TRİİODOTİRONİN (T3) ENZİM İMMUNOTEST KİTİ Katalog Numarası: 4S5 General Biologicals Corp. #6, INNOVATION FIRST ROAD, SCIENCE-BASED INDUSTRIAL PARK, HSIN CHU 377, TAIWAN, R. O. C. İnsan Serumunda Triiodotironin (T3) Kantitatif belirlemesini yapan Enzim Immunotest GBC T3 EIA da, mikrotiter kuyucuklar ikincil antikor (goat antimouse IgG) ile kaplıdır. Mikrotiter kuyucuklara belirli miktarlarda hasta serumu, mouse monoclonal anti-t3 antikorları ve T3 konjugatlı horseradish peroxidase eklenir. Inkübasyon sırasında, mouse T3 antikorları kuyucuklardaki ikincil antikorlara bağlanırlar. T3 ve enzim konjugatlı anti-t3, anti-t3 antikoru üzerindeki sınırlı sayıda bağlanma bölgesi için yarışırlar. Oda ısısında 6 dakika inkübasyondan sonra, bağlanmamış T3 konjugatlarının uzaklaştırılması için pleyt 5 kez su ile yıkanır. TMB solusyonu eklenerek oda ısısında dakika inkübe edildikten sonra mavi renk oluşumu gözlenir. Renk oluşumu 1N HCl eklenmesi ile son bulur ve oluşan rengin absorbansı 45nm de spektrofotometrik olarak ölçülür. Oluşan rengin yoğunluğu mevcut enzim miktarı ile orantılıdır ve aynı yol ile ölçülen bağlanmamış T3 standart miktarı ile ters orantılıdır. Daha sonra örnekteki T3 konsantrasyonu hesaplanır. 7-11 İN VITRO DIAGNOSTIK KULLANIM İÇIN - 8 C de saklayınız. ÖZEL VE GENEL İSIMLER GBC Triiodothyronine Enzim Immunotest KULLANIM AMACI GBC Total T3 EIA insan serumunda triiodothyronine (T3) konsatrasyonunu kantitatif olarak belirlemek için kullanılır. Bu test, hipertiroidi gibi tiroid hastalıklarında tanı koymak ve tedavi uygulayabilmek için yararlıdır. GİRİŞ Tiroid hormonları, tiroksin (T4) ve 3, 5, 3 triiodothyronine (T3) kanda plazma proteini olan tiroksin bağlayıcı globulin (TBG) ye bağlı olarak dolaşırlar 1. metabolik etkisi daha fazla olduğundan T3 konsantrasyonu T4 e göre daha düşüktür,3. Larenksin her iki tarafında tiroid kıkırdağı seviyesinde bulunan tiroid bezinden salgılanırlar. Tiroid bezi ve salgıladığı hormonlar endokrin sistemin en büyük parçalarıdır. Bunların; büyüme, farklılaşma, hücresel metabolizma, vücudun genel hormonal dengesi üzerinde, metabolik aktiviteler ve iskelet ve organ sistemlerinin gelişimde olduğu kadar güçlü ve düzenli etkileri vardır. T3, T4 ve TSH belirlenmesi tiroid hastalık tanısında önemli bir faktördür. T3 belirlenmesi; hipertiroidi tedavisi gören ve anti-tiroid ilaç tedavisine devam eden hastaların takibi açısından yararlıdır. Ayrıca ötiroid ve hipertiroid olgularının ayrımlanmasında da önemlidir 4. T3 ölçümü, yükselmiş T3 ve normal T4 seviyesine sahip tirotoksik hastalarda hipertirodinin değişkenlerini açığa çıkarır 5. T4 seviyesinde artış yokken T3 seviyesinde artış olması, önceden tedavi görmüş hastalarda tirotoksisitenin tekrar ettiğinin habercisidir. Hipertiroidin yanında, T3 seviyesi; hamile ve oral kontraseptif kullanan ya da östrojen tedavisi gören bayanlarda da yükselir. T3 ün klinik önemi, T4 seviyesi normalin altında iken sadece T3 seviyesinin normal olması açısından ötiroid hastaları için de kanıt olarak kullanılabilir. 