Genscreen HIV-1 Ag Confirmatory Assay

Genscreen HIV-1 Ag Confirmatory Assay 25 71121 REAKTİF NUMUNELERİN Genscreen HIV-1 ANTIGEN ASSAY TESTİ İLE NÖTRLEŞTİRİLEREK DOĞRULANMASI İÇİN 883670-2014/01

İÇİNDEKİLER 1. KLİNİK ÖNEMİ 2. Genscreen HIV1 Ag Confirmatory Assay KİTİNİN PRENSİBİ 3. Genscreen HIV1 Ag Confirmatory Assay KİTİNİN BİLEŞİMİ 4. GEREKLİ OLAN ANCAK ÜRÜNLE BİRLİKTE VERİLMEYEN DONANIM 5. HİJYEN VE GÜVENLİK TALİMATLARI 6. ÖNLEMLER 7. NUMUNELER 8. REAKTİFLERİN YENİDEN OLUŞTURULMASI- SON KULLANIM TARİHİ - SAKLAMA 9. ÇALIŞMA ŞARTLARI 10. HESAPLAMALAR VE SONUÇLARIN DEĞERLENDİRİLMESİ 11. NUMUNE VE REAKTİF DAĞITIMININ SPEKTROFOTOMETRİK YÖNTEMLE KONTROL EDİLMESİ 12. PERFORMANSLAR 13. TEST LİMİTLERİ 14. KAYNAKÇA 2 [TR]

1 - KLİNİK ÖNEMİ HIV-1'e ait p24 antijeninin varlığını doğrulamak amacıyla, tekrarlanabilir reaktif numuneler Genscreen HIV-1 Ag Assay testi ile nötrleştirilmelidir. Bir Anti HIV antikoru ile viral antijenlerin nötrleştirilmesi bilinen bir doğrulama yöntemidir (1-4). Numunede p24 antijeni bulunduğu, aynı denekten alınan nötrleştirilmemiş bir numuneye kıyasla HIV-1 antijeninde yaşanan reaktivite kaybı ile kanıtlanır. Genscreen HIV-1 Ag Confirmatory Assay testi, Genscreen HIV-1 Ag Assay testine göre tekrarlanabilir olarak reaktif bulunan serum ve plazma numunelerinde veya hücre kültürlerinin yüzeyde yüzen sıvı numunelerinde HIV-1 antijeninin varlığını doğrulamaya yöneliktir. 2 - Genscreen HIV1 Ag Confirmatory Assay KİTİNİN PRENSİBİ Genscreen HIV-1 Ag Assay testine göre tekrarlanabilir reaktif numune, doğrulama reaktifi ile [anti HIV antikoru (insan) inkübe edilir]. Numune HIV-1 antijeni içeriyor ise, bu durumda antijen doğrulama reaktifinde mevcut anti-hiv-1 antikorları tarafından etkisiz hale getirilir. Bu durumda ilgili numune Genscreen HIV-1 Ag Assay testi ile yeniden teste tabi tutulur. Etkisiz hale getirilen HIV-1 antijenianti HIV- 1 antikorları tarafından duyarlı hale getirilen kaplara sabitlenemez ve bunun sonucu olarak optik yoğunluk azalır. Elde edilen sinyalleri karşılaştırmak amacıyla, numunenin etkisiz hale getirilmemiş bir kontrolü [doğrulama reaktifi yerine HIV-1 (insan) antijeni negatif kontrolü ile işlenmiş] etkisiz hale getirilmiş numuneye paralel olarak teste tabi tutulur. Etkisiz hale getirilmiş numunenin optik yoğunluğundaki azalma etkisiz hale getirilmemiş numuneye ait sinyalin yüze 50'sine eşit veya bu değerin üzerinde ise ve etkisiz hale getirilmemiş numunenin sinyali test eşik değerinin üzerinde ise, Genscreen HIV-1 Ag Assay testi ile tekrarlanabilir reaktif numunelerin pozitifliği doğrulanır. 3 - Genscreen HIV1 Ag Confirmatory Assay KİTİNİN BİLEŞİMİ RA C0 Etiketleme Reaktiflerin niteliği Sunum HIV-1 Ag Confirmatory reagent Negative control HIV-1 Ag doğrulama reaktifi AntiHIV-1 antikorları içeren insan serumu % 0,005 gentamisin sülfat Koruyucu: ProClin 300 (%0,5) Negatif kontrol Ag HIV-1, Ag HBs, anti-hiv-1, anti- HIV-2, anti-hcv ve anti-htlv-i antikorları için reaktif olmayan normal insan serumu % 0,005 gentamisin sülfat Koruyucu: ProClin 300 (%0,5) 1 şişe 1,3 ml 1 şişe 12 ml 4 - GEREKLİ OLAN ANCAK ÜRÜNLE BİRLİKTE VERİLMEYEN MALZEMELER "Genscreen HIV-1 Ag Assay" test kılavuzuna bakın (referans no 71120). 5 - HİJYEN VE GÜVENLİK TALİMATLARI Kitteki tüm reaktifler "in vitro" teşhis amacıyla kullanılmaya yöneliktir. HIV-1 doğrulama reaktifi hepatit B (AgHBs) yüzey antijeni, hepatit C virüsü (Ac anti-hcv) ve HTLV virüsüne (Ac anti-htlv-i) yönelik antikor tarama testleri için negatif bulunmuştur. HIV-1 doğrulama reaktifi de ısı ile etkisiz hale gelmektedir. 3 [TR]

