Neurotransmitters in Urine LC-MS/MS Analysis Kit

Benzer belgeler
Busulfan Serum & Plasma LC-MS/MS Analysis Kit

Carnitine / Acylcarnitines LC-MS/MS Analysis Kit (Dried Blood Spot)

25-Hydroxyvitamin D2-D3 Serum VD-200 UHPLC Analysis Kit User Manual

25-Hydroxyvitamin D2-D3 Serum LC-MS/MS APCI Analysis Kit User Manual ZV D. No: ZV-3046-KK-10.R15

Organic Acid Urine LC-MS/MS Analysis Kit

Gıda Analizlerinde LC-MS/MS Aplikasyonları

Organic Acid Urine LC-MS/MS Analysis Kit

UYGULAMA NOTU. LCMSMS ile Bebek Devam Formülleri ve Süt Tozunda Melamin Analizi. Sıvı Kromatografi Kütle Spektrometre HAZIRLAYAN

AKE Bulaşık Yıkama Makinası Kontrol Kartı Kullanım Kılavuzu Dishwasher Controller User Manual TR EN

UYGULAMA NOTU. HPLC ile Gıda Ürünlerinde Fenolik Bileşen Analizi. Yüksek Performanslı Sıvı Kromatografi HAZIRLAYAN

g Na2HPO4.12H2O alınır, 500mL lik balonjojede hacim tamamlanır.

Amino Acid Biological Fluids LC-MS/MS Analysis Kit (Plasma & Serum & Urine & Cerebrospinal Fluid)

UYGULAMA NOTU. LCMSMS ile Bebek Mamasında Multitoksin Analizi - 1. Sıvı Kromatografi Kütle Spektrometre HAZIRLAYAN

Yüz Tanımaya Dayalı Uygulamalar. (Özet)

ELDAŞ Elektrik Elektronik Sanayi ve Tic.A.Ş.

UYGULAMA NOTU. LCMSMS ile Bebek Mamasında Multitoksin Analizi - 2. Sıvı Kromatografi Kütle Spektrometre HAZIRLAYAN

Numune Kodu ve parti no

KULLANICI TARAFINDAN TESTİN DOĞRULANMASI (VERİFİKASYON) Dr. Murat Öktem Düzen Laboratuvarlar Grubu

LCMSMS ile Gıdalarda Multitoksin Analizi

AKE.ZR Yıkama Durulama Zaman Rölesi Kullanım Kılavuzu Washing and Rinse Time Relay User Manual TR EN

RTA JEL / PZR Saflaştırma Kiti

RTA DNA qpcr Probe Master Mix

Gıda Analizlerinde Toksik Madde Tayini LC-GC Aplikasyonu Tanım:

UYGULAMA NOTU. LCMSMS Sistemi ile Tekstil, Deri ve Kağıt Materyallerinde Perflor Gruplu (PFOSs) Kimyasal Bileşiklerin Tayini

Çalışmalarımız Binboğa Bal firmasında gerçekleştirilmiştir. Desteklerinden dolayı Sn. Mehmet Çürük e teşekkürlerimizi sunarız.

METOT VALİDASYONU VE VERİFİKASYONU. Sedat Abuşoğlu Konya

UYGULAMA NOTU. LCMSMS ile Gıdalarda Sentetik Boyaların Analizi (Sudan Boyaları) Sıvı Kromatografi Kütle Spektrometre HAZIRLAYAN

H48.33b FILTER DRIER SHELLS KARTUŞ KOVANLARI. H48.33b.54.1

: Shower Unit (Flat) : Kompakt Duș Ünitesi (Flat)

QMS TOPIRAMAT. İmmün testi. Simgelerin Açıklamaları TOPIRAMATE KONTROLLERİ

RTA Kandan Genomik DNA İzolasyon Kiti

QMS LAMOTRIGINE. İmmün testi. Simgelerin Açıklamaları LAMOTRİGİN KALİBRATÖRLERİ

HPLC ile Elma Suyunda HMF Analizi

Protokolü PD S Reaksiyon

GCMS ile Ambalajda Fitalat Kalıntı Analizi

BRCA 1/2 DNA Analiz Paneli

Mitokondrial DNA Analiz Paneli

Jeokimya Analizleri. Geochemical Analysis

KROM (Cr +6 ) ANALİZ YÖNTEMİ VALİDAYON RAPORU VE BELİRSİZLİK HESAPLARI

Atıksu Arıtma Tesislerinde Hava Dağıtımının Optimize Edilmesi ve Enerji Tasarrufu

BOXER. Contents TANITIM GÜVENLİK NAKİNEYİ KULLANMADAN ÖNCE, BU TALİMATLARI DİKKATLİCE OKUYUNUZ. UYARI

Seri kablo bağlantısında Windows95/98/ME'ten Windows 2000'e bağlantı Windows95/98/ME - NT4 bağlantısına çok benzer.

Performans Tabloları Yalınkat Camlar

HIGH SPEED PVC DOOR INSTALLATION BOOK

ATILIM UNIVERSITY Department of Computer Engineering

NAT Yöntem onayı. Dr. A. Arzu Sayıner Dokuz Eylül Üniversitesi Tıp Fakültesi Tıbbi Mikrobiyoloji AD

Zest. : Shower Unit (Flat) Kompakt Duş Ünitesi (Flat) Description Tan m. : 90x90. Size / Ebat (cm) : 2.5. Depth / Derinlik (cm) Weight / A rl k (kg)

ÜRÜN KULLANIM KILAVUZU

TÜM ÖĞRENCİ DEĞİŞİM PROGRAMLARI (ERASMUS-MEVLANA-FARABİ) BAŞVURU AŞAMALARI AYNI SÜRECİ TAKİP ETMEKTEDİR.