6 TEST PRENSIBI KIT İÇERIĞI 1. Antikor-kaplı kuyucuklar (1 plate, 96 kuyucuk) Mikrotiter kuyucukları goat anti-mouse IgG ile kaplıdır.. Konsantre Enzim Konjugat (11x 1.3 ml) T3-HRPO Konjugat, TRIS buffer içeren, ph=7.6 ve ProClin- 3. 3. Enzim Konjugat Diluent (1 şişe, 13 ml) ANS, TRIS buffer içeren, ph=7.6 ve ProClin-3. 4. Referans Standart Seti (1 ml/vial) T3/T4-free içermeyen insan serumunda,.75, 1.5, 3., 6. ve 1. ng/ml triiodothyronine içeren ve ProClin-3. 5. T3 Antikor Reaktif (1 şişe, 7 ml) Fosfat bufferda mouse monoclonal anti-t3 içeren, ph=7.6 ve ProClin-3. 7. TMB Reaktif (1 şişe, 11 ml) 3, 3, 5, 5 tetramethylbenzidine (TMB), buffer solusyonunda stabilize. 8. Stop Solusyonu (1N HCl) (1 şişe, 11 ml) Seyreltilmiş hidroklorik asit içeren. KIT İÇERIĞINDE BULUNMAYAN GEREKLI MATERYALLER 1. Distile ya da deiyonize su. 5 μl, 1 μl, μl ve 1 ml pipetler 3. Tek kullanımlık pipet uçları 4. 45 nm okuma kapasiteli mikroplate okuyucu 5. Kurutma kağıdı 6. Grafik kağıdı 7. Vorteks mikser 8. Kalite kontrol materyalleri (BioRad Lyphochek Control sera gibi) UYARILAR VE ÖNLEMLER 1. ÖNLEM: Bu kit insan materyalleri içermektedir. Kaynak materyaller; FDA onaylı yöntemler ile HBsAg, HIV ½ ve HCV negatifliği açısından test edilmiştir. Fakat, hiçbir metod bu ajanların tam olarak yokluğunu garanti edemez. Bu nedenle; serum da dahil olmak üzere tüm insan kan ürünleri potansiyel enfeksiyon ajanı olarak kabul edilmelidir. Uygulamalar uluslararası güvenlik kurallarına uygun olarak yapılmalıdır. 1
. 1 N HCl ile temas etmekten kaçınınız. Cildi yakabilir ya da tahriş edebilir. Temas etmeniz halinde bol su ile yıkayın ve eğer bir rahatsızlık hissederseniz doktora başvurun. 3. Reaktifleri son kullanma tarihinden sonra kullanmayınız, birbirine karıştırmayınız ve farklı bir lot numarasına sahip kitin içindeki reaktifleri bu kit ile kullanmayınız. 4. Kullandıktan sonra reaktiflerin kapaklarını kapatınız. 5. Sodyum azid gibi katkı maddesi veya koruyucular içeren solusyonları enzim reaksiyonlarında kullanmayınız. 6. Ağızla pipetleme yapmayınız. 7. Bu kit sadece in vitro teşhis için kullanılır. SAKLAMA KOŞULLARI 1. Kiti kullanmadığınız zamanlarda -8 C de saklayınız. Son kullanım tarihi kitin üzerinde yazmaktadır.. Mikrotiter pleyti nemden korumak için kapalı poşetinde saklayınız. ÖRNEK TOPLAMA VE HAZIRLAMA 1. Kan kabul görmekte olan medikal yöntemler ile alınmalı ve serum kırmızı kan hücrelerinden ayrılmalıdır. Hemolitik, lipemik ve bulanık örneklerden kaçınınız.. Serum örnekleri için EDTA lı, heparinli ya da oksalatlı tüpler kullanılmamalıdır. 3. Örnekler ağzı kapalı tüplerde kullanım öncesinde -8 C de 48 saat saklanabilir. Örnekler kullanmadan önce - C de uzun süreli olarak (6 ay kadar) saklanabilir. Çözülmüş örnekler birkaç saat içinde vortekslenerek mutlaka kullanılmalıdır. REAKTIF HAZIRLAMA 1. Kullanmadan önce tüm reaktifleri oda sıcaklığına (18-5 C) çıkarınız.. Tüm reaktifler kullanmadan önce vortekslenmelidir. Karıştırma esnasında köpürtmeyiniz. 