Negatif kontrolün hazırlanmasında kullanılan insan kaynaklı malzeme teste tabi tutulmuş ve anti-hiv1 ve HIV2 antikorları, HBs antijeni, anti-hcv antikorları ve anti HTLV1/HTLV2 antikorları bakımından negatif bulunmuştur. Hiçbir yöntem HIV, Hepatit B veya Hepatit C virüslerinin veya diğer bulaşıcı ajanların bulunmadığını kesin bir şekilde garanti edemediği için, bu reaktifleri ve hasta numunelerini potansiyel olarak bulaşıcı malzeme addedin ve olağan önlemler ile kullanın. Güvenlik verileri fişi talep üzerine verilmektedir. Bu test kitinde bulunan kimyasal komponentlerle ilgili tehlikeler ve bunlardan korunma yöntemleri konusunda öneriler için lütfen etiketler üzerinde bulunan ve ayrıca bu kullanım talimatlarının sonunda yer alan resimli grafiklere başvurun. Güvenlik Veri Sayfası www.bio-rad.com adresinde bulunabilir. İnsan kaynaklı numunler ve reaktifler ve kontamine malzeme ve ürünler, bulaşıcı özellikleri giderildikten sonra atılacaktır: - Bu işlem, ya % 5 sodyum hipoklorit son konsantrasyonlu çamaşır suyuna (10 hacim kontamine sıvı veya su için, 1 hacim çamaşır suyu) 30 dakika boyunca batırılarak, - Ya da minimum 2 saat boyunca 121 C'de otoklavlama vasıtasıyla gerçekleştirilir. Otoklav, HIV ve HBV virüslerini etkisiz hale getirmek için en iyi yöntemdir. - DİKKAT: SODYUM HİPOKLORİT İÇEREN SOLÜSYONLARI OTOKLAVIN İÇİNE SOKMAYIN. Hijyen ve güvenlik konusundaki diğer talimatlar için "Genscreen HIV-1 Ag Assay" test kılavuzuna bakın (referans no 71120). 6 - ÖNLEMLER Elde edilecek sonuçların kalitesi aşağıdaki laboratuar uygulamalarına tam olarak uyulmasına bağlıdır: Son kullanma tarihi geçmiş reaktifler kullanmayın. Çalışma şartlarını değiştirmeyin. Kullanımdan önce, reaktiflerin laboratuar sıcaklığında (18-30 C) dengelenmesi için 30 dakika bekleyin. Diğer önlemler için, "Genscreen HIV-1 Ag Assay" test kılavuzuna bakın (referans no 71120). 7 - NUMUNELER Olağan uygulama yöntemleriyle bir kan numunesi alın. Kullanılabilir numuneler şunlardır: Serum, plazma veya hücre kültürü numuneleri. Antikoagülanlar, EDTA, heparin, sodyum sitrat değerlendirmeye tabi tutulmuş ve kullanılabilir addedilmiştir. Diğer talimatlar için, "Genscreen HIV-1 Ag Assay" (referans no 71120) test kılavuzuna bakın. 8 - REAKTİFLERİN YENİDEN OLUŞTURULMASI- SON KULLANIM TARİHİ - SAKLAMA Genscreen HIV-1 Ag Confirmatory Assay kitindeki reaktifler kullanıma hazırdır. Kit +2-8 C sıcaklıkta muhafaza edilmelidir. Kullanımdan önce tüm reaktifleri ortam sıcaklığına (18-30 C) getirin. Genscreen HIV-1 Ag Confirmatory Assay kitinde bulunan ve +2-8 C sıcaklıkta muhafaza edilen her unsur kit ilk defa açıldıktan sonra kutunun üzerinde belirtilen son kullanma tarihine kadar kullanılabilir. 4 [TR]

