, bir plaka yeni bir referans eğrisi oluşturmadan 28 gün kadar tekrar kullanılabilir. Plaka eğer yeni bir referans eğrisi çizilecekse, 28 gün sonra kullanılabilir. Son Ürünün Kararlılığı: Plakalar son noktada okunmalıdır veya sıkıca kapatılabilir ve aşağıdaki gibi okunmadan önce saklanabilir: 1) İnkübasyon sonrası 14 gün kadar C de saklanır, veya 2) İnkübasyon sonrası 28 gün kadar C de saklanır. KALİTE KONTROL Helena HbF QUIPlate Kontrol prosedürün tüm aşamalarını kontrol etmek için her bir plak için çalışılmalıdır. SONUÇLARIN YORUMLANMASI 1. Sağlanan grafik kağıdı kullanarak referans eğrisi hazırlayın. Aşağıda, Şekil 2'de gösterilen her bir HbF Standard için halka çapı karesine (y-ekseni) karşı bilinen örnek konsantrasyonu (x-ekseni) çizin. Noktalardan geçen en iyi best line çizin. HbF Standartları referans eğri üzerinde doğrusal bir best line vermelidir. Eğer eğri doğrusal değilse, çizmeden önce halka çapı karesinin alındığından emin olun. Eğer eğri hala doğrusal değilse, plakalar end pointe (24 saat inkübe edilmemiş) ulaşmamış olabilir veya bir uygulama hatası yapılmış olabilir. 3

5 Yukarıdaki Şekil 2, Referans Eğrisinin Örneği 2. Yukarıdaki standartlar için gösterilen her bir örnek ve kontrol presipite halkanın çapının karesini alın. Eğer numune çift çalışılırsa, değerlerin ortalamasını alın ve ortalama halka çapının karesini alın. 3. Karesi alınmış çap değeri kullanılarak, referans eğrisinden % HbF okuyun. a. % 0.5 ve % 10 arasındaki HbF değerleri ile numune sonuçları referans eğrisinden doğrudan okunur. b. 10% HbF den daha büyük sonuçlar içeren örnekler için sonular final değerini elde etmek için 10 dilüsyon faktörü ile çarpılmalıdır. SINIRLAMALAR 1. Dilüsyon öncesi numunelerin yeterli vortekslenmesi tekrarlanabilirliği için gereklidir. 2. Helena HbF QUIPlate, % 0.5 den yukarıdaki HbF düzeylerine sahip tam kan örnekleri doğru sonuçlar verir. % 10 dan daha büyük HbF düzeyli örnekler saf HbA Dilüent ile dilüe edilmelidir. 3. Hasta presipite halkalar netlik ve şiddetine göre standart halkalarla karşılaştırılmalıdır. Nadir durumlarda, bir hastada bir kirleticinin göstergesi çok zayıf halka diffuzyonu olabilir. Bu 4

6 en sık 5g/dL hemolizat uygulanması ile gerçekleşir. % 0.5 den daha az ya da hiç bulunmayan HbF li bazı hastalar hiç presipite halka göstermeyebilir. REFERANS DEĞERLERİ Helena HbF QUIPlate yöntemi kullanarak HbF değerleri için referans aralığı 50 yetişkin, 18 veya daha büyük yaşlardan alınan tam kan örnekleri test edilerek oluşturulmuştur. Yetişkin HbF = % Her bir laboratuar kendi hasta populasyonu için normal değer aralıklarını oluşturmalıdır. Bu değerler sadece bir kılavuz olarak düşünülmelidir. PERFORMANS ÖZELLİKLERİ Normal numuneler üzerinde hassas çalışmalar sisteminin performans özelliklerini değerlendirmek için yapılmıştır. BIBLIYOGRAFYA 1. Huisman, T.H.J. and Jonxis, J.H.P., The Hemoglobinopathies Clin and Biochem Anal, 2nd Edition, Marcel Dekker, Inc., Vol. 6:342, Meites, S. ed. Pediatric Clinical Chemistry, Am. Assoc. for Clin. Chem, Washington, DC. Pub. 2nd Ed pg , Lehmann, H. and Huntsman, R.G., Mans Haemoglobins, North Holland Publishing Co., Oxford pg , Wrightstone, R.N. and Huisman, T.H.J., On the Levels of Hemoglobins F and A2 in Sickle-cell Anemia and Some Related Disorders. Am J Clin Pathol 61: , Laboratory Methods for Detecting Hemoglobinopathies Division of Host Factors, Center for Infectious Diseases, Center for Disease Control, Atlanta, GA, p11-18,