BACTEC Peds Plus/F Culture Vials Resin İçeren Soybean-Casein Digest Broth PP091JAA 2008/01 Türkçe *ABD Patenti 4.632.902 KULLANIM AMACI BACTEC Peds Plus/F kültür flakonları (CO 2 içeren zenginleştirilmiş Soya-Kazein Dijeste broth), aerobik kan kültürleri içindir. Temel olarak, BACTEC floresan serisi cihazlarla kullanýlan, genellikle 3 ml den daha küçük hacme sahip pediyatrik ve diðer kan örneklerinden alýnan aerobik mikroorganizmalarýn (esasen bakteri ve maya) kalitatif kültürü ve geri kazanýmý için kullanýlýr. ÖZET VE AÇIKLAMA Test edilecek örnek bir veya daha fazla flakona inoküle edildikten sonra, flakonlar inkübasyon ve periyodik okuma için BACTEC floresan serisi cihazına yerleştirilir. Her flakonda, mikroorganizma gelişimi sonucunda gerçekleşen CO 2 artışını tespit edebilecek bir sensör bulunmaktadır. Sensör cihaz tarafından her on dakikada bir floresansındaki artış açısından izlenir; bu artış mevcut CO 2 miktarıyla orantılıdır. Pozitif bir okuma sonucu, flakonda canlı mikroorganizma bulunduğunun tahminleyici bulgusudur. Belirleme, belirli bir ortamda gelişebilecek mikroorganizmalarla sınırlıdır. Resin, kan örneklerinin kültür ortamına inokülasyonundan önce ve sonra işlenmesi için tanımlanmıştır. Resin BACTEC kültür ortamına, organizmaların özel bir işleme gerek kalmadan geri kazanımını artırmak için eklenmiştir. 1-3 PROSEDÜR İLKELERİ BACTEC flakonuna inoküle edilen test örneğinde mikroorganizma mevcutsa, organizmalar flakonda bulunan substratları metabolize ettikçe bir CO 2 üretimi gerçekleşecektir. Flakon sensörünün floresansındaki, yüksek CO 2 miktarından kaynaklanan artışlar, BACTEC floresan serisi cihazı ile izlenir. CO 2 artış hızı ve miktarının analiz edilmesiyle BACTEC floresan serisi cihazı, flakonun pozitif olup olmadığını, yani test örneğinin canlı organizma içerip içermediğini, belirler. REAKTİFLER BACTEC Peds Plus/F kültür flakonları işlemden önce şu aktif bileşenleri içerir: Bileşenlerin Listesi İşlenmiş Su... 40 ml Soya-Kazein Dijeste Broth...%2,75 a/h Maya Ekstraktı...%0,25 a/h Hayvan Dokusu Dijeste...%0,10 a/h Sodyum Piruvat...%0,10 a/h Dekstroz...%0,06 a/h Sükroz...%0,08 a/h Hemin... %0,0005 a/h Menadiyon... %0,00005 a/h Sodyum Polianetolesülfonat (SPS)... %0,020 a/h Piridoksal HCl (Vitamin B 6)... %0,001 a/h İyonik Olmayan Tutucu Resin... %10,0 a/h Katyonik Değişim Resini...%0,6 a/h Tüm BACTEC ortamları CO 2 eklenerek dağıtılmıştır. Uyarılar ve Önlemler In vitro Diyagnostik Kullanım içindir. Bu Ürün Kuru Doğal Kauçuk İçerir. Klinik örneklerde hepatit virüsü ve İnsan İmmün Yetmezlik Virüsü de dahil olmak üzere patojenik mikroorganizmalar bulunabilir. Kan veya diğer vücut sıvılarıyla kontamine olan tüm öğelerle çalışılırken, Standard Precautions (Standart Önlemler) 4-7 ve kurumsal düzenlemeler takip edilmelidir. Kullanılmadan önce her flakon; hasar, kontaminasyon veya bozulma belirtileri açısından incelenmelidir. Sızıntı, bulanıklık, renk değişimi (rengin koyulaşması) veya kapağın kabarması / içe göçmesi gibi hasar veya kontaminasyon belirtileri gösteren flakonlar kullanılmamalıdır. = 1