9 - ÇALIŞMA ŞARTLARI Bu testin süresi yaklaşık 4 saat olarak belirtilmiştir. Test kullanım prosedürünün her döngüsü başladıktan sonra tamamen ve kesintisiz olarak gerçekleştirilmelidir. DİKKAT: Genscreen HIV-1 Ag Assay testi ile 37 C'deki prosedüre göre tekrarlanabilir reaktif numuneleri Genscreen HIV-1 Ag Confirmatory Assay ile 37 C'deki prosedüre göre doğrulanmalıdır. Aynı şekilde, Genscreen HIV-1 Ag Assay testi ile 40 C'deki prosedüre göre tekrarlanabilir reaktif numuneleri Genscreen HIV-1 Ag Confirmatory Assay ile 40 C'deki prosedüre göre doğrulanmalıdır. Önerilen protokole kesinlikle uyun. Testin kalitesini doğrulamak için, test her uygulandığında negatif ve pozitif kontrol serumlarını kullanın. Doğru laboratuar uygulamalarını kullanın: 1. Numune dağıtım ve tanıtım planını özenle hazırlayın. 2. Sulandırılmış yıkama solüsyonunu hazırlayın. 3. Taşıyıcı çerçeveyi ve şeritleri (R1) koruyucu ambalajdan çıkarın. 4. Nötrleştirme prosedürü: a. Her numune için, bir plastik deney tüpüne "A" harfini taşıyan bir etiket (nötrleştirilmiş numune) ve bir plastik deney tüpüne de "B" harfini taşıyan bir etiket (nötrleştirilmemiş kontrol numunesi) yapıştırın. Her tüpe pipetle 150 µl tekrarlanabilir reaktif numunesi doldurun. b. HIV1 antijeni pozitif kontrolü için, iki plastik deney tüpüne "A" harfini taşıyan bir etiket (nötrleştirilmiş (kontrol) ve iki plastik deney tüpüne de "B" harfini taşıyan bir etiket (nötrleştirilmemiş kontrol) yapıştırın. Her tüpe pipetle 1 50 µl HIV-1 antijen pozitif kontrolü (C1) doldurun. c. HIV-1 antijen negatif kontrolü için, üç plastik deney tüpüne "B" harfini taşıyan bir etiket (nötrleştirilmemiş kontrol) yapıştırın. Her tüpe pipetle 150 µl HIV-1 antijen negatif kontrolü (C0) doldurun. d. "A" etiketini taşıyan her tüpe (nötrleştirilmiş) 25 µl HIV-1 antijen doğrulama reaktifi (RA) ilave edin. e. "B" etiketini taşıyan her tüpe (nötrleştirilmemiş) 25 µl HIV-1 antijen negatif kontrolü (C0) ilave edin. f. Hafifçe çalkalayarak veya vurarak, her tüpü karıştırın. Aşırı miktarda köpük oluşmasına engel olun. g. Nötrleştirme reaksiyonunun gerçekleşmesi için, tüpleri ortam sıcaklığında (18-30 C) 15 ila 30 dakika inkübe edin. 5. Plakayı ön yıkama işlemine tabi tutmadan, aşağıdaki malzemeleri doğrudan ve art arda yerleştirin (plaka dağıtım önerisi): Her kaba 50 µl numune sulandırıcısı A1, B1, C1'e 150 µl negatif kontrol (C0) D1, E1'e 150 µl pozitif kontrol (C1) nötrleştirilmiş F1, G1'e 150 µl pozitif kontrol (C1) nötrleştirilmemiş H1'e 150 µl işlenmiş numune İkisi nötrleştirilmiş ve ikisi nötrleştirilmemiş, dört pozitif kontrol numunesi ve üç negatif kontrol numunesi, (tamamen veya kısmen kullanılan) her mikroplakada teste tabi tutulmalıdır. Numune sulandırıcısı ve numunenin (veya kontrolün) iyice birbirine karıştığını kontrol edin. Her haznedeki solüsyonlar iyice karışınca, tekdüze bir renge sahip olur. Not: İşlemlerin bu aşamasında numune dağılımı görsel olarak kontrol edilebilir; gerçekten de numuneler ilave edildikten sonra, başlangıçta yeşil olan sulandırıcının rengi maviye döner. (otomatik kontrol için bkz. bölüm 11: NUMUNE İLAVELERİNİN SPEKTROFOTOMETRİ İLE KONTROL EDİLMESİ). 5 [TR]