3. T3-HRPO Çalışma Konjugate Reaktifi Hazırlanması:.1 ml T3-HRPO Konjugat Konsantresini (11x), 1. ml T3 Konjugat Diluent (1:1 dilusyon) ile karıştırınız. Hazırlanacak seyreltilmiş konjugat miktarı örnek sayısına bağlıdır. Hazırlanan Çalışma Konjugat Reaktifi 4 C de 4 saat saklanabilir. TEST PRENSIBI 1. Yeterli sayıda kuyucuk ayırınız. Örnek tanımlaması için veri sayfası hazırlayınız.. Uygun kuyucuklara standartlar, örnekler ve kontrollerden 5μL ekleyiniz. 3. Herbir kuyucuğa 5 μl T3 Antikor Reaktifi ekleyiniz. 3 saniye iyice karıştırınız. 4. Herbir kuyucuğa 1 μl Çalışma Konjugat Reaktifi ekleyiniz. 3 saniye iyice karıştırınız. 3. ve 4. aşamalarda tamamen karışmaları önemlidir. 5. Pleyti oda ısısında (18-5 C) 6 dakika inkübe ediniz. 6. Pleyti tersyüz ederek içeriğini atık kabına dökünüz. 7. Distile ya da deiyonize su ile 5 kez yıkayarak suyu atık kabına boşaltınız. (Musluk suyu kullanmayınız.) 8. Pleyti tersyüz ederek sert bir şekilde kurutma kağıdına vurunuz ve tüm kalan su damlacıklarını uzaklaştırınız. 9. Herbir kuyucuğa 1 μ L TMB Reaktifi ekleyiniz. 5 saniye dikkatlice karıştırınız. 1. Pleyti oda ısısında ve karanlıkta dakika bekletiniz. 11. Herbir kuyucuğa reaksiyonu durdurmak için 1 μ L Stop Solusyonu ekleyiniz. 1. 3 saniye dikkatlice karıştırınız. Tüm mavi renkli olanların sarı renge dönüşmesini sağlayana kadar! 13. Absorbanslarını mikroplate okuyucu ile 15 dakika içinde 45nm de okuyunuz. SONUÇLARIN DEĞERLENDIRILMESI 1. Referans standartlar, kontroller ve örneklerin absorbans değerlerini (OD 45 ) ölçünüz.. Dikey eksende absorbans ve yatay eksende konsantrasyon olacak şekilde, doğrusal grafik kağıdına, ng/ml olan konsantrasyonlara karşı herbir ortalama referans standartları gözönüne alınarak standart eğrisi (standard curve) çiziniz. 3. Herbir örneğin ortalama absorbans değerini kullanarak, standart eğrisinden ng/ml olarak T3 konsantrasyonlarını belirleyin.tecrübelerinize ve/veya bilgisayar kapasitenize bağlı olarak, diğer yöntemlerle de verileri elde edebilirsiniz. 4. Herbir seyreltilmiş örnek, uygun dilusyon faktörleri ile çarpılmalıdır. PROSEDÜR NOTLARI 1. Manuel Pipetleme: Herbir test çalışması için 3 kuyucuktan fazla kullanmamanız ve çok kananllı pipet ile çalışmanız tavsiye edilir.. Otomatik Pipetleme: Her bir test çalışması için 96 kuyucuklu tam plate kullanılabilir. Ayrıca, tüm standartlar, örnekler ve kontrollerin pipetlemelerinin 3 dakika içinde bitirilmesi önerilir. 3. Tüm standartlar, örnekler ve kontroller aynı anda çalışılmalıdır. 4. Stop Solusyonu eklendikten sonra 15 dakika içinde kuyucukların spektrometrede okutulması önerilir. CIHAZ KULLANIMI Absorbans ölçümü için mikroplate okuyucusunun 1 nm ya da daha az band aralığına ve 45nm dalgaboyunda dan OD ye kadar ya da daha fazla optik densite aralığına sahip olması gereklidir.