Kontamine flakonda pozitif basınç bulunabilir. Kontamine flakon doğrudan çizme işlemi için kullanılacaksa, kontamine kültür ortamı hasta damarına verilebilir. Flakon kontaminasyonu gözle görülür olmayabilir. Doğrudan çizme prosedürleri kullanırken, malzemeleri hastaya vermemek için prosesi yakından takip edin. Bazı durumlarda cam şişe boynu çatlamış olabilir ve çevir-aç kapak çıkarılırken veya kullanım sırasında kırılabilir. Yine bazı durumlarda, flakon uygun şekilde kapatılmamış olabilir. Her iki durumda da flakon içeriği dökülebilir veya sızıntı yapabilir. Flakonlar inoküle edildiyse, sızıntı veya dökülmeye, patojen organizmaların/ajanların mevcut olabileceğini göz önünde bulundurarak, dikkatle müdahale edin. Atmadan önce inoküle edilen tüm flakonları otoklavlayarak sterilize edin. Alt kültürleme ve boyama gibi işlemler için pozitif kültür flakonları: Örnekleme işleminden önce, mikrobiyal metabolizma sebebiyle oluşan gazın serbest bırakılması gerekir. Mümkünse örnekleme işlemi biyolojik güvenlik kabininde gerçekleştirilmeli ve işlem sırasında eldiven ve maske de dahil olmak üzere uygun koruyucu giysiler giyilmelidir. Alt kültürleme işlemine ilişkin daha fazla bilgi için Prosedür bölümüne bakın. Örneğin kültür flakonlarına inokülasyonu sırasında gerçekleşebilecek sızıntıları en aza indirgemek için, kalıcı iğneleri bulunan şırıngalar veya Luer-Lok marka uç kullanın. Saklama talimatları BACTEC flakonlar teslim alındıkları şekilde kullanılabilir; sulandırılmaları veya seyreltilmeleri gerekmez. Kuru ve doğrudan güneş ışığı almayan bir yerde 2 25 C de saklayın. ÖRNEK TOPLAMA Kontaminasyon riskini azaltmak için örnek steril teknikler kullanılarak alınmalıdır. Kültürlenebilir kan hacmi aralığı 0,5 ila 5,0 ml dir. Optimum sonuçlar 1,0 ila 3,0 ml ile elde edilir. Kültürlenen kanın hacmi 0,5 ml den azsa, Haemophilus türleri gibi bazı güç üreyen organizmaların geri kazanımı, bu Ambalajın Ek Sayfasının ilerleyen bölümlerinde açıklanan uygun bir desteğin kullanımını gerektirebilir. Örneklerin BACTEC flakonlarına örnek alım bölgesinde eklenmesi önerilir. Örnek alımı için genellikle Luer-Lok marka uç takılı bir şırınga kullanılır. Uygun durumlarda, Vacutainer marka İğne Yuvası ve Vacutainer marka Kan Alma Seti, Vacutainer Safety-Lok Kan Alma Seti veya diğer tüp kelebek setleri kullanılabilir. İğne ve tüp seti (doğrudan kan alımı) kullanılıyorsa, örneği almadan önce kan akış yönünü dikkatle gözlemleyin. Flakondaki vakum genellikle 5 ml den yüksektir; bu nedenle kullanıcı alınan hacmi flakon etiketindeki her 5 ml de bulunan işaretleri kontrol ederek izlemelidir. İstenen 1 3 ml alındığında, tüp kıvrılarak ve tüp seti BACTEC flakonundan çıkarılarak akış durdurulmalıdır. İnoküle edilen BACTEC flakonu laboratuvara mümkün olan en kısa sürede nakledilmelidir. PROSEDÜR BACTEC flakonundaki çevir-aç kapağı çıkarın ve flakonda çatlak, kontaminasyon, aşırı bulanıklık ve kapakta kabarma / içe göçme olup olmadığını kontrol edin. Herhangi bir hasar görülürse KULLANMAYIN. İnokülasyondan önce, septumu alkol swabı kullanarak silin (iyot kullanımı