6. Sızdırmazlık sağlamak için, mümkünse üstünü yapışkan bir film ile örterek, tüm yüzeyin üzerine iyice basın. 7. Plakayı kuru havalı statik inkübatörde 37 ± 1 C veya 40 ± 1 C sıcaklıkta 60 ± 5 dakika inkübe edin. 8. Yapışkan filmi çıkarın. Tüm kapların içeriğini kontamine atıklar için öngörülmüş (sodyum hipoklorit içeren) bir konteynere çekin ve kaplardan her birinin içine derhal minimum 370 µl yıkama solüsyonu ilave edin. 20 ila 60 dakikalık bir batırma süresi (bekleme süresi) uygulayın. Yeniden çekin. Yıkama işlemini 4 kez tekrarlayın (minimum 5 yıkama). Artık hacim 10 µl'den az olmalıdır (gerekirse plakayı emici bir kâğıt üzerinde ters çevirerek kurutun). Otomatik bir yıkayıcınız var ise, aynı işlem döngüsünü uygulayın. 9. Tüm kaplara konjugat 1 çalışma solüsyonundan hızlı bir şekilde 100 µl dağıtın. Konjugat kullanımdan önce çalkalanmalıdır. Not: Sarıya boyanmış olan konjugat 1 çalışma solüsyonunun dağıtılması işlemlerin bu aşamasında görsel olarak kontrol edilebilir. 10. Mümkünse, mikroplakanın üzerini yeni bir film ile örtün. Kuru havalı statik inkübatörde 37 ± 1 C veya 40 ± 1 C sıcaklıkta 30 ± 5 dakika inkübe edin. 11. Yapışkan filmi çıkarın. Tüm kapların içeriğini kontamine atıklar için öngörülmüş (sodyum hipoklorit içeren) bir konteynerin içine çekin ve daha önce olduğu gibi en az 5 kez yıkayın. Otomatik bir yıkayıcınız var ise, aynı işlem döngüsünü uygulayın. 12. Tüm kaplara konjugat 2 çalışma solüsyonundan hızlı bir şekilde 100 µl dağıtın. Konjugat kullanımdan önce çalkalanmalıdır. Not: Yeşile boyanmış olan konjugat 2 çalışma solüsyonunun dağıtılması işlemlerin bu aşamasında görsel olarak kontrol edilebilir. 13. Mümkünse, mikroplakanın üzerini yeni bir film ile örtün. Kuru havalı statik inkübatörde 37 ± 1 C veya 40 ± 1 C sıcaklıkta 30 ± 5 dakika inkübe edin. 14. Yapışkan filmi çıkarın; tüm kapların içeriğini çekerek boşaltın ve daha önce olduğu gibi en az 5 kez yıkayın. Artık hacim 10 µl'den az olmalıdır (gerekirse şeritleri emici bir kâğıt üzerinde ters çevirerek kurutun). 15. Önceden hazırlanmış 100 µl'lik enzimatik faaliyet developman solüsyonunu (R8+R9) tüm kaplara hızla dağıtın. Reaksiyonun ortam sıcaklığında (18 ila 30 C) 30 ± 5 dakika boyunca karanlıkta gerçekleşmesini sağlayın. Bu inkübasyon sırasında, yapışkan film kullanmayın. Not: Pembe renkte olan developman solüsyonunun dağıtılması, işlemlerin bu aşamasında görsel olarak kontrol edilebilir. Boş bir kap ile pembemsi renkteki developman solüsyonunu içeren bir kap arasında önemli bir renk farkı vardır. (otomatik kontrol için paragraf 11'e başvurun: NUMUNE VE REAKTİF İLAVELERİNİN SPEKTROFOTOMETRİ İLE KONTROL EDİLMESİ). 16. Developman solüsyonu ile aynı sıra ve dağıtım temposunu kullanarak 100 µl durdurma solüsyonu (R10) ilave edin. Reaksiyonel karışımı homojenleştirin. Not: Renksiz olan durdurma solüsyonunun dağıtılması, işlemlerin bu aşamasında görsel olarak kontrol edilebilir. Substratın pembemsi (negatif numuneler için) veya mavi (pozitif numuneler için) olan rengi, durdurma solüsyonu ilave edildikten sonra renksiz hale gelen (negatif numuneler için) veya rengi sarıya dönen (pozitif numuneler için) kaplardan kaybolur. 17. Plakaların alt kısmını özenle silin. Durdurma solüsyonunun dağıtılmasından en az 4 dakika sonra ve reaksiyonun sona ermesinden sonraki 30 dakika içinde, bir plaka okuyucusu yardımıyla 450/620-700 nm'de optik yoğunluğu okuyun. 18. Sonuçları kayda geçirmeden önce, okuma işlemi ile plaka ve numunelerin dağıtım ve tanıtım planının birbirleriyle uyumlu olduğunu kontrol edin. 6 [TR]

