RIDA Quick Cryptosporidium Makale No: N 1202 R-Biopharm AG, Landwehrstr. 54, D-64293 Darmstadt, Germany Tel: +49 (0) 61 51 81 02-0 / Fax: +49 (0) 61 51 81 02-20 Χ
1. Kullanım amacı Sadece in vitro diyagnostik kullanım içindir. RIDA Quick Cryptosporidium gaitada Cryptosporidium parvum tespiti için hızlı bir immunokromatografik bir testtir. 2. Testin özeti ve açıklaması Cryptosporidium parvum hayvanlarda çok görülen bir parasit olup özellikle evcil hayvanlarda önemli patojen bir organizmadır ve calve hastalığında görülür. Çoğu ülkelerde, insanlarda enfastasyon gözlemlenir, bu günlerde eskiden olduğundan daha fazladır. Tropik bölgelerde olan gelişmekteki ülkelerde, parasitler sıklıkla endemik ve çocuklar arasında epidemik diareye sebep olur. İmmunokompetent hastalarda, hastalık kendi kendini gösterir, kendiliğinden gastroenterit iyileşmesi gibi. Diare 3-10 gün sürer ve ateş, gastrointestinal semptomlar örn. Kusma ve ağrı gibi,devam eder bu konuda Giardiasise benzerlik gösterir. Semptomlar ve etkiler aslında immunoinkompetent hastalarda daha daha ciddidir ve ısrarla dinmeyen isal görülür. İnfestasyon, hayvanlardan insanlara kontamine olmuş su ile ve insandan insana geçer. Komünal fasilitelerin üyeleri, anaokulu çocukları ve yüksek risk grupları, homoseksüel erkekler, HIV hastaları yüksek risk taşır. Geçmişte, cryptosporidiosis tespiti için kullanılan metot, Oocystin gaitaya ve ince bağırsaktan alınan biyopsiye mikroskobik incelemesiydi ve deneyimli eleman gerektiriyordu. Bu metoda alternatif metot, hızlı immunokromatografik test tanımlandı. Bu test monoklonal antikorlar kullanır, mikroskobik prosedüre eşdeğer hassasiyet ve özgüllüktedir. 3. Test Prensibi Bu hızlı test, tek basamaklı, immunokromotografik yan - akış testidir. Cryptosporidia karşı yöneltilmiş monoklonal antikorlar kendi kendilerine kırmızı lateks partiküllere karşı bağlanır. Patojenlere karşı olan diğer spesifik antikorlar membrana sıkıca bağlanır. Gaita numunesi ekstraksiyon bufer içinde önce asılı kalır sonra çöker. Test stripi hazırlanan numunenin içine daldırılır. Numune renkli partikülerle içeri geçer test pozitif ise membran boyunca özel toplama bandına antijenler bağlanır. RIDA Quick Cryptosporidium 04-11-18 2
4. Sağlanan Reaktifler Pakette 25 teste yetecek kadar reaktif bulunur. Strip 25 test Kutu içinde 25 test stripi Diluent 30 ml Ekstraksiyon bufer, kullanıma hazır. %0.1 sodyum azid içerir. Pipet 25 adet 25 tek kullanımlık pipet 5. Saklama Bilgileri Paket üzerinde yazan tarihi kadar 2 30 C de saklanır. Miadı geçtikten sonra kalite garantisi geçerli değildir. Strip kutusunun içinde, striplerin nem almaması için nem tutucu bulunur, kutunun ağzı açık kalmamalıdır. Stripleri almak için her açıldığında kapağı kapatmak gerekir. 6. Gerekli malzemeler, fakat sağlanmayanlar - Gaita süspansiyonu için test tüpleri - Tüpler (Opsiyonel: kaplanmamış kuyucuklar) - Vorteks mikser (opsiyonel) - Mikropipet (200 μl - 1000 μl) - % 0.5 sodyum hipoklorit solüsyonu içeren atık kabı 7. Kullanıcılar için önlemler Sadece in vitro diyagnostik kullanım içindir.mutlaka eğitimli bir personel tarafından kullanılmalıdır.medikal laboratuvar çalışanları için olan rehber takip edilmeli ve oradaki direktiflere tamamen uyulmalıdır.numune