önerilmez). Her flakon için maksimum 5 ml örneği aseptik olarak çekin veya doğrudan alın (Prosedürün Kısıtlı Olduğu Alanlar bölümüne bakın). İnoküle edilen aerobik flakonlar inkübasyon ve izleme işlemleri için en kısa sürede BACTEC marka floresan serisi cihazına yerleştirilmelidir. İnoküle edilen bir flakonun cihaza yerleştirilmesi gecikirse ve gözle görülür bir gelişim varsa, bu flakon BACTEC floresan serisi cihazında test edilmemeli; alt kültürü hazırlanarak, Gram boyanmalı ve tahmini pozitif şişe olarak işlenmelidir. Cihaza girilen flakonlar test protokolü süresi boyunca her on dakikada bir otomatik olarak test edilir. Pozitif flakonlar BACTEC floresan serisi cihaz tarafından belirlenir ve bu şekilde tanımlanır (bkz. ilgili BACTEC floresan serisi cihaz kullanıcı kılavuzu). Cihazda bulunan sensör pozitif ve negatif flakonlarda gözle görülür bir farklılık göstermeyecektir; ancak BACTEC marka floresan serisi cihazı floresanstaki farklılığı tespit edebilir. Test süresinin sonunda negatif bir flakonda görünür pozitiflik (yani çikolata kıvamında kan, kabarmış septum lize olmuş ve/veya rengi koyulaşmış kan) gözlenirse, alt kültürü hazırlanmalı, Gram boyanmalı ve tahmini pozitif olarak işlenmelidir. Pozitif flakonların alt kültürleri ve Gram boyalı preparatları hazırlanmalıdır. Çoğu durumda organizmalar görünür hale gelecek ve doktora bir ön rapor bildirilebilecektir. BACTEC marka flakonlardaki sıvıdan seçici ortamda alt kültür ve ön direkt antimikrobiyal duyarlılık testi hazırlanabilir. Alt kültür hazırlanması: Alt kültür hazırlanmadan önce, flakonu dik konumda tutun ve septumun üzerine bir alkol sileceği yerleştirin. Flakondaki basıncı serbest bırakmak için, uygun bir filtresi bulunan steril bir iğne yerleştirin ve alkol sileceği ve septum boyunca emdirin. Basınç serbest kaldıktan sonra ve alt kültürü hazırlamak için flakon örneklenmeden önce iğne çıkarılmalıdır. İğnenin yerleştirilmesi ve çekilmesi işlemleri herhangi bir döndürme işlemi yapılmaksızın düz bir çizgi halinde gerçekleştirilmelidir. İzolatlardan maksimum verim elde etmek için, negatif olarak kabul edilip atılmadan önce negatif kültürler boyayla kontrol edilebilir ve/veya alt kültürleri hazırlanabilir. = 2
KALİTE KONTROLÜ Gerekli kalite kontroller ilgili yerel, devlet ve/veya federal düzenlemeler veya akreditasyon gerekliliklerine veya laboratuvarınızın standart Kalite Kontrol prosedürlerine uygun olarak gerçekleştirilmelidir. Kullanıcının, uygun Kalite Kontrol uygulamaları için ilgili CLSI (eski NCCLS) yönergelerine ve CLIA düzenlemelerine uyması önerilir. Son kullanma tarihi geçen kültür flakonlarını kullanmayın. Herhangi bir çatlak veya hasar görülen kültür flakonlarını kullanmayın; flakonu uygun şekilde atın. Her ortam kutusunda Kalite Kontrolü Sertifikaları bulunmaktadır. Kalite Kontrol Sertifikalarında, CLSI Standard, Quality Control for Commercially Prepared Microbiological Culture Media da belirtilen ATCC kültürleri de dahil olmak üzere test organizmaları gösterilmektedir. 