SİSPLATİN NEFROTOKSİSİTESİNİN ÖNLENMESİ VE TEDAVİSİNDE PROXEED PLUS IN ETKİSİ; DENEYSEL RAT ÇALIŞMASI Elif Ece Doğan 1, Mehmet Şerif Aydın 2, Eray Metin Güler 3, Abdurrahim Koçyiğit 3, Mesut Şeker 4, Rümeyza Kazancıoğlu 5 1 Bezmialem Vakıf Üniversitesi Tıp Fakültesi İç Hastalıkları Ana Bilim Dalı 2 Medipol Üniversitesi Rejeneratif ve Restoratif Bilimler Araştırma Merkezi 3 Bezmialem Vakıf Üniversitesi Tıp Fakültesi Biyokimya Ana Bilim Dalı 4 Bezmialem Vakıf Üniversitesi Tıp Fakültesi Onkoloji Bilim Dalı 5 Bezmialem Vakıf Üniversitesi Tıp Fakültesi Nefroloji Bilim Dalı
Sisplatin «Penicillin of Cancer» -Michele Peyrone, 1845 -Alfred Werner, 1893 -Barnett Rosenburg, 1965 Rosenberg B, VanCampl, Trosko J, Mansour V. Platinum compounds: A new class of potent antitumour agents. Nature 1969; 222: 385 386 2
Sisplatinin Kısıtlayıcıları Tümör hücre direnci Nefrotoksisite (doza bağımlı) Ototoksisite Nörotoksisite Emetojenite dos Santos NA, Carvalho Rodrigues MA, Martins NM, dos Santos AC. Cisplatin-induced nephrotoxicity and targets of nephroprotection: an update. Arch Toxicol 2012;86:1233-50. 3
Sisplatin Nefrotoksisitesi/ Patogenez Nefrotoksisite mekanizmaları Oksidatif stres Apoptoz Nekroz İnflamasyon Fibrozis Mitokondriyal hasar Yao X, Panichpisal K, Kurtzman N, Nugent K. Cisplatin nephrotoxicity: A review. Am J Med Sci.2007;334:115 124 4
Sisplatin Nefrotoksisitesi/ Histopatoloji Sitoplazmik vaküolizasyon Apopitoz Mitokondriyal şişme Nükleer solukluk Tübüler nekroz İnterstisyel ve periglomerüler fibrozis İnterstisyel inflamasyon Aleisa AM, Al-Majed AA, Al-Yahya AA, et al. Reversal of cisplatininduced carnitine deficiency and energy starvation by propionyl-l-carnitine in rat kidney tissues. Clin Exp Pharmacol Physiol 2007; 34: 1252-1259 5
Sisplatin Nefrotoksisitesinin Önlemesi Sıvı desteği Mineraller Antioksidan moleküller 6
Proxeed Plus Proxeed plus, sperm üretimi, gelişimi ve matürasyonunu sağlayan bir diet desteğidir. Yaklaşık 10 yıldır bu endikasyonda kullanılmaktadır. 7
Proxeed Plus Proxeed Plus ın içeriği; -L-carnitine Fumarate (1,7 gr) -Acetyl-L-Carnitine (0,5 gr) -Selenyum (50 mcg) -Çinko (10 mg) -Koenzim Q10 (20 mg) -Vitamin C (90 mg) -Folik Asit (200 mcg) -Vitamin B12 (1,5 mcg) 8
Proxeed Plus Bir gıda desteği olan Proxeed Plus ın içeriğindeki maddelerin birçoğu sisplatine bağlı nefrotoksisitede etkili bulunmuştur. Proxeed Plus; uzun süredir kullanılıyor olması, içeriğindeki moleküllerin ciddi antioksidan ve sitoprotektif etkileri sayesinde sisplatin nefrotoksisitesinde etkili bir medikal uygulama olabileceğini düşünmekteyiz. 10
Materyal ve Metod Deney Hayvanlarının Grupları Grup 1 (n=8): Sisplatin (7,5 mg/kg, i. p.) tek doz Grup 2 (n=8): Sisplatin (7,5 mg/kg, i. p.) uygulamasından 15 gün önce Proxeed Plus (150mg/kg/gün) her gün gavaj yoluyla uygulandı Grup 3 (n=8) : Sisplatin (7,5 mg/kg, i. p.) uygulamasının öncesi ve sonrasında15 gün boyunca Proxeed Plus (150mg/kg/gün) gavaj yoluyla her gün uygulandı. Grup 4 (n=8): 15 gün boyunca Proxeed Plus (150mg/kg/gün) gavaj yoluyla uygulandı. Grup 5 (n=8): Serum fizyolojik (1 cc, i. p.) 15 gün boyunca günde tek doz olarak uygulandı. 11
12
Değerlendirme Parametreleri Biyokimyasal Değerlendirme COMET ASSAY (Alkali Mononükleer Hücre Elektroforezi) Yöntemi İle DNA HASAR Tayini TAK TOS OSI Proinflamatuar Sitokinler (TNF-alfa, IL-1 beta, IL-6) Antiinflamatuar Sitokinler (IL-10) BUN Kreatinin 13
Değerlendirme Parametreleri Histopatolojik Değerlendirme Hemotoksilen Eozin ile İnceleme Tübüler dejenerasyon, epitel ve fırça kenar kaybı, tübüler dilatasyon, vakuolizasyon, nekroz ve intratübüler birikinti yaygınlığı Terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dutp nick-end labeling (TUNEL) boyama Anti-Caspase3 14