dilüsyonu için olan bufer, koruyucu olarak sodyum azid içerir.bu madde deriye ya da mukoz membrana temasından sakınılmalıdır. Numuneler ya da reaktifler ağız ile pipetlenmemeli ve yaralı deriyle, mukoz membran ile teması önlemelidir. Numuneler, eldiven giyilerek çalışılmalı ve test bittiği zaman eller yıkanmalıdır. Numuneler veya reaktifler ile çalışırken sigara içmeyiniz, yemek yiyip içmeyiniz. Tüm reaktifler ve metaryaller enfekte bir malzemeye dönüşür. Aynı numuneler davranıldığı gibi uygun bir dezenfektan ile dezenfekte edilmelidir.(örn: Sodyum hipoklorit) ya da 121 C de en az bir saat otoklavda bekletiniz. RIDA Quick Cryptosporidium 04-11-18 3
8. Numune toplama ve saklama Gaita numuneleri hiçbir katkı maddesi olmayan temiz bir kaba konmalıdır ve test başlamadan önce 2 8 C de bekletilmelidir.eğer 3 günden fazla saklamak gerekiyorsa, numuneler 20 C de saklanmalıdır. Bu durumda da numuneler test edilmeden önce oda ısısında tamamen çözülmelidir. Tekrar tekrar çözüp dondurmaktan kaçınılmalıdır. Eğer rektal swap kullanıldıysa, test için, yeteri kadar gaita (yaklaşık 50 mg) alındığından emin olunuz. 9. Test Prosedürü 9.1. Genel bilgi Numuneler çalışılmadan önce ekstraksiyon bufer ve test stripleri (20 25 C) oda sıcaklığına getirilmelidir. Striplerin kutusu oda sıcaklığına gelmeden önce açılıp, stripler çıkarılmamalıdır. Bir kere kullanılan stripler tekrar kullanılmamalıdır. Kalan reaktifleri geri kutusuna dökmeyiniz, kontaminasyona sebep olabilir. 9.2. Numune hazırlama Belirlenen test tüplerinde ekstraksiyon buferı 1ml olarak koyun. Sıvı gaita ise tek kullanımlık pipet ile 100 μl tüpün içine bırakınız. Katı ise buferın içine 50 mg bırakınız. Numune iyice homojen hale getirilmelidir. Bu da pipetle çekip bırakılarak ya da alternatif olarak vorteks mikser ile karıştırılarak olur. Bundan sonra, homojen hale gelen numunenin 3 dk kadar çökmesi için bekleyin. Üzerinde kalan temiz süpernatanttan en az 200 µl en çok 500µl temiz bir tüpe transfer edin. (ya da kaplanmamış kuyucuğa) 9.3. Numuneyi çalışma Strip kutusundan stripi çıkarın ve hazırlanan tüpün içine daldırın. Test stripleri işareti geçecek kadar daldırılmamalıdır. Test sonucu 5 dakika sonra okunmalıdır. 7. Kalite kontrol- reaktif miadı Numune süspansiyonuna daldırmadan önce, eğer test stripinin bozulmamış olduğu ve renk değişimine uğramamış olduğu ya da bandların görünebilirliği olmalıdır. Buna ilave olarak test inkübasyonundan sonra en az mavi kontrol bantı görülmelidir. Eğer görülmez ise test tekrar edilmeden önce aşağıdakiler kontrol edilmelidir: - Test striplerinin ve ekstraksiyon buferın miadı RIDA Quick Cryptosporidium 04-11-18 4
- Test prosedürünü düzeltin - Ekstraksiyon buferın kontaminasyonu Bu kontrollerden sonra, testi tekrar ettiğinizde kontrol bantı yine çıkmazsa üretici firma ile temasa geçiniz. 8. Değerlendirme ve yorumlama Sırasıyla maksimum iki bant görünmeli: bir kırmızı test bantı ve bir mavi kontrol bantı.eğer mavi kontrol bantı oluşmazsa, test geçersizdir ve değerlendirilemez. Aşağıdaki yorumlar mümkündür: - Cryptosporidium pozitif: kırmızı ve mavi bantlar görülür - Cryptosporidium negatif: sadece mavi bant görünür ise - Geçersiz: Hiçbir bant görülmez ve yukarıdaki hiçbir koşula uymaz ise Bant rengindeki değişim 10 dakikadan sonra olursa değerlendirilmemelidir. 