Kullanım Talimatları SAS-3 HDL Kolesterol Katalog No: 300500 1
KULLANIM AMACI SAS-3 HDL KOLESTEROL SAS-3 HDL Kolesterol Kit bir tamponlu agaroz jel içinde yüküne göre serum lipoproteinleri ayırır. Lipoprotein bantlar daha sonra aşağıdaki reaksiyon sırasına göre kantitatif olarak kolesterol ve kolesterol esterlerini görünür hale getiren bir kolesterol reaktiflerin inkübasyonu ile görüntülenir: Anoda doğru hızla göç eden alfa bant HDL ye karşılık gelir. Sonraki grup, prebeta VLDL ye karşılık gelir ve en yavaş hareket eden beta bant hemen hemen LDL ye karşılık gelir. Koroner kalp hastalığı (CHD) ile HDL Kolesterol ilişkisi 1951 1 de Barr ve arkadaşları ve 1975 2 de Miller ve Miller tarafından rapor edildi. Castelli 3-6 ve arkadaşlarını çalışması CHD riskini belirlemede kesin laboratuvar testi olarak HDL Kolesterol değerlendirmesine odaklanmıştır. Ulusal Kolesterol Eğitim Programın (NCEP) panellerinden alınan klinik öneriler Total, HDL ve LDL Kolesteroller ve Trigliseritler ölçümlerinin doğrudan klinik laboratuarlarda yapılmasını tavsiye eder. Kolesterol içeriğine dayalı olarak doğrulanmış aterojenik lipoprotein için LDL, NCEP kılavuzunda tedavi kararlarında başlıca temeldir 7. Helena BioSciences SAS-3 HDL Kolesterol yöntemi referans yöntemler ile karşılaştırmalarda HDL kolesterolun tam ve kesin kantitatif tespiti ile majör lipoprotein sınıflarının iyi ayrımlarını gösterir. UYARILAR VE ÖNLEMLER Tüm kitler yalnızca in-vitro diyagnostikte kullanım içindir. Herhangi bir kit bileşenini ağzınızla pipetlemeyin, ağzınıza sürmeyin. Tüm kit bileşenlerinin işlemi sırasında eldiven giyin. Risk, güvenlik koşulları ve atım bilgisi için ürün güvenlik kağıdına başvurun. BİLEŞENLER 1 - SAS-3 HDL Kolesterol Jel (x10) Agaroz koruyucu olarak sodyum azidli bir Barbital tamponu içerir. Paket içindeki jel kullanım için hazırdır. 2
2 - Kolesterol Reaktif (10x 2.5ml) Yukarı gösterilen reaksiyon sırasına göre kolesterolün tanımlanması için gerekli bileşenleri içerir. Çözdürme talimatı için ADIM-ADIM PROSEDÜRE bakın. 3 - Kolesterol Dilüent (1x 27ml) Koruyucu ve Triton X-100 içerir. Dilüent paket içinde kullanıma hazırdır. 4 - Diğer Kit Bileşenleri Her kit kullanım talimatları ve 10 jeli tamamlamak için yeterli miktarda kurutma kağıdı C içerir. SAKLAMA VE RAF ÖMRÜ 1 - SAS-3 Kolesterol Jel Jeller 15-30 derecede saklanmalıdır ve paket üzerinde belirtilen son kullanma tarihine kadar stabildir. DOLABA KOYMAYIN VEYA DONDURMAYIN. Jelin bozulmasını,1) jelin dondurulması kristal görünümü belirtir, 2) jelin kuruması, çatlama ve kuruluğu veya 3) bakteriyal yada fungal kaynaklı agarozun görülür kontaminasyonunu belirtir. 2 - Kolesterol Reaktif Reaktif 2...6 C de saklanmalıdır ve etiket üzerinde belirtilen son kullanma tarihine kadar stabildir. Çözünen reaktif 2...6 C de 6 saat stabildir. 