8 Bu ortamda Kalite Kontrol Sertifikasında listelenen her bir organizma için tespit için gereken süre 72 saattir: Organizma Streptococcus pyogenes ATCC 19615 Escherichia coli ATCC 25922 Streptococcus pneumoniae* ATCC 6305 Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 Candida albicans ATCC 18804 Neisseria meningitidis ATCC 13090 Alcaligenes faecalis ATCC 8750 Haemophilus influenzae ATCC 19418 Staphylococcus aureus ATCC 25923 *CLSI Suşu BACTEC floresan serisi cihazın Kalite kontrolüne ilişkin bilgi için ilgili BACTEC floresan serisi cihaz Kullanıcı Kılavuzu na başvurun. PROSEDÜRÜN KISITLI OLDUĞU ALANLAR Kontaminasyon Örnek alımı ve BACTEC marka flakona inokülasyonu sırasında örneğin kontamine olmasını önlemek için özen gösterilmelidir. Kontamine olan bir örnek pozitif okuma sonucu verir, ancak geçerli bir klinik sonuç değildir. Bu tür bir değerlendirme, kullanıcı tarafından, geri kazanılan organizma türü, aynı organizmanın çoklu kültürlerde gözlenmesi, hastanın klinik geçmişi gibi faktörlere dayanarak gerçekleştirilmelidir. Kan Örneklerindeki SPS ye Duyarlı ve Güç Üreyen Organizmaların Geri Kazanımı Kan, SPS ye duyarlı organizmalara (bazı Neisseria türleri gibi) karşı SPS toksisitesini nötralize edebildiğinden, optimum kan hacmi varlığı (1 3 ml) bu organizmaların geri kazanımında fayda sağlamaktadır. Bazı Haemophilus türleri gibi güç üreyen organizmalar, NAD veya V faktörü gibi kan örneğinde bulunan çeşitli gelişme faktörlerinin varlığını gerektirebilir. Kan örneği hacmi çok düşükse (0,5 ml veya daha az), bu organizmaların geri kazanımı için uygun bir destek kullanımı gerekebilir. Besin desteği olarak, BACTEC marka FOS Güç Üreyen Organizma Desteği kullanılabilir. Canlı Olmayan Organizmalar Kültür ortamından alınan ve Gram boyanan bir smear örneğinde ortam bileşenleri, boyama reaktifleri, immersiyon yağı, cam kesitleri ve inokülasyon için kullanılan örneklerden kaynaklanmış olabilecek az sayıda canlı olmayan organizma bulunabilir. Hasta örneği de kültür ortamında veya alt kültürün hazırlanması için kullanılan ortamda gelişebilen organizmaları içerebilir. Bu örneklerin özel ortamlarda uygun şekilde alt kültürleri hazırlanmalıdır. 9 Antimikrobiyal Aktivite Antimikrobiyal aktivitenin resin tarafından nötralizasyonu, dozaj seviyesi ve örnek alımının zamanlamasına bağlı olarak değişir. Çalışmalar, bu ortamda bulunan resinin imipenem-silastatin antimikrobiyal preparatlarını yeterli ölçüde nötralize etmediğini göstermiştir. Streptococcus pneumoniae nin Geri Kazanımı Aerobik ortamda, S. pneumoniae gözle görülür ve cihaz tarafından tespit edilebilir bir pozitif sonuç verir; ancak bazı durumlarda Gram boyamada herhangi bir organizma görülmez veya rutin alt kültürde geri kazanılmaz. Anaerobik bir flakon da inoküle edildiyse, organizmanın anaerobik koşullarda iyi gelişme gösterdiği raporlanmış olduğundan, organizma genellikle anaerobik flakonun aerobik alt kültürü hazırlanarak geri kazanılabilir. 10 = 3