QMS LAMOTRIGINE. İmmün testi. Simgelerin Açıklamaları LAMOTRİGİN KONTROLLERİ

Do not open the exam until you are told that you may begin.

: ALG Müh. ve Tic. Ahmet Lütfü Gönül ALG Su Laboratuvarı Sok. No: 90/205 El-Sel Sitesi Alsancak İzmir

Delta Pulse 3 Montaj ve Çalıstırma Kılavuzu.

Inspection Report Muayene Raporu KARE MÜHENDİSLİK ÇEVRE TEKNOLOJİLERİ SAN. TİC. A.Ş. SOLAR WATER HUMANITARIAN PROJECT

zeytinist

LC-MSMS ile Sularda. Bromat İyonu Tayini

MAIA Pesticide MultiTest

REAKSİYON PRENSİPLERİ

Sirkülasyon Pompaları

ÇEVRESEL TEST HİZMETLERİ 2.ENVIRONMENTAL TESTS

Listeria Monocytogenes Real time PCR Tespit Kiti

Kistik Fibrozis DNA Analiz Paneli

PCC 6505 PROFILE CUTTING LINE

20- Teklif edilecek cihazlar yeni, hiç kullanılmamış cihazlar olmalıdır. 21- Sistem FDA, CE, ISO, GMP Güvenlik ve Kalite Onaylarına Haiz Olmalıdır.

Do not open the exam until you are told that you may begin.

TANIMLAR. Dr. Neriman AYDIN. Adnan Menderes Üniversitesi Tıp Fakültesi Tıbbi Mikrobiyoloji Anabilim Dalı

ERASMUS+ ÖĞRENCİ DEĞİŞİM PROGRAMI BAŞVURU SİSTEMİ KULLANIM KILAVUZU USERS GUIDE FOR THE ERASMUS+ STUDENT EXCHANGE PROGRAM APPLICATION SYSTEM

WEEK 11 CME323 NUMERIC ANALYSIS. Lect. Yasin ORTAKCI.

ATIKSULARDA FENOLLERİN ANALİZ YÖNTEMİ

Protokolü PD S Reaksiyon

ANALİTİK ÖLÇÜM YÖNTEMLERİNİN LABORATUVARA KURULMASI İLE İLGİLİ HESAPLAMALAR. Doç.Dr. Mustafa ALTINIŞIK ADÜTF Biyokimya AD 2005

KULLANMA KLAVUZU / USER'S GUIDE GTİP/HS Code:

CmpE 320 Spring 2008 Project #2 Evaluation Criteria

DOKUZ EYLUL UNIVERSITY FACULTY OF ENGINEERING OFFICE OF THE DEAN COURSE / MODULE / BLOCK DETAILS ACADEMIC YEAR / SEMESTER

Klinik Mikrobiyoloji Laboratuarında Validasyon ve Verifikasyon Kursu 12 Kasım 2011 Cumartesi Salon C (BUNIN SALONU) Kursun Amacı:

KLOR (Cl2) ANALİZ YÖNTEMİ

BVCD DÝKDÖRTGEN HAVA DAMPERÝ ( BVCD) RECTANGULAR VOLUME CONTROL DAMPER

Ege Üniversitesi Elektrik Elektronik Mühendisliği Bölümü Kontrol Sistemleri II Dersi Grup Adı: Sıvı Seviye Kontrol Deneyi.../..

Kullanım Talimatları Directions for Use. Dişhekimliğinde kullanılır. For dental use only.

attomol apo B-100 quicktype

Bebek Hamağı Kullanım Kılavuzu Baby Hammock User Guide

Yöntemin Geçerliliği (Validasyon)

A UNIFIED APPROACH IN GPS ACCURACY DETERMINATION STUDIES

Zivak Hakkında. İçerik TEK FİRMA - BENZERSİZ ÇÖZÜM

Calacatta Oro

ANALĐZ ĐÇĐN GEREKLĐ EKĐPMANLAR. Mikro pipet (1000 µl) Ependorf tüpü (1.5 ml) Cam tüp (16X100 mm)


4. HAFTA BLM323 SAYISAL ANALİZ. Okt. Yasin ORTAKCI.

Analitik Kimya. (Metalurji ve Malzeme Mühendisliği)

BOĞAZİÇİ UNIVERSITY KANDİLLİ OBSERVATORY and EARTHQUAKE RESEARCH INSTITUTE GEOMAGNETISM LABORATORY

TAV FIRINI/ANNEALING FURNACE KULLANMA KLAVUZU / USER'S GUIDE

Waspo ya Güvenebilirsiniz

C6 Mugla White

6. Seçilmiş 24 erkek tipte ağacın büyüme biçimi, ağacın büyüme gücü (cm), çiçeklenmenin çakışma süresi, bir salkımdaki çiçek tozu üretim miktarı,

C5 Mugla White

AA ile İnsan Tam Kan ve İdrar Örneklerinde Elektrotermal AA Yöntemi ile Nikel Analizi

GENİŞLEYEN GÜVENLİK KAPISI EXPANDING SAFETY GATE

econn (Supplier Portal) of the MANN+HUMMEL Group

Unlike analytical solutions, numerical methods have an error range. In addition to this

Neyzen olabilmek için en önemli özellik; sabretmeyi bilmektir. In order to be a neyzen the most important thing is to be patient.