9. Metodun Limitleri RIDA Quick Cryptosporidium testi gaita numunesindeki Cryptosporidium parvum antijenlerini tespit eder. Test spesifik görünür bantların şiddeti ile klinik semptomların şiddetini ortaya çıkarmak için kullanılamaz. Sonuçlar klinik tablo ile birlikte yorumlanmalıdır. Pozitif sonuçlar diğer patojenlerin olmadığı anlamına gelmez. Negatif sonuçlar ise Cryptosporidia enfestasyonunun olmadığı anlamına da gelmez. Bu enfeksiyon aralıklı olarak salgılanan patojenler ya da az olan numunedeki patojen miktarı ile ilgili olabilir. Eğer hasta anemik ya da Cryptosporidium tarafından enfekte olduğu şüphesi varsa 4 hafta sonra bir gaita numunesi alınarak test tekrar edilmelidir. Fazla gaita numunesi, spesifik band renklerinin oluşacağına kahve rengi rengin oluşmasına sebep olur. Bu kahve rengi bantların bir anlamı yoktur. Bu gibi durumlarda, daha az miktarda gaita ile testi tekrar etmek gerekli olacaktır. Ya da daha önce hazırlanan süspansiyon dilüe edilir (temiz süpernatant oluştuktan sonra) çok fazla gaita tarafından sonucun maskelenmesi önlenip patojen bakterinin varlığı aranır. 10. Performans niteliği 13.1. Klinik karşılaştırma çalışması Rutin laboratuvarda RIDA Quick Cryptosporidium metodu ile mikroskobik karşılaştırma çalışmaları yapıldı.55 taze gaita numunesi (15 Giardia lamblia pozitif ve 40 negatif)çalışıldı. Sonuçlar Tablo 1 dedir. RIDA Quick Cryptosporidium 04-11-18 5
Tablo 1 : RIDA Quick Cryptosporidium ile mikroskopi karşılaştırması Mikroskopi RIDA Quick Cryptosporidium + - + 14 1-0 40 Hassasiyet: 93.8 % pos. prognosis değeri: 100.0 % Özgüllük: 100.0 % neg. prognosis değeri: 97.5 % 13.2. Çapraz reaksiyon RIDA Quick Cryptosporidium testi aşağıdakilerden hiç biri ile çapraz reaksiyon göstermez. Entamoeba coli Blastocystis hominis Jodamoeba buetschlii Chilomastix mesnili Endolimax nana Eggs of Taenia spp. Giardia lamblia RIDA Quick Cryptosporidium 04-11-18 6
Referanslar 1. Clavel, A.: Evaluation of the optimal number of fecal specimens in the diagnosis of cryptosporidiosis in AIDS and immunocompetent patients. Eur. Journal Clin. Microbiol. Infect. Dis. 14, 46-49 (1995). 2. Current, W. L., Garcia, L. S.: Cryptosporidiosis. Clinics in Laboratory Medicine 11 (No. 4), 873-895 (1991). 3. Current, W. L., Garcia, L. S.: Cryptosporidiosis. Clin. Microbiol. Rev. 4 (No. 3), 325-358 (1991). 4. Flanigan, T. P.: Human immunodifeciency virus infection and cryptosporidiosis: Protective immune responses. Am. J. Trop. Med. Hyg. 50 (5) Suppl., 29-35 (1994). 5. Guarino, A. et al.: Human intestinal cryptosporidiosis: secretory diarrhea and enterotoxic activity in Caco-2 cells. J. Infect. Dis. 171, 976-983 (1995). 6. Hayes, E. B. et al.: Large community outbreak of cryptosporidiosis due to contamination of a filtered public water supply. New. Engl. J. Med. 320 (No. 21), 1372-1376 (1989). 7. Le Chevallier, M. W. et al.: Giardia and Cryptosporidium spp. in filtered drinking water supplies. Appl. Environ. Microbiol. 57 (No. 9), 2617-2621 (1991). 8. Mc. Anulty, J. M. et al.: A community wide outbreak of cryptosporidiosis associated with swimming at a wave pool. Jama 272 (No. 20), 1597-1600 (1994). RIDA Quick Cryptosporidium 04-11-18 7