10 - HESAPLAMALAR VE SONUÇLARIN DEĞERLENDİRİLMESİ Bir numunede HIV-1 antijeni bulunduğu, nötrleştirilmiş numunelere ait absorbans değerinin (abs)nötrleştirilmemiş numunelere ait absorbans değeri ile karşılaştırılması vasıtasıyla doğrulanır. Bu karşılaştırma azaltma yüzdesi olarak ifade edilir. 1) Pozitif ve Negatif Kontrollerin Doğrulanması Bireysel negatif ve pozitif kontrol değerlerinin, Genscreen HIV-1 Ag Assay" test kılavuzundaki "test onayı" paragrafında tanımlanmış olan standartlar dahilinde olduğunu kontrol edin. Negatif kontrol değerlerinden biri Genscreen HIV-1 Ag Assay ürününün kılavuzunda belirtilen onay standartları dışında bulunuyor ise, elimine edilebilir.. Tüm pozitif kontroller dikkate alınmalıdır. 2) Absorbans Ortalamasının Hesaplanması (Xabs) Absorbans değerlerinin toplamını kabul edilebilir kontrol sayısı ile bölerek, negatif ve pozitif kontrollerin (nötrleştirilmiş ve nötrleştirilmemiş) ortalama absorbansını belirleyin. Ortalama absorbans değerlerini hesaplamak için, Genscreen HIV-1 Ag Assay test kılavuzunda bulunan "ortalama absorbansların hesaplanması" paragrafındaki kriterleri uygulayın. 3) Azaltma Yüzdesinin Hesaplanması Tüm kontrollerin ve tüm numunelerin azaltma yüzdesi aşağıdaki denklem uygulanarak belirlenir: abs nötrleştirilmemiş numune - abs nötrleştirilmiş numune azaltma yüzdesi = 100 x ------------------------------------------------------------------ abs nötrleştirilmemiş numune - Xabs negatif kontrol Örnek Numune Ortalama absorbans Nötrleştirilmemiş HIV antijeni negatif kontrolü 0,045 Nötrleştirilmemiş HIV antijeni pozitif kontrolü 1,020 Nötrleştirilmiş HIV antijeni pozitif kontrolü 0,040 HIV Ag Xabs (XCP) pozitif kontrol azaltma yüzdesi = 1.020-0.040 0.980 100 x ------------------- = ------- = %100,5 azaltma 1.020-0.045 0.975 4) Testin Geçerli İlan Edilmesi Her negatif kontrolün (ve gerekirse hücre kültürü ortam kontrolünün) absorbans değerleri 0,000 UA değerinin üzerinde ve 0,100 UA değerine eşit veya bu değerin altındadır. Bir negatif kontrolün değeri elimine edilebilir. İki negatif kontrol bu kriterlere uymaz ise, yeni bir dozaj yapılmalıdır. Pozitif kontrol ortalama absorbans değeri (XCP), 0,500 UA değerine eşit veya bu değerin üzerinde olmalı ve bireysel absorbans değerleri 0,65 ila 1,35 defa XCP değerleri arasında bulunan bir tekrarlanabilirlik aralığında yer almalıdır. Tüm pozitif kontrol değerleri dikkate alınmalıdır. 7 [TR]