Transkript:

Neurotransmitters in Urine LC-MS/MS Analysis Kit ZV-3033-0200-20 200 2-8 C User Manual

Table Of Contents Page 1. INTENDED USE:... 3 2. SUMMARY AND EXPLANATION:... 3 3. TEST PRINCIPLE:... 3 4. WARNING AND PRECAUTIONS:... 3 5. STORAGE AND STABILITY:... 4 6. MATERIALS SUPPLIED:... 4 7. MATERIALS REQUIRED BUT NOT SUPPLIED:... 5 8. PROCEDURE NOTES:... 5 9. LIMITATIONS OF THE PROCEDURE:... 6 10. PRE-TEST SET-UP INSTRUCTIONS:... 6 11. TEST PROCEDURE:... 7 12. QUALITY CONTROL:... 8 13. CALCULATION OF RESULTS:... 8 14. INTERPRETATION OF RESULTS:... 9 15. EXPECTED VALUES:... 9 16. LC-MS/MS PARAMETERS:... 10 17. MS SCAN PARAMETERS:... 10 18. ANALYTICAL PERFORMANCE:... 11 19. SAMPLE CHROMATOGRAMS:... 12 20. Automated Sample Preparation Method Parameters for Zivak ASP-200... 15 2

1. INTENDED USE: Quantitative LC-MS/MS analysis kit for Epinephrine, Norepinephrine, Dopamine, Serotonin, Gamma-aminobutyric acid, Glutamic Acid, Histamine, 5-Hydroxy-L- Tryptophan in urine. 2. SUMMARY AND EXPLANATION: Zivak Neurotransmitters LC-MS/MS Analysis Kit was developed for accurate analysis of Epinephrine, Norepinephrine, Dopamine, Serotonin, Gammaaminobutyric acid, Glutamic Acid, Histamine, 5-Hydroxy-L-Tryptophan in urine samples. 3. TEST PRINCIPLE: Neurotransmitters are extracted from human urine samples by using an acidic extraction and deproteinization steps. After the extraction, these analytes derivatized via reagents. Then derivatizated Neurotransmitters analyzed by LCcoupled tandem mass spectrometry. 4. WARNING AND PRECAUTIONS: For in-vitro diagnostic use only. Read the instructions carefully, before you start. In case of damage of the kit package, please contact Zivak or your supplier. Do not use expired kits and components. Please check batch no and expiry date before you start. Although the concentration of all toxic components is low, for safety reasons the sample preparation station should be placed in an exhaust hood. Protective gloves and goggles should be worn. Please take any necessary precautions to prevent infection with blood borne pathogens while working with biological fluids. Appropriate bio-safety precautions and disposal of bio-hazardous wastes should be followed. Please check the labels on reagent bottles. Reagents of this kit contain hazardous material may cause eye and skin irritations. 3

5. STORAGE AND STABILITY: Reagent 1,2,3,4 and calibrators, controls should be stored at between 2-8 C. Other all components of the kit should be stored at room temp. Urine calibrators and control must be stored at -20 C after reconstitution. All components are guaranteed until expiry date when stored at recommended temperatures and used as described in this instructions. 6. MATERIALS SUPPLIED: Order No. Volume Symbol Component ZV-3033-02R1-20 1x 30ml R1 Reagent 1, Contains deuterated internal standart ZV-3033-02R2-20 1x 50ml R2 Reagent 2, Contains base ZV-3033-02R3-20 1x 50ml R3 Reagent 3, Contains base and derivatization reagent ZV-3033-02R4-20 1x 50ml R4 Reagent 4, Contains organic extraction solvent ZV-3033-02MA-20 1x1 L MA Mobile Phase A, Contains organic solvent ZV-3033-02MB-20 1x 0,5 L MB Mobile Phase B, Contains organic solvent ZV-3033-02WB-20 1x 1 L WB Washing Solution ZS-2ML-8-1001 2x100pcs 2 ml glass autosampler vial ZS-9004-0100-00 2x100pcs 2 ml glass autosampler vial caps pre-slit ZV-3033-KK-20 1x 1pc User Guide 4

7. MATERIALS REQUIRED BUT NOT SUPPLIED: Calibrator Level 1 ZV-3033-02S1-20 1x 8ml Lyophilized Urine Calibrator Level 1 ZV-3033-02K1-20 Calibrator Level 2 1x 8ml Lyophilized Urine Calibrator Level 2 ZV-3033-02K2-20 1x 8ml Control Level 1 Lyophilized Urine Control Level 1 Zivak Neurotransmitters in Urine LC-MS/MS Analytical Column 20-200 µl pipette Pipette tips Vortex mixer 2.0 ml glass sample preparation tube (for Manual Sample Preparation) Centrifuge Bidistilled or deionised water 0,5 ml conical autosampler vial or vial insert (for Manual Sample Preparation) 8. PROCEDURE NOTES: Any inappopriate handling of samples or modification of the test procedure may influence the results. The indicated pipetting volumes, incubation times, temperatures and pretreatment steps have to be performed strictly according to the instructions. Use calibrated pipettes and devices only. Once the test is started, all steps should be completed without interruption. Make sure that required reagents, materials and devices are prepared ready at the appropriate time. Leave aside all reagents and specimens to reach room 5