Dikkate Alınması Gereken Genel Noktalar Optimum izolat geri kazanımı 1 3 ml kan eklenerek elde edilebilir. Daha düşük veya yüksek hacim kullanılması geri kazanımı ve/veya tespit sürelerini olumsuz yönde etkileyebilir. Kanda antimikrobiyal maddeler veya mikroorganizma gelişimini yavaşlatan veya engelleyen diğer inhibitörler bulunabilir. Sistem tarafından tespit edilemeyecek miktarda CO 2 üreten belirli organizmaların varlığında veya flakonu sisteme yerleştirmeden önce önemli ölçüde gelişme gerçekleşmesi durumunda hatalı negatif okuma sonuçları alınabilir. Beyaz kan hücre sayısının yüksek olması durumunda hatalı pozitif sonuç alınabilir. BEKLENEN SONUÇLAR ATCC ve yabani mikrobiyal suşlarının 10 ila 50 cfu/kültür flakonu hedef inokulum seviyesiyle inoküle edilen kültür çalışmaları gerçekleştirilmiştir. Aşağıda, beş (5) günlük süre içinde BACTEC Peds Plus/F Kültür Ortamında pozitif olarak tespit edilen organizmalar listelenmiştir. Acinetobacter baumanii Haemophilus influenzae Serratia marcescens Acinetobacter lwoffii Haemophilus parainfluenzae Staphylococcus aureus Alcaligenes faecalis Klebsiella pneumoniae Staphylococcus epidermidis Candida albicans Neisseria gonorrhoeae Stenotrophomonas (Xanthomonas) maltophilia Candida (Torulopsis) glabrata Neisseria meningitidis Streptococcus pneumoniae Corynebacterium J-K Proteus mirabilis Grup A Streptococcus Cryptococcus neoformans Providencia stuartii Grup D Streptococcus Enterobacter cloacae Pseudomonas aeruginosa Escherichia coli Salmonella typhimurium Dahili çalışmalar, antimikrobiyal maddelerin BACTEC resin ortamında kullanılan resinden etkilendiğini göstermiştir. Bu testlerde antimikrobiyal maddeler, duyarlı suşların inokülasyonundan önce resin ortamına klinik olarak uygun konsantrasyonlarda doğrudan eklenmiştir. Bu testler kontrol olarak resin içermeyen ortamların kullanıldığı testlerle paralel olarak gerçekleştirilmiştir. Aşağıdaki kategorileri temsil eden antimikrobiyal maddelerin resin tarafından nötralize edildiği görülmüştür: penisilinler, sefalosporinler (1., 2. ve 3. nesil), makrolidler, aminoglikosidler, florokunolonlar, linkomisinler, tetrasiklin ve kloramfenikol. PERFORMANS ÖZELLİKLERİ BACTEC Peds Plus/F Kültür Ortamının performansının BACTEC NR Peds Plus Kültür Ortamıyla karşılaştırıldığı harici 2 bölgede gerçekleştirilen bir klinik çalışmada, 3.249 uygun eşli örnek test edilmiştir. Toplam 430 organizma geri kazanılmıştır. Bunlardan 342 sinin (%80) klinik olarak önemli olduğu ve 88 inin (%20) klinik olarak önemli olmadığı belirlenmiştir. Klinik olarak önemli izolatlardan 219 u (%64) her iki ortamda da geri kazanılmış; 63 ü (%18) sadece BACTEC Peds Plus/F Kültür Ortamında geri kazanılmış ve 60 ı (%18) sadece BACTEC NR Peds Plus Kültür Ortamında geri kazanılmıştır. Tablo 1 de ortam türüne bağlı olarak geri kazanılan organizmalar gösterilmiştir. Çalışma sırasında BACTEC Peds Plus/F Kültür Ortamında dört hatalı pozitif kültür flakonu belirlenmiş, herhangi bir hatalı negatif kültür flakonu belirlenmemiştir. BACTEC Peds Plus/F Kültür Ortamı için ortalama tespit süresi 25 saatken; BACTEC NR Peds Plus Kültür Ortamı için 33 saattir. Tablo 1: Klinik Çalışma İzolat Geri Kazanımı Ortam Türü Organizma= Sadece Peds Plus/F de Geri Kazanılan= Sadece NR Peds Plus da Geri Kazanılan= Her İkisinde de Geri Kazanılan= Gram Negatifler 9 6 50 Gram Pozitifler 51 43 146 Maya 3 11 23 = 4