Her HIV antijeni nötrleştirilmiş pozitif kontrolü için azaltma yüzdesi minimum % 50 olmalıdır. 5) Sonuçların Yorumlanması Bir numune aşağıdaki kriterler yerine getirilir ise, HIV-1 antijeni açısından pozitif addedilir: Numune Genscreen HIV-1 Ag Assay testi ile tekrarlanabilir olarak reaktiftir. Nötrleştirilmemiş numunenin absorbans değeri hesaplanan eşik değere eşit veya bu değerin üzerindedir. Numunenin abs azaltma yüzdesi en az %50'dir. NOT: Hastalardan alınan bir numunenin absorbans değeri okuyucunun doğrusallık üst limitinin üzerinde ise, aşağıdaki hesaplamalar çerçevesinde üst eşiği absorbans değeri olarak kullanın. 1. Negatif kontrollerin ortalamasına sabit bir faktör (0,050) ekleyerek, eşik değeri hesaplayın. 2. "Azaltma yüzdesi hesabı" paragrafında verilen denklemi kullanarak, her numunenin abs değeri için azaltma yüzdesini belirleyin. Bir test sırasında elde edilen değer örnekleri ve bunlar hakkındaki yapılan yorumlar aşağıda sunulmaktadır: Numune Absorbans değeri Ortalama Negatif kontrol 0.041 0.045 Nötrleştirilmemiş 0.050 0.045 Pozitif kontrol 1.032 1.020 Nötrleştirilmemiş 1.008 Nötrleştirilmiş pozitif kontrol 0.037 0.040 0.043 Nötrleştirilmemiş, numune 0.858 Nötrleştirilmiş numune 0.041 Eşik örneği = 0.045 + 0.050 = 0.095 1.020-0.040 0.980 HIV antijeni CPX azaltma yüzdesi = 100 x ------------------- = ---------- = %100,5 azaltma 1.020-0.045 0.975 1.858-0.041 0.817 Numune abs değeri azaltma yüzdesi = 100 x ------------------- = ----------- = %100,5 azaltma 1.858-0.045 0.813 NOT: Bazı durumlarda, yüksek bir HIV antijen titresine sahip numunelerde, HIV-1 antijen doğrulama reaktifi eklendikten sonra %50 sinyal azalması görülmez. Bu yüzdendir ki, çok reaktif numuneler (absorbans 2,000) HIV antijen negatif kontrolünde sulandırılmalı (mesela 1/4 veya 1/8 oranında) ardından Genscreen HIV-1 Ag Confirmatory Assay doğrulama testi ile yeniden teste tabi tutulmalıdır. Sulandırılan numune için azaltma yüzdesi hâlâ en az % 50'ye eşit veya bu değerin üzerinde değil ise ve bu numune hâlâ çok reaktif ise, bir defa sulandırılan numuneyi 1/16 oranında veya daha yüksek bir oranda HIV-1 antijen negatif kontrolünde yeniden sulandırın ve Genscreen HIV-1 Ag Confirmatory Assay doğrulama testi ile yeniden teste tabi tutun. 8 [TR]