temperature (18-25 C) and gently swirl each vial of liquid reagent and sample before use. Mix reagents without foaming. Avoid contamination of reagents, pipettes and wells/tubes. Use new disposable plastic pipette tips for each reagent, standard or specimen. Do not interchange the vial caps. Always keep vials closed when not used. Do not re-use wells/tubes or reagents. Incubation time affects results. All tubes or wells should be handled in the same order and time sequences. 9. LIMITATIONS OF THE PROCEDURE: Specimen collection and storage have a significant effect on the test results. Urine samples must be kept frozen or acidified with appropriate acid solution before the analysis. (6N HCl, %50 Acetic acid, Na2CO3 (crystals), Boric acid (crystals)). If the urine sample is not clear, it has to be centrifuged before sample preparation. 10. PRE-TEST SET-UP INSTRUCTIONS: Preparation of Zivak Calibrator Level-I: Add 8 ml 0,1 M HCl to urine calibrator and dissolve. After preparation, calibrator must be aliquoted into 120 µl volumes and stored at -20 C. Preparation of Zivak Calibrator Level-II: Add 8 ml 0,1 M HCl to Urine Control Level I and dissolve. After preparation, Control Level I must be aliquoted into 120 µl volumes and stored at -20 C. Preparation of Zivak Control Level I: Add 8 ml 0,1 M HCl to Urine Control Level II and dissolve. After preparation, Control Level I must be aliquoted into 120 µl volumes and stored at -20 C. 6

11. TEST PROCEDURE: Sample Pre-treatment (Automated) Take 100 L of patient sample (or calibrators and controls) into the Zivak Multitasker Sample Preparation vials Make sure that reagents and wash solution are connected to the reagent pump and purged properly. Place the vials on the MULTITASKER system tray. Note: The prepared sample is stable at 2-8 C for 24 hours. Sample Pre-treatment (Manual) Take 100 L of patient sample (or calibrators and controls) into the sample preparation tube. Add 100 L of Reagent 1 and vortex for 10 seconds. Add 200 L of Reagent 2 and vortex for 10 seconds. Add 200 L of Reagent 3 and vortex for 10 seconds. Wait for 2 minutes and vortex again for 10 seconds. Wait for 1 minute. Add 200 L of Reagent 4 and vortex for 10 seconds. After mixing wait for a minute. Centrifuge at 12.000 x rpm for 3 minutes. Take 200 L the upper phase into the autosampler vial. Inject 3 L to the LC-MS/MS system. Note: The prepared sample is stable at 2-8 C for 24 hours. 7

12. QUALITY CONTROL: The test results are only valid if the test is performed by following the instructions. Moreover the user must strictly adhere to the rules of GLP (Good Laboratory Practice) or other applicable standards/laws. All standards and kit controls have to be found within the acceptable ranges as stated on the QC Certificate. If the criterias are not met, the run is not valid and should be repeated. Each laboratory should use known samples as further controls. In case of any deviation the following technical issues should be proven: Expiry dates of (prepared) reagents, storage conditions, pipettes, devices, incubation conditions and washing methods. It is recommended to participate at appropriate quality assessment trials. 13. CALCULATION OF RESULTS: The obtained area of the standard is plotted against their concentration. The standard curve is calculated by a linear regression or a weighted linear regression function. Using computer programs, the curve is best described by a 2-point linear regression fit with linear axes. For the calculation of the regression curve, apply each signal of the standards (one obvious outlier of duplicates might be omitted and the more plausible single value might be used). The concentration of the samples can be read directly from the regression function. Sample signals above the highest standard have to be confirmed by a reference method. (Peak Area of Sample) x (Peak area of IS in Calibrator) Concentration X of Calibrator = (Peak area of Calibrator) x (Peak area of IS in the Sample) Concentration of the Sample *IS: Internal Standard Calculation for 24 hours urine: Concentration of the Sample(mg/L) x Volume of 24h Urine (L) = mg analyte / 24 hours 8

Calculation for spot urine: [ (Concentration of the Sample (mg/l) ] [ (Concentration of Creatinine g/l) ] = mg analyte creatinine g 14. INTERPRETATION OF RESULTS: Various societies recommend different Cut-Off values for repetition of the measurement and the application of confirmatory assays. Depending on the application of samples from different populations, it is highly recommended that each laboratory establishes its own range of normal values and that this distribution of values is co-ordinated with the recommendations of the responsible society of this geographic region. 15. EXPECTED VALUES: It is recommended that each laboratory establishes its own range of normal values. 9

16. LC-MS/MS PARAMETERS: Device Column Zivak Tandem Gold LC-MS/MS System Zivak Neurotransmitters in Urine LC-MS/MS Analytical Column Injection volume 3 µl Gradient 00.00 min 5 % B 07:00 min 100 % B 09:00 min 100 % B 09:01 min 5 % B 13:00 min 5 % B Flow 0,25 ml/min Ionization Mode: ESI positive CID Gas 2,4 mtorr API Nebulizing Gas 55 psi Scan Time 1,3 sec SIM Width 1,5 amu Drying Gas 35 psi Drying Gas Temp. 350 C Needle 5000V Shield 600V Capillary 50V Detector 1700 V 17. MS SCAN PARAMETERS: Analyte RT Capillary CE MH+ (m/z) MS/MS No (min) (ev) (ev) 1 Dopamine 9,4 429,3 412,0 50 8 2 Epinephrine 9,2 442,2 424,2 50 8 3 Norepinephrine 8,7 410,2 238,0 50 12 4 Serotonin 8,7 349,0 203,0 50 10 5 Gamma-aminobutyric acid 7,8 232,0 86,0 50 14 6 Glutamic Acid 8,8 318,0 172,0 50 15 7 Histamine 7,8 284,0 138,0 50 15 8 5-Hydroxy-L-Tryptophan 6,9 349,0 261,0 50 16 9 Dopamine-IS 9,4 433,2 416,2 50 8 10 Epinephrine-IS 9,2 445,2 427,2 50 8 11 Norepinephrine-IS 8,7 416,2 244,0 50 12 12 Gamma-aminobutyric acid-is 9,2 304,0 173,0 50 15 13 Glutamic Acid-IS 8,8 324,0 178,0 50 15 14 Histamine-IS 8,6 379,0 204,0 50 20 15 5-Hydroxy-L-Tryptophan-IS 8,8 346,0 257,0 50 15 No Analyte IS 10