Klinik Denemeler Sırasında BACTEC Peds Plus/F de Geri Kazanılan Organizmaların Listesi: Actinobacillus lignieresi Escherichia coli Streptococcus Grup B Burkholderia (Pseudomonas) cepacia Klebsiella pneumoniae Streptococcus constellatus Candida albicans Neisseria meningitidis Streptococcus pneumoniae Candida tropicalis Pseudomonas fluorescens Streptococcus salivarius Citrobacter freundii Salmonella spp. Streptococcus intermedius Enterobacter aerogenes Serratia liquefaciens Enterobacter cloacae Staphylococcus aureus Enterococcus spp. Staphylococcus spp. koag. neg. TİCARİ TAKDİM ŞEKLİ Kat. No. Açıklama 442194 BACTEC Peds Plus/F Culture Vials, 50 flakonluk kutu REFERANSLAR 1. Wallis, C. et al. Rapid isolation of bacteria from septicemic patients by use of an antimicrobial removal device. J. Clin. Microbiol. 1980, 11:462-464. 2. Applebaum, P.C. et al. Enhanced detection of bacteremia with a new BACTEC resin blood culture medium. J. Clin Microbiol. 1983, 17:48-51. 3. Jungkind, D.L. et al. Evidence for a second mechanism of action of resin in BACTEC NR16A aerobic blood culture medium. Abstracts of the Annual Meeting of Amer. Soc. for Microbiol. 1989. 4. Clinical and Laboratory Standards Institute. 2005. Approved Guideline M29-A3. Protection of laboratory workers from occupationally acquired infections, 3rd ed. CLSI, Wayne, Pa. 5. Garner, J.S. 1996. Hospital Infection Control Practices Advisory Committee, U.S. Department of Health and Human Services, Centers for Disease Control and Prevention. Guideline for isolation precautions in hospitals. Infect. Control Hospital Epidemiol. 17:53-80. 6. U.S. Department of Health and Human Services. 1999. Biosafety in microbiological and biomedical laboratories, HHS Publication (CDC), 4th ed. U.S. Government Printing Office, Washington, D.C. 7. Directive 2000/54/EC of the European Parliament and of the Council of 18 September 2000 on the protection of workers from risks related to exposure to biological agents at work (seventh individual directive within the meaning of Article 16(1) of Directive 89/391/EEC). Official Journal L262, 17/10/2000, p. 0021-0045. 8. Clinical and Laboratory Standards Institute. 2004. Approved Standard M22-A3. Quality control for commercially prepared microbiological culture media, 3rd ed., CLSI, Wayne, Pa. 9. Murray, P.R., E.J. Baron, J.H. Jorgensen, M.L. Landry and M.A. Pfaller. 2007. Manual of clinical microbiology, 9th ed., American Society for Microbiology, Washington, D.C. 10. Howden, R.J. J. Clin. Path. 1976, 29:50-53. = 5
= = ==Becton, Dickinson and Company == BENEX Limited 7 Loveton Circle Bay K 1a/d, Shannon Industrial Estate Sparks, MD 21152 Shannon, County Clare, Ireland (800) 638-8663 Tel: 353-61-47-29-20 Fax: 353-61-47-25-46 ATCC is a trademark of the American Type Culture Collection. BD, BD Logo, BACTEC, Peds Plus, Vacutainer, Safety-Lok, FOS and Luer-Lok are trademarks of Becton, Dickinson and Company. 2008 BD = 6