TEST KALIBRASYONU T3 standartları, Diagnostic Products Corporation s Total T3 Coat-A- Count RIA testine karşı kalibre edilmiştir. Bu kalibrasyonun doğruluğu 1 ± 5%. Bu nedenle, hasta örneklerinin GBC Total T3 Eia testi ile doğruluğu ± 5% değişkenlik göstermektedir. STANDARD EĞRI ÖRNEĞI Aşağıda, Y-ekseninde tipik standart çalışması ile 45 nmde okunan optik dansiteler, X-ekseninde total T3 konsantrasyonu olacak şekilde bir örnek gösterilmiştir. NOT: aşağıdaki standart eğrisi sadece örnek olması için çizilmiştir ve çalışmakta olduğunuz bilinmeyen örneklerin hesaplanmasında kullanılmamalıdır. Herbir laboratuvar, herbir çalışma için kendi bilgilerini ve standart eğrisini hazırlamalıdır. Ayrıca; absorbans (45nm) değerleri farklı laboratuvarlarda farklı oda ısılarında inkübasyonlar ile değişkenlik göstermektedir. Absorbans (45nm) 3,5 1,5 1,5 Total T3 Absorbans (45nm)..685.75.381 1.5.8 3. 1.5 6..99 1..518 5 1 15 T3 Konsantrasyonu (ng/ml) BEKLENEN DEĞERLER GBC Total T3 EIA ile bir çalışmada, bir coğrafi bölgede bulunan 41 hipotiroid, 64 ötiroid ve 49 hipertiroid hastası (hastane laboratuvar analizleri ile belirlenen) kullanılmıştır. Test edilen örnekler içinde en düşük ve en yüksek hasta değerleri.14 ng/ml-6. ng/ml arasındadır ve aşağıdaki dağılımı göstermektedir: Hipotiroid: Ötiroid: Hipertiroid: <.8 ng/ml.8 1.9 ng/ml >1.9 ng/ml Bu değerler, diğer ticari üreticilerin önerdikleri değerler ile uyum sağlamaktadır. Genelde, serum total T3 seviyesi, thyroxine bağlayıcı globulinin (TBG) serumdaki seviyesi ile aynı düzeydedir. Yükselmiş T3 seviyesine yerine koyma tedavisi gören hipotiroid hastalarında rastlanabilir. 13,14 Yetersiz iodin emilimi serum T3 seviyesini yükseltebilir. 15 T3 seviyesi kordon kanında ve yaşlı kişilerde normalden düşüktür. 6,17. Laboratuvarların, coğrafik ve populasyon farklarına göre test ettikleri hastalara spesifik değerler oluşturmaları önerilir. Aşağıdaki şartlar ve tedavilere göre TBG seviyeleri değişebilir 18 : Increased serum TBG Decreased Serum TBG -Hamilelik -Androjenler -Östrojen Tedavisi (oral -Krtikosteroidler Kontraseptifleri içeren) -Anabolik steroidler -Fenotiyazinler -Aktif akromegali -Viral hepatit -Nefritik sendromlar -Akut aralıklı porfirya -Stress, major hastalıklar, -Miksödem ya da cerrahi -Irsi nedenler -Malnutrisyon (kötü beslenme) PERFORMANS ÖZELLIKLERI 1. Doğruluk Istatistik bir çalışma ile GBC ve Abbott AxSym total T3 kitleri karşılaşmasında 67 hasta örneği (aralık =.3 5.9 ng/ml) kullanılmış ve aşağıdaki sonuçlar bulunmuştur: N = 67 Korelasyon katsayısı =.96 Eğim=.9 Kesişme = -.9 GBC ortalaması = 1.4 ng/ml Abbott ortalaması =.91 ng/ml GBC ve MonoBind Total T3 kiti karşılaştırması yapan başka bir çalışmanın sonuçları (n = 8, aralık =.14 6. ng/ml) aşağıda verilmiştir: N = 8 Korelasyon katsayısı =.993 Slope = 1.4 Kesişme = -.84 GBC ortalaması = 1.1 ng/ml Monobind ortalaması = 1.13 ng/ml. Duyarlılık GBC total T3 testi duyarlılığı ng/ml standart absorbansın 95% güvenli limitlerinden hesaplanan T3 düşük konsantrasyonu olarak tanımlanmıştır. Bu metod. ng/ml alt sınıra kadar güvenli bir şekilde T3 konsantrasyonunu belirlemektedir. 3. Kesinlik a. Çalışma İçi Kesinlik Çalışma içi kesinlik, bir test içinde 3 farklı kontrol serumunun tekrarlanan kararlılığı ile tanımlanmıştır. Serum Örneği 1 3 Tekrar Sayısı Ortalama T3.85.48 4.41 Standard Deviasyon.8.1.14 Varyasyon Katsayısı (%) 9.6% 4.1% 3.% b. Çalışmalar Arası Kesinlik Çalışmalar arası kesinlik, tek tek kalibre edilmiş testlerde üç farklı serum ölçülerek tanımlanmıştır. Serum Örneği 1 3 3