1 Dopamine Dopamine-IS 2 Epinephrine Epinephrine-IS 3 Norepinephrine Norepinephrine-IS 4 Serotonin 5-Hydroxy-L-Tryptophan-IS 5 Gamma-aminobutyric acid Gamma-aminobutyric acid-is 6 Glutamic Acid Glutamic Acid-IS 7 Histamine Histamine-IS 8 5-Hydroxy-L-Tryptophan 5-Hydroxy-L-Tryptophan-IS 18.ANALYTICAL PERFORMANCE: No Analyte LOD (µg/l) LOQ (µg/l) Accuracy (%) Intra-Assay Precision (%CV) Inter-Assay Precision (%CV) Linearity (R 2 ) 1 Epinephrine 0.4 1.2 97.5 2.1 3.2 0.9989 2 Norepinephrine 0.6 1.8 98.5 1.7 2.6 0.9990 3 4 5 6 7 8 Dopamine Serotonin Gamma-aminobutyric acid Glutamic Acid Histamine 5-Hydroxy-L-Tryptophan 0.3 0.9 98.3 1.6 2.4 0.9985 1.33 4.39 97.2 4.72 5.5 0.991 3.30 10.89 94.6 4.21 5.3 0.995 1.33 4.39 92.8 5.42 6.4 0.994 0.83 2.74 91.5 4.26 5.1 0.986 0.65 2.15 92.7 3.57 4.7 0.996 Analytical Specificity (Cross Reactivity): No cross-reactivities were found with the typical substances tested. 11

19. SAMPLE CHROMATOGRAMS: 12

13

14

20. Automated Sample Preparation Method Parameters for Zivak ASP-200 1 - Reagent addition (Parallel) Reagent tray 2 - Reagent addition (Parallel) Reagent tray 3- Reagent addition (Parallel) Reagent tray 4- Reagent addition (Parallel) Reagent tray 3 - Vortex 4 - Injection (Serial) Analysis tray Analysis tray From 1;2;3 (Vial Position) 0 mm (Needle 4;5;6 (Vial Position) 0 mm (Needle 4;5;6 (Vial Position) 0 mm (Needle 4;5;6 (Vial Position) 0 mm (Needle 1 (Vial Position) 1 (Vial Position) 0 mm (Needle 1.5 mm (Needle 110 µl 220 µl 220 µl 220 µl 3 µl No liquid detection No liquid detection No liquid detection No liquid detection Liquid detection - active Analysis tray Analysis tray Analysis tray Analysis tray To 1 (Vial Position) 1 (Vial Position) 16 mm (Needle 16 mm (Needle 1 (Vial Position) 16 mm (Needle 1 (Vial Position) 16 mm (Needle 100 µl 200 µl 200 µl 200 µl Wash station A Wash station A Wash station A Wash station A Wash station A Loop Washing Pump 2 Pump 2 Pump 2 Pump 2 Pump 2 Pump 1 1000 µl 1000 µl 1000 µl 1000 µl 1000 µl 250 µl 5 repeat 2 repeat 2 repeat 2 repeat 1 repeat 1 repeat Pump 2 Pump 2 Pump 2 Pump 2 Pump 1 Syringes 20-2000 ms 18-2000 ms 20-3000 ms 18-3000 ms 20-3000 ms 18-3000 ms 20-3000 ms 18-3000 ms 16-2000 (speed - wait) 16-2000 (speedwait) Air segment Vortex- Centrifuge Parameters First First First First First 100 µl 200 µl 200 µl 200 µl 3 µl 2 - Reagent addition (Parallel) Reagent tray 4;5;6 (Vial Position) 0 mm (Needle Purge Before Syringe Pump Wash Place Flush Volume Repeat Time Pump 1 (250 ul) Wash station A 250 ul 1 Pump 2 (1000 ul) Wash station B 1000 ul 5 Batch 8 15

Neurotransmitters İdrar LC-MS/MS Analiz Kiti ZV-3033-0200-20 200 2-8 C Kullanma Kılavuzu 16

İÇERİK Sayfa 1. KULLANIM AMACI:... 18 2. ÖZET VE AÇIKLAMA... 18 3. TEST PRENSİBİ... 18 4. UYARILAR VE ÖNLEMLER... 18 5. SAKLAMA KOŞULLARI VE KARARLILIK... 19 6. KİT İÇERİĞİ... 19 7. KİT İÇERİĞİ DIŞINDA GEREKLİ OLAN MALZEMELER... 20 8. ÇALIŞMA PROSEDÜRÜ... 20 9. YÖNTEMDEKİ KISITLAMALAR... 21 10. TEST ÖNCESİ HAZIRLIKLAR... 21 11. NUMUNE HAZIRLIĞI... 22 12. KALİTE KONTROL... 23 13. SONUÇLARIN HESAPLANMASI... 23 14. SONUÇLARIN YORUMLANMASI... 24 15. BEKLENEN DEĞERLER... 24 16. LC-MS/MS PARAMETRELERİ... 24 17. MS SCAN PARAMETRELERİ... 24 18. ANALİTİK PERFORMANS... 25 19. ÖRNEK KROMATOGRAM... 26 20. Zivak ASP-200 İÇİN OTOMATİK METOT PARAMETRELERİ... 29 17