3 - Kolesterol Dilüent Dilüent 2...6 C de saklanmalıdır ve etiket üzerinde belirtilen son kullanma tarihine kadar stabildir. Partiküllü madde bozulmayı gösterebilir. SAĞLANMAYAN FAKAT GEREKSİNİLEN ÖĞELER Kat. No. 310200 Numune Aplikatör Ucu (1 x 10) Kat. No. 310300 Numune Aplikatör Ucu (5 x 10) Kat. No. 210100 Tek kullanımlık numune kapları (100) Kat. No. 3100 REP Prep Kat. No. 3386 SPIFE/SAS-3 Reaktif Spreaders Destain Solüsyon: 4750ml saf su ve 250 ml glasial asedik asidi karıştırın. Ağzını sıkıca kapatarak saklayın. Saf su NUMUNE TOPLANMASI VE HAZIRLANMASI Tercih edilen numune taze toplanmış serum veya EDTA antikoagülate plazmadır. Numune 4 güne kadar 2...6 C de buzdolabında saklanmalıdır. DONDURMAYIN. Hasta hazırlama: 1) Eğer HDL Kolesterolde sadece tespit edilecek parametrelerse, hastanın aç olmasına gerek yoktur. Eğer diğer lipid değerleri belirlenecekse, o zaman hasta numune almadan önce 12-14 saat aç olmalıdır. 2) Mümkünse 3-4 hafta süreyle hiç ilaç almamalıdır. 3
3) Hasta kilosunu korumalı ve en az 1 hafta normal diyet yapmalıdır. 4) Miyokard enfarktüsü veya benzeri travmatik vakadan sonra 4-8 hafta bekleyin. Etkileyici Faktörler: 1) Heparin tedavisi lipoproteinlerin özellikle beta lipoproteinin göçündeki değişikliklere yol açabilir. ADIM-ADIM PROSEDÜR 1. Cihaza aşağıdaki parametreleri programlayın: Adım Zaman(dk:sn) Sıcaklık(derece) Voltaj Diğer Elektroforezler Numune Yükleme 00:30 21 Hız 6 Numune Uygulama 01:00 21 Hız 6* 2 aplikasyon için Numune Yükleme, Numune Uygulama tekrar edin. Elektroforez 15:00 20 400 Reaktif Uygulama 21 4 Döngü İnkübasyon 20:00 30 * SPIFE 3000 / SAS-3 için pozisyon 1 kullanılır. Boyama Boya arındırma 15:00 Dolaşım AÇIK Yıkama 15:00 Dolaşım AÇIK Kurutma 40:00 63 2. Aplikatör ucunu cihaz üzerindeki pozisyonuna yerleştirin: 3. i) SPIFE Kombo Kullanıcıları: Numune bazının uygun kuyusu içine 50μl numune pipetleyin. Buharlaşmadan numuneleri koruyun. ii) SPIFE 2000 / 3000 / SAS-3 Kullanıcıları: Tek kullanımlık uygun numune kaplarına 35μl numune pipetleyin. Buharlaşmadan numuneleri koruyun. 4. 2.5 ml Kolesterol Dilüent ekleyerek 1 şişe reaktif hazırlayın ve iyice karıştırın: i) SPIFE Kombo /2000 Kullanıcıları: aşağıdaki elektroforez kullanımı için saklayın. ii) SPIFE 3000 / SAS-3 Kullanıcıları: Reaktif çubuğunun merkezindeki yuvaya şişeyi yerleştirin. 5. Jeli paketinden çıkarın ve kaplamasını atın. 6. 2ml REP Prep i bölmenin sol tarafına boşaltın ve dikkatlice bölme içine jeli koyun, bölme içinde iğneler ile jel bağlarındaki delikleri hizalayın ve jelin altında kabarcık oluşturmamaya dikkat edin. Elektrot kollarına elektrotlar eklenir böylece jel blokları ile temasa ederler. 7. Jelin yüzeyi kurutma kağıdı C ile kurutulur, kurutma kağıdı alınır. 4