Tekrar Sayısı Ortalama T3.79.53 4.1 Standard Deviasyon.8.8.6 Varyasyon Katsayısı (%) 1.3% 3.% 1.4% 4. Düzeltme ve Doğrusallık Çalışmaları a. Düzeltme T3 seviyesi bilinen çeşitli hasta serum örnekleri çalışılmıştır. Ortalama düzeltme 16%. Beklenen Konsantrasyon 5.5.71 1.46.68 5.81 3. 1.54.71 Ölçülen Konsantrasyon % Düzeltme 4.1 99%.73 11% 1.5 14%.65 96% Ortalama Düzeltme #1 = 1 % 6.16 16% 3.17 15% 1.75 114%.84 119% Ortalama Düzeltme # = 111 % b. Doğrusallık Sıfır T3 standardı ile çeşitli oranlarda seyreltilmiş iki örnek ile çalışılarak doğrusallık tanımlanmıştır. Ortalama düzeltme 99%. # Dilusyon Beklenen Konsantrasyon 1.. Seyreltilmemiş 1: 1:4 1:8 Seyreltilmemiş 1: 1:4 1:8 3.3 1.51.75.83 1.4.71 ölçülen Konsantrasyon 6.6 3.5 1.46.68 5.66.86 1.55.67 % Beklenen 11% 97% 91% Ortalama = 96% 11% 19% 94% Ortalama = 11% 5. Özgünlük Aşağıdaki hormonlar çapraz kontaminasyon için test edilmiştir: TEST EDİLEN HORMONLAR Triiodo-L-Thyronine Triiodo-D-Thronine KONSANTRASYON 1. ng/ml 3. ng/ml 6. ng/ml 8. ng/ml.5 ng/ml 1. ng/ml. ng/ml 4. ng/ml 8. ng/ml T3 EŞDEĞER RENK ŞİDDETİNE SAHİP ÜRÜNLER 1. 3. 6. 8..45.81.37 4.14 7.97 TEST EDİLEN KONSANTRASYON T3 EŞDEĞER RENK HORMONLAR L-Thyroxine (T4) D-Thyroxine (T4) Triiodothyroacetic Acid Monoiodotyrosine Diiodotyrosine Methimazole 5,5 -Diphenylhydantoin Phenylbutazone 6-n-Propyl--Thiouracil Salicylic Acid Acetylsalicylic Acid 4.5 μg/dl 9. μg/dl 18. μg/dl 36. μg/dl. μg/dl 4. μg/dl 8.μg/dL.5 ng/ml 5.5 ng/ml 1. ng/ml. ng/ml 1. ng/ml 1, ng/ml 1, ng/ml 5, ng/ml 1, ng/ml 1, ng/ml 5, ng/ml 1, ng/ml 5, ng/ml 5, ng/ml 1, ng/ml 1, ng/ml 1, ng/ml 5, ng/ml 1,,ng/mL 1, ng/ml 1, ng/ml 5, ng/ml 5, ng/ml 5, ng/ml 1,, ng/ml 5, ng/ml 5, ng/ml 1,, ng/ml ŞİDDETİNE SAHİP ÜRÜNLER )..53 1.35.3.4.55 3.47 6.53 >8. >8. >8..17 1.96.8.1.58.5.6.5.3.36.1 1.48 1.66.8 SINIRLAMALAR 1. Önemli Not: Triiodothyroacetic asit ya da triiodothyropionic asit gibi tiroid yerine koyma tedavisi gören hastalarda bu kit ile hatalı yüksek T3 değerleri görülebilir. Tiroid hastalığı ile ilgili olmayan birçok şartlar da anormal T3 seviyesine neden olabilir.(beklenen Değerler bölümüne bakınız.). Kit içeriğindeki kullanım bilgileri tam olarak anlaşılıp uygulandığında güvenli ve üretken sonuçlar elde edilir. 3. T3 konsantrasyonu 1 ng/ml dan büyük olan serum örnekleri Sıfır standart ile seyreltilmeli ve yeniden test edilmelidir. Seyreltilmiş örnekten ölçülen değerler, gerçek serum değerlerini bulmak için dilusyon faktörü ile çarpılmalıdır. 4. Bilirubin değeri 5 mg/dl a kadar olan ikterik örnekler test sonuçlarını etkilemez. 5. 1 mg/dl ye kadar olan hemoglobin seviyesi T3 değerini etkilemez. 6. Bu kitin kullanılması ile gözlenen sonuçlar sadece diğer diagnostik prosedürlere ek olarak ve doktorlara bilgi vermek amacı ile kullanılabilir. 7. Yıkama prosedürü kritiktir. Yetersiz yıkama kesinliği azaltmakta ve yanlış yükselmiş absorbans okumalarına neden olmaktadır. 4