1. KULLANIM AMACI: İdrar numunelerinde Serotonin, Gama-aminobutirik asit, Glutamik Asit, Histamin, 5-OH-L-Triptofan, Epinefrin, Norepinefrin ve Dopamin in LC-MS/MS yöntemiyle kantitatif analizi. 2. ÖZET VE AÇIKLAMA Adrenalin (epinefrin), noradrenalin (norepinefrin) ve dopamin ölçümü kronik özellikle hipertansiyon hastalarında feokromositoma tümörü taramasında önemlidir. Ayrıca bu test feokromositoma tümörüne rastalanan ve tedavi edilen hastalarda tümörün tekrar oluşumunun kontrolünde de önemlidir. Zivak İdrarda Neurotransmitters Analiz kiti Serotonin, Gama-aminobutirik asit, Glutamik Asit, Histamin, 5-OH-L-Triptofan, Epinefrin, Norepinefrin ve Dopamin in idrar numunlerinde doğru bir şekilde analizi için geliştirilmiştir. 3. TEST PRENSİBİ Neurotransmitters metodunda asidik ekstraksiyon ve deproteinizasyon işlemleriyle idrar numunesinden ekstrakte edilir. Ekstraksiyon işleminden sonra analitler reaktifler ile türevlendirilir. Türevlenmiş katekolaminler LC-MS/MS sisteminde analiz edilir. 4. UYARILAR VE ÖNLEMLER Sadece in-vitro kullanım amaçlıdır. Profesyonel kullanım içindir. Çalışmaya başlamadan önce, kullanım kılavuzunu dikkatlice okuyunuz. Kit ambalajının zarar görmüş olması durumunda, lütfen Zivak veya bayinizle irtibata geçiniz. Son kullanma tarihi geçmiş kitleri veya bileşenlerini kullanmayınız. Kullanmadan önce seri numarasını ve son kullanma tarihini kontrol ediniz. Toksik bileşen konsantrasyonları çok düşük olmakla birlikte güvenlik amacıyla çeker ocak altında çalışılması önerilir. Çalışırken koruyucu eldiven ve gözlük kullanılmalıdır. Çalışılan kan veya biyolojik örneklerden kaynaklanabilecek enfeksiyonlara karşı gerekli her türlü önlemi alınız. Biyo-zararlı atıklar için uygun biyo-güvenlik ve atık yönetimi koşullarını sağlayınız. 18

5. SAKLAMA KOŞULLARI VE KARARLILIK Kitin bütün bileşenleri 2-8 C derece arasında saklanmalıdır. İdrar kalibratör ve kontrolleri çözüldükten sonra -20 C de muhafaza edilmelidir. Bütün bileşenler önerilen koşullarda saklandığı takdirde son kullanma tarihine kadar garantilidir. 6. KİT İÇERİĞİ Sipariş No Hacim Sembol İçerik ZV-3033-02R1-20 1x 30ml R1 Reaktif 1, ZV-3033-02R2-20 1x 50ml R2 Reaktif 2, ZV-3033-02R3-20 1x 50ml R3 Reaktif 3, ZV-3033-02R4-20 1x 50ml R4 Reaktif 4, ZV-3033-02MA-20 1x1 L MA Mobil Faz A, ZV-3033-02MB-20 1x 0,5 L MB Mobil Faz B, ZV-3033-02WB-20 1x 1 L WB Yıkama Solüsyonu ZS-2ML-8-1001 2x100 ad 2 ml cam vial ZS-9004-0100-00 2x100 ad 2 ml cam vial kesikli kapak ZV-3033-KK-20 1x 1 ad. Kullanma Klavuzu 19

7. KİT İÇERİĞİ DIŞINDA GEREKLİ OLAN MALZEMELER Calibrator Level 1 ZV-3033-02S1-20 1x 8ml İyofilize İdrar Kalibrator Level 1 ZV-3033-02K1-20 Calibrator Level 2 1x 8ml İyofilize İdrar Kalibrator Level 2 ZV-3033-02K2-20 1x 8ml Control Level 1 İyofilize İdrar Kontrol Level 1 Zivak Neurotransmitters Kolonu 20-200 µl pipet Pipette uçları Vorteks karıştırıcı 2.0 ml cam durhaim hazırlık tüpü (Manuel Numune Hazırlığı) Distile veya deiyonize su 0,5 ml konik autosampler viali or vial insert (Manuel Numune Hazırlığı) 8. ÇALIŞMA PROSEDÜRÜ Test prosedürünün yanlış ve değiştirilerek uygulanması test sonucunu etkileyebilir. Pipetleme hacimleri, inkübasyon zamanları ve hazırlık aşamaları tam olarak belirtilen miktarlarda ve talimatlara uygun bir biçimde yapılmalıdır. Teste bir kere başlandığı zaman, herhangi bir kesintiye uğramadan tamamlanmalıdır. Bunu sağlamak için gerekli reaktiflerin, maddelerin ve cihazların zamanında hazır olduğundan emin olunuz. Çalışmaya başlamadan önce bütün 20