8. HDL test programını seçin ve uyarıları izleyin, numuneleri uygulayın, elektroforezi yapın ve jeli inkübe edin. 9. SPIFE Kombo /2000 Kullanıcıları: Jelin bir köşesi boyunca kolesterol şişe içeriğini dökün. Bir reaktif dağıtıcı kullanarak, homojen bir kaplama sağlamak için ileri geri iki kez yayarak jel yüzeyi üzerine reaktifi dağıtın. 10. Elektroforezi takiben, elektrotları alın ve Gel Block Remover kullanarak her iki jelin kurutucusunu alın. 11. Boyama kabı jel tutucusuna jel tutturulur. 12. Boyama ünitesinde HDL test programı seçilir ve izleyen uyarılar, Boyama, Boya arındırma ve jel kurutmadır. 13. Boyama döngüsünün sonunda, boyama alanından jeli alın. Jel şimdi incelenmek için hazırdır. SONUÇLARIN YORUMLANMASI Her bir laboratuar tek-tek bu yöntem için elde edilen normal değerlere karşı jellerin değerlendirilmesini yapmalıdır. Jeller 570 nm filtre kullanarak densitometre ile taranabilir. NCEP kurallarında tedavi kararları öncelikle LDL kolesterol düzeylerine dayalıdır 7 : 5
Sınıflandırma şemasında kabul edilen risk faktörleri yaş (erkek >45, kadın >55 yaş), erken CHD in aile öyküsü, sigara, hipertansiyon ve diyabetdir. HDL Kolesterol <35 mg/dl yüksek riskli olarak kabul edilir ve sınıflandırma bir risk faktörü olarak sayılır. HDL Kolesterol> 60 mg / dl koruyucu olarak kabul edilir ve risk faktörlerinin toplam sayısından bir çıkarılır. KALİTE KONTROL HDL Kolesterol Kontrol (Katalog No.3218) her plaka çalışmasında ve prosedürün tüm basamaklarını doğrulamak için kullanılabilir. Uygun test değerleri için sağlanan paket içeriğine bakın. REFERANS DEĞERLERİ <200mg/dL bir total kolesterol ile erkek ve kadın donörlerden 14 normal numune kullanılarak aşağıdaki normal değerler elde edilmiştir (yayınlanan bu değerler yalnızca bir kılavuzdur): PERFORMANS ÖZELLİKLERİ 1) Presizyon Duyarlılık Yükseltilmiş kolesterol örneğin seri dilüsyonları bant başına 9.7 mg/dl kolesterole eşit olacak sistemin duyarlılığını gösterdi. Doğrusallık Yükseltilmiş kolesterol örneğinin seri dilüsyonları bant başına 400 mg/dl kolesterole kadar doğrusal sistem gösterdi. BIBLIYOGRAFYA 1. Barr, D.P. et al Protein-lipid Relationships in Human Plasma, Am. J. Med., 1951 ; 11 : 480-493. 2. Miller, G.J and Miller, N.E. Plasma-High Density-Lipoprotein Concentration and Development of Ischemic Heart Disease, Lancet, 1976 ; 1 : 16-19. 3. Kannel, W.B. et al Serum Cholesterol, Lipoproteins and the Risk of Coronary Heart Disease Ann. Inter. Med., 1971 ; 74 (1) : 1-12. 4. Gordon, T. et al High Density Lipoprotein as a Protective Factor Against Coronary Artery Disease. The Framingham Study, Am. J. Med., 1977 ; 62 : 707-714. 6
5. Galen, R.S. HDL Cholesterol, How Good a Risk Factor?, Diag. Med., 1979 ; Nov/Dec : 39-58. 6. Castelli, W.P. et al. HDL Cholesterol and Other Lipids in Coronary Heart Disease The Cooperative Lipoprotein Phenotyping Study Circulation, 1977 ; 55 (5) : 767-772. 7. National Cholesterol Education Program, Second report of the expert panel on detection, evaluation and treatment of high blood cholesterol in adults (Adult Treatment Panel II). NCEP 1993. 7