Bulgular Grup 1 (SİS): 64.97 ± 8.69 Grup 2 (PP+SİS): 38.05 ± 6.93 Grup 3 (PP+SİS+PP): 18.77 ± 5.37 Grup 4 (PP): 16.34 ± 5.02 Grup 5 (KNT): 15.97±4.61 15
Bulgular Grup 1 (SİS): 1.63 ± 1.07 Grup 2 (PP+SİS): 0,88 ± 0.31 Grup 3 (PP+SİS+PP): 0.56 ± 0.21 Grup 4 (PP): 0.51 ± 0.11 Grup 5 (KNT): 0.48±0.13 16
Bulgular Grup 1 (SİS): 0.68 ± 0.12 Grup 2 (PP+SİS): 0.77 ± 0.21 Grup 3 (PP+SİS+PP): 0.86 ± 0.13 Grup 4 (PP): 0.88 ± 0.11 Grup 5 (KNT): 0.91 ±0.10 17
Bulgular Grup 1 (SİS): 16.414±2.19 Grup 2 (PP+SİS): 13.46 ±3.17 Grup 3 (PP+SİS+PP): 10.17 ± 1.93 Grup 4 (PP): 10.02± 4.13 Grup 5 (KNT): 9.91±1.87 18
Bulgular Grup 1 (SİS): 25.08± 9.76 Grup 2 (PP+SİS): 16.51 ± 7.58 Grup 3 (PP+SİS+PP): 12.11 ± 5.17 Grup 4 (PP): 11.73± 4.5 Grup 5 (KNT): 11.11±2.86 19
Bulgular Grup 1 (SİS): 61,94±14.97 Grup 2 (PP+SİS): 53.35 ±10.09 Grup 3 (PP+SİS+PP): 21.46 ± 5.46 Grup 4 (PP): 19.02 ± 6.90 Grup 5 (KNT): 18.33±4.99 20
Bulgular Grup 1 (SİS): 1234.90 ± 89.36 Grup 2 (PP+SİS): 933.12 ± 67.78 Grup 3 (PP+SİS+PP): 610.502 ± 73.09 Grup 4 (PP): 591.58 ± 65.36 Grup 5 (KNT): 552.39± 48.13 21
Bulgular Grup 1 (SİS): 1119.74± 82.9 Grup 2 (PP+SİS): 897.42 ± 62.84 Grup 3 (PP+SİS+PP): 595.28 ± 57.41 Grup 4 (PP): 552.46 ± 42.17 Grup 5 (KNT): 505.65 ± 41.10 22
Bulgular Grup 1 (SİS): 1019.85 ± 75.70 Grup 2 (PP+SİS): 858.90 ± 80.86 Grup 3 (PP+SİS+PP): 670.52 ± 59.82 Grup 4 (PP): 612.60 ± 75.73 Grup 5 (KNT): 591.89 ± 45.28 23
Bulgular Grup 1 (SİS): 486.45 ± 60.32 Grup 2 (PP+SİS): 701.97 ± 38.43 Grup 3 (PP+SİS+PP): 854.63 ± 88.92 Grup 4 (PP): 785.81 ± 62.01 Grup 5 (KNT): 533.57 ± 48.79 24
Bulgular Histolojik İnceleme Kontrol (A) ve PP (B) gruplarında böbrek dokusu normal morfolojisinde görülmektedir. 25
Bulgular Histolojik İnceleme SİS grubunda (C) tübüler dilatasyon, epitel döküntüsü, fırça kenar kaybı, intrasitoplazmik vakuolizasyon ve intratübüler hiyalin madde birikimi görülmektedir. SİS+PP (D) ve PP+SİS+PP (E) gruplarında hasarın iyileştiği ve kontrol grubuna benzer bir morfolojide oldukları görülmektedir 26
Bulgular 27
TUNEL Boyama 28
Bulgular TUNEL Boyama 29
CASPASE-3 30
Bulgular CASPASE-3 31
32
Tartışma Yakın zamanda Nematbakhsh ve ark.nın sisplatin nefrotoksistesini önlemede koruyucu ajanlar üzerine olan bir çalışmasında şu sonuca ulaşılmıştır : «Sisplatin indüklü nefrotoksisite sadece oksidatif stresi artırmaz aynı zamanda renal hemodinamikleri, eser element seviyelerini, reaktif antioksidan komponentlerini vb. birçok durumu etkiler.» Bundan dolayı tüm problemleri çözecek tek bir antioksidan destek bulunmamaktadır. Nematbakhsh M, Pezeshki Z, Eshraghi Jazi F et al. Cisplatin Induced Nephrotoxicity; Protective Supplements and Gender Differences Asian Pac J Cancer Prev. 2017;18(2):295-314. 33
Tartışma Proxeed Plus içeriğindeki farklı moleküller sayesinde kombine etki oluşturarak sisplatine bağlı nefrotoksisiteyi önlemektedir. Sisplatin uygulamasından önce uygulanan Proxeed Plus ın etkinliği kısıtlı olmakla birlikte mevcuttur. PP+SIS uygulamasında kısmi etkili olduğu biyokimyasal ve histopatolojik verilerle gösterildi. Ancak PP+SIS+PP uygulamasına göre etkisi kısıtlı kalmaktadır. PP+SIS+PP uygulamasında daha uzun süre Proxeed Plus uygulanmasına bağlı etkinliğinin artmış olduğunu düşünmekteyiz. 34
Sonuç Çalışmamızda farklı özelliklere sahip molekül (Karnitin, Koenzim Q10, Vitamin C, Vitamin B12, Folik asit) ve mineralleri (Selenyum, Çinko) bünyesinde kombine halde bulunduran Proxeed Plus ın sisplatin nefrotoksisitesine etkisi incelendi. Proxeed Plus ın sisplatinin indüklediği nefrotoksisiteyi önlediği biyokimyasal ve histolojik parametrelerle gösterilmiştir. 35
Teşekkür ederim 36