reaktiflerin ve numunelerin oda sıcaklığına (18-25 C) gelmesini bekleyiniz, sıvı reaktifleri ve örneklerini kullanmadan önce hafifçe çalkalayarak karıştırınız. Reaktifler, pipetler ve numune hazırlık tüplerinde kirlilik ve bulaşma olmamasına dikkat ediniz. Her reaktif, standart ve numune için ayrı ve yeni pipet ucu kullanınız. Vial kapaklarını kendi aralarında değiştirmeyiniz. Kullanılmadığı zaman vial kapaklarını her zaman kapalı tutunuz. Vialler, vial kapakları, numune hazırlık tüpleri ve pipet uçları tek kullanımlıktır. İnkübasyon süreleri sonuçları etkilemektedir. Bütün numune hazırlık işlemleri belirtilen sırada ve sürede yapılmalıdır. 9. YÖNTEMDEKİ KISITLAMALAR Örnek toplama ve saklama koşullarının test sonuçları üzerindeki etkisi büyüktür. İdrar numuneleri dondurulmuş veya uygun bir asit çözeltisi ile asitlendirilmiş bir biçimde saklanmalıdır. (6N HCl, %50 Asetik asit, Na2CO3 (kristal), Borik asit (kristal)). İdrar numunesi berrak değilse, numune hazırlığından önce santrifüj edilmesi gerekmektedir. 10. TEST ÖNCESİ HAZIRLIKLAR Zivak Kalibratörün Hazırlanması : İdrar standart numunesine 2 ml 0,1 M HCl eklenip çözülür. Hazırlanan kalibratör 120 μl lik hacimlere bölünerek -20 C de saklanmalıdır. Zivak Kontrol 1 Numunesinin Hazırlanması : İdrar kontrol level 1 numunesine 2 ml 0,1 M HCl eklenip çözülür Hazırlanan kontrol numunesi 120 μl lik hacimlere bölünerek -20 C de saklanmalıdır. Zivak Kontrol 2 Numunesinin Hazırlanması : İdrar kontrol level 1 numunesine 2 ml 0,1 M HCl eklenip çözülür 21

Hazırlanan kontrol numunesi 120 μl lik hacimlere bölünerek -20 C de saklanmalıdır. 11. NUMUNE HAZIRLIĞI Numune Hazırlığı (Otomatik): 100 µl hasta numunesi (veya kalibratör ve kontroller) Zivak Multitasker Numune Hazırlama Tüpüne (Vialine) Alınır. Reaktifler ve yıkama solüsyonunun sisteme bağlandığından emin olunuz. MULTITASKER Analiz tablasına vialleri yerleştiriniz ve başlat butonuna basınız. Hazırlanmış numune 2-8 C de 24 saat boyunca stabildir. Numune Hazırlığı (Manuel): 100 µl hasta numunesi (veya kalibratör ve kontroller) durhaim cam hazırlık tüpüne alınır. 100 µl Reaktif 1 eklenir ve 10 saniye boyunca vortekslenir. 200 µl Reaktif 2 eklenir ve 10 saniye boyunca vortekslenir. 200 µl Reaktif 3 eklenir ve 10 saniye boyunca vortekslenir.5 dakika süresince beklenip tekrar 10 sn vortekslenir. 200 µl Reaktif 4 eklenir ve 10 saniye boyunca vortekslenir. 22

12000 x rpm de 3 dakika boyunca santrifüj edilir. 300 µl üst faz bir viale alınıp 3 L enjeksiyon yapılır Hazırlanmış numune 2-4 C de 24 saat boyunca stabildir. 12. KALİTE KONTROL Test sonuçları ancak verilen test talimatlarına uyulduğu takdirde geçerlidir. Kullanıcılar çalışırken GLP veya diğer kurumlar tarafından belirlenmiş olan kurallara ve standartlara bağlı kalmalıdır. Bütün standart ve kontrol değerleri kalite kontrol sertifikasında belirtilen aralıklarda olmalıdır. Değerler bu aralıkların dışında kaldığı takdirde analiz geçerli değildir ve tekrarlanmalıdır. Her laboratuvar daha ileri aşama kontroller için değeri bilinen numuneleri kullanmalıdır. Bu değerlerden sapma olması halinde reaktiflerin son kullanma tarihi, saklama koşulları, kullanılan pipetlerin doğruluğu, cihazlar, inkübasyon koşulları ve yıkama metotları gibi teknik detayların doğruluğundan emin olunmalıdır. Ayrıca uygun dış kalite kontrol programına üye olunması önerilir. 13. SONUÇLARIN HESAPLANMASI Standardın alanına karşı standart konsantrasyonu grafiği çizilir. Standart eğrisi lineer regresyon veya ağırlıklı lineer regresyon fonksiyonu ile hesaplanır. Regresyon eğrisini hesaplamak için, her bir standarda karşılık gelen sinyal değeri grafiğe alınır. Bilinmeyen konsantrasyonu regresyon eğrisinin fonksiyonundan direk olarak okunabilir. Standart eğrisinin üzerinde kalan konsantrasyon değerleri referans bir metot ile teyit edilmelidir. 23

14. SONUÇLARIN YORUMLANMASI Farklı toplumlarda farklı Cut-Off değerleri belirlenmelidir. Farklı toplumlardaki hasta numuneleri için yapılan çalışmalara bağlı olarak, her laboratuvarın kendi normal değerlerini belirlemesi önemle tavsiye edilir ve bu değerlerin dağılımı o coğrafi bölgedeki sorumlu kurumun önerdiği değerler ile uyumlu olmalıdır. Tanı ve tedavi aşamalarında bu analizlerin sonuçları klinik gözlemler ve tanı testleri ile desteklenmelidir. 15. BEKLENEN DEĞERLER Her laboratuvarın kendi normal değerlerini belirlemesi önemle tavsiye edilir. Cihaz Kolon 16. LC-MS/MS PARAMETRELERİ Zivak Tandem Gold LC-MS/MS Sistemi Zivak-Neurotransmitters Kolonu Enjeksiyon Hacmi 3 µl Gradiyant 00.00 min 5 % B 07:00 min 100 % B 09:00 min 100 % B 09:01 min 5 % B 13:00 min 5 % B Akış 0,25 ml/min Iyonizasyon Modu: ESI positive CID Gaz 2,4 mtorr API Nebulizing Gaz 55 psi Tarama Süresi 1,3 sec SIM Width 1,5 amu Drying Gaz 35 psi Drying Gaz Sıcaklığı 350 C İğne Voltajı 5000V Shield voltajı 600V Kapiler voltaj 50V Dedektör 1700 V 17. MS SCAN PARAMETRELERİ Capillary CE Analit RT (dk) MH+ (m/z) MS/MS No (ev) (ev) 1 Dopamin 9,4 429,3 412,0 50 8 2 Epinefrin 9,2 442,2 424,2 50 8 24