11 - NUMUNE VE REAKTİF İLAVELERİNİN SPEKTROFOTOMETRİK YÖNTEMLE KONTROL EDİLMESİ "Genscreen HIV-1 Ag Assay" test kılavuzuna bakın (referans no 71120). 12 - PERFORMANSLAR Özgüllük Bir kan donörü popülasyondan alınmış, taze serum (941) ve plazmalardan (1122) oluşan toplam 2063 numune Genscreen HIV-1 Ag Assay testine tabi tutuldu. Tüm numuneler Ac anti-hiv1 tarama ve Ag HIV algılama testlerinden daha önce elde edilen sonuçlara göre negatifti. Bu özgüllük incelemesi işlem protokolünde belirtilen 2 inkübasyon sıcaklığında gerçekleştirilmiştir. Tekrarlanabilir yanlış pozitif bulunan 2 numune doğrulama testinde nötrleştirilmemiştir. Duyarlılık Genscreen HIV 1 Ag Assay testiyle tekrarlanabilir olarak reaktif bulunan 78 numune (SFTS paneli 96 pozitif ve HIV1 enfeksiyonunun farklı aşamalarında olan seropozitif hastalar) bir duyarlılık incelemesine tabi tutulmuştur. Genscreen HIV-1 Ag Assay testine göre tekrarlanabilir reaktif olan 76 numunenin tamamı Genscreen HIV-1 Ag Confirmatory Assay testiyle doğrulanmıştır. Başka bir EIA testine göre reaktif olmayan iki hasta numunesi nötrleştirme testiyle doğrulanmamıştır. Ag HIV-1'in farklı grup ve alt-tiplerini temsil eden 55 hücre kültürü yüzey sıvısı (A, B, C, D, E, F, G, H, J, N ve O) nötrleştirilmiştir. 17 serokonversiyon paneli teste tabi tutulmuştur. Genscreen HIV-1 Ag Assay testiyle pozitif bulunan tüm numuneler Genscreen HIV-1 Ag Confirmatory Assay testiyle doğrulanmıştır. Çengel Etkisinin İncelenmesi "Genscreen HIV-1 Ag Assay" testinde çengel etkisi olmadığını kontrol etmek için yüksek HIV-1 antijen konsantrasyonları teste tabi tutulmuştur. 2 µg/ml ila 0,2 pg/ml'lik konsantrasyonlar elde etmek için HIV-1 viral lisatı pozitif kontrol sulandırıcısında sulandırılmıştır. Konsantrasyonları 20 ng/ml'nin altında olan tüm numuneler nötrleştirilmiştir. Bu değerin ötesinde, nötrleştirmenin etkili olması için numuneler sulandırılmalıdır. 13 - TEST LİMİTLERİ HIV-1 antijeninin varlığının doğrulanması için serum, plazma veya hücre kültürü numuneleri teste tabi tutulduğunda, Genscreen HIV-1 Ag Assay testi ve Genscreen HIV-1 Ag Confirmatory Assay doğrulama testinin kullanım kılavuzlarındaki tavsiyelere uyulmalıdır. Bu kitin kullanıcılarının testi uygulamadan önce bu kullanım kılavuzunu dikkatle okumaları tavsiye edilir. Özellikle numune ve reaktiflerin pipetle alınması, mikroplakaların yıkanması ve inkübasyon aşamalarının süreleri konusunda test kullanım prosedürlerine uyulmalıdır. HIV antijen oranı testin algılama limitlerine göre fazla düşük olan numuneler için negatif sonuçlar elde edilebilir; aynı şekilde aranan markör numunenin alındığı hastalık aşamasında mevcut değil ise, negatif sonuçlar gözlemlenebilir. Numune veya reaktif talimatlara uygun şekilde ilave edilmemiş ise, yanlış negatif sonuçlar elde edilebilir. Prosedür esnasında bir enfeksiyon veya hata ile ilgili klinik şüphe olması durumunda yeni bir dozaj yapılması düşünülmelidir. Bir numune için 0,000 UA'nın altında bulunan bir absorbans değeri, prosedür sırasında bir hata yapıldığını veya donanım ile ilgili bir sorun olduğunu gösterir; bu durumda ilgili numune yeniden teste tabi tutulmalıdır. 9 [TR]

Diğer kullanım limitleri için, "Genscreen HIV-1 Ag Assay" test kılavuzuna bakın. 14 - KAYNAKÇA 1. Casey JM, Kim Y, Andersen PR, et al: Human T-cell lymphotropic virus type III: immunologic characterization and primary structure analysis of the major internal protein, p24. J Virology 55:417-423,1985. 2. Ritter J, Escaich S, Trepo C, et al: HIV antigen detection in antibody negative sera. Abstract 1627, IV International Conference on AIDS, 1988. 3. Veronese FD, Sarngadharan MG, Rahman R, et al: Monoclonal antibodies specific for p24, the major core protein of human T-cell Leukemia virus type III. Natl Acad Sci USA, 82:5199-5202,1985. 4. Schaeffler B, Flesher A, Shriver K, Tam MR: Monoclonal antibody detection of p25 HIV antigen in the serum and CSF of patients within the AIDS spectrum. Abstract 7759, IV International Conference on AIDS, 1988. 5. Resnick L, Veren K, Salahuddin SZ, et al: Stability and inactivation of HTLV- III/LAV under clinical laboratory environments. JAMA 255:1887-1891,1986. 6. Sarngadharan MG, Markham PD: The role of human T-Lymphotropic retroviruses in leukemia and AIDS, in Wormser GP (ed.): AIDS and Other Manifestations of HlV Infection. New Jersey, Noyes Publications 1987, pp 218-220. 7. Bond WW, Favero MS, Petersen NJ, et al: Inactivation of Hepatitis B virus by intermediate-to-high level disinfectant chemicals. J Clin Micro 18:535-538,1983. 10 [TR]

11 [TR]

12 [TR]

13 [TR]

14 [TR]