KALITE KONTROL Kit performanısını sağlamak için herbir kalibrasyon eğrisi ile birlikte düşük, orta ve yüksek kalite kontrol örneklerinin (kontrollerin) çalışılması gerekmektedir. Ortalama değerleri ve kabul edilebilir aralığı belirlemek için istatistiksel olarak yeterli sayıda kontrol kullanılmalıdır. sodyum azide içeren kontroller kullanılmamalıdır. REFERANSLAR 1. Schall, R. F. Jr., Fraser, A.S., Hansen, H.W., Kern, C.W., and Teneso H.J., A Sensitive Manual Enzyme Immunoassay for Thyroxine, Clin. Chem. 4 (1): 181 (1978).. Larsen, P.R., Triiodothyronine: Review of Recent Studies of its Physiology and Pathophysiology in Man. Metabolism, 1, 173-19 (197). 3. Utiger, R.D., Serum Triiodothyronine in Man. Ann. Rev. Med., 5: 89-3 (1974). 4. Larsen, P.R. and Ingbar, S.H.: The thyroid gland. In Wilson, J.H., and Foster, D.W. (Eds.): Williams Textbook of Endocrinology. 8 th ed. Philadelphia, W.B. Saunders Co., 199. 5. Hollander, C.S., et al., Clinical Laboratory Observation in Cases of T3 Toxicosis Confirmed by Radioimmunoassay, Lancet. 1: 69-611 (197). 6. Sterling, K., Refetoft, S., and Selenkow, H.A., T3 Thyrotoxicosis; Thyrotoxicosis due to Elevated Serum Triiodothyronine levels. J.A.M.A. 13, 571-575 (197). 7. Skelley, D., Brown L., and Besch, P., Radioimmunoassay, Clin. Chem., 19(): 146 (1973). 8. Walker, W.H.C., Introduction: An Approach to Immunoassay, Clin. Chem., 3(): 384 (1977). 9. Schuurs, A. H. W. M. and Van Weemen, B.K., Review, Enzyme-Immunoassay, Clin. Chem. Acta., 81 (5): 1 (1977). 1. Scharpe, S. L., Cooreman, W. M., Blomme, W. J., and Laekeman G.M., Quantitative Enzyme Immunoassay: Current Status, Clin. Chem. (6): 733 (1976). 11. Wisdom, G.B., Enzyme-Immunoassay, Clin. Chem., (8): 143 (1976). 1. USA Center for Disease Control/National Institute of Health Manual, Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories, 1984. 13. Lieblich, J., Utiger, R.D., J. Clin. Invest., 51: (197). 14. Braverman, LE., and Ingbar, S.H., Clin. Res., 17: 458(1969). 15. Mitsuma, T., Nihei, N., Gershengorn, M.E., and Hollander, C. S., J. Clin, Invest., 5: 679 (1971). 16. Larsen, P.R., J. Clin. Invest., 51 : 1939 (197). 17. Rubenstein, H. A., Butler, V.P. Jr., and Werner, S.C., J. Clin. Endocrino, Metab., 37: 47 (1973). 18. Hoffenberg, R., Medicine, 8: 39 (1978). EC Sadece invitro kullanım içindir. REP Üretici Yetkili Temsilci GENERAL BIOLOGICALS CORPORATION No.6 INNOVATION FIRST ROAD, SCIENCE BASED INDUSTRIAL PARK, HSIN CHU, 377, TAIWAN, R.O.C. Tel: +886-357791 Fax: +886-357797 Web Site: www.gbc.com.tw Medical Technology Promedt Consulting GmbH Altenhofstrasse 8, D-66386 St. Ingbert, Germany Tel: +49 () 6894-581 Fax: +49 () 6894-5811 Sembol İndeksi 5