3 Norepinefrin 8,7 410,2 238,0 50 12 4 Serotonin 8,7 349,0 203,0 50 10 5 Gama-aminobutirik asit 7,8 232,0 86,0 50 14 6 Glutamik Asit 8,8 318,0 172,0 50 15 7 Histamin 7,8 284,0 138,0 50 15 8 5-OH-L-Triptofan 6,9 349,0 261,0 50 16 9 Dopamin-IS 9,4 433,2 416,2 50 8 10 Epinefrin-IS 9,2 445,2 427,2 50 8 11 Norepinefrin-IS 8,7 416,2 244,0 50 12 12 Gama-aminobutirik asit -IS 9,2 304,0 173,0 50 15 13 Glutamik Asit -IS 8,8 324,0 178,0 50 15 14 Histamin-IS 8,6 379,0 204,0 50 20 15 5-OH-L-Triptofan-IS 8,8 346,0 257,0 50 15 No Analyte IS 1 Dopamin Dopamin-IS 2 Epinefrin Epinefrin-IS 3 Norepinefrin Norepinefrin-IS 4 Serotonin 5-OH-L-Triptofan-IS 5 Gama-aminobutirik asit Glutamik Asit -IS 6 Glutamik Asit Histamin-IS 7 Histamin 5-OH-L-Triptofan-IS 8 5-OH-L-Triptofan Dopamin-IS 18. ANALİTİK PERFORMANS No Analit LOD LOQ (µg/l) (µg/l ) 25 Doğruluk (%) Intra- Assay Precision (%CV) Inter- Assay Precision (%CV) Linearit y (R 2 ) 1 Epinefrin 0.4 1.2 97.5 2.1 3.2 0.9989 2 Norepinefrin 0.6 1.8 98.5 1.7 2.6 0.9990 3 Dopamin 0.3 0.9 98.3 1.6 2.4 0.9985 4 Serotonin 1.33 4.39 97.2 4.72 5.5 0.991 5 Gama-aminobutirik asit 3.30 10.89 94.6 4.21 5.3 0.995 6 Glutamic Asit 1.33 4.39 92.8 5.42 6.4 0.994 7 Histamin 0.83 2.74 91.5 4.26 5.1 0.986 8 5-OH-L-Tryptofan 0.65 2.15 92.7 3.57 4.7 0.996

Analitik Seçicilik (Çapraz reaksiyon): Analitler arasında çapraz reaksiyon veya bir interferans etkisi gözlenmemiştir. 19. ÖRNEK KROMATOGRAM 26

27

28

20. Zivak ASP-200 İÇİN OTOMATİK METOT PARAMETRELERİ 1 - Reagent addition (Parallel) Reagent tray 2 - Reagent addition (Parallel) Reagent tray 3- Reagent addition (Parallel) Reagent tray 4- Reagent addition (Parallel) Reagent tray 3 - Vortex 4 - Injection (Serial) Analysis tray Analysis tray From 1;2;3 (Vial Position) 0 mm (Needle 4;5;6 (Vial Position) 0 mm (Needle 4;5;6 (Vial Position) 0 mm (Needle 4;5;6 (Vial Position) 0 mm (Needle 1 (Vial Position) 1 (Vial Position) 0 mm (Needle 110 µl 220 µl 220 µl 220 µl 3 µl 1.5 mm (Needle To No liquid detection Analysis tray 1 (Vial Position) 16 mm (Needle No liquid detection Analysis tray 1 (Vial Position) 16 mm (Needle No liquid detection Analysis tray 1 (Vial Position) 16 mm (Needle No liquid detection Analysis tray 1 (Vial Position) 16 mm (Needle 100 µl 200 µl 200 µl 200 µl Liquid detection - active Wash station A Wash station A Wash station A Wash station A Wash station A Loop Washing Pump 2 Pump 2 Pump 2 Pump 2 Pump 2 Pump 1 1000 µl 1000 µl 1000 µl 1000 µl 1000 µl 250 µl 5 repeat 2 repeat 2 repeat 2 repeat 1 repeat 1 repeat Pump 2 Pump 2 Pump 2 Pump 2 Pump 1 Syringes 20-2000 ms 18-2000 ms 20-3000 ms 18-3000 ms 20-3000 ms 18-3000 ms 20-3000 ms 18-3000 ms 16-2000 (speed - wait) 16-2000 (speedwait) Air segment Vortex- Centrifuge Parameter s First First First First First 100 µl 200 µl 200 µl 200 µl 3 µl 2 - Reagent addition (Parallel) Reagent tray 4;5;6 (Vial Position) 0 mm (Needle Purge Before Syringe Pump Wash Place Flush Volume Repeat Time Pump 1 (250 ul) Wash station A 250 ul 1 Pump 2 (1000 ul) Wash station B 1000 ul 5 Batch 8 29