UYGULAMA NOTU Sıvı Kromatografi Kütle Spektrometre M033 LCMSMS ile Bebek Devam Formülleri ve Süt Tozunda Melamin Analizi HAZIRLAYAN Dr. Engin Bayram Ant Teknik Cihazlar Ltd. Şti.
KONU: Bebek devam formülü ve süt tozunda melaminin LCMSMS ile analizi. ÇALIŞMANIN AMACI: Bebek devam formülü ve süt tozunda, basit ekstraksiyon ile melamin analizi. Kjeldahl metodu, toplam azot miktarı ölçümü üzerinden numunenin protein içeriğini tayin eder. Melamin molekülü ise içerdiği yüksek miktarda azot (%66) nedeniyle adı geçen yöntem ile analiz edilecek numuneye katılması durumunda, numunenin düşük protein içeriğinin normal/yeterli olarak tayin edilmesini sağlayabilir. Bu nedenle de melamin, toplam protein tayini ile kalite kontrol analizi gerçekleştirilecek bir gıda numunesinde katkı maddesi olarak kullanılarak tağşişe imkan tanır. Melaminin gıda kalite kontrol analizinde önemli bir parametre haline gelmesi ise 2007 yılında, bir uzak doğu ülkesinde toplu bebek ölümlerinin sebebinin araştırılması ve bebek mamalarında yüksek oranda melamin ve ya analoglarının (siyanürik asit vb.) tespit edilmesi ile gerçekleşmiştir. METOD VE MATERYALLER: Numune hazırlık: Gerçek numuneler: Formülasyon (Devam Sütü) üretici tarafından önerilen şekilde hazırlanır (1 ölçek toz formülasyona 30mL su eklenir) ve buradan 1mL alınarak numune üzerine 5mL Su (2,5%(v/v) formik asit içeren) eklenir, vortekslenen karışım üzerine 14mL Asetonitril (2,5%(v/v) formik asit içeren) eklenerek son karışım, shakerda 30 dakika çalkalanır, santrifüj edilir (4000rpm, 10 dakika) ve 0,22um lik PTFE şırınga ucu filtreden süzülerek sisteme enjekte edilir. Süt tozunda ise herhangi bir ön seyreltme yapılmadan doğrudan ekstraksiyon işlemine başlanır. Standard hazırlık: Sertifikalı analit standardları, Melamin içermeyen devam sütü ekstraktı ile, uygun derişimlere seyreltilir. ANALİTİK KOŞULLAR: MS Koşulları; Cihaz Model Block Heater Temp DL Temp Nebulizing Gas Drying Gas Source/Polarity : Shimadzu : LCMS-8040 TQ : 400 C : 250 C : 2.5 L/min : 15 L/min : ESI(+) MRM Transitions ID# Name m/z Ref. Ions 1 127.30>60.00 127.30>110.00
LC Koşulları; Cihaz Model Kolon Kolon Fırını Sıcaklığı Mobil Phase A Mobil Phase B Akış Hızı Enjeksiyon Hacmi : Shimadzu : Nexera XR UHPLC : Merck SeQuant Zic-HILIC (3.5um, 100x3.0mm) : 40 C : Asetonitril:Su (95:5, 0.1% Formic Acid) : Asetonitril:Su (50:50, 20mM Ammonium Formate : 0.2 ml/min (Gradient Program) : 1 ul Gradient Koşulları;
SONUÇLAR VE DEĞERLENDİRME: Değerlendirmeler: Çalışmada, bebek devam sütü ve süt tozu matriksleri seçilmiş ve her iki matrikste de matriks matched (MM) kalibrasyon eğrileri çizilerek geri kazanım çalışması yapılmıştır. Kalibrasyon Çözeltisi (Kantitatif Kromatogramlar) Bebek devam sütü (10ug/L) (x100) 7,0 6,0 5,0 4,0 3,0 2,0 1,0 0,0 1,1 (x1,000) 1,0 0,9 Süt Tozu (10ug/L) 0,8 0,7 0,6 0,5 0,4 0,3 0,2 0,1 0,0 Melamin Kalibrasyon Eğrisi (Matrix-Matched, 5-50ug/L) Devam Sütü Melamin Kalibrasyon Eğrisi (Matrix-Matched, 5-50ug/L) Süt Tozu
Örnek Sonuçları (Spike Miktarı: 1mg/L) Matriks Geri Kazanım(%) Kromatogram 2,50 (x1,000) 2,25 2,00 1,75 1,50 Devam Sütü 91.2 1,25 1,00 0,75 0,50 0,25 0,00 (x1,000) 1,75 1,50 1,25 Süt Tozu 84.4 1,00 0,75 0,50 0,25 0,00 8,0 8,5 Kaynakça High Sensitivity Quantitation Method of Dicyandiamide And in Milk Powders by Liquid Chromatography Tandem Mass Spectrometry, Shimadzu Corp. App. Note, No: PO-CON1459E, ASMS 2014. Bu Aplikasyon Notu uygulamanın gerçekleştirildiği tarihe ait bilgiler ışığında oluşturulmuştur. Bu yayında yer alan bilgilerin referans gösterilerek başka bir yerde kullanılması Ant Teknik in iznine tabidir. Aplikasyon Notu Ant Teknik tarafından önceden bildirilmeksizin değiştirilebilir. antteknik.com